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定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能
目的 检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者 T细胞受体重排删除DNA环(signal joint T-cell receptor excision DNA circles sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照.结果 ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs, (2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005].各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复.
关键词： T细胞受体重排删除DNA环 胸腺近期输出功能 白血病 实时定量PCR -
AML-M5患者外周血naive T细胞水平和TCR Vβ谱系利用特点
目的了解急性髓性白血病M5亚型(AML-M5)患者 T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量和TCR Vβ基因谱系利用和克隆性,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCR Vβ亚家族T细胞增殖特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.利用RT-PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因表达和克隆性.9例正常人外周血作为对照.结果 M5患者外周血中TRECs含量为0.76±1.21/1000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平(6.84±4.71/1000 CD3+细胞,p<0.05).5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族(2-16个).基因扫描分析显示4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞, Vβ1,Vβ15和Vβ21克隆性T细胞均分别见于3例病人中.结论率先报道了AML-M5型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,尽管整体T细胞免疫功能低下,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示其具有一定地对白血病细胞相关抗原产生特异性免疫反应的能力.
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B淋巴细胞肿瘤患者胸腺近期的输出功能
本研究了解B细胞肿瘤患者胸腺近期输出naive T细胞的水平,以评价其T细胞免疫潜能.利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测61例B细胞肿瘤患者(成人B-ALL 20例,儿童B-ALL 6例,B-CLL 4例,B-NHL 17例,MM14例)外周血单个核细胞(PBMNC)中T细胞受体重排删除DNA环(T-cell receptor rearrangement excision circles.TREC)的含量,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TREC水平.5例ALL-CR病人和17例正常人外周血作为对照.实验结果显示,正常人外周血中TREC拷贝数为3.76±3.42/1 000 PBMNC和5.87±4.96/1 000 CD3+细胞,而各B细胞肿瘤组的TREC水平均显著低于正常人水平,其TREC水平在成人B-ALL为0.53±1.52拷贝/1 000 PBMNC和2.01±3.93拷贝/1 000 CD3+细胞(P=0.0005和P=0.0123),在B-CLL为0.11±0.15拷贝/1 000PBMNC,0.23±0.27拷贝/1 000 CD3+细胞(p=0.0015和P=0.0381),在B-NHL为0.71±1.34拷贝/1 000 PBMNC(P=0.0017),在MM为0.53±0.90拷贝/1 000 PBMNC(p=0.0018).ALL-CR组TREC水平同样低于正常人水平,儿重B-ALL组TREC水平明显高于成人组.结论:各类B细胞肿瘤胸腺近期输出naive T细胞功能均明显降低,个体差异较大,在病人达到完全缓解期时,胸腺近期输出功能仍没有得到恢复,提示对病人有动态观察的必要性.
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T细胞受体重排删除环定量检测及其在慢性乙型肝炎中的应用
在临床实践中获取胸腺组织来了解胸腺功能变化并不现实.因此,胸腺功能的评估通常使用能够反映胸腺近期输出功能的间接指标.外周血T细胞受体重排删除环(T cell receptorrearrangement excision circles,TRECs)及幼稚T淋巴细胞是评估胸腺近期输出功能的常用的间接指标,外周血TRECs定量分析已用于一些疾病胸腺近期输出功能和免疫重建的评价.
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急性早幼粒细胞白血病患者胸腺近期输出功能情况
目的了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,从而了解患者胸腺近期输出naive T细胞的水平.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测9例APL患者和14例正常人外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.结果正常人TRECs拷贝数为(4.10±3.65)/1000PBMC和(6.36±5.28)/1000CD+3细胞,APL患者TRECs拷贝数为(0.13±0.22)/1000PBMC和(0.77±1.60)/1000CD+3细胞,与正常人相比均有显著性差异(P=0.0004,p=0.0005).结论率先报道了APL患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低的情况.
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胸腺近期输出功能与移植后T细胞免疫重建
造血干细胞移植的成功,有赖于T细胞免疫的重建.T细胞受体重排删除环(TRECs)是目前较可靠的反映胸腺近期输出功能的检测指标.定量检测TRECs水平可判断胸腺近期输出功能,评价移植后T细胞免疫重建情况.
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弥漫大B细胞淋巴瘤患者胸腺近期输出功能动态监测的临床意义
目的 观察弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者不同治疗阶段胸腺近期输出naive T 细胞的动态变化,评估其与疾病预后的关系以及化疗对免疫重建潜能的影响.方法 利用实时定量PCR(TaqMan)方法分别检测30例DLBCL患者不同治疗阶段外周血单个核细胞(PBMNC)中T细胞受体重排删除DNA环(TREC)的水平(以每1000个PBMNC中的含量表示),并根据外周血中CD3细胞阳性率计算CD3+T细胞中TREC水平.以12名年龄相匹配的正常人作为对照.结果 与正常人外周血中的TREC水平相比,不同基因亚型DLBCL患者外周血中的TREC水平均明显低下,生发中心B细胞样(GCB)型患者组的TREC水平高于非生发中心B细胞样(non-GCB)型患者组.化疗前GCB型患者组PBMNC和CD3+T细胞中的TREC水平分别为0.91±0.15和1.22±0.69,而non-GCB型患者组分别为0.43±0.29和0.64±0.44.治疗前的TREC水平与患者的国际预后指数(IPI)评分明显相关(r=-0.441,P=0.015).化疗后的TREC水平进一步降低,治疗6个周期后低,GCB型患者组PBMNC和CD3+T细胞中的TREC水平分别为0.63±0.34和0.89±0.65,而non-GCB型患者组分别为0.19±0.11和0.27±0.25.大多数患者化疗结束后3个月TREC水平上升较为明显.5例患者化疗后6个月的TREC水平已接近正常.结论 DLBCL患者的胸腺近期输出功能严重受损,化疗前的胸腺近期输出功能与疾病的预后有重要关系,化疗影响患者的T细胞免疫功能重建潜能.
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尿毒症维持性血液透析近期胸腺输出功能变化研究
目的 评估尿毒症维持性血液透析(MHD)患者近期胸腺输出na(i)ve T细胞的情况.方法 对郑州大学附属肿瘤医院2010年10月至2011年10月收治的15例MHD患者利用实时定量PCR( TaqMan)方法检测其透析前后外周血单个核细胞中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的含量,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+T细胞中TRECs水平.以10例年龄相匹配的正常人外周血作为对照.结果 与正常人外周血中TRECs拷贝数相比,15例MHD者首次透析前的TRECs均显著低下,分别为(0.48±0.39)拷贝/1000 PBMCs和(1.03±0.57)拷贝/1000CD3+T细胞(P值分别为0.0014和0.0067).而透析2～6个月后外周血中的TRECs值差异较大,平均为(0.41±0.36)拷贝/1000 PBMCs和(1.33±1.46)拷贝/1000 CD3+T细胞(P值分别为0.0008和0.019),仍明显低于正常水平,与首次透析前的水平相比,差异无统计学意义.结论 MHD患者首次透析前及透析2～6个月后胸腺近期输出na(i)ve T细胞功能均明显低下,胸腺近期输出功能低下是导致细胞免疫功能缺陷的根本原因之一.
关键词： 维持性血液透析 胸腺近期输出功能 免疫功能 T细胞受体重排删除环 -
实时荧光定量PCR分析慢性丙型肝炎患者胸腺近期输出功能
目的 观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测CHC患者的胸腺近期输出功能,并且比较TRECs含量与HCV载量的关系.方法 利用实时荧光定量PCR方法检测22例CHC患者及16例正常人PBMCs中TRECs含量,用RT-PCR方法结合荧光探针的检测技术检测CHC组外周血血清中的HCVRNA.结果 CHC患者中TRECs含量为(5.52±1.87)copies/103PBMCs,低于正常人TRECs水平(7.19±2.42)copies/103PBMCs,P＜0.05;TRECs含量与HCV载量直线相关分析r=-0.427,P＜0.05.结论 CHC患者TRECs水平低于正常人,显示其胸腺近期输出功能明显降低,且与HCV载量呈负相关性.
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慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后TRECs含量的变化
观察慢性乙型肝炎(CHB)患者经抗病毒治疗前后T细胞受体重排删除环(TRECs)含量的变化.利用实时荧光定量PCR方法检测15例干扰素、13例阿德福韦酯治疗前后的CHB患者及27例健康体检者外周血单个核细胞(PBMCs)中TRECs的含量.CHB患者中TRECs含量为(7.29±2.26)copies/103PBMCs,低于健康体检者TRECs水平(10.48±6.90)copies/103PBMCs,P＜0.05;TRECs含量与HBV载量直线相关分析r=0.06,P=0.975;干扰素组治疗后TRECs含量(12.77±5.25)copies/103PBMCs,高于治疗前(7.14±2.69)copies/103PBMCs,P＜0.05;阿德福韦酯组治疗后TRECs含量(8.63±3.26)copies/103PBMCs与治疗前(7.464±1.73)copies/103PBMCs比较,P＞0.05,差异无统计学意义.CHB患者组中TRECs含量低于正常对照组,TRECs含量与HBV载量无明显相关性,干扰素治疗能提高CHB患者中TRECs的含量,而阿德福韦酯无此作用.
关键词： 慢性乙型肝炎 T细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 抗病毒药 -
抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc阳性人群的胸腺近期输出功能初步探讨
目的 观察抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,从而推测其胸腺近期输出功能.方法 利用实时荧光定量PCR方法检测30例抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群及22例正常人PBMCs中TRECs含量.结果 抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群中TRECs含量为(5.67±1.55)copies/103 PBMCs,与正常人TRECs水平(6.11±2.11)copies/103 PBMCs无差异(P＞0.05).结论 抗-HBs、抗-Hbe和抗-HBc阳性人群TRECs水平情况显示其胸腺近期输出功能与正常人比较无差异.
关键词： 抗-HBs 抗-HBe 抗-HBc T细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 -
实时荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能
目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除环(TRECs)的含量,进而评价CHB患者的胸腺近期输出功能,并分析TRECs含量与HBV病毒含量间的关系.方法 利用实时荧光定量PCR法检测205例CHB患者PBMCs中TRECs含量及血清HBV DNA含量,同时选取32例健康人群作为对照组.结果 患者组外周淋巴细胞中TRECs含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).根据HBV DNA含量的不同分为HBV DNA阴性组、低病毒组(＜1×105 IU/ml)和高病毒组(≥1×105 IU/ml),3组患者TRECs含量差异无统计学意义(t =2.58,P＞0.05).采用直线回归相关性分析发现,HBV DNA含量与TRECs含量之间无相关性(r=0.15,P＞0.05).结论 CHB患者PBMCs中TRECs含量低于正常人群,提示CHB患者胸腺近期输出功能明显降低;TRECs含量与HBV 病毒含量间无明显相关性.
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B-ALL患者胸腺输出TCR Vβ亚家族na(i)ve T细胞分析
目的 了解B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞中TCR Vβ亚家族23种信号T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在情况,从而了解胸腺近期输出各TCR Vβ亚家族na(i)veT细胞的功能.方法 利用半巢式PCR分别扩增10例B-ALL患者外周血单个核细胞DNA中的23种Vβ～Dβ1sjTRECs,10例正常人作为对照.结果 TCR Vβ亚家族sjTRECs在大部分正常人和部分B-ALL患者中均可检测到,与正常人比较,B-ALL病人的Vβ24～Dβ1sjTRECs出现频率比正常人高,且有统计学意义(80%:30%,P=0.0285),另有18个家族的Vβ～Dβ1sjTRECs比正常人低,其中在Vβ1(30%,P=0.0285)、Vβ12(20%,P=0.0285)、Vβ13(40%,P=0.0043)、Vβ15(20%,P=0.0022)和Vβ18(20%,P=0.0089)5个亚家族sjTRECs出现频率的差异有统计学意义.结论 B-ALL病人胸腺输出大多数Vβ亚家族na(i)veT细胞功能低于正常人.
关键词： 急性淋巴细胞白血病 T细胞受体删除DNA环 胸腺近期输出功能 -
实时定量PCR分析CML患者胸腺近期输出功能
目的了解慢性粒细胞白血病(CML)患者 CD3+、CD4+和CD8+细胞中T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,从而推测CML患者的胸腺近期输出功能.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测8例CML患者外周血单个核细胞、3例CML患者CD4+和CD8+细胞中TRECs的水平.并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+细胞中TRECs水平.9例正常人外周血作为对照.结果 CML患者中TRECs含量为0.1±0.22/1 000 T细胞,明显低于正常人TRECs水平(6.84±4.71/1 000 T细胞,P<0.01).其中5例患者外周血单个核细胞中未能检测到TRECs,经分选CD4+和CD8+细胞后,2例可以检测到低水平的TRECs.结论本研究首先报道了CML患者TRECs水平情况,结果显示其胸腺近期输出功能明显降低.
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原发性血小板减少性紫癜患者胸腺近期输出功能状态
目的:了解原发性血小板减少性紫瘢(ITP)患者胸腺近期输出功能的状态,评价其T细胞潜能.方法:采用实时定量PCR(TaqMan)方法检测15例ITP患者外周血单个核细胞(PBMCs)中T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量,17例正常人作为对照.结果:正常人外周血中每1 000个PBMCs中TRECs拷贝数为(3.76±3.42),ITP患者TRECs水平变化较大[每1000个PBMCs中TRECs拷贝数为(2.60±2.99)],4例病人未能检测到TRECs,病人平均TRECs水平与正常人的差异没有显著性(P＞0.05),女性病人TRECs水平略高于男性(P=0.499),但无统计学意义.结论:多数ITP患者外周血初始T细胞水平和胸腺近期输出功能保持正常水平.
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自体造血干细胞移植后的胸腺近期输出功能
目的:了解血液病患者接受自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平,从而了解其胸腺近期输出功能和T细胞免疫重建情况.方法:采用实时定量PCR法检测9例血液病患者经auto-HSCT治疗后外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平;22例正常人外周血样本作为对照.结果:PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异,年龄与PBMNCs中的TRECs水平呈负相关;auto-HSCT组的每1 000个PBMNCs中的TRECs平均拷贝数(2.533±4.194)明显低于正常组(4.367±3.626)(P＜0.05),但部分病例的TRECs水平已基本达到正常水平.结论:在一定时间内,auto-HSCT后的胸腺近期输出功能仍较低,不同个体T细胞免疫重建时间存在差异.
关键词： 自体造血干细胞移植 T细胞受体重排删除环 胸腺近期输出功能 -
AML患者外周血中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的检测
目的:检测急性髓性白血病(AML)患者外周血中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况.方法:利用半巢式PCR扩增31例不同亚型AML患者外周血单个核细胞DNA中TCR β基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环(sjTRECs)中的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs,10例正常人外周血作为对照.结果:TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人和AML患者中均可检测到,AML患者三者的检出率分别为45.16%、41.94%和32.26%,均略低于正常人,但差别未显示出统计学意义.≤30岁的AML患者3种Vβ sjTRECs的检出率均高于30岁以上的患者,以Vβ2-Dβ1 sjTRECs明显.结论:率先提供AML患者外周血T细胞中TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,为研究AML患者胸腺近期各Vβ亚家族幼稚(na(I)ve) T细胞的输出情况提供资料.
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AML患者外周血中TCR Vβ亚家族naive T细胞的检测
目的 检测急性髓性白血病(AML)患者外周血中TCR 23个Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在特点,从而间接了解AML患者相应Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR分别扩增32例AML患者每5×104和1×104个外周血单个核细胞(PBMCs)中的23个Vβ亚家族sjTRECs,10例正常人外周血作为对照.结果在5×104和1×104两种PBMCs水平,AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数分别为(5.09±3.28)和(2.59±2.06)个,与正常人的(13.70±2.67)和(5.50±2.07)个相比,两组的差异均有统计学意义(两组均为P=0.000).AML患者5×104个PBMCs中约可检测到5/23(20%)个Vβ亚家族sjTRECs,并且有13个Vβ亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常人水平,其中Vβ10-和Vβ14-Dβ1 sjTRECs的检出率低,而Vβ21高.不同FAB分型AML患者间的检出差别未显示出统计学意义.32例AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数量差别较大(1～15个),年龄与检出的亚家族数量呈负相关,＜30岁者的检出量高于≥30岁者,尤其在5×104个PBMCs水平差异有统计学意义(r=-0.481,P=0.005).结论 AML患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族naive T细胞存在不同程度的缺失或水平降低,表明AML患者存在严重的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能严重受损.
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MDS患者外周血中TCR Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs的分析
目的 检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中TCR Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs的存在情况.方法 利用半巢式PCR扩增9例MDS患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ链基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环(Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs),10例正常人外周血作为对照.结果 所有TCR Vβ1-247-Dβ1 sjTRECs在正常人组外周血T细胞DNA中均有检出,除TCR Vβ12-Dβ1sjTRECs和TCR Vβ19-Dβ1sjTRECs外,其余TCR Vβ-Dβ1 sjTRECs在MDS患者外周血T细胞DNA中均可检.大多数TCRVβ1-24-Dβ1 sjTRECs在正常人组中的检出率较MDS患者高,但其中只有6种TCR Vβ1-Dβ1 sjTRECs(分别是TCR Vβ3、12、13、15、21、22-Dβ1 sjTRECs)的检出率差异有统计学意义.结论 本研究率先提供了MDS患者外周血T细胞中TCR Vβ-Dβ1 sjTRECs的存在情况.MDS患者TCR Vβ-Dβ1 sjTRECs出现频率低于正常人提示其胸腺近期输出功能存在部分缺陷情况.
关键词： MDS na(I)veT细胞 TRECs 胸腺近期输出功能
