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端粒酶检测在大肠癌早期诊断中的应用
端粒是真核生物染色体末端由许多简单重复序列及相关蛋白质组成的复合结构,具有保护染色体结构完整及解决末端复制的作用[1].笔者应用端粒末端重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)对大肠癌、癌旁组织及大肠腺瘤中端粒酶活性进行检测,以探讨端粒酶活性在大肠癌早期诊断中的应用价值.
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食管病变中端粒酶活性及其hTERT的相关性研究
端粒酶的激活是细胞获得永生化的必要途径,亦是细胞恶性转化的基础.人类70%～95%恶性肿瘤端粒酶活性(TA)增高,而正常组织端粒酶无或低表达.关于端粒酶逆转录酶蛋白(hTERT)能否反映食管鳞癌组织中端粒酶活性,各家报道不一.本实验通过检测食管鳞癌及不典型增生组织的TA和hTERT的表达,探讨食管鳞癌端粒酶活性及端粒酶逆转录酶蛋白的表达及彼此间相关性.
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DNA倍体分析联合端粒酶活性检测对良恶性腹水的鉴别诊断价值
目的:探讨腹水细胞DNA倍体分析联合端粒酶活性检测对良、恶性腹水的鉴别诊断价值.方法:采用TRAP-PCR-ELISA法对96例腹水(良性腹水47例,恶性腹水49例)进行端粒酶活性半定量测定,用酶标仪(Σ960型)测其在波长450 nm的吸光度(A),以A>0.20为阳性判断标准,同时进行腹水细胞DNA倍体分析.结果:(1)恶性腹水组细胞DNA倍体分析阳性率为81.36%(40/47),明显高于良性腹水组的2.13%(1/47),DNA倍体分析区别腹水良、恶性的敏感度为81.36%,特异度为97.87%;(2)恶性腹水组端粒酶活性(平均A值0.745)明显高于良性腹水组(平均A值0.065),端粒酶活性在恶性腹水组阳性率为91.84%(40/49),明显高于良性腹水组的4.26%,端粒酶活性检测区别腹水良、恶性的敏感度为91.84%,特异度为95.74%;(3)DNA倍体分析联合端粒酶活性检测对恶性腹水的诊断率为97.96%(48/49).结论:DNA倍体分析联合端粒酶活性检测是鉴别良、恶性腹水敏感而特异的方法.
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联检端粒酶活性和DNA异倍体诊断恶性腹水
目的:评价联检端粒酶活性(TA)和DNA异倍体诊断恶性腹水的价值.方法:良、恶性腹水各57份,应用端粒重复序列扩增-杂交-酶联免疫分析法检测TA、流式细胞术检测DNA异倍体.结果:恶性腹水TA及DNA异倍体的阳性率为84.2%及73.7%,联检TA和DNA异倍体的阳性率为94.7%.结论:联检TA和DNA异倍体可进一步提高诊断恶性腹水的敏感性,更有益于良、恶性腹水的鉴别,联检的临床价值高于单一试验.
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端粒酶、p21、 p53与原发性胆囊癌关系
目的探讨端粒酶、p21和p53在原发性胆囊癌的发生、转移和浸润中的作用及相互关系.方法我们应用TRAP-PCR和免疫组织化学方法对原发性胆囊癌中端粒酶、p21和p53表达进行检测.结果①原发性胆囊癌端粒酶、p21和p53阳性表达率为84.8%、47.8%和71.7%.②端粒酶、p21和p53在胆囊癌旁粘膜阳性表达率为4.6%、94.5%和94.5%.③癌细胞浸润越深,端粒酶p21和p53阳性表达率越高.④淋巴结转移,端粒酶阳性表达率为100%,而p21和p53为22.7%和63.6%.结论端粒酶、p21和p53阳性表达与胆囊癌的浸润及在胆囊癌形成和对周围组织浸润,淋巴结转移可能起重要作用.
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端粒酶活性与膀胱癌T24细胞生长
目的:研究端粒酶逆转录酶基因(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对膀胱癌T24细胞生长的影响.方法:用脂质体介导技术,将hTERT基因ASODN转染入膀胱癌T24细胞中应用端粒酶PCR-ELISA法检测端粒酶活性变化,MTT法测定细胞生长变化,并用流式细胞术观察其对T24细胞周期的影响.结果:hTERT基因ASODN能显著地抑膀胱癌T24细胞端粒酶活性,癌细胞生长增殖受限,同时抑制具有序列特异性和剂量依赖性,并出现细胞凋亡现象,其凋亡率(15.8%)明显高于SODN 转染组(0)和空白对照组(1.9%,P<0.05).结论:hTERT基因ASODN能特异性抑制膀胱癌T24细胞端粒酶活性和生长,促进其细胞凋亡.
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端粒酶与肝癌的关系
端粒是染色体末端的特殊结构,其长度随细胞分裂而进行性缩短,端粒酶是由RNA和蛋白质组成的复合体,能以自身RNA为模板,合成端粒序列.
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紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响
目的研究紫杉醇诱导人胃癌细胞凋亡及端粒酶活性变化.方法采用0.001～1 μmol·L-1的紫杉醇处理SGC 7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性.光镜及流式细胞术分析表明,0.01μmol·L-1的紫杉醇处理后24 h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,12 h相对端粒酶活性为96,24 h为58,48 h为28,72 h起变为阴性.结论紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一.
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胃癌及癌前病变hTERT的表达与细胞免疫功能
目的观察在胃癌及癌前病变组织中端粒酶催化亚单位hTERT的表达与患者细胞免疫功能,探讨hTERT及细胞免疫功能对胃癌诊断、治疗、预后的临床意义.方法用原位杂交方法对¨6例内镜胃粘膜活检标本的端粒酶催化亚单位hTERT进行检测,包括慢性浅表性胃炎(CSG)30例,慢性萎缩性胃炎(CAG)27例、腺瘤型息肉8例、胃溃疡9例,胃癌(GC)42例,并按肿瘤部位、大体类型、有无淋巴结转移及分化程度分组.同时,用流式细胞技术(FCM)检测了30例慢性浅表性胃炎、27例慢性萎缩性胃炎、42例胃癌的外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞,并与正常对照(NC)相比较.结果CSG的hTERT阳性率为0%(0/30),癌前病变为36%(13/44),GC为86%(36/42).胃癌组织hTERT阳性率与肿瘤部位、大体类型、有无淋巴结转移及分化程度无显著相关性.CSG组CD3+,CD4+较NC已有明显下降(P＜0.05),CAG组T细胞功能(CD3+,CD4+,CD4+/CD8+)及NK各值较NC及CSG组均明显降低(P＜0.05～0.01),GC组T细胞及NK细胞各值较CAG组显著异常(P＜0.05～0.01),并随着胃癌进展,CD3+,CD4+,CD4+/CD8+各值进一步降低.结论端粒酶活化可能是胃粘膜癌变的关键步骤,胃粘膜活检标本hTERT的表达是胃癌癌变过程中重要的生物学标志物.胃癌和癌前病变患者细胞免疫功能低下,对胃癌的发生发展有重要意义.
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顺铂对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性和凋亡及p53和bcl-2 表达的影响
目的:观察顺铂对 HeLa 细胞端粒酶活性、凋亡及其 p53、bcl-2 表达的影响,以揭示顺铂抗宫颈癌的机理.方法:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的 HeLa 细胞 72 h,通过端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,以及流式细胞术观察细胞凋亡及 p53、bcl-2 的表达.结果:顺铂能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞凋亡,使其 bcl-2 基因的表达显著降低,而 p53 基因的表达则增强.端粒酶活性下调与细胞凋亡及其 p53、bcl-2 基因表达紧密相关,P＜0.01.结论:顺铂能下调端粒酶活性,诱导细胞凋亡,使 bcl-2 表达降低和 p53 表达增强,这可能是顺铂抗癌作用的重要机制之一.
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胰液端粒酶活性检测在胰腺疾病鉴别诊断中的价值
目的:探讨端粒酶活性推测在胰腺癌早期诊断中的价值.方法:40例胰腺癌和31例慢性胰腺炎患者均行ERCP抽取胰液,采用TRAP-PCR-SSCP和TRAP-PCR-ELISA两种方法分别进行定性、定量分析,同时检测胰腺癌细胞株4株,正常胰液和正常胰腺组织测定其端粒酶活性做为对照.结果:端粒酶定性分析:胰腺癌组胰液中阳性率67.50%(27/40);慢性胰腺炎组41.93%(13/31);胰腺癌细胞株全部为阳性,阳性率100%(4/4);正常胰腺和胰腺组织均呈阴性(0/5).端粒酶定量测定:胰腺癌组为1.475±0.467;慢性胰腺炎组为0.358±0.479.胰腺癌细胞株为1.842±0.256.胰腺癌组胰液中端粒酶阳性率明显高于慢性胰腺炎组,P＜0.05;胰腺癌患者组,高于慢性胰腺炎组,P＜0.01.结论:胰液中端粒酶活性测定可作为胰腺良恶性疾病鉴别诊断的重要依据,可作为胰腺癌早期诊断的手段之一.
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原发性肺癌与食管癌组织中端粒酶活性表达的临床研究
目的:探讨端粒酶作为一种新的生物学标志物用于常见胸部恶性肿瘤诊断和预后评价等方面的临床应用价值.方法:采用端粒重复序列扩增法对原发性肺癌、食管癌手术切除组织及相应的癌旁组织进行端粒酶活性分析,并以相应的良性病变作为对照.结果:32例肺癌组织中端粒酶阳性率为84.4%(27／32),癌旁组织为9.4%(3／32),良性组织中未检出端粒酶阳性.端粒酶活性随肺癌临床分期有升高趋势,伴淋巴结转移标本组阳性率94.7％(18／19)明显高于非淋巴结转移组69.2％(9／13),P<0.05;但与肿瘤病理组织学类型、分化程度等差异无统计学意义,P>0.05.37例食管癌端粒酶阳性率为86.5%(32／37),癌旁组织为18.9%(7／37),正常食管组织未检出端粒酶阳性.当癌侵及肌层及外侵后,其阳性表达率100％(23／23)高于局限于黏膜及黏膜下层者71.4％(10／14),P<0.01.伴淋巴结转移标本阳性率100％(21／21)高于非淋巴结转移者75％(12／16),P<0.05.结论:端粒酶有可能成为肺癌、食管癌早期诊断和判断预后的重要生物标志物和治疗新靶点.
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端粒酶基因在脑胶质瘤中的原位表达
目的:研究端粒酶基因(hTR)在脑胶质瘤中的原位表达状况及其与分型、分级的关系,评估其对胶质瘤诊断的价值.方法:用原位杂交技术检测了79例甲醛固定、石蜡包埋的胶质瘤蜡块标本中端粒酶基因(hTR)的表达状况并分析与组织学分级、WHO分型之间的关系.用ABC法检测PCNA的表达.6例正常脑组织作对照.结果:端粒酶基因(hTR)在脑胶质瘤中的检出率为59.2%(47/79).端粒酶基因(hTR)在胶质瘤组织学分级中的分布为Ⅱ级11/32,Ⅲ级12/20,Ⅳ级24/27,各级胶质瘤组间比较,差异有显著意义,P<0.05.端粒酶基因(hTR)的表达强度与胶质瘤的组织学分级、WHO分型之间有相关性,P<0.05,Ⅲ级、Ⅳ级的检出率明显高于Ⅱ级.正常脑组织中未检出端粒酶基因.端粒酶阳性组与阴性组PCNA阳性细胞密度差异有显著意义,P<0.05.结论:胶质瘤中端粒酶基因(hTR)表达状况可能与胶质瘤的分化程度、组织学分级相关,提示端粒酶基因的过表达可能对胶质瘤的演化和进展具有一定重要作用,并可能作为胶质瘤的一个新的诊断标志物,结合PCNA评价胶质瘤的生物学行为更为可靠.
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端粒酶在食管癌组织中的表达及临床意义
目的:研究食管癌组织中端粒酶活性检测的临床意义,探讨其作为食管癌诊断和预后评价指标的可行性.方法:采用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplication protocal,TRAP)-PCR-ELLISA方法检测42例食管癌手术切除组织及相应的癌旁组织中端粒酶的活性,并以16例食管良性病变作为对照.结果:42例食管癌组织中端粒酶阳性率为85.7%(36/42),癌旁组织为11.9%(5/42),16例食管良性病变组织中未检出端粒酶阳性.食管癌组织端粒酶水平明显高于癌旁组织(P<0.01)及良性病变组织(P<0.01).端粒酶活性随细胞分化程度、临床分期有升高趋势,但差异无统计学意义,伴淋巴结转移食管癌组织中端粒酶阳性率明显高于不伴淋巴结转移组,P<0.01.结论:端粒酶的激活与食管癌的发生发展密切相关.端粒酶可作为食管癌辅助诊断、预后判断的标志物之一,并为食管癌的基因治疗提供理论依据.
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细针穿刺肿瘤组织端粒酶活性检测在乳腺癌诊断中的意义
目的:探讨细针穿刺乳腺肿瘤组织端粒酶活性检测在乳腺癌诊断中的意义.方法:用PCR-ELISA法检测79例术前乳腺肿瘤穿刺活检标本和大体标本的端粒酶活性并与病理诊断进行对照.结果:乳腺癌65例,穿刺组织端粒酶阳性57例,阳性率为87.7%;大体组织端粒酶阳性54例,阳性率83.1%;淋巴结有转移者端粒酶活性高于无淋巴结转移者;乳腺良性疾病14例,端粒酶阳性2例,阳性率14.3%.结论:术前乳腺肿瘤穿刺组织端粒酶活性检测有利于乳腺肿瘤的早期诊断及鉴别诊断,可以间接了解乳腺癌的进展程度.
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检测诱导痰中端粒酶活性对肺癌的诊断价值
目的:探讨检测诱导痰中端粒酶活性对肺癌的诊断价值.方法:肺癌患者48例,肺部良性疾病患者26例,两组患者均收集常规痰和诱导痰标本,采用TRAP-ELISA法测定端粒酶活性.结果:肺癌组患者常规痰液中端粒酶活性阳性检出率为47.9%,诱导痰中端粒酶活性阳性检出率为75.0%,两者差异有统计学意义,P=0.018 1.肺癌组两种方法的标本端粒酶水平均高于对照组;而不同病理类型的肺癌端粒酶活性水平差异无统计学意义,P=0.671 7.结论:诱导痰技术无创、简便,检测诱导痰中端粒酶活性对肺癌的临床诊断有一定价值.
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恶性胸腔积液及腹水端粒酶活性检测的意义
目的:探讨胸腔积液及腹水端粒酶活性的检测及应用价值.方法:采用PCR-based assay检测了肺癌、恶性肿瘤胸腔积液及腹水中的端粒酶活性.结果:18例肺癌及恶性胸腔积液及腹水端粒酶活性均呈阳性,且其中2例恶性渗出液端粒酶活性阳性诊断早于同步病例结果.正常组织及对照均呈阴性反应.结论:端粒酶活性在恶性胸腔积液及腹水诊断中是一个非常有用的鉴别方法.
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端粒酶活性的原位检测在食管癌早期诊断中的意义
目的:研究端粒酶活性的原位检测在食管癌早期诊断中的意义.方法:应用原位杂交技术检测30例食管癌组织、癌旁组织及其正常黏膜中端粒酶mRNA的表达显示端粒酶的活性.结果:端粒酶活性在食管癌组织中阳性表达率显著性高于癌旁组织、正常黏膜.结论:端粒酶的原位检测对食管癌的早期诊断有一定意义.
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端粒酶活性检测联合血清CA125检测在卵巢肿瘤诊断中的临床意义
目的:探讨端粒酶活性与卵巢肿瘤特异性血清标记物CA125联合检测的临床意义.方法:以42例卵巢肿瘤患者为研究对象,行TRAP-ELISA方法检测肿瘤组织中端粒酶活性,同时以放射免疫法检测其血清CA125值.结果:端粒酶活性检测联合血清CA125检测可使卵巢肿瘤的检测敏感性从94.7%提高至100%.结论:端粒酶活性检测联合血清CA125检测有助于卵巢肿瘤的早期诊断及病情监测.
关键词： 端粒 末端转移酶/代谢 酶联免疫吸附测定 CA-125抗原/血液 卵巢肿瘤/诊断 -
术前化疗后乳腺癌组织端粒酶表达研究
目的探讨术前化疗对乳腺癌组织端粒酶表达的影响.方法运用聚丙烯酰胺凝胶-银染法及TRAP-PCR-ELISA法,对50例新鲜乳腺癌组织进行端粒酶定性和定量研究.结果术前化疗组20例,端粒酶阳性表达率为85.0%,平均活性值为1.09±1.05.而未化疗组30例,端粒酶阳性表达率为83.3%,平均活性值为0.88±0.80.两组资料定性和定量比较,差异均无显著性(P>0.05).结论端粒酶活性作为肿瘤细胞存活的标志,在术前化疗的乳腺癌组织中,其改变迟发于组织病理形态学的改变.
