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使用PCR-SSP方法检测HLA-DR抗原
目的采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法.方法合成29个特异性引物和1对阳性对照引物,组成20个PCR反应用于DR位点,建立一步法PCR-SSP.结果所有样本PCR-SSP基因分型获得成功,分型结果经标准DNA,限制性核酸内切酶分析证实符合,特异性和重复性100%.结论 PCR-SSP检测HLA-DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点,适合临床应用.
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婴幼儿脓毒症不同免疫状态细胞因子变化探讨
目的 检测不同免疫状态脓毒症婴幼儿细胞因子浓度的变化,探讨婴幼儿脓毒症免疫功能紊乱的可能机制.方法 深圳市儿童医院重症监护室2007年5月至11月收治的脓毒症患儿36例为研究组,16例正常婴幼儿为对照组.根据人类白细胞抗原(HLA)-DR的测定值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组).用流式细胞术检测CD14+单核细胞HLA-DR表达率;实时荧光定量PCR检测CD4+T细胞IL-10、IL-6 mRNA表达;ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10血浆浓度.结果 (1)小儿危重病例评分DR-H组高于DR-L组(90.15±4.43 vs 81.91±7.45,P＜0.05).(2)细胞因子变化:两组前炎症细胞因子IL-1β、IL-6血浓度均明显高于对照组(P＜0.05),DR-H组TNF-α高于对照组.两组问比较,IL-1β及IL-6差异无显著性,DR-H组TNF-α高于DR-L组(P＜0.05).两组IL-6基因表达均高于对照组(P＜0.05),以DR-L组增高尤为显著.两组IL-10均高于对照组(P＜0.05),DR-L组IL-10基因表达高于对照组及DR-H组.结论 CD14+单核细胞HLA-DR表达检测对婴幼儿脓毒症危重程度及预后有一定判断价值.婴幼儿脓毒症发病过程中,前炎症细胞因子始终处于高表达状态,导致免疫抑制的主要原因可能是抗炎因子IL-10过表达.
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急性胰腺炎患者外周血单核细胞HLA-DR表达与部分细胞因子水平的观察
目的:动态观察急性胰腺炎(AP)患者单核细胞人类白细胞抗原OR(HLA-DR)表达水平及促/抗炎反应平衡变化. 方法:应用流式细胞术动态监测44例轻型急性胰腺炎(MAP)患者和32例重症急性胰腺炎(SAP)患者发病第1、3、7天外周血单核细胞HLA-DR表达变化,同时检测血清细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10水平. 结果:SAP组单核细胞HLA-DR表达在整个观察期内均明显低于MAP组和健康对照组,而MAP组HLA-DR表达呈一过性下降,第3天起即有明显恢复.SAP组血清促炎细胞因子IL-6和抗炎细胞因子IL-10水平均明显高于MAP组和健康对照组,由于IL-10峰值时间滞后,发病3 d后以抗炎反应为主导,而TNF-α水平在各组间没有显示出明显差别. 结论:SAP病程中促/抗炎反应并存且交替制衡,过度的抗炎反应导致单核细胞抗原呈递功能严重受损,这可能是SAP容易并发严重感染的重要原因之一.
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HLA-DR抗原在Stevens-Johnson综合征和中毒性表皮松解症患者急性期结膜上皮细胞中的表达
目的 通过检测SJS/TEN患者急性期结膜上皮细胞人类白细胞抗原DR (human leukocyte antigen-DR,HLA-DR)的表达,探讨局部HLA-DR表达与SJS/TEN患者眼部损伤以及疾病严重程度的相关性,以进一步探讨HLA-DR抗原在SJS/TEN发病中的作用.方法 收集临床确诊的SJS和TEN急性期患者,同一时间采用SCORTEN评分系统进行疾病严重程度评分(severity of illness score,SIS),根据结膜充血、结膜渗出、结膜假膜、角膜糜烂、眼睑累及和睑缘累及6个方面进行眼部损伤程度评分(severity of eye score,SES),通过结膜印迹细胞学方法获取球结膜上皮细胞,应用流式细胞术检测球结膜上皮细胞中HLA-DR的表达,并分析各指标间的相关性.结果 SJS和TEN急性期患者共8例,SIS平均为n=8,(1.25± 1.83)分,SES平均为n=16,(7.38±3.48)分,结膜上皮细胞HLA-DR的表达量为n=16,(35.25±12.30)％.相关分析发现,SES和双眼结膜上皮细胞HLA-DR的表达量的平均值成正相关(n=16,r=0.739,P=0.001)；双眼SES和SIS无相关(n=8,r=0.626,P=0.097)；SIS和双眼结膜上皮细胞HLA-DR的表达量的平均值无相关(n=8,r=0.600,P=0.116).结论 在SJS/TEN急性期眼部损伤的发生过程中,存在HLA-DR介导的结膜上皮细胞作为非特异性抗原递呈细胞的激活状态,眼部损伤和疾病的严重程度具有不同步性,在急性期应同时进行眼部损伤评分,根据评分采取相应的眼部治疗,减少并发症的发生.
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猿猴病毒40T抗原介导永生化黑素细胞对其核型、HLA-DR和hTERT表达的影响
目的:观察猿猴病毒40T(sv40T)抗原介导黑素细胞(melanocyte,MC)永生化对染色体核型、人白细胞抗原-DR(human letlcocyte antigen-DR,HLA-DR)和人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)表达的影响.方法:利用SV40T抗原基因和真核表达载体PEGFP,经SofastTM阳离子聚合物转染至体外培养的第4代MC细胞,使其永生化,通过C418筛选,滤纸片法挑选单一克隆.对培养至第15代的永生化细胞进行染色体分析,免疫组化方法检测HLA-DR和hTERT蛋白的表达,反转录(RT)-PCR检测hTERT mRNA表达,以人黑素瘤A375细胞株为对照.结果:SV40T抗原介导的永生化黑素细胞具有正常的二倍体.HLA-DR和hTERT的表达未受影响,均为阴性,同时也未检测到hTERT mRNA的表达.结论:①转化的Mc染色体为正常核型、HLA-DR的表达不受体外长期传代培养和SV40T抗原的影响;②SV40T抗原不通过上调端粒酶反转录酶活性途径介导细胞永生化,同时也说明该转化细胞不易向恶性转化.
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人类白细胞抗原DR在脑卒中后免疫抑制中的作用
单核巨噬细胞表面表达的人类白细胞抗原DR（ human leucocyte antigen-DR，HLA-DR）是外源性抗原肽递呈过程中重要的分子，其表达水平可在疾病早期反映外周免疫状态。 HLA-DR由人类白细胞抗原基因Ⅱ类DR区域编码，主要表达于单核巨噬细胞、树突状细胞等抗原递呈细胞，在机体免疫系统中发挥着许多重要功能。近年来发现，急性脑卒中后外周单核细胞HLA-DR表达与机体免疫抑制密切相关，作者就HLA-DR在脑卒中后免疫抑制中的作用做一综述。
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清胰汤对SAP合并感染患者单核细胞HLA-DR表达的影响
目的：探讨清胰汤对重症急性胰腺炎（SAP）并发感染患者单核细胞HLA-DR表达的影响。方法33例SAP合并感染患者随机分成3组：SAP并发感染组（Ⅱ组）、GM-CSF治疗组（Ⅲ组）、清胰汤治疗组（Ⅳ组）；选取7例SAP未并发感染患者为对照组（Ⅰ组）；各组均予常规治疗，Ⅲ、Ⅳ组在常规治疗基础上加用GM-CSF或清胰汤治疗，一周后检测外周血WBC，血淀粉酶，ET，CRP，IL-6以及单核细胞HLA-DR表达率。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组患者在各项血清学指标均高于Ⅰ组，单核细胞HLA-DR表达水平低于Ⅰ组（P<0.05）；而Ⅲ、Ⅳ组患者各项指标较Ⅱ组明显改善（P<0.05）。结论 SAP并发感染患者存在单核细胞免疫功能缺陷，而清胰汤治疗能够改善这种免疫功能障碍以及过度炎症反应。
关键词： 清胰汤 重症急性胰腺炎合并感染 单核细胞免疫功能 人类白细胞抗原DR 炎症反应 -
肠内营养增加谷氨酰胺对重型脑外伤病人的人类白细胞抗原DR表达的影响
[目的]探讨在重度脑外伤病人住院后的前15 d中,在肠内营养中增加谷氨酰胺,观察其对单核细胞的HLA-DR的表达.[方法]2002年1月至2004年6月,在山东省千佛山医院,将55例严重脑外伤病人随机分2组,实验组28例增加谷氨酰胺的肠内营养,对照组27例给予同等热量、同等氮量的肠内营养液,选出年龄相当的健康志愿者43人为健康对照组.在外伤后第1、5、9、14 d测定单核细胞的HLA-DR的表达,测定血浆谷氨酰胺含量.[结果]在第3天至5天,血浆中谷氨酰胺含量,实验组与对照组低于健康对照组,实验组高于对照组;HLA-DR的表达,外伤第1天实验组与对照组明显低于健康对照组,第5天、第9天和第14天实验组高于对照组.[结论]增加谷氨酰胺的肠内营养饮食能增加严重脑外伤病人单核细胞的HLA-DR的表达,从而提高病人的细胞免疫功能.
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复方甘草酸苷对自身免疫性肝炎患者肝脏单核巨噬细胞吞噬功能的影响及机制
目的 探讨复方甘草酸苷对自身免疫性肝炎(AIH)患者肝脏单核巨噬细胞吞噬功能的影响及机制.方法 选择AIH患者30例,分离并培养肝脏单核巨噬细胞,取培养2天的细胞随机分为两组,观察组加入终浓度为1 mg/mL的甘草酸苷,对照组加入等量缓冲液,处理30 min.采用荧光显微镜观察细胞吞噬能力,计算吞噬率及吞噬指数;采用流式细胞仪检测细胞表面抗原提呈分子CD80、CD40、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)表达.结果 观察组细胞吞噬率为(49.80±1.36)%、吞噬指数为80.36±4.70,对照组分别为(26.38±3.25) %、32.38±1.79,观察组均高于对照组(P均<0.01).观察组细胞表面CD40、CD80、HLA-DR相对表达量分别为0.768±0.031、0.768±0.031、0.937±0.062,对照组分别为0.452±0.023、0.452±0.023、0.548±0.032,观察组均高于对照组(P均<0.01).结论 复方甘草酸苷可提高AIH患者肝脏单核巨噬细胞的吞噬功能;增加单核巨噬细胞抗原呈递能力可能是其作用机制.
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人类白细胞表面抗原DR在呼吸机相关性肺炎患者中的表达及意义
目的 探讨人类白细胞抗原DR (HLA-DR) 的表达与呼吸机相关性肺炎 (VAP) 的发生与预后的关系.方法 随机抽取本院重症监护病房患者57例, 上呼吸机后采集静脉血检测单核细胞HLA-DR、白细胞计数 (WBC) 、C-反应蛋白 (CRP) 、降钙素原 (PCT);采集VAP患者24 h内的差参数进行APACHEⅡ评分, 观察追踪至第28 d, 根据其预后分为存活组和死亡组, 分析2组各参数差异, 两样本均数的比较采用t检验;采用Logistic回归模型对单核细胞HLA-DR与VAP发生的相关性进行分析.结果 VAP患者组的HLA-DR/CD14+水平为 (48.21±4.278) ％, 明显低于对照组 (64.49±6.019) ％ (P＜0.05);Logistic回归分析显示, 单核细胞HLA-DR与患者患VAP的危险性呈负相关 (OR=0.976, 95％CI:0.9530.999), 即HLA-DR每增加一个单位, 患者患VAP的风险下降2.4％.结论 人类白细胞抗原HLA-DR表达水平对判定呼吸机相关性肺炎的发生具有一定的临床参考价值.
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使用PCR-SSP方法检测HLA-DR4抗原
目的:采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR4位点的DNA分型方法.方法:合成特异性引物,组成PCR反应用于DR4位点,建立一步法PCR-SSP.结果:所有样本PCR-SSP基因分型获得成功,分型结果经标准DNA,限制性核酸内切酶分析证实符合,特异性和重复性100%.结论:PCR-SSP检测HLA-DR4的方法具有快速,准确,特异性高等优点,适合临床应用.
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干扰素对人结肠癌细胞HLA-DR表达的影响
目的探讨干扰素(IFN)对人结肠癌细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)表达的影响.方法采用免疫组化SP法和ELISA法分别检测不同剂量的α-IFN和γ-IFN刺激前、后HLA-DR在4株人结肠癌细胞HC8、Lovo、SW-480和Ls-174-T中的表达情况.结果α-IFN和γ-IFN刺激之前,4株细胞中除Lovo细胞不表达HLA-DR,其他3株细胞均可不同程度表达HLA-DR;刺激之后,4株细胞系的HLA-DR表达均有所增强,并呈现出IFN依赖性及γ-IFN的剂量依赖性,γ-IFN的诱导作用强于α-IFN.结论 IFN可以上调人结肠癌细胞HLADR的表达,IFN用于结肠癌的临床治疗具有一定的应用前景.
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人类白细胞抗原DR与甲状腺相关眼病的研究进展
甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)是常见的眼眶疾病之一,发病机制不清,研究显示该病是一种器官特异性自身免疫性疾病,患者除具有眼部症状外,可伴随不同程度的甲状腺功能异常.
