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用HaCaT细胞和正常人黑素细胞构建组织工程皮肤
目的 探索用人永生化表皮细胞(HacaT)和黑素细胞复合鼠尾胶原凝胶支架构建组织工程皮肤的可行性.方法 HaCaT细胞和黑素细胞与鼠尾胶原复合,经历液下和气液面共13 d的培养,苏木素-伊红(HE)染色观察不同培养阶段组织学形态变化,S-100免疫组化染色观察黑素细胞分布情况.结果 随培养时间的延长,组织工程皮肤的细胞层数逐渐增加,结束时可达12～15层;同时,细胞层内发生黑素化,颜色逐渐加深,组织学结构可见黑素颗粒分布广泛,S-100免疫组化染色显示黑素细胞均匀分布于基底层.结论 在鼠尾胶原凝胶支架表面用HaCaT细胞和黑素细胞可构建出组织工程皮肤,为探索基于组织工程皮肤的化合物光毒性检测奠定基础.
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比较多种细胞因子对培养的黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响
目的:研究α-促黑素细胞刺激激素(α-MSH)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、内皮素-1(ET-1)以及干细胞生长因子(SCF)等多种细胞因子对人体黑素细胞的增殖、酪氨酸酶的活性以及黑素合成的影响.方法:分别采用MTT法、多巴氧化法、氢氧化钠裂解法和流式细胞仪测定细胞增殖情况、酪氨酸酶活性和黑素的含量以及黑素细胞的凋亡率,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术分析各种细胞因子与酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达的关系.结果:加入bFGF和ET-172 h后,该两组黑素细胞的酪氨酸酶活性和合成黑素能力明显增强;而SCF、α-MSH对黑素细胞的酪氨酸酶活性及合成黑素能力无明显影响.bFGF、SCF、ET-1、α-MSH各组酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达量均比空白对照组增加.而bFGF、SCF、ET-1、α-MSH 4组对黑素细胞的凋亡均无显著影响.结论:bFGF和ET-1对正常人黑素细胞的黑素细胞增殖及黑素生成都有增强作用.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 干细胞生长因子 内皮素-1 α-黑素细胞刺激素 黑素细胞 -
人类白细胞抗原等位基因与白癜风相关性研究进展
白癜风的病因、发病机制尚未完全明了.有遗传学说、自身免疫学说、黑素细胞自身破坏学说、神经化学因子学说等,但均未定论[1].目前多数学者认为白癜风是一种多基因或多因素遗传疾病,研究表明,该病与人类白细胞抗原(HLA)具有明显的相关性[2].HLA复合体是多位点的共显性复等位基因系统,每个座位上的HLA基因均可编码一种特定的抗原成分,故具有高度多态性.
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中西药对白癜风发病机制中酪氨酸酶调控的研究现状
酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是皮肤黑素生成途径中的主要限速酶,是黑素细胞分化成熟的一个特征性标志,其活性与黑素合成含量呈正相关.黑素在黑素细胞的黑素小体中合成,由酪氨酸酶催化酪氨酸生成多巴和多巴醌,再经过一系列反应而合成,并通过黑素细胞的树突而运输到附近的角质形成细胞中,从而形成表皮的色素.
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艾灸血清对体外黑素细胞生长及SCF、c-kit蛋白表达的影响
目的:研究艾灸血清对体外培养人黑素细胞增殖、黑素合成,以及SCF、c-kit蛋白的影响,为艾灸治疗白癜风提供科学依据.方法:20只背部黄褐色毛豚鼠,随机分为艾灸组、对照组,豚鼠背部脱毛约2cm×2cm.艾灸组选用经外奇穴“灸癜风”和“阿是穴”作为艾灸治疗穴.穴上3cm处悬灸,采用温和灸补法,每日1次,每穴每次10min左右,疗程1个月;对照组动物同法固定,但不进行艾灸.末次治疗1h后,各组动物心脏采血,收集血清;采用体外培养正常人黑素细胞,观察艾灸血清、对照组血清在5％、10％、15％3种不同浓度,及24、48、72h,对黑素细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性,以及SCF、c-kit蛋白表达的影响.结果:艾灸血清可促进黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性增加、黑素含量增加,并可促进SCF/c-kit信号通路中c-kit、SCF蛋白的表达.结论:艾灸血清中存在活性物质,可以促进黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性增加、黑素含量增加,并可促进SCF/c-kit信号通路中c-kit、SCF蛋白的表达.
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补骨脂对体外黑素细胞黏附和迁移的作用
目的:研究补骨脂对黑素细胞黏附和迁移的影响.方法:用补骨脂处理黑素细胞,检测其黏附于牛血清纤维结合素和通过微孔滤膜的细胞数量并与生姜和未经药物处理的黑素细胞比较.结果:补骨脂可显著促进黑素细胞黏附于牛血清纤维结合素和通过微孔滤膜并呈剂量依赖关系,但当补骨脂浓度超过0.2mg·L-1时这种作用未见增加.补骨脂浓度在0.01mg·L-1时,黑素细胞黏附并无显著增加,但对迁移的影响已可见统计学差异(P＜0.01).生姜则不具有这样的作用.结论:在体外,补骨脂能明显促进黑素细胞的黏附和迁移,这至少可以部分解释应用补骨脂治疗白癜风是有效的.
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黑素再生液对体外培养的黑素细胞黏附和迁移的影响
目的:探讨黑素再生液对黑素细胞黏附、迁移的影响.方法:分别用黑素再生液和补骨脂处理人表皮纯化培养的黑素细胞,观察其在纤维连接素包裹的培养板上黏附以及通过微孔滤膜的情况,并作对照比较.结果:黑素再生液和补骨脂均可促进黑素细胞黏附于培养板,黑素再生液可诱导黑素细胞迁移并呈剂量依赖性(P＜0.01),补骨脂对黑素细胞迁移无明显影响(P＞0.05).结论:黑素再生液可以促进黑素细胞的黏附和迁移,其效果优于补骨脂.
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Wnt3a减轻黑素细胞iMC65氧化应激损伤
目的 探讨Wnt3a对氧化应激损伤的iMC65黑素细胞的保护作用及机制.方法 将黑素细胞分成对照组, Wnt3a组,H2O2处理组,Wnt3a干预组,750μmol/L的H2O2作用模拟黑素细胞的氧化应激损伤.MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞产生活性氧(ROS),荧光素酶报告基因检测Nrf2/ARE通路的激活, Western blot检测Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达.结果 与对照组相比,H2O2处理组的细胞活性明显下降(P<0.01),凋亡比率明显上升(P<0.01),ROS的产生明显增加(P<0.01).而Wnt3a干预组能显著缓解H2O2处理组细胞活性的降低(P<0.05)、降低凋亡比率(P<0.05),减少ROS的产生(P<0.05).Wnt3a也能上调Nrf2和HO-1蛋白水平的表达.结论 Wnt3a可以保护氧化应激状态下的黑素细胞,其机制可能与激活Nrf2/ARE有关.
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过氧化氢对白癜风患者黑素细胞的氧化损伤
目的 探讨过氧化氢(H2O2)对体外培养黑素细胞的影响及氧化应激与白癜风发病的关系.方法 培养的黑素细胞中加入H2O2,用MTT法检测黑素细胞增殖,NaOH法检测黑素合成.结果 H2O2可以抑制黑素细胞增殖及黑素合成,且具有浓度和时间依赖性.结论 氧化应激可以抑制黑素细胞增殖及黑素合成,提示氧化损伤不足以诱发白癜风皮损.
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白癜风患者血清抗黑素细胞抗体检测及相关抗原的鉴定
目的：检测白癜风患者血清抗黑素细胞胞质和胞膜蛋白质抗体，并鉴定高识别率的胞膜抗原；检测白癜风患者血清抗酪氨酸酶相关蛋白1（ TRP-1）抗体与热休克蛋白70（ HSP70），并探讨二者的关系。方法体外培养高纯度正常人黑素细胞，间接免疫荧光法检测抗黑素细胞抗体并对相关抗原定位，裂解黑素细胞并抽提蛋白质，免疫印迹法检测50例白癜风患者血清（4例HBsAg阳性），并用蛋白质谱分析技术鉴定相关胞膜抗原；ELISA法检测70例白癜风患者血清（10例HBsAg阳性）抗TRP-1抗体和HSP70。结果间接免疫荧光法显示白癜风相关抗原位于黑素细胞胞质及胞膜上。免疫印迹法检测显示，膜抗原阳性率为80％，相应膜抗原相对分子质量（ Mr ）大约为86×103、75×103、60×103、52×103、44×103，各条带阳性率分别为36％、58％、22％、2％、2％；胞质抗原阳性率为30％，其M r约为110×103、90×103、75×103、50×103、40×103，各条带的阳性率分别为12％、4％、12％、10％、2％。20例对照血清胞膜抗原和胞质抗原阳性率分别为15％和5％。白癜风组均明显高于对照组。蛋白质谱鉴定显示：Mr为86×103和75×103的膜抗原为Lamin A／C，Mr 为60×103的膜抗原为Vimentin X1。在合并乙型肝炎的白癜风患者血清中存在高水平的抗TRP-1抗体与HSP70，并且二者浓度呈显著正相关性（ r＝0．927，P＜0．01）。结论通过蛋白质谱鉴定，发现了一种新的白癜风相关黑素细胞膜抗原，对白癜风自身免疫机制的研究有重要意义。通过检测血清抗TRP-1抗体和HSP70，初步探讨了HBV感染与白癜风发病的关系。
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三种波长的强脉冲光照射对豚鼠表皮色素和黑素细胞的影响
目的 评价三种不同波长强脉冲光照射对豚鼠表皮色素和黑素细胞的影响.方法 用相同能虽密度34 J/cm2和相同脉宽36.2 ms的535 nm波长、580 rim波长、615 nm波长的强脉冲光分别照射三组豚鼠背部皮肤,在照射前、照射后不同阶段取材,通过HE、Lillie亚铁反应法、透射电镜观察表皮色素的变化.结果 随着照射次数增加和时间的推移,表皮色素逐渐消退,对每次照射后的三组色素变化作统计学比较,535 nm组祛除色素效果优于另外两组(P<0.05),并且透射电镜观察该组黑素细胞的细胞器变性明显,但细胞核和细胞膜完整.结论 较短波长的强脉冲光照射可用于祛除表皮色素沉着,效果优于长波长强脉冲光,黑素细胞并未遭到彻底破坏,但细胞器变性明显,町能会抑制黑素合成.
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调Q开关紫翠宝石激光治疗太田痣的临床体会
太田痣是良性皮肤黑素细胞的病损,因发生于面部而影响美容,传统的治疗方法为手术冷冻、CO2激光照射、磨削等[1],痛苦大,易留下瘢痕,效果不理想.我科自1999年6月以来,应用调Q开关紫翠宝石激光治疗太田痣256例,取得满意疗效,现将临床体会介绍如下.
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自体培养黑素细胞治疗白癜风患者疗效观察
目的：观察自体培养黑素细胞治疗白癜风患者的疗效。方法从发疱壁上获取自体黑素细胞、纯黑素细胞的培养与增殖、移植区使用超脉冲CO2磨去表皮后进行自体黑素细胞的培养移植治疗白癜风，对所有的患者跟踪观察疗效至少6个月。结果治疗的48例白癜风患者中，57块皮损进行了自体培养黑素细胞的移植,总有效率为91.35%。结论自体培养黑素细胞移植是治疗白癜风的比较有效的方法，且此方法需要供区表皮较少、手术后复色比较均匀、治疗的面积大、色素分布更均匀、操作简单、疗程短、见效快、疗效高，值得推广以及应用。
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体外培养自体黑素细胞移植治疗白癜风
目的:探讨体外培养自体黑素细胞和移植治疗白癜风的疗效.方法:用无菌刀片在白癜风患者正常皮肤区获取表皮,用胰蛋白酶消化表皮制成细胞悬液,在Ham F12细胞培养基中培养.观察培养的自体黑素细胞移植到白癜风患者皮损区后色素生成效果.结果:13例患者21个皮损区接受了黑素细胞移植治疗,总有效率90.48％.结论体外培养自体黑素细胞移植治疗白癜风疗效肯定,值得临床推广和应用.
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角质形成细胞和黑素细胞体外共培养体系的建立
目的：构建角质形成细胞和黑素细胞体外共培养模型。方法胰酶消化包皮的表皮作为细胞来源，获取黑素细胞和角质形成细胞。结果角质形成细胞与黑素细胞混合培养5天后，细胞培养基逐渐变成浅灰色，再继续培养，培养基的颜色加深，细胞生长状态良好。结论成功构建了角质形成细胞与黑素细胞体外共培养模型，为色素问题的进一步研究奠定了基础。
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黑枫一号擦剂治疗白癜风49例
白癜风是局部黑素细胞破坏引起的后天性色素脱失皮肤病,病因不明,影响美容,易诊而难治.我们自2002年6月至2004年3月,使用本院自制的黑枫一号擦剂治疗白癜风患者49例,取得了较好的疗效,现报告如下.
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Q开关紫翠宝石激光治疗雀斑168例
Q开关紫翠宝石激光是近年来诞生的一种新型激光器，其特征是能选择性的破坏皮肤中的黑素细胞，而不损害周围的正常组织。由于该机所具有的这一特点，适用于太田痣、色素痣、文身的治疗。近2～3年该机已引进国内，在临床上对上述疾病的治疗取得很大进展。我们从1997年至今应用美国赛诺秀公司生产的Photo Genic 调Q开关紫翠宝石激光机治疗了168例雀斑患者，疗效满意，现报道如下。一、对象和方法1.对象：所有雀斑患者均来自门诊，共168例，其中男79例，女89例。年龄15～46岁。皮损均分布于面部。少者为数10颗，多者达数千颗。
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川芎嗪对体外培养的黑素细胞的抑制作用
目的观察川芎嗪(TMP)对体外培养的黑素细胞的抑制作用.方法采用MTT法测定细胞增殖情况;NaOH裂解法测定黑素合成;Takahashi法测定酪氨酸酶含量;用透射电镜观察黑素小体的生成.结果川芎嗪对黑素细胞的增殖有抑制作用,能使细胞数明显减少(P＜0.05),并能使黑素合成显著下降(P＜0.01),使酪氨酸酶活性逐渐减弱(P＜0.01);透射电镜观察显示,加川芎嗪后黑素小体明显减少.结论川芎嗪能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性,这可能是临床应用中药川芎治疗皮肤色素性疾病的机制.
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大蒜素对黑素细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 探讨大蒜素对人黑素细胞氧化应激损伤的保护作用及机制.方法 设空白组、对照组、过氧化氢组、大蒜素组、实验1、2、3组.空白组无细胞仅添加完全培养基;对照组添加完全培养基;过氧化氢组添加0.4 mmol/L过氧化氢完全培养基;大蒜素组添加新鲜配制的浓度为40μmol/L大蒜素完全培养基;实验1、2、3组,首先分别以不同浓度大蒜素(80、40、20 μmol /L大蒜素完全培养基)干预对数生长期经0.4 mmol /L过氧化氢处理的黑素细胞,药物干预24 h后用倒置显微镜观察细胞形态,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定大蒜素对氧化应激损伤黑素细胞的保护作用.结果 不同浓度大蒜素对过氧化氢诱导下黑素细胞保护作用不同.过氧化氢组黑素细胞活力显著下降(43.610±3.872)％(P＜0.05),但与实验2、3组相比差异无统计学意义(P=0.345);实验1组黑素细胞活力明显降低(58.223±2.806)％(P＜0.05),但高于实验2、3组(P＜0.05).结论 大蒜素通过降低H2O2诱导下人黑素细胞胞内活性氧自由基(ROS)产生,调控人黑素细胞氧化应激水平,抵抗H2O2引起的细胞凋亡.大蒜素可能是机体介导氧化应激反应的保护性因素.
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维A酸在细胞和基因水平调控黑素表达的研究
目的 探讨维A酸治疗皮肤色斑的作用机制.方法 应用不同浓度的维A酸作用于B16F10黑素瘤细胞及正常人黑素细胞,观察肘酪氨酸酶mRNA的表达、酪氨酸酶活性、黑素含量及黑素细胞增殖率的影响.结果 维A酸的作用浓度为100μmol/L时,黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达下调均值为30.13%;当浓度为500μmol/L以上时,可使酪氨酸酶活性降低82.79%,并随着浓度的增加作用越明显;而对黑素含量的降低则需要更高的浓度(1 000μmol/L);同时,还有促进黑素细胞增殖的作用.对照组氧醌对酪氰酸酶mRNA的表达无明显影响,对色素细胞有抑制和毒性作用.结论 维A酸能够抑制黑素产生,是通过下调酪氨酸酶的表达和活性来完成.
