首页 > 文献资料
-
缺氧、缺血对新生鼠大脑半胱氨酸蛋白酶活性的影响
目的探讨缺氧、缺血对新生鼠大脑组织天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3（简称caspase-3）活性的影响及意义。方法选择7 d龄Sprague-Dawley大鼠33只，结扎左侧颈总动脉后，吸入8%氧气2 h，制成缺氧、缺血性脑损伤（HIBD）动物模型，HIBD后0.5、12、24、48 h取两侧大脑组织制成组织匀浆，用显色底物天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-对硝基苯胺复合物测定caspase-3活性。结果缺氧、缺血侧大脑组织caspase-3活性逐渐增高，24 h后吸光度值达1.004 7±0.439 0，48 h后降至0.456 9±0.228 5，各时点间差异有极显著性（P<0.001）。对侧大脑组织各时间点caspase-3活性未见明显变化（P>0.05）。结论新生鼠大脑缺氧、缺血后caspase-3明显激活，支持细胞凋亡参与HIBD，应用caspases抑制剂或其他抗凋亡药物，有可能为HIBD的治疗开辟新的途径。
-
Caspase活化的细胞凋亡在老年非小细胞肺癌组织中的表达
目的:研究老年非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Caspase活化的癌细胞凋亡与临床病理特征的关系.方法:对手术切除的老年NSCLC组织标本50例(鳞癌24例,腺癌26例),采用Caspase特异的单克隆抗体-M30 CytoDEATH免疫组化染色方法显示凋亡细胞,计算凋亡指数(AI).结果:28.0%(14/50)的肺癌组织标本中可见不同程度的M30表达.其中肺鳞癌组织的M30阳性表达率(41.7%)明显高于肺腺癌(15.3%),差异有显著意义,P<0.05;肺鳞癌组织的AI亦高于腺癌,差异有显著意义,P<0.05.低分化NSCLC组织的AI高于中、高分化的NSCLC组织,差异有显著意义,P<0.05;低分化鳞癌组织的AI明显高于中、高分化的鳞癌,差异有显著意义,P<0.05.M30的表达与其他临床病理学特征无相关性.结论:非小细胞肺癌组织中存在Caspase活化的自发性癌细胞凋亡机制,且Caspase的表达与组织类型及组织分化程度有关.
-
薯蓣苷元诱导人黑素瘤细胞A375-S2凋亡依赖半胱天冬酶和MAPK途径
目的研究薯蓣苷元诱导人黑素瘤细胞A375-S2凋亡的机制.方法 MTT法测定细胞生长抑制率及半胱天冬酶和有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)抑制剂对薯蓣苷元诱导细胞凋亡的影响.电镜观察细胞形态变化.流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布.用半胱天冬酶活力检测试剂盒测定半胱天冬酶活力.结果薯蓣苷元抑制A375-S2细胞的生长呈时间-剂量依赖性.经薯蓣苷元处理后的A375-S2细胞表现出典型的凋亡特征:细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、染色质浓集、边聚.流式细胞仪检测表明薯蓣苷元导致DNA片段化和细胞周期阻滞在G0/G1期.半胱天冬酶家族抑制剂(z-VAD-fmk )和p38 MAPK抑制剂(SB203580)可部分抑制薯蓣苷元诱导的A375-S2细胞凋亡.结论薯蓣苷元可诱导A375-S2细胞凋亡.其诱导凋亡作用与半胱天冬酶及MAPK的活化相关.
-
三氧化二砷通过激活Caspases酶诱导髓性白血病细胞凋亡
目的:明确Caspases酶是否与三氧化二砷(As2O3)诱导的人髓性白血病细胞凋亡有关;明确蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的激活物PMA对As2O3与VP16诱导的细胞凋亡是否有不同的影响.方法:把NB4和HL60细胞株放入有或无Caspases酶抑制剂(Z-VAD.fmk或Y-VAD.Cho)的As2O3中进行培养;凋亡以细胞形态学,DNA梯带和流式细胞分析来评价.多聚的磷酸腺苷聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)裂解被用作Caspases酶激活的标志.结果:NB4和HL60细胞株在As2O3诱导凋亡的过程中均出现了PARP裂解;Z-VAD.fmk--Caspases酶广谱抑制剂,可以阻断As2O3诱导的细胞凋亡和PARP裂解;但Y-VAD.Cho--Caspases酶的选择性抑制剂,没有此效应;在足以激活PKC的条件下用PMA预培养HL60细胞2～8 h,不论对As2O3还是VP16诱导的凋亡均无明显影响.结论:对于培养的髓性白血病细胞,As2O3诱导细胞凋亡是始自瀑布式激活Caspases酶的远端,通过PARP裂解来实现的.PKC的激活,不论对于As2O3还是VP16诱导的细胞凋亡均无影响.
-
caspase-3抑制药和钙拮抗药联合应用对氧糖剥夺性神经元缺血损害的保护作用
目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制药Ac-DEVD-CHO与钙拮抗药尼莫地平对神经元缺血性损害的协同保护作用.方法 利用新生(＜24h)Wistar大鼠皮质基底节神经元进行原代分散培养,建立氧糖剥夺离体神经元"缺血"模型,采用乳酸脱氢酶测定法评价培养神经元的损害程度;并通过荧光免疫吸附酶法检测caspase-3活性,观察caspase-3抑制药Ac-DEVD-CHO(0.50μg/ml)、钙拮抗药尼莫地平(20μmol/L)及二者联合应用对氧糖剥夺4 h神经元损害和caspase-3活性的影响.结果 Ac-DEVD-CHO、尼莫地平及二者联合用药均可显著减轻氧糖剥夺4 h后的神经元损害,并可抑制caspase-3活性的升高,与氧糖剥夺对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);两药联合应用具有明显协同作用.结论 caspase-3抑制药与钙拮抗药对缺血性神经元具有协同保护作用.
-
腹部开放伤合并海水浸泡后致肠功能障碍半胱氨酸蛋白酶-3的表达与细胞凋亡的关系
目的 研究腹部开放伤合并海水浸泡所致肠功能障碍发生过程中小肠上皮细胞的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)的表达与细胞凋亡的关系.方法 原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠腹部致伤后不浸泡、0.9%氯化钠溶液浸泡、海水浸泡结束后细胞凋亡的发生及变化特点.免疫组化检测各组凋亡相关蛋白Caspase-3表达变化.结果 正常大鼠小肠上皮散在TUNEL阳性细胞,Caspase-3阳性细胞主要在小肠上皮绒毛处呈中等阳性表达.腹部致伤后不浸泡及0.9%氯化钠溶液浸泡组TUNEL阳性细胞较对照组增多,而Caspase-3表达亦较对照组增高.海水浸泡组的TUNEL阳性细胞及Caspase-3表达较0.9%氯化钠溶液浸泡组及不浸泡组明显增多.结论 在大鼠腹部开放伤合并海水浸泡导致的肠功能障碍无论从形态学上及凋亡蛋白的表达上均较不浸泡和0.9%氯化钠溶液浸泡严重,大量肠细胞凋亡的发生可能是海战伤中早期出现肠功能障碍的主要原因.
-
bcl-2小分子干扰 RNA 对人子宫内膜癌RL -952细胞阿霉素敏感性的影响
目的：研究靶向bcl-2小分子干扰 RNA （ siRNA ）干扰序列对人子宫内膜癌RL-952细胞阿霉素（ DOX）敏感性的影响及相关作用机制。方法2014年5—8月，将siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞，设3个实验组：空白对照组、 bcl-2 siRNA干扰组（转染bcl-2 siRNA干扰序列）及阴性对照组（转染siRNA空载序列），检测bcl-2 siRNA干扰组的转染效率和3组bcl-2表达水平。将细胞随机分成5组，分别为空白对照组、阴性对照组（转染siRNA空载序列）、干扰组（转染bcl-2 siRNA干扰序列）、 DOX组（加入5μg／ml DOX）、联合组（转染siRNA干扰序列并加入5μg／ml DOX），检测细胞活力、细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶（ Caspase ）-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平。结果 siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞的转染效率为（94.6±12.5）％。3组bcl-2表达水平比较，差异有统计学意义（F＝8.75， P＜0.05）。 bcl-2 siRNA干扰组bcl-2表达水平低于空白对照组和阴性对照组（q＝3.99、2.87， P＜0.01）。5组细胞活力比较，差异有统计学意义（F＝42.52， P＜0.05）。干扰组、DOX组、联合组细胞活力低于空白对照组（ q ＝7.66、8.64、6.89， P＜0.05）；联合组细胞活力低于DOX 组（ q＝6.76， P＜0.01）。5组细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（F＝112.34， P＜0.05）。干扰组、 DOX组、联合组细胞凋亡率高于空白对照组（q＝5.78、4.99、6.21， P＜0.05）；联合组细胞凋亡率高于DOX组（q＝4.89， P＜0.01）。5组Caspase-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）。干扰组、 DOX组、联合组Caspase-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平高于空白对照组（P＜0.05）； DOX组、联合组Caspase-3活性高于阴性对照组，干扰组、 DOX组、联合组Caspase-9活性高于阴性对照组（ P＜0.05）；联合组Caspase-3活性高于干扰组， DOX组、联合组Caspase-9活性高于干扰组（ P＜0.05）；联合组Caspase-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平高于DOX组（ P＜0.05）。结论靶向bcl-2 siRNA干扰序列可以增强人子宫内膜癌RL-952细胞的DOX敏感性， bcl-2可作为人子宫内膜癌基因治疗的候选靶点。
-
藏雪莲多糖通过P38丝裂原激活蛋白激酶通路减轻中波紫外线辐射后皮肤角质形成细胞凋亡引起炎性损伤的研究
目的：探讨藏雪莲（SSB）多糖是否通过P38丝裂原激活蛋白激酶（P38MAPK）通路减轻中波紫外线（ UVB）辐射后皮肤角质形成细胞（ HaCaT细胞）凋亡引起炎性损伤。方法2014年10月—2015年3月，提取SSB多糖，体外培养 HaCaT 细胞，将 HaCaT 细胞分为低剂量辐射组（30 mJ/cm2，辐射1 h， A 组）和高剂量辐射组（60 mJ/cm2，辐射1 h，B组）；将A组和B组又分别分为对照组（1组）、辐射组（ UVB，2组）、低剂量SSB多糖组（UVB+SSB 10 mg/ml，3组）和高剂量SSB多糖组（UVB+SSB 40 mg/ml，4组）。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测并比较白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF -α）、P38MAPK、P53、B 细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关X（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase -3）水平。结果 A2组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平高于A1组，Bcl-2水平低于A1组（P<0.05）；A3组IL-6、TNF-α、P38MAPK、Caspase-3水平高于A1组（P<0.05）；A4组TNF-α、Bcl-2水平高于A1组（P<0.05）；A3组、A4组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平低于A2组，Bcl-2水平高于A2组（P<0.05）；A4组IL-6、TNF-α、Caspase-3水平低于A3组，Bcl-2水平高于A3组（P<0.05）。B2组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平高于B1组，Bcl-2水平低于B1组（P<0.05）；B3组IL-6、TNF-α水平高于B1组，Bcl-2水平低于B1组（P<0.05）；B4组IL-6、Bcl-2水平高于B1组， TNF -α、Caspase -3水平低于 B1组（ P <0.05）；B3组、B4组IL-6、TNF -α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平低于 B2组，Bcl-2水平高于 B2组（P <0.05）；B4组IL-6、TNF -α、Caspase-3水平低于B3组，Bcl-2水平高于B3组（P<0.05）。结论 SSB多糖通过P38MAPK通路减少UVB辐射后HaCaT细胞凋亡，进而减轻HaCaT细胞的炎性损伤。
-
黑枸杞水提物对中波紫外线辐射后人角质形成细胞增殖与凋亡及凋亡相关蛋白表达水平的影响研究
目的 研究黑枸杞水提物对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成(HaCaT)细胞增殖与凋亡及凋亡相关蛋白〔P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)、P53、半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)〕表达水平的影响,以期探讨黑枸杞水提物减轻UVB损伤HaCaT细胞的作用机制.方法 2015年3月-2016年1月,提取黑枸杞水提物,体外培养HaCaT细胞,取对数生长期的HaCaT细胞,采用随机数字表法分为对照组(无辐射)、UVB组(30 mJ/cm2 UVB辐射40 min)、黑枸杞水提物组(30 mJ/cm2 UVB辐射40 min+黑枸杞水提物2 mg/ml).采用MTS法检测各组细胞增殖活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组P38MAPK、P53、caspase-8、caspase-3、Bcl-2表达水平.结果 UVB组细胞增殖活力小于对照组(P<0.05);黑枸杞水提物组细胞增殖活力小于对照组,大于UVB组(P<0.05).UVB组细胞凋亡率大于对照组(P<0.05);黑枸杞水提物组细胞凋亡率大于对照组,小于UVB组(P<0.05).UVB组P38MAPK、P53、caspase-8、caspase-3表达水平高于对照组,Bcl-2表达水平低于对照组(P<0.05);黑枸杞水提物组P38MAPK、P53、caspase-8、caspase-3表达水平低于UVB组,Bcl-2表达水平高于UVB组(P<0.05).结论 黑枸杞水提物可促进UVB辐射后HaCaT细胞的增殖,同时阻止其凋亡,其机制可能为黑枸杞水提物能够下调P38MAPK、P53、caspase-8、caspase-3表达水平及上调Bcl-2表达水平,进而减轻HaCaT 细胞的辐射损伤.
-
血清脂蛋白 CysC Hcy 及 hs-CRP 水平变化与动脉粥样硬化性疾病的相关性分析
目的：探讨血清脂蛋白、胱抑素 C(CysC)、同型半胱氨酸(Hcy)及超敏 C 反应蛋白(hs-CRP)水平变化与动脉粥样硬化性疾病的相关性。方法选取2010年6月至2011年6月本院诊治的90例高血压患者为研究对象，同期选取健康体检者32名为对照组，对所有研究对象行颈动脉超声检查及血清脂蛋白、CysC、Hcy、hs-CRP 检测，并进行对比分析和 Logistic 回归分析。结果高血压1、2、3级患者的血清脂蛋白、CysC、Hcy 及 hs-CRP 水平均显著高于对照组患者(P <0.05)；随着患者血压的升高，血清脂蛋白、CysC、Hcy、hs-CRP 的浓度逐渐升高(P <0.05)；Logistic 回归分析显示，血清脂蛋白 A、CysC、Hcy、hs-CRP 变化水平是心脑血管不良事件发生的独立影响因素。结论血清脂蛋白、CysC、Hcy 及 hs-CRP 含量的增高与动脉粥样硬化性疾病具有密切的关系，并且与患者疾病的严重程度呈正相关。应及早检测相关危险因子，为临床治疗、预防动脉粥样硬化性疾病提供依据。
-
不同年龄大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切半胱氨酸蛋白酶3的活性及坐骨神经损伤后的表达变化
目的:观察不同年龄大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达情况及其在坐骨神经损伤后的表达变化,并分析其与脊髓细胞凋亡的关系.方法:实验于2004-03/09在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成.选择Wistar大鼠324只,成年、幼年、老年大鼠各108只.不同年龄组动物均随机分为对照组和手术组,对照组12只为非手术组;手术组共96只,分为术后1 d,3 d,1周、2周、3周、4周、5周、6周8个时间组,每组12只.各手术组大鼠均在戊巴比妥钠麻醉后,切除股方肌下缘约6 mm的坐骨神经.大鼠脊髓细胞凋亡情况采用原位缺口末端标记法及流式细胞仪Annexin V/PI双标检测法,原位缺口末端标记阳性细胞及Annexin V阳性细胞即凋亡细胞;大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达情况应用免疫组化法检测;大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性应用Activity Assay试剂盒检测.结果:所有大鼠全部进入结果分析,无脱失.①脊髓细胞凋亡情况的原位缺口末端标记及流式细胞仪Annexin V/PI双标检测结果:正常成年及老年大鼠未见明显标记的阳性细胞,正常幼年大鼠可见个别阳性标记细胞,坐骨神经损伤诱导脊髓神经细胞凋亡的高发时间为伤后2～4周,老年大鼠细胞凋亡持续时间较长.各手术组正常侧与对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).不同年龄大鼠Annexin V阳性细胞出现时间均早于原位缺口末端标记阳性细胞.②天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性及表达情况比较:幼年正常组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达及天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性均高于成年及老年大鼠(P＜0.01),损伤后各年龄组均有明显变化,幼年正常组损伤后1 d天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3开始升高,升高时间早于成年及老年组.各手术组正常侧与对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论:脊髓细胞凋亡情况与天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性测定结果有较好的相同改变趋势,提示天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的活化是细胞凋亡的早期生物化学指标.不同年龄大鼠正常时脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达以其在坐骨神经损伤后的表达变化存在差异,说明针对不同年龄段发生的周围神经损伤,其促进神经再生调控时期不同.
-
荧光定量聚合酶链反应法检测光感受器细胞凋亡大鼠视网膜中半胱氨酸蛋白酶3 mRNA的表达
目的:检测半胱氨酸蛋白酶3 mRNA在光感受器凋亡大鼠视网膜中的表达,探讨其在光感受器细胞凋亡的发生、发展中的意义.方法:实验于2004-03/12在中山眼科中心眼科学教育部重点实验室完成.选择雌性SD大鼠36只,随机数字表法分为正常对照组6只,N-甲基-N-亚硝脲组30只,后者又分为造模后12 h,1,2,3,5 d 5个时相点,每个时相点6只.正常对照组大鼠经腹腔注射生理盐水;N-甲基-N-亚硝脲组大鼠按体质量一次性腹腔注射N-甲基-N-亚硝脲40mg/kg,分别于造模后12 h,1,2,3,5 d处死动物,摘除右眼球,立即分离视网膜,提取总RNA,用荧光定量聚合酶链反应法检测视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA的含量.结果:纳入动物36只,均进入结果分析.正常对照组、N-甲基-N-亚硝脲组造模后12 h,1,2,3,5 d 5个时相点视网膜中半胱氨酸蛋白酶3mRNA表达量分别为1.52×105,18.35×105,25.14×105,29.25×105,13.72×105,12.24×105.N-甲基-N-亚硝脲腹腔注射后12 h视网膜中半胱氨酸蛋白酶3 mRNA表达量上升,第2天时高,达正常对照组表达量的19倍,此后渐下降,第5天表达量仍为正常对照组的8倍.结论:视网膜中半胱氨酸蛋白酶3 mRNA表达与光感受器细胞的存亡有关,可作为光感受器细胞凋亡发生、发展的预测指标之一.
-
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡的影响
背景:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在正常细胞中以酶原形式存在,受凋亡刺激因素作用后能够被激活从而引起细胞凋亡.目的:通过检测脑海马组织胞质S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及海马区神经元凋亡情况,探讨全脑缺血再灌注后脑海马神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的关系.设计:随机对照实验.单位:解放军第三军医大学西南医院急救部.材料:实验于1999-01/04在解放军第三军医大学西南医院完成.选取雄性Wistar大鼠182只,随机分为3组:假手术组14只,脑缺血再灌注组84只,乙酰天冬氨酰谷氨酰缬氨酰天冬氨酸乙醛(acetyl-asp-glu-valasp-aldehyde,AC-DEVD-CHO)治疗组84只,后两组均设立缺血再灌注8,24,48,72,120,168 h 6个时相点,每个时相点14只大鼠.方法:脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组建立大鼠全脑缺血20 min再灌注模型,分别于再灌注后8,24,48,72,120,168 h处死取海马组织;假手术组施行麻醉及手术,但不夹闭颈总动脉和烧灼椎动脉,术后观察72 h后处死取海马组织备检.以单位质量标本于单位时间内裂解产生的氨甲基香豆素量表示标本中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性.各组不同时相点脑组织切片封固后在荧光显微镜下于330～350 nm处观察脑海马细胞凋亡情况.主要观察指标:①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化.②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况.③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系.结果:实验纳入182只大鼠,脱落14只,共168只大鼠进入结果分析.①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化:假手术组术后观察72时为0.与脑缺血再灌注组比较,AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24,48,72,120,168 h均明显降低[(1.71±0.03),(1.22±0.03);(2.77±0.09),(1.59±0.7);(5.54±0.51),(2.3±0.19);(6.28±1.71),(3.43±0.46);(3.11±1.21),(1.73±0.14)nkat/kg;P＜0.05或0.01].②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况:每400倍视野下,假手术组术后观察72 h为(1.2±0.4)个.与脑缺血再灌注组比较,AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24,48,72,120,168 h均明显降低[(6.4±1.7),(2.8±0.8);(11.8±1.3),(5.8±1.9);(19.8±3.1),(10.0±1.9);(31.2±5.9),(16.4±2.4);(19.8±2.3),(9.0±2.3)个/400倍视野;P＜均0.01].③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系:脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组均行直线相关分析,二者的变化呈显著正相关(r分别为0.935 6及0.980 0,P均＜0.01).结论:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活是引起海马神经元调亡的主要因素之一,在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用.
-
地塞米松诱导胸腺细胞凋亡在神经免疫性疾病研究中的意义
目的观察地塞米松诱导胸腺细胞 caspase- 3蛋白与 p38MAPK的表达变化,探讨地塞米松诱导胸腺细胞凋亡在神经免疫性疾病研究中的意义.方法采取体外细胞培养 Balb/c小鼠 (体质量 20 g左右的 Balb/c小鼠 , 雌雄不限 )胸腺细胞的方法,制备地塞米松诱导的细胞凋亡模型,通过流式细胞仪观察凋亡细胞数量的变化情况.运用 Western blotting技术检测地塞米松处理的 Balb/c小鼠胸腺细胞 0, 30, 60, 180 min时相点 caspase- 3蛋白与 p38MAPK的表达变化.结果地塞米松可以诱导 Balb/c小鼠胸腺细胞发生凋亡,发生的比例是 21.75%.随后的 western blot检测显示,伤后即刻 p38MAPK开始表达,并在 60 min达到高峰,随后有所减弱.而 caspase- 3蛋白的表达开始较弱呈逐渐升高的趋势,一直持续至伤后 180 min.结论 p38MAPK信号通路在地塞米松诱导的 Balb/c小鼠胸腺细胞凋亡过程中起重要作用.
-
半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注损伤皮质中的动态时空表达
目的:观察半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注不同时间、灶周皮质的动态时空变化.方法:实验于2005-05/08在河北医科大学第二医院神经分子影像医学和神经病学实验室完成.①选择清洁级健康新西兰白兔66只,雄性,兔龄4.5～5个月,体质量(2.6±0.2)kg,采用兔大脑中动脉阻断局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组(n=6),模型组(n=60),模型组按再灌注时间又分为6个时间点,即1 h、6 h、1 d、3 d、7 d、14 d,每个时间点10只大白兔,各时间点依方法不同又分为组织学检测组(n=5)和流式细胞术检测组(n=5).②采用免疫组化SP法检测皮质半胱氨酸蛋白酶3表达:应用Meta Morph显微图像分析系统于400倍光镜下随机观察并测量灶周皮质5个不重复视野神经细胞胞浆半胱氨酸蛋白酶3阳性表达光密度值,计算其平均数.③流式细胞术检测细胞凋亡率和灶周皮质半胱氨酸蛋白酶3的表达:经计算机分析系统,绘制细胞数DNA分布图,以二倍体峰前亚二倍体峰(凋亡峰)判定细胞凋亡,计算DNA断裂的凋亡细胞百分数(细胞凋亡率).④透射电镜取材和观察:开颅取脑后,立即取梗死灶周1 mm×1 mm×2 mm大小的标本,经过一系列处理后,在光镜下进一步确认已切到梗死灶周后,行超薄切片.醋酸铀、枸橼酸铅双重染色后,日立H-9000型透射电镜进行超微结构观察并照相.⑤结果行单因素方差分析.结果:66只大白兔全部进入结果分析.①免疫组化及流式细胞术分析发现,半胱氨酸蛋白酶3在2 h缺血再灌注l h迅速增多,并随再灌注时间延长而加剧,3 d达高峰,然后逐渐下降,14 d仍高于基线水平.②灶周皮质凋亡率和脱氧核苷酰转移酶法计数TUNEL阳性细胞数在再灌注1 h也逐渐增多,1～3 d达高峰,然后逐渐下降,14 d降至基线水平.③超微结构显示假手术组的细胞结构正常.再灌注3 d神经元损伤重,7 d时形态有所改善.结论:半胱氨酸蛋白酶3活性表达在再灌注期先于凋亡发生前,并且其表达时程较长,是检测缺血再灌注凋亡的敏感指标,也是溶栓后治疗的靶点.
-
黄芪对新生鼠乏氧缺血脑损伤后海马区神经的保护及学习记忆能力的干预
背景:黄芪可通过减轻兴奋性氨基酸的释放及在细胞间的堆积、缓解Ca2+超载、抗氧化等途径抑制凋亡的发生.目的:将黄芪用于未成熟脑缺氧缺血脑损伤的治疗,一方面检测其对海马缺氧缺血后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA表达水平的影响,另一方面通过迷宫实验观察黄芪对缺氧缺血脑损伤的成熟鼠学习记忆能力的干预.设计:随机对照实验.单位:东南大学临床医学院/附属中大医院儿科,基础医学院病理科.材料:实验于2002-10/2003-06在东南大学临床医学院实验中心完成.选取出生7 d的同窝SD大鼠114只,随机分成3组:假手术组18只,模型组48只,黄芪治疗组48只.黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂生产,规格为10 mL/支,含生药20 g.方法:模型组与黄芪治疗组建立缺氧缺血脑损伤模型,假手术组不造模.黄芪治疗组于造模后即刻及每天同一时间腹腔注射0.08 mL黄芪注射液,7 d后停药,模型组于同时间腹腔注射等量生理盐水,假手术组不给药.黄芪治疗组及模型组在缺氧缺血后24 h,5 d断头取脑,假手术组于假手术后24 h断头取脑.各组海马区脑损伤行组织病理学检测,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA的表达采用半定量反转录-聚合酶反应方法进行检查,成年90 d龄的大鼠进行三等分迷宫测试其学习记忆能力,3个实验各自独立.主要观察指标:①各组海马区脑损伤组织病理学检测.②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA的表达.③三等分迷宫试验结果.结果:实验纳入大鼠114只,全部进入结果分析.①各组海马区脑损伤组织病理学检测:假手术组双侧海马区组织无水肿、坏死,神经细胞形态正常,神经细胞数为(87.7±0.6)×103/高倍视野.模型组24 h时结扎侧海马区水肿,细胞周围间隙增宽,神经细胞数减少为(68.8±3.0)×103/高倍视野,与假手术组比较差异显著(P＜0.01);5 d时结扎侧海马体积缩小,锥状细胞层紊乱,神经细胞稀少至(48.7±2.2)×103/高倍视野,与假手术组及同侧24 h时比较均有显著差异(P＜0.01).黄芪治疗组24 h时结扎侧海马区组织水肿较模型组明显减轻,5 d时可观察到完整的海马形态,此两时间点神经细胞死亡率均较模型组明显减低(P＜0.01).②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA的表达:假手术组以低水平表达,吸光度值为0.220±0.009.模型组于缺氧缺血后逐渐升高,6 h时比假手术组升高11%,至24 h时mRNA水平达高峰,较假手术组约升高260%(P＜0.01),高峰持续至48 h后下降,5 d和7 d时恢复基础水平.黄芪治疗组变化趋势与模型组相似,但在24,48 h两时间点时峰值降低了44%～46%,与模型组比较差异显著(P＜0.01).③三等分迷宫试验结果:与模型组比较,黄芪治疗组达到学会标准所需训练次数明显减少[(45.7±2.7),(16.1±2.5)次,P＜0.01],缺氧缺血24 h后记忆保持率显著提高[(48.3±11.7),(80.0±9.0)%,P＜0.01].结论:黄芪可以有效抑制未成熟脑缺氧缺血损伤后海马区神经细胞的凋亡,提高神经细胞存活率,此种保护作用与抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达有关.同时黄芪能够明显改善未成熟脑缺氧缺血损伤后的学习记忆能力.
-
针刺对脑缺血再灌注模型大鼠海马caspase-3 mRNA表达的影响
目的:探讨针刺对脑缺血再灌注大鼠脑组织保护作用的机制.方法:参考Bederson6级5分法进行神经功能评分和用原位杂交技术检测脑缺血再灌注24h后大鼠海马caspase-3 mRNA的表达.结果:穴位针刺组较非穴位针刺组扣模型组更显著的改善大鼠缺损的神经功能(P<0.05).穴位针刺可以下调脑缺血再灌注大鼠海马caspase-3 mRNA的表达,与模型组、非穴组相比,差异有显著性(P<0.01).结论:针刺能够改善脑缺血再灌注后大鼠神经功能损伤,其作用机制可能是通过下调caspase-3的表达,抑制凋亡实现的.
-
亚低温降低新生大鼠缺氧缺血脑损伤半胱氨酸蛋白酶活性
目的探讨亚低温治疗对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)脑组织天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响及意义.方法将HIBD模型鼠随机分为常温缺氧缺血(IN)组(肛温37℃)和亚低温缺氧缺血(IH)组(肛温33℃);对照组为假手术动物,分为常温对照(CN)组和亚低温对照(CH)组.采用显色底物天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸-7-氨基-4-三氟甲基香豆素(DEVD-AFC)测定caspase-3酶的活性,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测脑细胞凋亡.结果缺氧缺血侧大脑组织caspase-3活性逐渐增高,以IN组明显,24 h达高蜂(34.7±3.2),然后逐渐下降,但48 h(12.9±4.1)和72 h(4.2±0.9)后仍有明显增高;亚低温可明显降低caspase-3活性的增高,以亚低温治疗24 h(2.4±0.5)明显,与IN组比较,差异有显著性(P＜0.001);72 h亚低温还可显著降低脑细胞凋亡的发生率,为(6.4±1.7)%,与IN组的(25.3±1.5)%相比,差异有显著性(P＜0.01);72 h亚低温对细胞坏死无明显改善,细胞坏死率为(11.2±0.7)%,与IN组的(13.0±1.4)%相比,差异无显著性(P＞0.05).caspase-3活性与脑细胞凋亡发生率呈正相关(r=0.78,P＜0.01).结论亚低温治疗可通过降低缺氧缺血后caspase-3酶的活性,减轻脑细胞凋亡,从而起到脑保护作用.
-
生存素表达与子宫内膜异位症的关系
子宫内膜异位症(EMS)是良性疾病,但在细胞增殖、凋亡、血管形成、侵袭性等方面与恶性肿瘤有共同之处.IAP家族成员生存素(survivin)在凋亡抑制中具有关键性作用.近年研究发现,EMS患者在位、异位内膜中生存素的表达与正常妇女子宫内膜存在明显区别,可能参与EMS的发病机制.以生存素作为靶分子可以作为EMS诊断、治疗中新的突破点.
-
Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系
目的探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系.方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性.并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率.结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P＜0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P＜0.05).结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关.
