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人参皂苷Rg3逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药的实验研究
目的 观察人参皂苷Rg3对逆转人肝癌细胞BEL-7402耐药作用.方法 MTT法测定人参皂苷Rg3与长春新碱(VCR)联合对肝癌细胞BEL-7402生长抑制率,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人参皂苷Rg3作用于肝癌细胞MDRImRNA的表达量.结果 不同浓度的人参皂苷Rg3( 10、20、30、40、60 mg/L)与长春新碱(0.02 mg/L)联合作用后,其对细胞增殖抑制率较单独用药时作用增加(P＜0.05),相互作用指数CDI＜1.人参皂苷Rg3 40.0μg/mL作用于肝癌细胞BEL-7402不同时间(24、48、72h)后MDR1mRNA的表达量明显下降[(79.21±2.23)％,(62.58±2.46)％,(45.46±1.13)％],与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg3与长春新碱联合应用具有协同抑制作用,能逆转BEL7402对VCR的耐药.人参皂苷Rg3能抑制BEL-7402细胞MDR1 mRNA的表达.
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中期因子过表达对肝癌细胞多药耐药的影响
目的 探讨中期因子(midkine,MK)过表达对肝癌细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的影响.方法 将肝癌SMMC 7721细胞转染pIRES2-EGFP-MK重组质粒后,分别以实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及流式细胞术检测MK基因mRNA和蛋白水平,通过流式细胞术检测细胞内DNR蓄积,MTr法检测细胞对不同化疗药物的敏感性了解MK对肝癌细胞多药耐药的影响.结果 pIRES2-EGFP-MK重组质粒转染肝癌SMMC 7721细胞后,MK基因mRNA和蛋白产物MK的表达水平明显增高,提示MK重组质粒达到了对MK转录的有效增强.中期因子转染组细胞胞内DNR蓄积量显著降低(4.06±:0.88,P＜0.05),对ADM、5-FU的IC50显著增加(15±3,27±4,P＜0.05).结论 经pIRES2-EGFP-MK重组质粒转染肝癌细胞后,细胞内中期因子表达的增高可增强肝癌细胞对不同化疗药物的耐药性.
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MDR1特异性核酶逆转肝癌多药耐药的实验研究
目的 探讨MDR1核酶(N2A+tRNAimet-iMDR1-sRz,sRz)在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药(MDR)的可行性.方法 将原发性MDR人肝癌组织裸鼠原位移植模型第2代随机分为A组(空白对照组:生理盐水40 μl+Lipofect AMINETM2000 10μl)、B组(阴性对照组:N2A+tRNAimet10μg/40μl+Lipofect AMINETM2000 10μl)和C组(核酶组:sRz 10μg/40 μl+LipofectAMINETM200010μ1),均开腹瘤内注射.瘤内注药1周后用表阿霉素15 mg/kg腹腔注射,每周1次,连续4周.彩色B超测量肿瘤体积.化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR、Western blot法检测肿瘤中MDR1 mRNA及其蛋白P-gp的表达.结果 C组每次化疗后肿瘤体积均较前缩小(F=659.99,P＜0.05).除第1次化疗外,其余各次化疗后C组的抑制率均高于A、B组(F=35.36,12.77,97.60,P＜0.05).化疗结束后,C组与瘤源以及A、B组相比,肿瘤组织中MDR1 mRNA和P-gp的表达明显降低(F=45.36,3590.40,P＜0.05).结论 sRz可有效降低肝癌细胞表达MDR1 mRNA和P-gp,一定程度上逆转MDR,提高E-ADM的化疗效果.单纯E-ADM化疗可使肝癌组织MDR1 mRNA和P-gp表达升高,诱导MDR的产生.
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RNA干扰沉默EZH2基因增强人肝癌多药耐药Bel/Fu细胞对氟尿嘧啶的敏感性
目的 研究沉默人肝癌多药耐药Bel/Fu细胞的EZH2基因表达是否影响癌细胞对氟尿嘧啶( fluorouracil,5-Fu)的敏感性.方法 体外培养肝癌多药耐药Bel/Fu细胞；EZH2 siRNA干扰沉默EZH2基因表达；RT-PCR和Western blot检测干扰后EZH2 mRNA和蛋白的表达水平；MTT法检测细胞生长抑制率；Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率；流式细胞仪分析细胞周期；Western blot检测多药耐药相关蛋白MDR1的表达水平.实验设对照组、5-Fu处理组、EZH2 siRNA处理组、5-Fu和EZH2 siRNA联合处理组.结果 EZH2 siRNA干扰24h后,EZH2 mRNA和蛋白的表达水平明显降低.在联合处理组中,MTF法检测其细胞凋亡抑制率为43.17％±3.81％,明显高于其他3组；流式检测联合处理组细胞凋亡率,其细胞凋亡值为30.4％±1.77％,明显高于其他3组.流式检测联合处理组细胞周期,发现联合组G1期细胞的百分比为69.16％±2.31％,明显高于其他3组,S+G2 +M期细胞的百分比为30.76％±1.29％,明显低于其他3组,细胞周期被阻滞于G1期.检测MDR1在联合组中的表达水平,发现MDR1蛋白的表达水平明显低于其他组别.结论 RNA干扰沉默EZH2基因可以增强Bel/Fu细胞对5-Fu的敏感性,其机制可能与MDR1蛋白表达降低有关.
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多药耐药相关蛋白在肝癌多药耐药细胞系HePG2/ADM中的作用
目的 研究4种耐药蛋白:多药耐药蛋白(multi-drug resistance protein 1,MDR1),多药耐药相关蛋白1(multi-drug resistance related protein 1,MRP1),肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP),乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在肝癌多药耐药中的作用.方法 通过培养液中阿霉素(adriamycin,ADM)浓度递增诱导法筛选培养,建立HePG2/ADM肝癌多药耐药细胞株;采用real time荧光定量PCR检测四种耐药蛋白mRNA在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HePG2及HePG2/ADM中的表达差异;Western blot检测3种细胞系中4种耐药蛋白的表达.结果 (1)建立HePG2/ADM细胞系.MTT法检测阿霉素对HePG2/ADM细胞IC50为亲本细胞的282倍(P＜0.05).(2)HePG2/ADM中MDR1和BCRP mRNA表达分别是HePG2的400倍(F=87.49,P＜0.05)和9倍(F=1006,P＜0.05).MRP1和LRP mRNA表达差异无统计学意义(FMRP1=3.43,FLRP=2.44,Pall＞0.05).(3)L02和HePG2中4种耐药蛋白mRNA的表达均无差异(FMDR1=1006,FBCRP=87.49,FMRP1=3.43,FLRP=2.44,Pall＞0.05).(4)Western blot检测发现HePG2/ADM细胞中MDR1,BCRP,LRP蛋白表达显著高于HePG2和L02细胞(FMDR1=28.68,FBCRP=18.60,FLRP=6.28,Pall＜0.05),MRP1蛋白表达不增高(FMRP1=0.70,P＞0.05).(5)4种耐药蛋白表达在HePG2和L02细胞差异均无统计学意义(FMDR1=28.68,FBCRP=18.60,FMRP1=0.70,FLRP=6.28,Pall＞0.05).结论 MDR1和BCRP在HePG2/ADM多药耐药中起重要作用,HePG2/ADM多药耐药与MRP1和LRP可能无关.
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浸润性乳腺癌患者谷胱苷肽S-转移酶-π和肺耐药蛋白表达及其与DNA倍体的关系
目的:探讨谷胱苷肽S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)及DNA倍体在乳腺癌患者中的表达意义.方法:应用流式细胞术(FCM)定量分析56例原发浸润性乳腺癌GST-π、LRP蛋白表达及DNA倍体的状况.结果: 乳腺癌组织GST-π和LRP表达的相对荧光强度(RFI)以中位数(M)表示分别为1.18和0.56,而相应癌旁组织分别为0.80和0.23,癌组织GST-π和LRP蛋白表达与相应癌旁组织比较差异有统计学意义,P＜0.05.癌组织DNA指数(DI)、S期比例(SPF)和增殖指数(PI)显著高于相应癌旁组织,P＜0.05.GST-π和LRP蛋白表达及DI、SPF 、PI在不同年龄、不同肿瘤大小、不同病理类型、不同临床分期和雌、孕激素受体阴性与阳性患者间的表达差异均无统计学意义,P＞0.05.有淋巴结转移组患者GST-π和LRP表达水平及DI、SPF、PI值显著高于无淋巴结转移组患者,P＜0.05.异倍体与二倍体乳腺癌GST-π和LRP表达差异无统计学意义,P＞0.05.结论:GST-π和LRP蛋白表达及DNA含量在乳腺癌发生、发展中起重要作用.GST-π和LRP蛋白表达及DI、SPF和PI与淋巴结转移有关.GST-π和LRP蛋白表达与DNA含量可作为预测乳腺癌预后的指标.
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胃癌中P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、肺耐药蛋白的表达及其意义
目的 检测胃癌组织中P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)的表达,分析其与胃癌临床病理因素的关系.方法 采用免疫组织化学SP法对59例胃癌患者癌组织进行研究.结果 在59例胃癌患者中P-gp阳性率高[86.4%(51例)],其次为LRP[84.7%(50例)],二者呈正相关(r=0.803);MRP阳性率低[27.1%(16例)].P-gp、MRP、LRP与分化程度无关(均P＞0.05).P-gp与临床分期呈正相关(r=0.742),MRP、LRP均与胃癌浸润深度、淋巴结转移与否及分化程度无关.结论 P-gp、MRP、LRP在未接受化疗胃癌组织中高表达,提示胃癌中存在P-gp、MRP、LRP介导的原发性耐药.
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膀胱肿瘤T24/ADM多药耐药细胞株的建立及耐药机制的研究
目的 建立人类膀胱肿瘤多药耐药(MDR)细胞株并研究其耐药机制.方法 以人类膀胱肿瘤细胞株T24为研究对象,用多柔比星(ADM)浓度梯度递增诱导法,建屯人类膀胱肿瘤细胞多药耐药模型(简称T24/ADM).用MTT法检测肿瘤细胞的MDR特性;RT-PCR检测膀胱肿瘤耐药细胞株MDR基因的表达情况.流式细胞术检测耐药细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果 T24/ADM对多种化疗药物产生耐药,对ADM的耐药性提高了16.3倍.RT-PCR检测发现T24/ADM中MDR基因和P-gp的表达明显增强.结论 T24/ADM细胞具有MDR特性,其耐药性与MDR基因和P-gp的过表达有关.
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鼻咽癌多种耐药基因的表达
目的 探讨鼻咽癌对化疗药物耐药基因的表达.方法 应用单克隆抗体多药耐药基因蛋白(P-glycoprotein,P-gp),多药耐药相关蛋白(multidrug resistance relation protein,MRP),肺耐药相关蛋白(lung-resistance related protein,LRP),拓朴异构酶Ⅱ(topoisomeeraseⅡ,Topo Ⅱ),胸腺肽合成酶(thymidylate synthase,TS)和谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferase,GST-π)对56例鼻咽癌患者的肿瘤组织进行免疫组化检测.48例是鼻咽部原发灶组织,其中28例患者用顺氯氨铂(Cisplatin,DDP)+5-氟脲嘧啶(Fluorouracil,5-FU)另20例用卡铂(Carboplatin)+5-FU进行2个疗程化疗,8例是鼻咽癌治疗后颈部淋巴结复发,进行颈淋巴结廓清术.结果 各项多药耐药指标在56例患者中均有不同程度表达,它们之间差异有统计学意义,P＜0.001,TopoⅡ高表达.鼻咽部原发灶大小T1～T2和T3～T4比较,GST-π的阳性表达差异有统计学意义,P＜0.05.初诊患者有无远处转移,P-gP阳性表达比较差异有统计学意义,P＜0.01.鼻咽部原发灶和颈部复发淋巴结比较,MRP的阳性表达差异有统计学意义,P＜0.05.而患者的性别、年龄和颈部淋巴结大小(N0～N3)比较,各项多药耐药阳性表达差异均无统计学意义,P值均＞0.05.P-gp、GST-π和TS阳性组和阴性组用DDP+5-FU化疗,GST-π阳性组和阴性组用卡铂+5-FU化疗,阳性组疗效低于阴性组,P值均＜0.05,差异有统计学意义.而TopoⅡ高表达,其阳性组化疗疗效均优于阴性组.对DDP+5-FU和卡铂+5-FU的疗效进行比较,P值均＜0.05,差异有统计学意义.结论 鼻咽癌组织存在多种多药耐药基因表达,是鼻咽癌的化疗主要的障碍.进一步研究鼻咽癌多药耐药基因的表达和对化疗的反应是必要的.
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噻吩诺啡在Caco-2细胞上的转运特征
目的 探讨噻吩诺啡在Caco-2细胞上的转运特征及其对P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 采用高效液相色谱-质谱-质谱法测定噻吩诺啡浓度,研究噻吩诺啡在单层细胞中的双向转运,考察时间及转运蛋白抑制剂对噻吩诺啡在Caco-2细胞上转运的影响;流式细胞仪检测胞内钙黄绿素-AM浓度,评价噻吩诺啡对P-gp的抑制作用;采用Western蛋白印迹法检测P-gp表达.结果 噻吩诺啡通过Caco-2单层细胞的转运量在1.5 h内随时间延长呈线性增加,表观渗透系数(P_(app))2.338×10~(-6) cm·s~(-1);加入P-gp及多药耐药相关蛋白2(MRP2)抑制剂环孢素A和MK571后分别提高2.8和2.3倍;在噻吩诺啡作用下,胞内钙黄绿素-AM浓度无显著变化,P-gp表达无显著增加.结论 噻吩诺啡在Caco-2细胞吸收中等偏差,是P-gp和MRP2的共同底物,噻吩诺啡对P-gp无诱导或抑制作用.
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TA方案新辅助化疗对青年乳腺癌中VEGF及EGFR表达的影响
目的 探讨TA方案新辅助化疗对青年乳腺癌患者组织中VEGF及EGFR表达的影响.方法 采用免疫组织化学法检测41例青年乳腺癌患者在新辅助化疗前后乳腺癌灶组织VEGF及EGFR的表达.结果 患者经TA新辅助化疗前后VEGF阳性表达率分别为60.98％ (25/41)与43.90％(18/41),P=0.122;化疗前后EGFR阳性表达率分别为48.65％ (27/41)与56.76％ (22/41),P=0.260,差异均无统计学意义.新辅助化疗前,VEGF青年组阳性表达率与中老年组阳性表达率分别为60.98％ (25/41)和37.80％ (31/51),P=0.015,差异有统计学意义；新辅助化疗后,VEGF青年组阳性表达率与中老年组阳性表达率分别为43.90％(18/41)和30.49％ (25/82),P=0.141,差异无统计学意义.新辅助化疗前,EGFR青年组阳性表达率与中老年组阳性表达率分别为48.65％ (27/41)和40.24％ (33/82),P=0.007,差异有统计学意义；新辅助化疗后,EGFR青年组阳性表达率与中老年组阳性表达率分别为37.80％ (31/51)和32.93％ (27/82),P=0.027,差异有统计学意义.结论 青年乳腺癌癌组织VEGF与EGFR的高表达可能与其预后不良的特点有关.TA新辅助化疗后青年组与中老年组VEGF与EGFR表达均降低,而青年组EGFR降低更明显,说明在降低乳腺癌侵袭性方面,相对于中老年乳腺癌患者,新辅助化疗可能在青年组疗效更明显.
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99Tcm-MIBI显像在乳腺癌新辅助化疗中的应用价值
目前,新辅助化疗(NAC)已成为局部晚期乳腺癌的标准治疗方法,而肿瘤的多药耐药性(MDR)是乳腺癌NAC失败的主要原因之一.MDR的产生与mdrl编码的P-糖蛋白(P-gp)介导的耐药机制有关.99Tcm-MIBI是一种肿瘤阳性显像剂,也是P-gp的作用底物,可作为非侵入性的体内显像方法用于评估不同肿瘤中P-gp介导的耐药机制.研究显示,99Tcm-MIBI早期显像反映MIBI进入肿瘤细胞的多少及速率,并与其恶性程度密切相关,可用于NAC疗效的评估;而延迟显像反映MIBI被排出肿瘤细胞外的量及速度,并与细胞膜P-gp的表达及MDR密切相关,可无创性地检测由P-gp引起的多药耐药,预测NAC的敏感性.
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MRP1在大肠癌中表达的研究
目的 研究多药耐药相关蛋白1(muhidrug resistance-associated protein 1,MRPI)在大肠癌中的表达及其与临床病理指标的关系,为大肠癌的有效防治提供科学依据.方法 应用免疫组织化学SP法对53例大肠癌患者的原发灶癌组织、距原发灶10cm经病理证实的正常组织进行MRP1蛋白免疫组织化学检测,并将检测结果与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、分化程度、生长部位、Dukes分期情况进行综合分析.结果 MRP1蛋白主要是在细胞膜和(或)细胞浆内表达,MRP1蛋白在大肠癌原发灶组、正常组织组的阳性表达率分别为49.1%(26/53)和15.1%(8/53),两者有显著性差异(P<0.01).MRP1的表达与大肠癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移等病理特征均无关.结论 MRP1可能与大肠癌的发生有关,并与原发性多药耐药性有关,MRP1可能是独立于病理学特征之外的分子参数.
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不同价态染砷大鼠肝脏MRP2表达水平与砷甲基化产物关联性
目的 分析亚砷酸钠(iAs3+)和砷酸氢钠(iAs5+)染毒后,对大鼠多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达的影响,及其与肝脏砷及甲基化产物的关联性,寻找不同价态砷体内代谢转运间的差异,为进一步阐明砷毒作用机制提供依据.方法 70只Wistar大鼠分成7组,第1组为正常对照组,给予饮用去离子水;第2～4组为染毒iAs3+高、中、低剂量组,分别给予20.0、6.7、2.2 mg/kg体质量亚砷酸钠溶液;第5～7组为染毒iAs5+高、中、低剂量组,分别给予20.0、6.7、2.2 mg/kg体质量砷酸氢钠溶液.各组大鼠于染毒90 d后处死,取肝脏组织,用蛋白印迹法(Western-blotting)测定MRP2表达的变化.采用高效液相-氢化物发生原子荧光光谱分析法(HPLC-HGAFS)分析各组肝脏中砷及甲基化产物含量,并运用Pearson相关法分析MRP2表达与砷及甲基化产物的相关性.结果 对照组、iAs3+和iAs5+高、中、低剂量组MRP2蛋白表达分别为1.21±0.13、1.85±0.09、1.65±0.19、1.61±0.18、1.69±0.04、1.42±0.19、1.27±0.10,iAs3+的高、中、低剂量组和iAs5+高、中剂量组MRP2蛋白表达均高于对照组(P均＜0.05)；相同受试物比较,iAs3+和iA83+的高剂量组MRP2蛋白表达均高于低剂量组(P均＜ 0.05)；不同受试物同一剂量组比较,iAs3+高、中、低剂量组的MRP2蛋白表达均强于iAs5+高、中、低剂量组(P均＜0.05).同时,iAs3+染毒组肝脏中MRP2蛋白表达量与iAs3+和砷甲基化代谢产物MMA和DMA的含量均呈正相关关系(r值分别为0.575、0.678、0.395,P均＜0.05)；iAs5+染毒组肝脏中MRP2表达量与MMA和DMA的含量均呈正相关关系(r值分别为0.593、0.643,P均＜0.05),与iAs3+的含量无相关关系(P＞0.05).结论 随着砷染毒剂量的增加,MRP2表达逐渐上调,从而致使肝细胞膜上MRP2表达代偿性改变.MRP2外排通路可能在iAs3+代谢径路中发挥重要作用.肝脏MRP2与不同价态砷甲基化产物的负荷或水平密切相关.
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二十二碳六烯酸增加人胃癌细胞SGC-7901对多柔比星的敏感性
目的:本研究旨在探讨二十二碳六烯酸[docosahexaenoic acid (DHA),22:6 ω-3]逆转由多柔比星( adriamycin,ADR)引起的胃癌SGC-7901细胞的耐药性.方法:体外常规培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以DHA、ADR单药和DHA+ADR联合作用于细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况；倒置光学显微镜下观察细胞的形态；FCM法检测细胞的凋亡率；激光共聚焦显微镜以及高效液相色谱法检测细胞中ADR的蓄积情况；RT-PCR及蛋白质印迹法检测细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistanceprotein,MDR) P-糖蛋白p-170的表达情况.结果:DHA与ADR联合作用于胃癌SGC-7901细胞后,DHA能够增加ADR对细胞的生长抑制作用；细胞形态观察发现死细胞明显增多；细胞凋亡率显著增加；细胞中的ADR蓄积量约增加2.1倍；细胞中p-170 mRNA以及蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:DHA能够增加胃癌细胞SGC-7901对ADR的敏感性,放大ADR的肿瘤杀伤作用.
关键词： 胃肿瘤 二十二碳六烯酸 多柔比星 多药耐药相关蛋白类 SGC-7901细胞 -
多药耐药对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭活性、耐药机制及丝裂原活化蛋白激酶表达的影响
目的:通过化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药细胞模型,探讨多药耐药获得对细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响,耐药机制及与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路表达的相关性.方法:采用多柔比星( adriamycin,ADM)高浓度冲击和小剂量缓升2种方法诱导建立人肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721和BEL-7402)耐药模型.比较耐药细胞株与亲本细胞株间的差异,主要包括采用生物发光法进行药物敏感实验并计算耐药指数;RT’-PCR法和免疫组织化学法检测相关耐药基因(p-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1、肺癌耐药蛋白、乳腺癌耐药蛋白、蛋白激酶C、谷胱甘肽-S-转移酶-π和拓扑异构酶Ⅱ)mRNA及相应蛋白的表达.免疫组织化学法检测与细胞增殖活性相关的Ki-67和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达:FCM法检测细胞周期、细胞凋亡率的改变Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力的改变后,分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MAPK信号通路中ERK1、ERK2、ERK5、JNK1、JNK2和p38a基因及相应蛋白的表达.结果:共建立6株ADM耐药细胞株；与亲本细胞株相比,耐药细胞株耐药指数均＞5,并对多种化疗药耐受性增强,多药耐药相关基因及蛋白的表达均上调2～10倍,以高浓度冲击法诱导的细胞中蛋白表达上调明显.耐药细胞中Ki-67及PCNA蛋白的表达量均升高20倍以上,细胞周期被阻滞在S期,体外侵袭能力增强1.3～2.5倍；ADM干预后,细胞凋亡率减少60％以上.MAPK信号通路中不同基因和蛋白表达量均有不同比例升高,以ERK1、ERK2升高明显.结论:ADM能够诱导多株人肝癌细胞产生多药耐药,导致细胞增殖活性升高、细胞周期改变、抗凋亡能力及侵袭能力增强.MAPK信号通路中相关蛋白表达的上调与细胞多药耐药有一定关系.
关键词： 肝肿瘤 多药耐药相关蛋白类 丝裂原激活蛋白激酶类 -
乳腺癌组织多药耐药相关蛋白表达及其与化疗敏感性关系的研究
目的:探讨3种耐药相关蛋白P-gp、GST-π和Topo Ⅱ在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌新辅助化疗敏感性的相关性.方法:乳腺癌患者80例,随机分为应用新辅助化疗(CEF)组(A组)和未化疗组(B组),A组应用新辅助化疗2周期,化疗前后分别行B超检查测量肿瘤大小.采用S-P免疫组织化学法检测80例乳腺癌组织中P-gp、GST-Tπ和Topo Ⅱ的表达情况.结果:p-gp的表达在A组较B组有显著升高(P＜0.05):GST-π和Topo Ⅱ的表达在A组及B组的表达差异无统计学意义(P＞0.05).A组P-gp的表达情况与乳腺癌肿瘤的缩小呈直线相关(P＜0.05):GST-π、Topo Ⅱ的表达情况与乳腺癌瘤体的缩小无明显相关(P＞0.05).P-gp的表达与腋窝淋巴结阳性有显著相关;GST-π的表达与肿瘤的分级有显著相关,与雌激素受体呈负相关;Topo Ⅱ的表达与肿瘤的分级呈正相关.结论:P-gp的表达可能与乳腺癌的获得性耐药有关,GST-π和Topo Ⅱ的表达可能与乳腺癌的天然耐药有关.
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MCF-7/BCRP细胞系的建立及其生物学特征
目的:建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7/BCRP.方法:提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达载体pcDNA3.1(-)上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞.采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系.结果:MCF-7/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14.72;外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长;MCF-7/BCRP细胞能表达一定量的BCRP.结论:MCF-7/BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型.
关键词： 多药耐药相关蛋白类 乳腺肿瘤 MCF-7/BCRP细胞系 基因表达 -
全颅常规外照射对大鼠血-脑脊液屏障上P-gp和MRP1表达的影响及意义
目的 探讨全颅常规外照射对大鼠血-脑脊液屏障上多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、MRP1表达的影响及其临床意义.方法 将50只正常成年雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别采用0(对照组)、10、20、30、40 Gy 的 60Co γ射线进行全脑常规分割外照射, 每次2 Gy、1野/次,5次/周.各组完成照射计划后16 h断头取脑,40 g/L中性甲醛固定24 h,石蜡包埋,制备组织切片.采用免疫组化法检测各组大鼠血-脑脊液屏障上P-gp和MRP1的表达情况.结果 对照组P-gp阳性表达强,照射10、20、30 Gy时,其表达减弱,30 Gy时弱,40 Gy时P-gp表达又有所增强,20、30、40 Gy组与对照组比较,差异有显著性(F=8.18,q=4.496～6.670,P＜0.05);10 Gy组与20、30、40 Gy组比较,差异有显著性(q=3.371～5.551,P＜0.05).MRP1在对照组有微弱表达,随着照射剂量的增加其表达有所增强,40 Gy组与其他各组间比较,差异有显著性(F=11.14,q=2.560～7.657,P＜0.05).结论 一定剂量的放射线主要是通过降低血-脑脊液屏障上P-gp的表达,增加血-脑脊液屏障的通透性发挥作用,并且在放射剂量达到20 Gy时化疗效果好.
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ATRA耐药基因HA117相关蛋白在四种恶性肿瘤的表达及临床意义
目的 探讨ATRA耐药基因HA117相关蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌及神经母细胞瘤组织中的表达特点及临床意义.方法 以肠腺癌标本20例、肺癌标本23例、乳腺癌标本21例以及神经母细胞瘤标本20例手术切除组织为实验组;以巨结肠手术切除扩张段近切口缘的正常结肠组织10例、手术切除的肺癌癌旁组织9例、乳腺癌癌旁组织11例及神经母细胞瘤瘤旁组织14例为对照组;应用免疫组化S-P法检测HA117蛋白在上述组织切片中的表达,并结合临床资料进行回顾性分析.结果 HA117在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织中阳性表达明显高于非癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05);HA117蛋白的阳性表达与肠腺癌、肺癌及乳腺癌患者的肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),与神经母细胞瘤的病理分型和淋巴结转移有显著相关性(P<0.05).结论 HA117蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织的高表达提示这四种恶性实体肿瘤对ATRA具有较强的耐药性.
