首页 > 文献资料
-
hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性影响
目的 检测hTERT基因反义核酸对A2780细胞端粒酶活性的影响及其机制.方法 TRAP法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测hTERT蛋白表达.结果 端粒酶活性检测结果显示,A2780细胞吸光度A值为0.492±0.051,hTERT反义核酸作用48h A值降为0.351±0.047,hTERT反义核酸作用72h A值降为0.238±0.024.hTERT蛋白表达检测结果显示,A2780细胞hTERT蛋白阳性率89.513%±3.389%,hTERT反义核酸作用48h后hTERT蛋白阳性率低至71.237%±2.872%,hTERT反义核酸作用72h hTERT蛋白阳性率低至47.767%±1.226%.而hTERT正义核酸无上述作用. 结论 hTERT反义核酸能降低A2780细胞端粒酶活性,其机制可能是降低hTERT蛋白表达量.
-
利用多重PCR方法快速鉴定结核分枝杆菌北京基因型菌株
目的 建立结核分枝杆菌北京基因型菌株快速鉴定方法,研究该家族在人群中的流行传播的规律和特点.方法 采用间隔区寡核苷酸(spoligotyping)分型与多重PCR方法分别对临床分离的112株结核分枝杆菌进行北京基因型菌株鉴定.结果 在分析的112株结核分枝杆菌中,107株为北京基因型,多重PCR鉴定结果与Spoligotyping分型符合率为100%.结论 与spoligotyping分型相比,多重PCR技术可以快速地区分北京基因型与非北京基因型株,且方法简单,更适于基层试验室中对北京基因型结核分枝杆菌在人群中的流行进行大规模监测.
-
反义寡核苷酸体外抗乙型肝炎病毒研究
目的探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用,为基因水平上防治乙型肝炎病毒(HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据.方法用PCR方法分别合成了互补于HBV X基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸(AsON)及无关序列,其中针对ENⅡ设计的AsON,目前尚未见互补于该区段反义寡核苷酸的报道.以HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞为靶细胞,ELISA法检测AsON作用前后细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌情况.结果当AsON的佳作用浓度为10 μmol/L时,3种反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg抑制率分别为:57%、60%、52%和56%、45%、56%,AsON 对HBV抗原的抑制作用具双峰现象.无关序列无明显抑制作用(<12%).利用锥虫蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色试验观察到当AsON作用浓度为40 μmol/L时,对细胞代谢无明显毒副作用.结论反义寡核苷酸封闭HBV X基因区的关键区段,可有效抑制HBV抗原的分泌.
-
微囊藻毒素-LR特异性RNA配基体外筛选探讨
目的利用大容量寡核苷酸库筛选富集具有分子识别、能与微囊藻毒素-LR特异结合的RNA配基. 方法将一段中间为40个随机核苷酸排列、两端为恒定区域的DNA库转录成RNA随机库,然后将RNA随机库与共价结合在琼脂糖上的微囊藻毒素-LR反应、洗脱、收集能与靶分子特异结合的微量RNA,反转录为cDNA,PCR扩增.如此重复,经13轮筛选富集,再对筛选核酸配基克隆、测序,进一步比较各克隆RNA配基的亲和性.结果能与靶分子特异结合的微量RNA经过每轮筛选逐步增加,到第11～13轮进入平台期;60个克隆产物中有38个成功测定序列和分析,将其分成3组5对,所有克隆序列中未发现组间共有保守序列.选择有代表性的克隆RNA配基,比较其对靶分子的亲和力,克隆RNA配基:MC1、MC25、MC17和MC32对靶分子微囊藻毒素-LR具有较高的亲和力;他们与不同浓度系列的靶分子反应,经数学模型外推克隆MC1、MC25、MC17和MC32 RNA配基以及RNA随机库对微囊藻毒素-LR的解离常数值分别为8.4、4.6、5.7、9.1和>25.6 μmol/L,其中MC25检测微囊藻毒素-LR低下限至少可达0.5 μmol/L.结论从大容量RNA随机库中分离富集到一类能够识别并特异性结合微囊藻毒素-LR的配基,为研究与检测环境中藻类毒素提供了一种新的手段.
-
青海省结核分枝杆菌的间隔寡核苷酸分型研究
肺结核主要是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的一类以呼吸系统感染为主的慢性传染病.中国是全球第二大结核病高负担国家,据估计每年约有100万新发肺结核病例,占全球11％[1].近年来,结核病分子生物学研究日趋成熟,其中,用于MTB分型的指纹技术有广泛的应用前景,间隔寡核苷酸分型方法就是其中一种.
-
核因子κB p65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖和I型胶原表达的影响
目的 探讨核因子κB(NF-κB)p65反义寡核苷酸(ASOND)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和I型胶原表达的影响.方法 Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC;脂质体介导的不同浓度的NF-κB p65 ASOND(0.001、0.01、0.1和1μmol/L)进入HSC;台盼蓝染色排斥法检测NF-κBp65 ASOND对HSC的毒性实验并检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性;MTT法测定NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC增殖影响;RT-PCR法和ELISA法检测不同浓度NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC I型胶原表达的影响.结果 转染NF-κB p65 ASODN后,HSC细胞NF-κB蛋白的表达下降,不同浓度(0.001、0.01、0.1和1 μmol/L)的NF-κB p65 ASOND对于体外培养HSC的存活率和LDH无明显影响(P>0.05),0.01～μmol/L的NF-κB p65 ASOND抑制HSC的增殖,lmg/L TNF-α刺激HSC的I型胶原蛋白和mRNA的表达,且随浓度的增加作用增强(P<0.05).结论 NF-κB p65 ASOND可通过抑制NF-κB活性减少HSC活化增殖及Ⅰ型胶原生成,从而减少细胞外基质的产生.
-
前列腺凋亡反应基因4反义寡核苷酸抑制谷氨酸诱导的PC12细胞内钙离子浓度上调及其抗凋亡意义
目的研究前列腺凋亡反应基因4(par-4)反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞内游离钙离子浓度的上调作用及其抗凋亡意义.方法脂质体介导转染par-4反义寡核苷酸.谷氨酸诱导PC12细胞凋亡.Hoechest 33258/碘化丙啶荧光染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术分析凋亡百分率.Fura-2/AM荧光染色结合激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定钙依赖性蛋白酶Calpain10的mRNA水平.Western印迹测定par-4蛋白表达量.结果与正常对照组(25.6±4.1)相比,谷氨酸诱导PC12细胞中par-4蛋白表达上调(90.0±3.2,P<0.01),par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(52.3±5.0,P<0.01);谷氨酸诱导凋亡组凋亡百分率为53%, par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡(31%,P<0.01);谷氨酸诱导PC12细胞内游离钙离子浓度上调,par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(荧光强度比值分别为167.9±32.4、228.8±36.8,P<0.01);谷氨酸诱导PC12细胞内钙依赖性蛋白酶Calpain10 mRNA水平上调(46.3±3.7),par-4反义寡核苷酸抑制其上调(34.8±2.1,P<0.01).结论 par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞内游离钙离子浓度上调和抑制Calpain10基因转录有关.
-
Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的抑制作用
目的探讨Bcl-XL反义寡核苷酸转染后,对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响.方法采用阳离子脂质体介导的反义寡核苷酸转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹杂交、四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)、流式细胞术及凋亡的原位末端标记(TUNEL)检测等方法观察了Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖、凋亡的影响及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响.结果 MTT法检测显示,Bcl-XL 反义寡核苷酸可显著抑制食管癌细胞的增殖(P<0.05);对Bcl-XL mRNA表达抑制率为57.3%,可显著下调Bcl-XL的蛋白表达;应用流式细胞术和TUNEL检测技术,反义寡核苷酸组的凋亡率分别为(31.1±5.8)%和35.0%,与相关对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).反义寡核苷酸组裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到显著抑制(P<0.05).Bcl-XL mRNA及蛋白表达亦受到明显抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞明显增加.结论 Bcl-XL 反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长.通过反义寡核苷酸下调Bcl-XL的表达,达到治疗食管癌的目的,为食管癌的基因治疗提供实验依据.
-
跨膜型和分泌型肿瘤坏死因子α对内毒素性休克肝的影响及意义
目的探讨分泌型(S)和跨膜型(TM)肿瘤坏死因子α(TNF-α)对内毒素性休克肝的影响及意义.方法首先使用埃氏大肠杆菌死菌液制备大鼠内毒素性休克模型;并分不同时间点检测血清中的S-TNF-α、腹腔巨噬细胞表面上的 TM-TNF-α;然后,在给大鼠注射死菌液之前30 min,注射TNF-α转化酶(TACE)反义寡核苷酸(5 mg/kg);6 h后分别检测S-TNF-α、TM-TNF-α水平;检查肝脏的病理改变,并监测各组大鼠的血压变化.结果在内毒素性休克过程中,TM-TNF-α表达的动态变化不同于 S-TNF-α, TM-TNF-α在注射菌液30 min后开始升高,4.5 h达高峰,随后有所下降,但一直维持在较高水平.TACE反义寡核苷酸能有效地抑制TM-TNF-α转化为S-TNF-α,使腹腔巨噬细胞表面上的TM-TNF-α表达明显增高(P<0.001),使血压维持在正常水平,肝脏未见病理改变.结论内毒素性休克的病理过程主要与S-TNF-α有关,而 TM-TNF-α则可抵抗内毒素的攻击,稳定血压,限制炎症反应及保护肝组织免受损伤,此研究为临床治疗休克和感染性疾病提供了新的线索和实验依据.
-
Bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸抑制HL-60细胞在重度联合免疫缺陷鼠中生长的研究
目的分析bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(ASPO)抑制HL-60细胞在重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内致白血病作用, 探讨应用bcl-2 ASPO体外净化白血病可行性.方法应用终浓度为10 μmol/L ASPO和正义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(SPO)与HL-60细胞共孵育,7 d后,1×107个活细胞腹腔接种SCID鼠;在35 d后处死2组动物,用半巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SCID小鼠外周血、骨髓、肝脏、脾脏的HL-60细胞,组织病理观察它们浸润分布情况.结果 ASPO处理组HL-60细胞bcL-2表达下降,体外增殖抑制,凋亡,在SCID鼠中不会产生白血病,且未有残留;SPO组HL-60细胞不受影响,仍可在SCID鼠体内广泛增殖浸润,产生白血病.结论 bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸体外处理白血病细胞后可以抑制其体内增殖作用,可达到体外净化目的.
-
微小RNA-21反义寡核苷酸对宫颈鳞癌SiHa细胞株细胞生物学特性影响的体内外实验研究
目的 探讨体内外微小RNA-21( miR-21)反义寡核苷酸对宫颈鳞癌SiHa细胞株绌胞生物学特性的影响.方法 miR-21反义寡核苷酸(miR-21-ASO)通过脂质体转染宫颈鳞癌SiHa细胞,即时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR -21表达情况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、集落形成实验、流式细胞术等方法探讨抑制miR-21表达对SiHa细胞形态及生物学特性改变的影响.应用免疫组织化学MaxVision法、TUNEL( TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况.结果 miR-21在SiHa细胞株中呈显著高表达,miR-21-ASO可使SiHa细胞中miR-21表达量显著降低(P＜0.05).MTT法检测结果显示,转染miR-21 -ASO后SiHa细胞的生长受到明显抑制(P＜0.05).阴性对照组的细胞集落形成率为98.3％±2.0％,miR-21抑制组则为55.6％±1.4％,miR-21抑制组的细胞集落形成率受到明显抑制(P＜0 05).流式细胞术检测显示,阴性对照组和miR-21抑制组的SiHa细胞凋亡率分别为6.7％±1.3％和29.4％±1.7％,miR-21抑制组的细胞凋亡率明显增加(P＜0.05).裸鼠皮下移植瘤成瘤率,miR-21抑制组与阴性对照组的成瘤比例分别为3/8和6/8(P ＜0.05).裸鼠瘤体的Ki-67阳性指数,miR-21抑制组(42％)比阴性对照组(90％)显著下降.荧光TUNEL凋亡检测显示,miR-21抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多(P＜0.05).结论 miR-21-ASO可有效抑制宫颈鳞癌SiHa细胞中miR-21表达,影响癌细胞增殖活性,促进癌细胞凋亡,体内抑制SiHa细胞裸鼠移植瘤生长促进其凋亡.
-
乳糖化多聚赖氨酸导向反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒的作用
目的研究乳糖化多聚赖氨酸(Gal-PLL)导向反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的特异性抑制作用。方法 根据聚合酶链反应(PCR)产物直接测序结果，在HBV U5样序列区合成了一段16聚硫代磷酸反义寡核苷酸，并将其与肝靶向配体Gal-PLL连接，在2.2.15细胞比较，观察了它们对HBV基因表达的影响。结果 通过测序确定了2.2.15细胞中HBV DNA属于HBV表面抗原ayw1亚型，并将此用于反义寡核苷酸的序列设计；经荧光组化分析表明，Gal-PLL对大鼠肝组织有选择性亲和力；Gal-PLL与DNA形成复合物的佳摩尔比为2∶1；在相同实验条件下，硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为70%和58%，而Gal-PLL硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为96%和82%，同时培养上清液和细胞中HBV DNA的含量明显下降，无关序列寡核酸无明显效果，寡核苷酸对细胞未产生毒性。结论 肝靶向配体和反义寡核酸的复合物可以通过无唾液酸糖蛋白受体靶入2.2.15细胞内，并对HBV基因表达和复制产生特异性抑制作用。
-
硫代反义寡核苷酸在鸭体内外对鸭乙型肝炎病毒DNA复制的影响
目的研究在转录起始区域设计硫代反义寡核苷酸抑制鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV DNA)复制的可行性.方法设计合成分别基于DHBV PreS1、PreS2、S抗原启动基因的硫代反义寡核苷酸,应用Southern blot实验和cpm计数测定其对原代鸭肝细胞中及雏鸭中感染DHBV的DHBV DNA的作用.结果在1.5 μmol/L浓度下,体外抑制率分别是61.5%,69.3%和62.4%.选取PreS1抗原基因起始区段的硫代反义寡核苷酸进行整体动物实验.每只动物每天按10 μg/g体重静脉注射一次,共给药6 d.对动物肝脏进行取样分析表明,在此剂量下,对DHBV DNA的抑制率可达87.9%.结论本实验所设计的针对转录起始区的硫代反义寡核苷酸在体内外对DHBV DNA复制均有明显抑制作用,说明了在这一区域设计硫代反义寡核苷酸的可行性.
-
涂层支架局部导入c-myc反义核酸防治再狭窄的实验研究
目的:探讨铂-铱合金明胶蛋白涂层支架局部导入c-myc反义寡核苷酸的可行性及对新生内膜的抑制作用.方法:将携带c-myc反义寡核苷酸的国产铂-铱合金明胶蛋白涂层支架置入兔颈动脉(n=16),在术后7、14、30、90 d处死动物行HE和Weigert染色,图像分析测量新生内膜厚度和面积,c-myc蛋白免疫组化染色并与对照组(n=16)进行对比分析.结果:随观察时间延长两组新生内膜面积和平均新生内膜厚度呈持续增加趋势,且不同观察时间点给药组新生内膜面积和平均新生内膜厚度均显著小于对照组(P均＜0.001).c-myc免疫组化染色给药组为弱阳性和阴性,对照组为阳性.14 d时透射电镜观察显示血管平滑肌细胞呈过渡型改变.结论:国产铂-铱合金明胶蛋白涂层支架可携带c-myc反义寡核苷酸于兔颈动脉局部,并抑制新生内膜的形成,提示支架可作为局部给药防治再狭窄的工具.
-
端粒酶活性与膀胱癌T24细胞生长
目的:研究端粒酶逆转录酶基因(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对膀胱癌T24细胞生长的影响.方法:用脂质体介导技术,将hTERT基因ASODN转染入膀胱癌T24细胞中应用端粒酶PCR-ELISA法检测端粒酶活性变化,MTT法测定细胞生长变化,并用流式细胞术观察其对T24细胞周期的影响.结果:hTERT基因ASODN能显著地抑膀胱癌T24细胞端粒酶活性,癌细胞生长增殖受限,同时抑制具有序列特异性和剂量依赖性,并出现细胞凋亡现象,其凋亡率(15.8%)明显高于SODN 转染组(0)和空白对照组(1.9%,P<0.05).结论:hTERT基因ASODN能特异性抑制膀胱癌T24细胞端粒酶活性和生长,促进其细胞凋亡.
-
hTERT反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及端粒酶活性的影响
目的 研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖及端粒酶活性的抑制作用,探讨其在瘢痕疙瘩治疗中的作用.方法 应用ASODN封闭瘢痕疙瘩成纤维细胞hTERT基因的表达,不同浓度不同时间以ASODN作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,细胞计数和MTT法检测成纤维细胞生长增殖情况,端粒酶PCR-ELISA法检测不同处理浓度和时间成纤维细胞端粒酶活性.结果 ASODN作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞72 h后,成纤维细胞生长受抑,增殖能力减弱,并具有浓度、时间依赖性.端粒酶活性检测显示:ASODN 0.5、1.0和1.5 μmol/L作用组OD450-690值分别为0.612±0.038、0.535±0.027、0.423±0.023,与空白对照组(0.898±0.058)比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；正义寡核苷酸1.0 μmol/L作用组(OD450-690值为0.893±0.042)与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 hTERT基因ASODN能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖,降低成纤维细胞端粒酶活性是其重要作用机制之一.通过抑制端粒酶活性进行抗瘢痕疙瘩治疗可能是一个新途径.
-
反义miR-21对荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响
目的 构建荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤模型,探讨干扰miR-21 表达对移植瘤生长、凋亡的影 响.方法 将人工合成的反义寡核苷酸ASODN(AS-miR-21)转染SiHa 细胞(抑制组),同时设阴性对照组和 空白对照组,对数生长期的SiHa 细胞分别接种于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长率.当肿瘤 体积达0.2 cm3 时采用AS-miR-21 多点瘤周注射,观察其对移植瘤的影响.应用免疫组化技术、荧光TUNEL 检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况.结果 (1)成功构建人宫颈鳞癌裸鼠皮下移植瘤模型,抑制组、阴性 对照组及空白对照组成瘤率分别为37.5%、75.0%、100.0%,瘤体平均体积为(732.80 ±56.32 ) mm3 、(1228.46 ±78.53)mm3 、(1301.26 ±80.63)mm3,平均生长率为18.32%、30.71%和32.53%,瘤重为(0.73 ± 0.05)g、(1.26 ±0.12)g 和(1.35 ±0.25)g,抑制组与阴性、空白对照组比较差异均有统计学意义(P <0.05); (2)免疫组化显示抑制组裸鼠瘤体Ki67 表达显著下降;荧光TUNEL 凋亡检测显示抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡 率明显增多;(3)注射治疗剂量AS-miR-21 两周后观察肿瘤组织局部坏死严重,胞核裂解、消失,凋亡明显增 加.结论 AS-miR-21 可下调裸鼠人宫颈鳞癌移植瘤中miR-21 的表达,抑制移植瘤生长和促进其凋亡.
-
结缔组织生长因子反义寡核苷酸对胰腺癌细胞基质金属蛋白酶-9、血管内皮生长因子表达及细胞增殖与侵袭的影响
目的 通过研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人胰腺癌细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)表达及细胞增殖与侵袭力的影响,深入探讨CTGF在胰腺癌发生、发展中的作用机制,为CTGF ASODN在胰腺癌基因治疗中的运用奠定理论基础.方法 经脂质体介导将CTGF ASODN转染人胰腺癌细胞株SW1990,荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转染细胞CTGF、MMP-9与VEGF mRNA与蛋白表达;噻唑盐(MTT)比色法检测转染细胞的增殖活性;采用Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 (1)荧光显微镜及流式细胞仪检测显示CTGF ASODN可成功转染SW1990细胞.(2)反义组、无义组和单加脂质体组细胞CTGF mRNA表达量分别为0.24±0.09、0.67±0.21、0.63±0.18,反义组较其他组的mRNA表达明显减少(P<0.01);相应的CTGF蛋白表达量分别为0.19±0.07、0.75±0.26、0.71±0.23;相应的MMP-9 mRNA表达量分别为0.21±0.12、0.78±0.35、0.81±0.37;相应的VEGF mRNA表达量分别为0.16±0.06、0.42±0.22、0.43±0.28;相应的MMP-9蛋白表达量分别为0.68±0.22、1.97±0.46、1.92±0.39;相应的VEGF蛋白表达量分别为0.27±0.07、0.52±0.19、0.55±0.18,反义组CTGF、MMP-9和VEGF的表达较其他组显著降低(P<0.01).(3)反义组、无义组、单加脂质体组细胞增殖活性分别为1.67±0.14、2.34±0.17、2.29±0.21,反义组较其他组细胞增殖被显著抑制(P<0.01).(4)反义组、无义组、单加脂质体组微孔滤膜外侧细胞数分别为24.88±6.17、52.37±8.62、55.49±8.83,反义组较其他组微孔滤膜外侧细胞数显著减少(P<0.01).结论 CTGF ASODN转染可有效抑制SW1990细胞CTGF的表达,并降低其MMP-9、VEGF的表达及细胞增殖活性与细胞侵袭力.
-
干细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞中原癌基因蛋白质c-kit及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响
目的 探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义.方法 以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞.实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF反义寡核苷酸组;(3)转染SCF错义寡核苷酸组.Western blot方法检测转染前后肝癌细胞中SCF、bFGF蛋白的表达,RT-PCR检测转染前后肝癌细胞中c-kit与bFGF mRNA的表达,用流式细胞仪检测转染SCF反义寡核苷酸后HepG2细胞凋亡率.结果 与转染错义寡核苷酸组相比,SCF反义寡核苷酸对HepG2细胞中c-kit、bFGF的表达有明显抑制作用,转染SCF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01).结论 SCF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,SCF/c-kit有可能作为PI3K/Akt信号通路的上游对肝癌细胞bFGF的表达起重要调控作用.
关键词： 肝肿瘤 干细胞因子 寡核苷酸类 反义 原癌基因蛋白质C-kit 成纤维细胞生长因子2 转染 -
缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸对缺氧时视网膜血管内皮细胞增殖活性影响的研究
目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)反义寡核苷酸(ASODN)对缺氧时体外培养的牛眼视网膜血管内皮细胞(BREC)增殖活性的影响,探讨HIF-1αASODN 治疗视网膜新生血管性疾病的可行性.方法 根据Genbank 提供的HIF-1αcDNA 序列设计HIF-1αASODN,全硫代修饰,并用脂质体包被,体外转染BREC 细胞,荧光显微镜下计算转染效率.采用免疫组织化学法检测HIF-1α的表达,采用免疫组织化学法和生物荧光法分别检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、细胞内ATP 含量以分析细胞增殖能力.结果 荧光显微镜检测表明,HIF-1αASODN 可成功转染BREC.免疫荧光检测显示,未转染组缺氧开始时HIF-1α有极低表达,在缺氧1 h 时表达量显著上升,4 h 达到高峰,16 h 后下降.而ASODN 转染组HIF-1α的表达始终在极低水平,两组间差异有统计学意义(P ＜0.01).PCNA 免疫组织化学检测和细胞内ATP 含量测定结果显示,在缺氧后各检测点ASODN 转染组较对照组细胞增殖活性受到抑制,抑制作用在缺氧后8 h 为明显(P ＜0.01).结论 HIF-1αASODN 转染能有效抑制BREC 细胞HIF-1α的表达,从而降低细胞增殖活性,可能对视网膜新生血管性疾病有治疗作用.
