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霉酚酸酯对蛋白超载肾病大鼠p38丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的影响
目的 探讨霉酚酸酯(MMF)对蛋白超载肾病大鼠p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路的影响.方法 SD大鼠30只分3组(n=10):对照组(生理盐水)、BSA组[牛血清白蛋白(BSA)超载肾病大鼠]、治疗组(BSA+MMF).采用蛋白超载肾病大鼠模型,于4周后观察各组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、24h尿蛋白定量;免疫组织化学检测核因子κB(NF-κB),应用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB的活性变化;Western免疫印迹分析法检测p38 MAPK的磷酸化水平.光镜和电镜观察大鼠肾组织形态改变.结果 光镜和电镜显示BSA组大鼠出现肾间质淋巴、单核细胞浸润、肾小管萎缩和纤维化等病变;治疗组病变较BSA组明显减轻.与对照组比较,BSA组大鼠24 h尿蛋白增加[(48.3±3.3)mg/24h比(67.8±4.5)mg/24 h,P<0.05],NF-κB和p38 MAPK表达增加(45.24±6.25比88.59±7.43和80.68±8.34比235.23±10.41,P<0.05),且p38 MAPK表达与NF-κB和24h尿蛋白定量呈正相关(r=0.72,r=0.65,P<0.05).与BSA组比较,治疗组MMF可减少尿蛋白排泄[(59.1±4.2)mg/24 h,P<0.05],同时抑制p38 MAPK磷酸化和NF-κB的表达(P<0.05).结论 MMF可减少NF-κB的表达,其机制可能依赖于抑制p38 MAPK的磷酸化.
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沙门菌效应分子SopB激活HeLa细胞MAPK蛋白激酶的磷酸化
目的 研究沙门菌感染宿主细胞的过程中,沙门菌Ⅲ型分泌系统分泌的效应蛋白SopB对宿主细胞蛋白激酶MAPK的激活作用,同时寻找SopB蛋白与MAPK激活有关的结构域.方法 通过基因克隆的方法将沙门菌SopB全长基因以及各种SopB truncation均被克隆至pCS2-EGFP质粒载体中,利用磷酸钙转染法将该SopB重组质粒转染至HeLa细胞,24h后通过western blot方法利用磷酸化的pERK 1/2、p-p38以及pJNK抗体检测HeLa细胞MAPK蛋白激酶受SopB激活的情况.结果 在HeLa细胞中过量表达SopB蛋白能够显著诱导蛋白激酶MAPK的磷酸化激活,进一步在HeLa细胞中表达SopB各种truncation片段证实,SopB对HeLa细胞MAPK蛋白激酶的激活与其N末端29个氨基酸直接相关.结论 SopB可以激活宿主细胞MAPK信号途径,且这种活性与其N末端29个氨基酸有关.
关键词： 沙门菌属 丝裂原激活蛋白激酶类 蛋白激酶类 泛素化 磷酰化 -
神经生长因子对人脐静脉内皮细胞在体外形成管腔样结构的影响
目的 探讨神经生长因子(NGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在体外形成管腔样结构(LLSs)的影响及其信号机制.方法 将接种在基质胶上的HUVECs分为空白对照组、NGF组、NGF中和抗体组、对照IgG组、NGF中和抗体+NGF组、对照IgG+NGF组,以相差显微镜直接观察LLSs形态,并通过二脒基苯基吲哚/鬼笔环肽免疫荧光染色观察LLSs的细胞组成.为证实NGF促LLSs形成的信号通路.向培养液中分别预先加入丝裂原活化蛋白激酶3个主要信号通路的特异性抑制剂(PD98059、SB203580及SP600125),观察上述3个信号通路对NGF促LLSs形成的影响,并应用Western blot检测NGF及c-Jun N末端激酶(JNK)特异性抑制荆SP600125对HUVECs JNK表达及活性的影响.结果 NGF组LLSs的平均面积较空白对照组明显增加(P＜0.01).NGF中和抗体+NGF组LLSs的平均面积较对照IgG+NGF组明显减少(P＜0.01);NGF中争抗体组LLSs的平均面积较对照IgG组亦明显减少(P＜0.01).NGF可激活HUVECs的JNK信号通路,SP600125可显著减少NGF诱导的LLSs形成(P＜0.01).PD98059及SB203580对NGF诱导的LLSs形成均无明显影响(P＞0.05).结论 NGF能促进HUVECs在体外形成LLSs,可能与激活JNK信号通路有关.
关键词： 神经生长因子 脐静脉 内皮细胞 信号传导 丝裂原激活蛋白激酶类 -
软脂酸通过丝裂原活化蛋白激酶通路促进血管内皮细胞凋亡
目的 探讨软脂酸(PA)诱导的血管内皮细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的作用.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分对照组、PA组、MAPK通路干预组[分别先用p38抑制剂SB203580、氨基末端激酶(JNK)抑制剂PD98059、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂SP600125干预]再分为PA+SB组、PA+PD组、PA+SP组.流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测caspase-3、磷酸化p38、JNK和ERK1/2表达水平;分光光度法检测caspase-3的活性.结果 与对照组比较,PA组、PA+ SB组、PA+PD组、PA+SP组HUVEC凋亡及caspase-3表达和活性明显增加,PA组磷酸化p38MAPK表达明显增加(P＜0.05).与PA组比较,PA+ SB组HUVEC细胞凋亡率、caspase-3表达和活性明显降低(P＜0.05);而PA+ PD组和PA+ SP组HUVEC凋亡率、caspase-3表达和活性无明显变化(P＞0.05).结论 PA通过p38MAPK通路促进内皮细胞凋亡.
关键词： 棕榈酸 丝裂原激活蛋白激酶类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 内皮 血管 细胞凋亡 转录因子 -
缺血性脑卒中信号转导通路研究进展
短暂或持久的局灶性脑缺血可引起一系列病理生理变化而导致脑损伤,且随时间和缺血程度增加而加重.由此引发的缺血性脑卒中,其发病机制复杂,能量代谢障碍、兴奋性氨基酸毒性作用、炎性反应、半暗带去极化及细胞凋亡等共同参与了其病理生理变化过程.
关键词： 卒中 丝裂原激活蛋白激酶类 1-磷脂酰肌醇3-激酶 信号传导 Toll样受体偏头痛 前庭疾病 眩晕 -
心脏再同步化治疗相关细胞分子机制研究进展
慢性心力衰竭是以进行性心脏功能下降及心腔扩大为特征，其致病机制涉及众多细胞信号通路。虽拮抗神经内分泌激素治疗，预后明显改善，但心力衰竭发病率及病死率仍居高不下。部分心力衰竭患者表现为心脏收缩不同步心力衰竭（DHF），而收缩不同步可显著增加心力衰竭发病率及病死率。心脏再同步化治疗（CRT）是一种极有希望的DHF非药物治疗手段，可促进急慢性心脏同步收缩，逆转心室重构，明显改善心脏功能，降低病死率，但30％患者对CRT 无效。近年利用犬左束支导管射频消融术、心房快速起搏和双心室起搏技术，成功创建 DHF及 CRT 的实验动物模型， CRT心力衰竭相关细胞分子机制获得重要进展。CRT逆转心脏节段性表达差异，下调应激信号，增强β-肾上腺素受体反应性，改善离子通道功能，调节钙信号，改善线粒体能量代谢功能，抑制细胞凋亡［1］。随着CRT 相关细胞分子机制探索，不断揭示出心力衰竭全新信号通路，有望筛选CRT反应者生物标记物，深入探讨心力衰竭发生、发展病理生理机制具有重要意义。
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基于全基因组重测序技术检测与瘢痕疙瘩相关基因拷贝数变异的初步研究
目的 利用全基因重测序技术初步探讨与瘢痕疙瘩相关的基因组拷贝数变异(CNV).方法 收集1个瘢痕疙瘩家系,共4代27人,选取该家系中5例(4例瘢痕疙瘩患者,1名健康人)利用Illumina Hiseq 2000进行全基因组重测序,对所获信息进行数据库比对和变异注释.结果 通过数据库比对及变异注释分析后获得了与瘢痕疙瘩相关的15个CNV,通过DAVID对筛选出来的15个基因进行基因注释和信号通路分析.共发现5个CNV[生长因子受体结合蛋白7(GRB7)、丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(MAP4 K4)、丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶15(MAP3K15)、Kruppel样转录因子7(KLF7)和NKx2-2]与瘢痕疙瘩密切相关.这些CNV所涉及的基因与细胞表皮形成与分化、细胞外分泌及细胞黏附有关.结论 共发现5个与瘢痕疙瘩相关的CNV,其中MAP3K15和MAP4K4与瘢痕疙瘩关系可能为密切.
关键词： 瘢痕疙瘩 变异(遗传学) 基因组 人 丝裂原激活蛋白激酶类 -
雌激素通过子宫内膜癌细胞膜受体激活丝裂原活化蛋白激酶通路快速效应的初步研究
目的 研究子宫内膜癌Ishikawa细胞中17β雌二醇通过细胞膜受体对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的快速激活效应.方法 17β雌二醇偶联牛血清白蛋白(E2-BSA)在不同的时间作用于Ishikawa细胞后,采用蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1和ERK2(ERK1/2)的表达情况,并利用激光扫描共焦显微镜(激光共聚焦)技术观察雌激素是否可以与细胞膜受体结合,不穿过细胞膜而快速磷酸化ERK1/2.结果 蛋白印迹法检测发现,ERK1/2在1×10-7mol/L的E2-BSA作用5 min后被快速磷酸化,磷酸化ERK1/2蛋白的表达水平为0.52,60 min时达到高峰(表达水平为0.98),120 min时回落(表达水平为0.09).激光共聚焦技术显示,E2-BSA在作用5 min时与细胞膜上相应受体结合,未穿过细胞膜即增高磷酸化ERK1/2的表达.结论 雌激素可以通过细胞膜受体快速激活子宫内膜癌细胞的MAPK通路.
关键词： 子宫内膜肿瘤 受体 细胞表面 雌二醇 丝裂原激活蛋白激酶类 -
磷脂酰肌醇3激酶抑制剂诱导猪卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的研究
目的 观察磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)抑制剂--沃曼青霉素(wortmannin)诱导猪卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗(IR)后,其信号传导通路中葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)基因表达的变化.方法 采用猪卵巢颗粒细胞体外培养,分别以浓度为0、1.0、1.5、3.0、5.0μmol/L的wortmannin作用48 h后,以氚标记葡萄糖法及葡萄糖氧化酶法检测细胞的葡萄糖消耗量,以免疫荧光法分析GLUT4、MAPK蛋白定位表达情况,以RT-PCR方法 对GLUT4、MAPK的mRNA进行半定量分析.结果 浓度为1.5 μmol/L的wortmannin降低细胞对葡萄糖的摄取量高达40%(P＜0.05),残余葡萄糖含量增多约13.76%,出现明显的IR.免疫荧光法结果 显示GLUF4、MAPK蛋白主要在细胞质表达.RT-PCR结果 提示,GLUT4基因表达水平降低21.06%,MAPK表达水平升高56.43%.结论 wortmannin可干扰细胞内的糖代谢信号传导通路,诱导IR的发生;同时可放大有丝分裂信号传导通路.
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丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞分泌功能的调节作用
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞分泌功能的调节作用.方法 将体外培养的猪卵巢颗粒细胞分为两组,分别加入浓度为50 μmoL/L的二甲基亚砜(DMSO)和MAPK抑制剂--PD98059(PD),作用48 h后,将加入DMSO的细胞分为两组,观察1组细胞加入浓度为20μmol/L的腺苷酸环化酶激活剂,不加腺苷酸环化酶激活剂的为对照1组;将加入PD的细胞也分为两组,观察2组细胞加入浓度为20 μmol/L的腺苷酸环化酶激活剂,不加腺苷酸环化酶激活剂的为对照2组,继续作用48 h.以化学发光法测定4组细胞中睾酮、孕酮和雌二醇的水平;用RT-PCR技术检测17α羟化酶(CYP17)和细胞色素芳香酶P450的基因表达,以扩增产物的灰度比(GSR)表示.结果 (1)生贿激素水平:对照1组睾酮、孕酮、雌二醇水平分别为(29.5±2.5)nmol/L、(80±5)nmol/L、(49±4)pmol/L,对照2组分别为(42.3±3.4)nmol/L、(170±15)nmoL/L、(75±6)pmol/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察2组睾酮、孕酮、雌二醇水平分别为(106.2±7.6)nmol/L、(210±16)nmol/L、(130±11)pmol/L,观察1组分别为(47.2±3.5)nmol/L、(130±6)nmol/L、(81±6)pmol/L,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05);(2)酶表达变化:对照2组与对照1组比较,CYP17 mRNA表达增强50%,而芳香酶P450 mRNA表达下降20%,观察2组与观察1组比较,芳香酶P450、CYP17 mRNA表达均增强,且以CYP17 mRNA表达增强更明显,达到125%.结论 MAPK信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞的分泌功能具有抑制作用.
关键词： 卵巢 粒层细胞 丝裂原激活蛋白激酶类 类黄酮物质 福司柯林 -
雌二醇诱导子宫内膜癌细胞产生的VEGF和bFGF对MAPK通路的影响
目的 探讨雌二醇诱导子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞生成的血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中主要基因蛋白的影响.方法 实验分为4组:雌二醇组(E2组,加入1 μmol/L的雌二醇作用30 min),抑制剂组[包括Bibf1120组:加入10 μmol/L的VEGF受体抑制剂——Bibf1120; Ponatinib组:加入2.5 μmol/L的bFGF受体抑制剂——Ponatinib; U0126组:加入10μmol/L的MAPK激酶(MEK)特异性抑制剂——U0126.各组均预处理1 h],抑制剂+E2组(包括Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组和U0126+E2组,各抑制剂预处理1h后,加入1μmol/L的雌二醇作用30 min);对照组(仅加入无血清DMEM培养基).(1)以不同浓度(分别为0.01、0.1、1、10、100μmol/L)雌二醇作用于Ishikawa细胞后,采用蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白活化水平.(2)采用荧光定量PCR技术检测各组细胞中VEGF、bFGF、MEK1/2、ERK1/2mRNA的表达,蛋白印迹法检测各组细胞中VEGF、bFGF蛋白的表达及磷酸化NEK1/2(p-MEK1/2)、p-ERK1/2蛋白活化水平,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期比例,体外穿膜实验检测各组细胞的迁移能力.结果 (1)不同浓度(分别为0.01、0.1、1、10、100 μmo1/L)的雌二醇作用30 min后Ishikawa细胞中p-ERK1/2蛋白的活化水平分别为0.16±0.03、0.10±0.03、0.41±0.04、0.19±.0.03、0.19±0.03,均明显高于对照组的0.05±0.00 (P＜0.05),且雌二醇浓度为1μmol/L时其活化水平高.(2)E2组细胞中VEGF、bFGF mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);Bibf1120+E2组细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达水平分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).E2组MEK1/2、ERK1/2mRNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平均显著高于对照组(P＜0.05);Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组、U0126+E2组细胞中MEK1/2、ERK1/2mRNA及p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平均低于E2组(P＜0.05).E2组G1期及S期细胞比例分别为(53.6±3.2)％和(29.2±4.2)％,分别与对照组的(65.1±2.6)％和(20.2±1.9)％比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组、Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组G1期细胞比例分别为(66.8±2.6)％、(63.1±2.6)％和(63.3±0.4)％,S期细胞比例分别为(25.4±1.9)％、(25.0±3.8)％和(23.8±0.5)％,分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组分别与Bibf1120+E2组、Ponatinib+E2组比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).E2组穿过微孔的细胞数为(110±17)个,与对照组的(65±8)个比较,差异有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组、Bibf1 120+E2组、Ponatinib+E2组穿过微孔的细胞数分别为(28±4)、(38±5)、(42±6)个,分别与E2组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);U0126+E2组分别与Bibf1 120+E2组、Ponatinib+E2组比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).结论 雌二醇通过非基因转录效应产生的VEGF、bFGF可以激活MAPK通路,促进子宫内膜癌的发生、发展.
关键词： 子宫内膜肿瘤 细胞系 肿瘤 血管内皮生长因子A 成纤维细胞生长因子2 丝裂原激活蛋白激酶类 雌二醇 -
双氢青蒿素对卵巢上皮性癌细胞体外增殖及有丝分裂原激活的蛋白激酶磷酸化水平的影响
目的 探讨双氢青蒿素对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞体外增殖的影响,以及对卵巢癌细胞有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平的影响.方法 双氢青蒿素处理卵巢癌细胞株SKOV3和OVCAR3细胞后,四甲基偶氮唑蓝比色法检测SKOV3和OVCAR3细胞的体外增殖抑制效应,蛋白印迹法检测SKOV3和OVCAR3细胞中两种MAPK[即细胞外信号调节激酶(ERK)1/2和p38蛋白激酶]的磷酸化水平,以未用双氢青蒿素处理的SKOV3和OVCAR3细胞作为对照.结果 双氢青蒿素处理72 h后,SKOV3和OVCAR3细胞的50%抑制浓度(IC50)平均分别为(9.0±1.4)和(5.5±1.2)μmol/L.双氢青蒿素处理后,SKOV3和OVCAR3细胞中ERK 1/2的磷酸化水平明显降低,相对于对照细胞分别下降了64.2%和75.3%,差异均有统计学意义(P＜0.05);而p38蛋白激酶的磷酸化水平无明显变化,相对于对照细胞仅分别下降了8.5%和6.4%,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 双氢青蒿素能制卵巢癌细胞的体外增殖,该作用可能与其下调癌细胞内ERK 1/2的磷酸化水平有关.
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丝裂原活化蛋白激酶信号转导系统对Vp-16诱导分化作用的影响
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-acti-vated protein kinases,MAPKs)信号转导系统对依托泊苷(Vp-16)诱导K562细胞分化作用的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖活性;流式细胞仪解析细胞周期;硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞向单核/巨噬系统分化.结果:0.1～0.8μg/mL的Vp-16抑制K562细胞增殖,引起细胞G2/M期阻滞,诱导细胞向单核/巨噬系统分化;细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)抑制剂PD98059降低Vp-16的诱导分化作用,P＜0.05;p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kina-ses,p38 MAPK)抑制剂SB203580增强Vp-16的作用,P＜0.05;而C-JUN氨基末端激酶(c-jun N-terminal ki-n2ses,JNK)抑制剂SP600125对Vp-16的诱导分化作用无明显影响,P＞0.05.结论:在Vp-16诱导K562细胞向单核/巨噬系统分化过程中,ERK正向,p38MAPK负向调节Vp-16的诱导分化作用.
关键词： 丝裂原激活蛋白激酶类 白血病 细胞系 依托泊苷 -
MEKK1在肿瘤MAPK信号传导通路中作用的研究进展
目的:总结国内外关于MEKK1在肿瘤MAPK信号通路中的调控作用,及其对肿瘤转移、细胞迁移和运动影响的研究进展.方法:应用Medline及CNKI期刊全文数据库检索系统,以"MEKK1、MAPK信号转导和肿瘤"为关键词,检索1992-01-2008-01的相关文献,共检索到英文文献4046篇和中文文献2篇.纳入标准:1)MEKK1的来源和分子结构特征;2)MEKK1与肿瘤相关的MAPK信号通路及其他信号通路的关系;3)MEKK1与AP1的关系;4)MEKK1与肿瘤细胞凋亡的关系;5)MEKK1与肿瘤细胞迁移和运动的关系.根据纳入标准,精选55篇文献,后纳入分析21篇文献.结果:MEKK1是MAPK信号传导通路中的重要结点,也是MAPK通路与其他信号通路的结点.MEKK1具有广泛的生物学功能,如调控NFκB和AP1,影响细胞的存活和凋亡,并且与肿瘤细胞的侵袭、迁移和运动密切相关.结论:MEKK1是抗肿瘤药物研究的潜在靶点,虽然目前还没有MEKK1的抑制剂上市,但可通过研究疾病状态下与MEKK1过表达有关的细胞功能来开发MEKK1抑制剂.
关键词： 丝裂原激活蛋白激酶类 信号转导 肿瘤 综述文献 -
丝裂原活化蛋白激酶信号通路在乳腺癌中的作用机制
丝裂原活化蛋白激酶( mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,在多种细胞过程中发挥关键性的作用,包括细胞的恶性转化、肿瘤的发生发展、肿瘤的耐药等方面。乳腺癌是女性群体中常见的恶性肿瘤。据估计,妇女的一生中,每8人就有1人会被诊断为乳腺癌,并且,其发病率呈逐年上升趋势[1]。乳腺癌是一类高度异质性的恶性肿瘤,根据免疫组织化学特征可分为：(1) ER阳性的肿瘤；(2) HER-2阳性的肿瘤；(3)ER、PR、HER-2受体均阴性的肿瘤。本文将MAPK信号通路在乳腺癌各亚型中的研究进展作一综述。
关键词： 乳腺肿瘤 MAP激酶信号系统 丝裂原激活蛋白激酶类 -
骨形态发生蛋白质2介导Smad和丝裂原活化蛋白激酶通路促进人神经胶质瘤细胞增殖的实验研究
目的 探讨骨形态发生蛋白质2 (BMP-2)在神经胶质瘤细胞株中的表达及BMP-2对细胞增殖的作用机制.方法 传代培养人U8vIII、U87、T98G、LN229及U373神经胶质瘤细胞株.采用PCR法检测BMP-2及其受体BMPR1A、BMPR1B、Alk-2和Smad1在5种细胞株中的表达.MTS法检测0、25、50、100、250及500 ng/ml的BMP-2对U87细胞增殖的影响.Western blot方法分析用上述剂量的BMP-2处理U87细胞后,Smads和丝裂原活化蛋白激酶类(MAPKs)活性的变化;100 ng/ml的BMP-2处置U87细胞后0、5、15、30及60 min,Smads和MAPKs活性的变化;用100 ng/ml的BMP-2处置U87细胞后0、4、8、16及24 h,BMP通路下游基因cyclin B、cyclin D1、p27及p21的表达.结果 BMP-2及其受体BMPR1A、BMPR1B、Alk-2和Smad1在5种细胞株中均有表达,表达量差异有统计学意义(均P ＜0.01);BMP-2在U87中表达高,U373中表达低.MTS实验显示,BMP-2对U87细胞的增殖具有促进作用,在剂量为100 ～ 250 ng/ml时达高峰;与0 ng/mlBMP-2比较,随着BMP-2剂量的增加磷酸化的Smad1/5/8、p38激酶、c-Jun N-末端激酶(JNK)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)的表达逐渐增高(均P＜0.01),100 ～ 250 ng/ml时达高峰.在BMP-2处理U87细胞5 min后磷酸化的Smad1/5/8、p38、JNK和ERK蛋白的表达开始升高,30 min达高峰,各磷酸化蛋白在不同时间点的表达差异均有统计学意义(均P ＜0.01).BMP-2(100 ng/ml)处置U87细胞后,cyclin B和cyclin D1的表达逐渐升高,p27和p21的表达逐渐下降,均于24 h达高峰,各个时间点的表达差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 BMP-2通过介导BMP/Smad和BMP/MAPK通路的活性而促进神经胶质瘤细胞的增殖.
关键词： 神经胶质瘤 骨形态发生蛋白质2 丝裂原激活蛋白激酶类 Smad蛋白质类 -
慢性鼻-鼻窦炎中鼻甲黏膜环氧合酶2与上游丝裂原激活蛋白激酶及核因子κB信号通路相关性探讨
目的 探讨慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)患者中鼻甲黏膜环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)与丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)通路关键酶的表达及其相关性,明确其在黏膜炎性反应机制中的作用.方法 将24例CRS患者中鼻甲外侧黏膜按海口分型分期标准分为3组(组1为Ⅰ型2期,组2为Ⅱ型2期,组3为Ⅲ型,每组8例),8例正常鼻黏膜作为对照.应用免疫组化和荧光实时定量多聚酶链反应检测COX-2、p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)、NF-κBp65和p50的表达,并分析其相关性.结果 COX-2、p38MAPK、ERK和NF-κB在3组CRS中均有表达,强度高于对照组,差异有统计学意义(P值均＜0.05);3组CRS之间表达差异无统计学意义(P值均＞0.05);JNK在CRS各组和对照组中均无阳性表达.相关性分析表明:CRS各组中COX-2、p38MAPK、ERK、NF-κB p65及p50的蛋白质表达量同mRNA表达水平呈直线正相关(P值均＜0.05);在同一组CRS中COX-2与p38MAPK、ERK的蛋白质和mRNA表达呈正相关(P值均＜0.05);CRS各组中COX-2表达与NF-κB p65、p50的核内表达正相关(P＜0.05).结论 CRS中COX-2表达上调,与上游p38MAPK、ERK、NF-κB等信号转导通路具有相关性,提示COX-2在CRS鼻黏膜炎性反应中可能受后者调节.
关键词： 鼻窦炎 环氧化酶2 丝裂原激活蛋白激酶类 NF-κB -
晚期糖基化终产物促进血管外膜成纤维细胞迁移机制及坎地沙坦的干预作用研究
目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管外膜成纤维细胞(AF)迁移的影响及坎地沙坦的干预作用.方法 组织贴块法培养SD大鼠的AF细胞,用Transwell小室检测AGEs对AF迁移的影响.RT-PCR及免疫印迹技术观察AGEs对AF晚期糖基化终产物受体(RAGE)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路磷酸化的影响.结果 不同浓度的AGE(50、100、150、200、300mg/L)均可从基因和蛋白水平上调RAGE的表达,且均在200mg/L时达到峰值(P<0.05).p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂、坎地沙坦可以抑制由糖基化人血清白蛋白(AGE-HAS)刺激引起的RAGE表达(P<0.05).AGEs可促进p38、ERK1/2、JNK的磷酸化,JNK在20min,p38、ERK1/2在30min时磷酸化达峰值(P<0.05).p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂可分别抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化,RAGE中和抗体、坎地沙坦可抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化.不同浓度AGE(50、100、150、200、300mg/L)可促进AF细胞的迁移,该作用于200mg/L时达到峰值(P<0.05).RAGE中和抗体、p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、坎地沙坦均可抑制AGE所致成纤维细胞的迁移(P<0.01).结论 AGEs经由RAGE影响MAPK通路而促进AF细胞迁移,坎地沙坦可通过阻断此途径抑制AF细胞迁移,这可能是其血管保护作用的机制之一.
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JNK信号传导通路在赭曲毒素A体外诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用
目的 探讨赭曲毒素A(OA)诱导人肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的作用机制. 方法 体外培养HKC,随机分为空白对照组、溶剂(0.04%乙醇)对照组、OA 1 μmol·L-1处理组及c-Jun氨基端激酶(JNK)阻断剂SP600125 0.5 μmol·L-1预处理+OA组.细胞处理24 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色和Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(caspase)3蛋白的表达以及JNK的磷酸化水平(p-JNK). 结果 OA组细胞凋亡率明显高于溶剂对照组[(4.24±0.17)%vs(1.06±0.14)%],SP600125预处理+OA组HKC凋亡率[(2.44±0.38)%]明显低于OA组.OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平明显升高,SP600125预处理+OA组caspase 3蛋白的表达和p-JNK水平较OA组明显降低. 结论 OA可能通过激活JNK,上调caspase 3蛋白的表达而诱导HKC凋亡.
关键词： 赭曲毒素A C-Jun氨基端激酶 细胞凋亡 信号传导 丝裂原激活蛋白激酶类 细胞 培养的 -
组织因子/活化凝血Ⅶ因子复合物对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7的调控作用
目的:观察活化凝血Ⅶ因子(actived factor Ⅶ,FⅦa)对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7(ProMMP-7)的影响,探讨其可能的组织因子信号转导通路.方法 :(1)用Western blot检测100 nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞系不同时间点及不同浓度FⅦa刺激LoVo细胞系12 h后细胞ProMMP-7蛋白水平;用Western blot检测5 mg/L组织因子(tissue factor,TF)抗体预孵育LoVo细胞系0.5 h后再给予100 nmol/L FⅦa刺激12 h后细胞ProMMP-7蛋白水平.(2)观察用100 nmol/L FⅦa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶ERK1/2,丝裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末端蛋白激酶JNK)磷酸化水平变化.(3)在FⅦa刺激前0.5 h分别加入ERK1/2,P38和JNK信号通路特异阻断剂PD98059,SB203580和SP600125,培养12 h后检测细胞ProMMP-7蛋白的变化.结果 :(1)FⅦa可刺激LoVo系细胞表达ProMMP-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12 h左右ProMMP-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗体预处理的LoVo细胞系,其FⅦa上调ProMMP-7表达的作用被完全阻断.(2)用100 nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞5 min时,MAPKs磷酸化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38表达水平开始增加,至10 min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-JNK活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍).(3)ERK1/2通路阻断剂PD98059及P38通路阻断剂SB203580可部分减少FⅦa上调LoVo细胞系表达ProMMP-7的效应,分别降低了32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.009),JNK通路特异性阻断剂SP600125对ProMMP-7的表达无明显影响.结论: FⅦa通过与LoVo细胞表面的TF结合诱导ProMMP-7的表达,并呈时间依赖性和剂量依赖性;ERK1/2和P38 MAPKs亚通路参与LoVo细胞TF信号转导通路并与TF/FⅦa调控ProMMP-7表达有关.
关键词： 因子Ⅶa 结直肠肿瘤 基质金属蛋白酶类 丝裂原激活蛋白激酶类
