首页 > 文献资料
-
维甲酸抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡
维甲酸(retinoic acid,RA)属于维生素甲类化合物(retinoids)家族,基本结构或生物活性类似于维生素A[1],由环已烯、侧链及极性基团三部分组成.因为羧基方向不同而分为两种异构体,即全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和顺式维甲酸(cis-RA).其生物活性是通过核内可被配体饱和的维甲酸受体(retinoic acid receptor,RAR)和维A类化合物X受体(retinoid X receptor,RXR)激活而介导的[2].自1988年我国学者应用ATRA诱导分化治疗急性早幼粒细胞白血病取得成功以来,极大地推动了RA治疗恶性肿瘤的实验室和临床的研究[3-7].现已证实,RA具有广泛的生物活性,对脊椎动物的生长发育[8-10]、免疫功能[11]、抑制多种肿瘤细胞的增殖及诱导肿瘤细胞的分化具有很强的调节作用[12,13].近年来研究又发现,RA可诱导肿瘤细胞凋亡,对肿瘤的预防和治疗均有积极影响[14].
-
药物诱导细胞凋亡治疗肝癌
细胞凋亡(apoptosis)是细胞自然衰老、死亡的一种形式,是一切生物正常胚胎发生过程和人类发育过程细胞清除的正常途径.这一过程的紊乱,将导致人类发生多种疾病.许多研究资料表明,肿瘤的发生与细胞凋亡有密切关系[1],细胞凋亡异常在肿瘤发生和发展过程中具有非常重要的病理生理意义[2],细胞凋亡参与肿瘤的起始过程,并对癌症的发生起负相调控作用.Dive认为肿瘤的化疗、放疗的目的就是诱导肿瘤细胞凋亡.因此,在肝癌的治疗中不断地探讨新方法新途径,包括化疗药物、放射线、细胞因子、激素和基因编码等.近年来大量实验研究发现,肝癌细胞可以通过人为地触发细胞凋亡而被清除,其中药物诱导细胞凋亡对今后肝癌治疗研究提供了诱人的前景不同种类的化学药物,生物药物和中药对不同种类肿瘤敏感细胞有促进凋亡作用.部分化疗药物、生物药在体外实验中能诱导肝癌细胞凋亡,如顺铂、环磷酰胺、阿霉素、细胞因子等[3,4].下面就药物诱导细胞凋亡治疗肝癌研究简要综述如下.
-
紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响
目的研究紫杉醇诱导人胃癌细胞凋亡及端粒酶活性变化.方法采用0.001～1 μmol·L-1的紫杉醇处理SGC 7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性.光镜及流式细胞术分析表明,0.01μmol·L-1的紫杉醇处理后24 h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,12 h相对端粒酶活性为96,24 h为58,48 h为28,72 h起变为阴性.结论紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一.
-
舒林酸抑制人胃腺癌细胞增殖及诱导凋亡
目的在体外对舒林酸抗人胃腺癌细胞增殖和凋亡诱导作用及其机制进行初步研究.方法采用人胃腺癌细胞株MKN45,MKN28作为研究对象.体外药物敏感试验(MTT)检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应;分别用Hoechst33258细胞核荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察舒林酸诱导的细胞凋亡改变;应用Western斑点免疫印迹法观察经舒林酸2mmol·L-1和4mmol·L-1作用24 h后细胞内环氧化酶-2(COX-2)和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化.结果舒林酸对人胃腺癌细胞MKN45,MKN28的杀伤率随着剂量的增大和作用时间的延长而增加,舒林酸对不同类型的细胞杀伤率不同.舒林酸能够诱导人胃腺癌细胞MKN45,MKN28产生凋亡,凋亡诱导作用的强弱同样具有时间和剂量依赖性,而且对不同类型胃癌细胞的凋亡诱导效应有显著差异.经舒林酸2 mmol·L-1和4 mmol·L-1作用24 h后,MKN45细胞内COX-2和Bcl-2蛋白比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少,而MKN28细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达未出现明显变化.结论舒林酸在体外对人胃腺癌细胞株MKN45和MKN28有良好的增殖抑制作用,诱导凋亡是其抑制胃癌细胞增殖的重要作用机制.舒林酸对人胃腺癌细胞的抑制和凋亡诱导作用与其抑制细胞内环氧化酶-2,并进而抑制Bcl-2的表达有关,并可能与胃癌细胞的分化状态有关.
-
茶叶水提取物诱导LoVo细胞凋亡的差异
目的探讨几种绿茶、红茶和乌龙茶水提取物诱导大肠癌LoVo细胞凋亡的作用及其差异性方法用台盼蓝拒染法显示二种绿茶、二种红茶和二种乌龙茶水提取物对LoVo细胞的细胞毒作用;用HE染色、琼脂糖凝胶电泳观察上述处理因素对LoVo细胞在形态学和生化方面的影响,通过流式细胞仪对LoVo细胞的凋亡进行定量分析.结果台盼蓝拒染法显示不同品种的茶叶水提取物对LoVo细胞的生长具有抑制作用,并具有时间和剂量效应关系,这种细胞毒效应在不同茶叶水提取物之间存在差异.HE染色显示几种茶叶水提取物皆能诱导LoVo细胞的凋亡,出现典型的凋亡细胞形态学改变:细胞核固缩、碎裂等.琼脂糖凝胶电泳上呈现典型的"梯状”带流式细胞仪定量分析表明不同茶叶水提取物所致的凋亡率不同.结论不同品种的茶叶水提取物可诱导大肠癌LoVo细胞的凋亡,其作用强弱依次为绿茶、红茶和乌龙茶.茶叶诱导LoVo细胞凋亡除主要由其中的儿茶素介导外,可能还有其他成分的参与.
-
丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡
目的建立化疗药物体外诱导肝癌细胞凋亡的模型,为进一步研究化疗诱导肝癌细胞凋亡的分子机制奠定基础.方法丝裂霉素(MMC)处理人肝癌细胞系HepG2,荧光显微镜和透射电镜观察肝癌细胞的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA片段的"梯状”条带,流式细胞仪分析以进一步了解凋亡发生的程度及细胞周期分布情况.结果 MMC能以时间和浓度依赖方式诱导肝癌细胞凋亡,8 g@L-1作用24h后肝癌细胞出现凋亡,至48h达高峰.形态学上可见细胞浓缩,核固缩,染色质浓聚聚边等典型凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳观察到独特的DNA"梯带”.流式细胞仪检查发现典型的凋亡峰.4 g@L-1,8 g@L-1和16 g@L-1药物处理组的细胞凋亡百分率分别为15.83±5.72,20.33±5.73及17.00±6.41,与对照组(1.90±0.48)比较,均有显著性差异(P＜0.01);而且8 g@L-1组与其他两组比较差别亦有显著性(P＜0.05).空白对照组中,分布在G1,S,G2/M各期的细胞比例分别为0.79,0.12,0.09,而经药物处理后相应细胞周期分布为0.53,0.39和0.08,提示肝癌细胞生长明显受阻于Q/M期.结论 MMC能以时间和浓度依赖方式诱导肝癌细胞凋亡,该凋亡模型的建立将有助于进一步探讨化疗药物诱导肝癌细凋亡的分子机制和化疗药物作用机制.
-
复方中药体外保护肝细胞的机制
目的探讨复方中药制剂体外保护肝细胞的机制.方法用MTT法、荧光染色、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术等方法观察不同浓度中药复方制剂(包括黄芩、黄柏、板蓝根、山豆根等)抑制TNF-α+Act-D诱导正常大鼠肝细胞凋亡的作用,并检测各组清蛋白的分泌结果自组中药复方制剂能明显改善肝细胞的凋亡状况,出现了典型的形态学和生化学改变,但存在药物浓度上的差异.中药组(0.2,2 mg.L-1)的凋亡率(10.4%±1.2%,13.9±0.4%)低于凋亡模型组(vs17.4%±1.9%,n=3,P＜0.05),中药组(20mg.L-1)的凋亡率(18.30%±1.15%)与凋亡模型组相比没有显著性差异(P＞0.05).除此之外,自组中药复方制剂还促进肝细胞清蛋白的分泌,但存在作用时间和药物浓度的交互作用.结论复方中药制剂能够抑制正常肝细胞凋亡并促进其清蛋白分泌.
-
瑞香狼毒小鼠药物血清协同细胞毒化疗药物抗肝癌及机制研究
目的研究瑞香狼毒(SC)与细胞毒化疗药物的协同抗肝癌效应,探讨其协同抗癌作用机制.方法小鼠口服SC水提物10 g·kg-1,2 h后采集血清.将对数生长的人肝癌BEL-7402细胞用SC药物血清与阿霉素或VP-16联合处理,MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡,免疫组化测定细胞bcl-2蛋白表达,光学显微镜观察细胞形态改变.结果 50 g·L-1SC小鼠药物血清可明显增强阿霉素和VP-16体外抗肝癌活性,IG50分别由0.81 mmol·L-1和1.26mmol·L-1减小为0.32 mmol·L-1和0.29 mmol·L-1.流式细胞仪DNA分布图可见,VP-16 1 umol·L-1与50 g·L-1小鼠药物血清联合处理组C2/M期细胞较单独VP-16组增加68.2%(从0.22到0.37),亚二倍体凋亡细胞增加100.0%(从0.25到0.50),Bcl-2阳性表达细胞降低47.8%(从0.46到0.24).光镜下可见联合处理组细胞生长停滞,数量显著减少,部分细胞体积缩小,染色质凝集,核碎裂;单独VP-16组细胞形态改变较轻.结论瑞香狼毒可增强细胞毒化疗药物抗肝癌活性.协同诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2阳性表达,阻止肿瘤细胞周期于G2/M期是其主要机制.
-
三氧化二砷联合氟尿嘧啶抗人结肠癌Lovo细胞作用及其机制的研究
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)与氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠腺癌细胞株Lovo的影响及其作用机制.方法:经不同浓度的As2O3和(或)5-FU处理Lovo细胞后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应;AO/EB荧光染色、DNA电泳、电镜和流式细胞术观察细胞凋亡和形态学及细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达的变化.结果:与As2O3或5-FU单药作用相比,As2O3与5-FU联合应用可显著增强人结肠癌细胞增殖抑制作用和诱导结肠癌细胞凋亡作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1期细胞比例上升,癌细胞bcl-2基因表达明显下降,bax和Fas基因表达显著增强.结论:As2O3与5-FU联合应用具有显著协同抗大肠癌作用,其机制可能与增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性药物与细胞周期调控剂联合增效以及调控凋亡相关基因的表达有关.
-
青蒿琥酯对K562细胞凋亡诱导作用及其与亚砷酸的协同作用
目的:研究青蒿琥酯体外诱导K562细胞凋亡的作用及其与亚砷酸的协同作用.方法: 采用MTT法、透射电镜技术、流式细胞术检测青蒿琥酯或(和)亚砷酸作用后K562细胞的凋亡发生情况.结果:青蒿琥酯抑制K562细胞的增殖,IC50值为12.41 μg/mL,其有时间、剂量-效应关系;12.50～50.00 μg/mL的青蒿琥酯可诱导K562细胞凋亡,并具有一定的时间剂量-效应关系;12.50μg/mL青蒿琥酯与1.00 μmol/L亚砷酸联合作用于K562细胞48 h后,凋亡率为21.07%,与阴性对照(1.87%)、单独应用青蒿琥酯(7.45%)、亚砷酸(2.57%)相比,差异有统计学意义,χ2依次为1 128.39、335.47和1 058.40,P值均为0.000.结论: 青蒿琥酯对K562细胞具有凋亡诱导作用,并且与亚砷酸具有协同作用.
-
三氧化二砷对人肝癌细胞作用的研究
目的:应用体外培养的肝癌细胞株(SMMC-7721)观察砷剂(As2O3)的凋亡诱导作用.方法:采用MTT 法检测As2O3对肝癌细胞增殖的影响,DNA电泳及流式细胞仪检测不同浓度As2O3作用不同时间对肝癌细胞的凋亡诱导作用及细胞周期的影响.结果:As2O3抑制肝癌细胞的增殖并具有剂量-时效关系;As2O3可使肝癌细胞周期改变,与浓度有关,与作用时间未见明显关系;As2O3诱导肝癌细胞发生凋亡,并与浓度、时间有关.结论:As2O3能抑制肝癌细胞增殖,改变肝癌细胞周期,诱导肝癌细胞凋亡.
-
三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究
目的:研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人鼻咽癌细胞株(CNE1)增殖及诱导凋亡的作用.方法:以不同浓度的As2O3处理CNE1,用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况,细胞染色方法观察细胞凋亡的形态,原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞的DNA含量.结果:As2O3明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖,其抑瘤作用优于顺铂(DDP)和 5-氟尿嘧啶(5-FU).As2O3作用于细胞后,可见典型凋亡细胞的形态学改变:细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,凋亡小体形成等.流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体 "凋亡峰".结论: As2O3可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长和促进细胞凋亡的作用.
-
丁酸钠对体外培养的卵巢癌细胞生长影响及其机制探讨
目的:观察丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对体外培养的卵巢癌细胞3AO生长的影响,初步探讨其作用机制.方法:以人卵巢上皮癌细胞株3AO为肿瘤模型,采用不同浓度的NaB对其进行干预,MTT比色法测定NaB对3AO细胞增殖活性的影响,进一步通过光镜、电镜观察3AO细胞的形态学改变,进行DNA降解分析,并采用流式细胞技术分析细胞周期动力学变化.结果:NaB作用下3AO细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制,一定浓度的NaB作用一定时间,可诱导3AO细胞发生凋亡,光镜和电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变,DNA降解分析中出现典型的梯形条带,流式细胞技术分析发现NaB作用首先引起细胞周期分布的改变,随剂量的加大和用药时间的延长,凋亡率逐渐升高.结论:NaB通过诱导凋亡而抑制体外培养的3AO细胞生长,其机制可能与细胞G1期阻滞有关.
-
转染bcl-2基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡
目的:观察bcl-2对K562细胞凋亡的影响.方法:用真核表达质粒p290-bcl-2转染K562细胞,用RT-PCR和Western blot检测bcl-2 mRNA 和蛋白表达;用MTT实验检测K562 细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化;用DNA"ladder"检测bcl-2对凋亡的影响.结果:转染bcl-2后K562的bcl-2蛋白表达增高,细胞存活率明显提高,在足叶乙甙低于125 μmol/L时检测不到凋亡梯形DNA;而K562细胞在足叶乙甙为32 μmol/L时就能检测到凋亡梯形DNA.结论:若把bcl-2导入正常造血干细胞,从而增强干细胞对化疗药物的耐受性,这将对化疗具有重要意义.
-
阿仑膦酸盐促进体外培养鼠破骨细胞凋亡
目的:研究阿仑膦酸盐通过凋亡抑制破骨细胞性骨吸收的作用.方法:通过光镜、透射电子显微镜和原位末端标记显示形态学特征的方法确证阿仑膦酸盐可诱导体外培养破骨细胞凋亡.结果:破骨细胞和其前体细胞在阿仑膦酸盐处理后呈现凋亡的形态学特征.结论:阿仑膦酸盐导致破骨细胞量的减少可能和细胞凋亡有关.
-
三氧化二砷通过激活Caspases酶诱导髓性白血病细胞凋亡
目的:明确Caspases酶是否与三氧化二砷(As2O3)诱导的人髓性白血病细胞凋亡有关;明确蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的激活物PMA对As2O3与VP16诱导的细胞凋亡是否有不同的影响.方法:把NB4和HL60细胞株放入有或无Caspases酶抑制剂(Z-VAD.fmk或Y-VAD.Cho)的As2O3中进行培养;凋亡以细胞形态学,DNA梯带和流式细胞分析来评价.多聚的磷酸腺苷聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)裂解被用作Caspases酶激活的标志.结果:NB4和HL60细胞株在As2O3诱导凋亡的过程中均出现了PARP裂解;Z-VAD.fmk--Caspases酶广谱抑制剂,可以阻断As2O3诱导的细胞凋亡和PARP裂解;但Y-VAD.Cho--Caspases酶的选择性抑制剂,没有此效应;在足以激活PKC的条件下用PMA预培养HL60细胞2～8 h,不论对As2O3还是VP16诱导的凋亡均无明显影响.结论:对于培养的髓性白血病细胞,As2O3诱导细胞凋亡是始自瀑布式激活Caspases酶的远端,通过PARP裂解来实现的.PKC的激活,不论对于As2O3还是VP16诱导的细胞凋亡均无影响.
-
结扎冠状动脉对大鼠心肌凋亡相关基因表达的影响
目的:研究大鼠冠状动脉结扎时心肌组织中凋亡相关基因的表达状况与急性心肌缺血的关系.方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型.描记Ⅱ导心电图;检测血清肌酸激酶(creatine kinase, CK)活性、心肌组织丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性;RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、CPP32、Bcl-2和Bax在心肌组织的相对表达量.观察伪结扎组、结扎组、苦豆碱(aloperine, Alo)给药组(20 mg.kg-1)、普萘洛尔(propranolol, Prop)给药组(2 mg.kg-1)对上述各指标的影响.采用单因素方差分析(One Way ANOVA)对结果进行统计处理.结果:结扎大鼠左冠状动脉前降支可导致心电图明显的缺血性改变及血清CK活性显著升高;心肌组织的MDA含量和SOD活性显著增加;缺血心肌组织中Fas、CPP32和Bcl-2基因的表达显著增加(P＜0.001),Bax变化不明显(P＜0.05).Alo和Prop能明显缓解心电图的缺血性改变并降低血清CK活性;减少心肌组织的MDA含量和SOD活性;降低心肌组织Fas、CPP32和Bcl-2基因的表达(P＜0.001),对Bax影响不明显(P＜0.05).结论:结扎大鼠左冠状动脉前降支所致的急性心肌缺血性损伤与Fas参与、CPP32介导的心肌细胞凋亡有关,也与Bcl-2家族参与的心肌细胞凋亡有关.
-
细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡及其与细胞周期关系分析
目的分析细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的时间效应及其与细胞周期的关系.方法 (1)利用透射电镜观察细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时凋亡小体的形成.(2)应用流式细胞仪技术检测细胞色素C诱导HL-60细胞的凋亡率并分析其凋亡的时-效关系以及凋亡与细胞周期的关系.结果 (1)细胞色素C作用HL-60细胞24小时出现凋亡,形成凋亡小体.(2)细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的作用体现一定的时间效应,8～24小时作用时间范围内,凋亡率随时间延长而明显增高.(3)细胞色素C诱导HL-60凋亡与细胞周期密切相关,随凋亡率升高,S期和G2期细胞比例随之下降,且S期细胞比例与凋亡率二者呈显著负相关(r=-0.718,P<0.01).结论细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期密切相关,其周期特异性具有一定的实际意义.
-
吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响
目的观察吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡,及其对cyclin E蛋白的影响.方法采用MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌HepG2细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对HepG2细胞周期分布的影响,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对HepG2细胞周期调控蛋白cyclin E的影响.结果吲哚美辛可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡,改变细胞周期分布,使G0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,同时还可使cyclin E蛋白表达下降.上述作用具有剂量和时间依赖性(P<0.05).结论吲哚美辛可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,从而抑制细胞增殖.
-
白血病细胞多药耐药的凋亡机制及其对策
白血病治疗中出现耐药是提高疗效的一大障碍,其中又以多药耐药(multidrug resistance,MDR)为主要形式,其具体发生机制尚未完全明了.大量研究结果提示细胞凋亡途径不能被激活可能就是白血病细胞耐药的本质,现就多药耐药的凋亡机制及其有关对策综述如下.
