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大蒜素对慢性肾功能衰竭模型大鼠肾纤维化的影响
目的 观察大蒜素对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure, CRF)模型大鼠肾组织纤维化的影响,探讨其作用机制.方法 采用腺嘌呤溶液(250 mg/kg)灌胃21 d的方法建立CRF大鼠模型.造模成功后,将80只模型大鼠采用随机数字表法分为模型组和大蒜素低、中、高剂量组,每组20只,另设正常对照组20只.大蒜素低、中、高剂量组分别灌胃大蒜素溶液2.5、5.0、10.0 mg/ml,模型组和正常对照组灌胃等体积生理盐水,按2 ml/kg大鼠体重给药,1次/d,连续给药28 d.末次给药后2 h,测定大鼠体重并计算肾脏指数;采用HE染色观察肾组织病理改变并进行评分;采用生化分析仪测定血清BUN、SCr、尿酸、24 h尿蛋白水平;采用ELISA法检测血清中CRP、IL-6、TNF-α水平及血浆中Ⅳ型胶原(collage typeⅣ, CⅣ)、Ⅲ型前胶原(Ⅲ procollagen, PCⅢ)、层黏连蛋白(laminin, LN)、纤维连接蛋白(fibronectin, FN)水平;采用免疫组化染色法观察肾组织Ⅰ型胶原(collage typeI, ColⅠ)、丝氨酸蛋白酶-1 (plasminogen activator Inhibitor-1, PAI-1)、MMP-1表达.结果 与模型组比较,大蒜素中、高剂量组大鼠体重升高,肾脏指数降低(P＜0.05或P＜0.01),肾组织病理学改变评分降低(P＜0.01);大蒜素中、高剂量组大鼠血清 BUN[(14.51 ± 2.76)mmol/L 、 (11.48 ± 2.43)mmol/L 比(24.07 ± 3.82)mmol/L] 、 SCr[(116.28 ± 27.35)μmol/L、(106.57±24.18)μmol/L比(134.89±35.02)μmol/L]、尿酸[(83.34±16.42)mmol/L、(77.86± 13.97)mmol/L比(114.76±16.53)mmol/L]、24 h尿蛋白[(152.79±48.43)mg、(137.03±42.61)mg比(177.94± 96.47)mg] 、 CRP[(8.79 ± 1.84)mg/L 、 (7.51 ± 1.69)mg/L 比(11.64 ± 1.95)mg/L] 、 TNF-α[(184.37 ± 24.15)ng/L、(126.82±12.96)ng/L 比(255.87±31.93)ng/L]水平降低(P＜0.05 或 P＜0.01);血浆 C-Ⅳ[(40.26±7.12)ng/ml、(23.79±4.25)ng/ml比(67.53±8.39)ng/ml]、PC-Ⅲ[(32.03±5.89)ng/ml、(24.31± 5.84)ng/ml 比(54.20 ± 7.08)ng/ml] 、 LN[(99.05 ± 38.17)ng/ml 、 (83.42 ± 28.83)ng/ml 比(117.83 ± 35.76)ng/ml]水平降低,FN[(98.58±21.43)mg/L、(125.96±25.12)mg/L比(66.72±13.09)mg/L]水平升高(P＜0.05或P＜0.01);大蒜素中、高剂量组肾组织Col Ⅰ[(0.17±0.03)、(0.09±0.03)比(0.27±0.05)]、PAI-1[(0.20±0.05)、(0.16±0.04)比(0.31±0.08)]表达下调,MMP-1[(0.10±0.03)、(0.22±0.05)比(0.04± 0.02)]表达上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 大蒜素可抑制CRF大鼠肾组织纤维化,减轻炎症反应,保护肾组织.
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超滤法结合替代对照品HPLC测定大蒜辣素与大鼠及人血浆的蛋白结合率
目的:测定大蒜辣素与大鼠及人血浆的蛋白结合率,为大蒜辣素的成药性研究提供参考.方法:以羟苯乙酯为替代对照品,采用C18色谱柱,流动相甲醇-1％甲酸梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长254 nm,结合超滤法对大蒜辣素与大鼠及健康人血浆的蛋白结合率进行测定.结果:测得75,150,300 mg·L-大蒜辣素溶液与大鼠和人血浆蛋白结合率分别为23.2％,19.8％,28.1％及15.5％,25.8％,40.0％.结论:大蒜辣素与大鼠及人的血浆蛋白结合率均较低,替代对照品HPLC可用于测定大蒜辣素的血浆蛋白结合率.
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大蒜辣素对大鼠心肌梗死后纤维化的影响及与TGFβ/Smads信号通路的关系
大蒜辣素是国际公认的大蒜活性物质,具有心血管保护作用.该实验主要观察大蒜辣素对大鼠心肌梗死后纤维化的影响,并探讨其作用与TGFβ/Smads信号通路的关系.实验采用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法制备大鼠心肌梗死模型,术后24 h开始腹腔注射给药,给药21 d后处死动物,取心脏组织做Masson染色观察心肌组织纤维化情况,免疫组织化学方法观察心肌组织Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白表达情况及TGFβ1,Smad3和Smad7蛋白表达情况.结果显示模型组大鼠心肌纤维化明显,Ⅰ,Ⅲ型胶原表达量增加,大蒜辣素各剂量组均可减轻心肌纤维化程度,减少Ⅰ,Ⅲ型胶原表达,表明大蒜辣素可抑制心肌梗死后心肌纤维化的进展.同时大蒜辣素还可下调心肌TGfβ1和Smad3蛋白表达,上调Smad7蛋白表达.该研究揭示了大蒜辣素具有抗心肌梗死后纤维化作用,其机制部分与调节TGFβ/Smads信号通路有关.
关键词： 大蒜辣素 心肌纤维化 心肌梗死 TGFβ/Smads信号通路 -
大蒜素微乳的制备与质量研究
目的 研究稀释后可供静脉注射的大蒜素微乳的处方及制备工艺,并对大蒜素微乳进行质量评价.方法 以聚氧乙烯氢化蓖麻油RH-40为表面活性剂、无水乙醇为助表面活性剂、油酸为油相,绘制该系统的三元相图;在此基础上,进行处方筛选并确定优的处方和该注射液的制备工艺;建立高效液相色谱法测定微乳中大蒜素的含量;分别考察大蒜素微乳的外观性状、pH值、离心稳定性、形态、粒径及粒度分布、稳定性等.结果 该液相色谱含量测定方法简便、准确、可靠、切实可行;所制得的大蒜素微乳较稳定,外观澄明,略带淡蓝色乳光,为O/W型微乳,呈微弱酸性;球形完整,分散良好;粒径为14.9 nm,稀释50倍后粒径为13.3 nm,均呈Gauss分布.结论 大蒜素微乳易于制备,较稳定,各项理化性质良好,质量易控.
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大蒜素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究
目的 探讨大蒜素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用.方法 用不同浓度大蒜素作用于体外培养的U251细胞12 h、24h及48 h,CCK-8法检测细胞存活率；流式细胞术(FCM)检测细胞周期及细胞凋亡.结果 大蒜素能明显抑制细胞生长,呈量-效和时-效关系(P ＜0.001)；FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0/G1期；大蒜素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加(P ＜0.001),有浓度依赖性.结论 大蒜素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡.
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大蒜素对裸鼠胃癌移植瘤生长和端粒酶活性抑制作用的研究
目的 探讨大蒜素对裸鼠胃癌移植瘤生长和端粒酶的活性抑制作用.方法 SGC-7901胃癌移植瘤裸鼠被随机分为5组,N组为PBS处理组,P组为氟尿嘧啶组(200 mg/L),L组为低剂量大蒜素组(600 mg/L),M组为中剂量大蒜素组(800 mg/L),H组为高剂量大蒜素组(1000 mg/L).观察荷瘤鼠的生长状态,量取肿瘤的大小,称取瘤重分析其抑瘤作用,应用人端粒酶酶联免疫法测定端粒酶的活性.结果 与对照组相比大蒜素和氟尿嘧啶均对荷瘤鼠的肿瘤有抑制作用,并且大蒜素的浓度越高,抑制作用越强,抑瘤率分别为:H组57.66%、M组17.08%、L组6.85%、P组59.55%;各组对端粒酶活性均有抑制作用,大蒜素剂量越大抑制作用越强,H组与对照组相比端粒酶的活性抑制作用差异有统计学意义(P=0.000).结论 大蒜素对胃癌裸鼠移植瘤和端粒酶活性有抑制作用.
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大蒜素对动脉粥样硬化小鼠血脂代谢的影响
目的 探讨大蒜素对动脉粥样硬化模型小鼠血脂代谢以及动脉粥样硬化发展的影响.方法 小鼠分6组,分别为普通饮食组(G1、G2组)、高脂高胆固醇组(G3、G4组)和高脂高胆固醇/高糖组(G5、G6组),其中偶数组同时给予大蒜素灌胃处理.分别于小鼠3、5、7、11和15周龄,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)(n=6),并同时取小鼠肝脏及主动脉进行形态学观察 (n=6).结果 高脂高胆固醇以及高脂高胆固醇/高糖喂养组小鼠较同龄普通饮食喂养组小鼠的血脂TC、TG、HDL-C和LDL-C水平明显增高,大蒜素处理组除HDL-C外,其他血生化指标均有不同程度的降低(如TC,G2/G1,42.40±2.57 vs. 45.40±6.72;G4/G3, 106.90±5.37 vs. 109.20±2.35;G6/G5, 115.45±1.27 vs. 121.76±5.12).大蒜素处理组小鼠肝脏和主动脉内膜病理学改变相对较轻.结论 大蒜素对于动脉粥样硬化模型小鼠的TC、TG、LDL-C水平均有一定程度的降低作用,而对HDL-C没有明显影响.对肝脏脂肪沉积以及主动脉动脉粥样硬化病变的发展均有一定程度的抑制作用.
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大蒜素对表皮葡萄球菌在人工关节材料表面粘附的影响
目的 探讨大蒜素对表皮葡萄球菌在人工关节材料超高分子聚乙烯和钛合金表面粘附的影响.方法 实验分为4组(其中按大蒜素干预的浓度不同具体细分):生理盐水干预组;1 mg/L大蒜素浓度干预组;2 mg/L大蒜素浓度干预组;4 mg/L大蒜素浓度干预组.利用细菌计数和生物膜定量实验观察不同浓度大蒜素干预后对表皮葡萄球菌在超高分子聚乙烯(UHMWPE)和钛合金表面粘附及生物膜形成的影响.细菌粘附数和生物膜量等计量资料使用单因素方差分析评估,组间两两比较使用LSD法.结果 在大蒜素浓度分别为0 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L干预下,单位面积的超高分子聚乙烯材料表面粘附的细菌数分别为(36 312 ±6 522) CFU/mm2、(30 624 ±8 728) CFU/mm2、(13 425±6 026) CFU/mm2、(681±249) CFU/mm2,组间差异有统计学意义(F=61.52,P＜0.05).钛合金螺钉表面细菌数分别为(76 113 ±6 504) CFU、(71 155 ±7 241) CFU、(18 611 ±6 549) CFU、(7 066±1 249) CFU,组间差异有统计学意义(F=325.42,P＜0.05).超高分子聚乙烯表面生物膜吸光度值分别为(4.38 ±0.55)、(4.17±0.67)、(2.20±0.69)、(0.62 ±0.38),组间差异有统计学意义(F=81.84,P＜0.05).钛合金螺钉表面的生物膜量分别为(3.43±0.51)、(3.29±0.53)、(2.74±0.58)、(0.59±0.25),组间差异有统计学意义(F =66.31,P＜0.05).结论 亚抑菌浓度的大蒜素能够抑制表皮葡萄球菌在UHMWPE和钛合金材料表面粘附,抑制生物膜在上述材料的形成.
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胸苷激酶基因系统联合大蒜素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合大蒜素对膀胱癌细胞的协同杀伤效应及对细胞凋亡的影响.方法通过脂质体将胸苷激酶(TK)基因转入膀胱癌BIU87细胞构建BIU87TK细胞,观察GCV(1 mg/L)、大蒜素(5 mg/L)及GCV+大蒜素(浓度同前)共同作用对BIU87TK细胞形态学、细胞凋亡率及细胞周期变化的影响,检测bcl-2、bax、半胱天冬蛋白酶(caspase-3)表达变化及caspase-3活性变化.结果药物作用72 h,GCV+大蒜素对BIU87TK细胞的抑制率为72.50%,高于GCV作用后的35.00%和大蒜素作用后的37.00%,二者可发挥协同抑瘤作用;(F=6.46,P<0.05).GCV+大蒜素联合作用前期凋亡率高于单独作用细胞,细胞周期阻滞在S和G2期,与单独作用比较阻滞时效提前;二者可抑制bcl-2表达并可促进caspase-3表达及活化.结论 HSV-TK/GCV系统联合大蒜素可通过共同诱导凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长.细胞周期阻滞,相关凋亡基因表达及活性的变化可能发挥了重要的作用.
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大蒜素对黑素细胞氧化应激损伤的保护作用
目的 探讨大蒜素对人黑素细胞氧化应激损伤的保护作用及机制.方法 设空白组、对照组、过氧化氢组、大蒜素组、实验1、2、3组.空白组无细胞仅添加完全培养基;对照组添加完全培养基;过氧化氢组添加0.4 mmol/L过氧化氢完全培养基;大蒜素组添加新鲜配制的浓度为40μmol/L大蒜素完全培养基;实验1、2、3组,首先分别以不同浓度大蒜素(80、40、20 μmol /L大蒜素完全培养基)干预对数生长期经0.4 mmol /L过氧化氢处理的黑素细胞,药物干预24 h后用倒置显微镜观察细胞形态,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定大蒜素对氧化应激损伤黑素细胞的保护作用.结果 不同浓度大蒜素对过氧化氢诱导下黑素细胞保护作用不同.过氧化氢组黑素细胞活力显著下降(43.610±3.872)％(P＜0.05),但与实验2、3组相比差异无统计学意义(P=0.345);实验1组黑素细胞活力明显降低(58.223±2.806)％(P＜0.05),但高于实验2、3组(P＜0.05).结论 大蒜素通过降低H2O2诱导下人黑素细胞胞内活性氧自由基(ROS)产生,调控人黑素细胞氧化应激水平,抵抗H2O2引起的细胞凋亡.大蒜素可能是机体介导氧化应激反应的保护性因素.
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大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823生长的影响
目的:研究大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823增殖抑制作用及对细胞周期的影响.方法:传代培养人胃癌细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率并测定药物半数抑制率(IC50);流式细胞仪检测细胞周期的改变.结果:大蒜素对SGC-7901和BGC-823两种细胞的生长均有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性,72 h IC50分别为20和30μg/mL;以72 h IC50浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞株24、48 h后,流式细胞检测与对照组比G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞明显增加,P＜0.01.提示两种胃癌细胞株经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于G2/M期.结论:大蒜素可使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞的增殖明显受到抑制;细胞周期被阻滞在G2/M期.
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鼻咽癌细胞中大蒜素抑制MAPK信号通路的作用机制研究
目的:探讨大蒜素导致鼻咽癌细胞G1/S期阻滞的分子机制.方法:采用MTT法测定细胞增殖活性;激酶活性分析测定MAPK激酶的活性;报道基因分析检测转录因子AP-1的转录活性;Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin D1的表达水平.结果:大蒜素呈浓度依赖性抑制鼻咽癌细胞增殖,细胞的存活率从100%降为52.8%(50μg/mL),P＝0.006 8;检测50μg/mL大蒜素处理时MAPK激酶的活性,发现其活性仅为未处理组的42.92%,说明大蒜素抑制了MAPK激酶活性;基因分析显示在大蒜素作用下,转录因子AP-1的转录活性也呈浓度依赖性的降低,从6.3×10 3U降低到3.8×10 3U(50μg/mL),P＝0.008 9,受AP-1调节的G1/S期调节蛋白Cyclin D1的相对表达水平也从100%下降为32.2%.结论:大蒜素通过抑制MAPK信号通路而抑制转录因子AP-1的活性,从而下调Cyclin D1表达,导致细胞G1/S期阻滞.
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大蒜新素对大鼠变应性鼻炎模型血浆中白细胞介素4和γ干扰素的影响
目的 探讨大蒜新素对大鼠变应性鼻炎模型外周血中愀扇潘和白细胞介素4(IL-4)的影响.方法 健康雌性SD大鼠30只,随机分为对照组、空白组和实验组,每组10只.实验组用卵清蛋白辅以氢氧化铝和灭活百日咳杆菌佐剂建立变应性鼻炎模型,成功后连续腹腔注射大蒜新素10 d;对照组造模方法同实验组,成功后腹腔注射等体积的生理盐水;空白组除无卵清蛋白致敏和激发外,方法同对照组.颈内静脉取血,分离血浆,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IL-4和INF-愕暮俊＝峁实验组、对照组和空白组大鼠外周血浆中IL-4水平(-x±s,下同)分别为(22.81±8.79)pg/L、(41.43±4.93)pg/L和(9.93±2.07)pg/L;INF-愕乃椒直鹗.32±11.20)pg/L,(11.35±2.45)pg/L和(21.69±5.93)pg/L.实验组血浆中IL-4的水平低于对照组而高于空白组,差异具有统计学意义(t值分别为3.22及4.17,P值均<0.05);实验组血浆中INF-γ水平高于对照组(t=3.84,P<0.05),而与空白组相比差异无统计学意义(t=1.47,P>0.05).结论 大蒜新素能降低大鼠变应性鼻炎模型外周血中IL-4的水平,同时提高INF-γ的水平,对Th1和Th2细胞因子水平具有调节作用.
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NMR代谢组学法研究大蒜辣素对大鼠的作用机制
核磁共振代谢组学法研究大蒜辣素对大鼠的作用机制.以生物核磁共振技术结合偏小二乘-辨别分析法(PLS-DA)分析大鼠腹腔注射大蒜辣素后尿液内源性代谢产物的变化,研究大蒜辣素对正常大鼠代谢过程的影响.给药后,尿样中三羧酸循环中间产物柠檬酸、α-酮戊二酸、琥珀酸含量呈现出先升高后逐渐恢复的趋势,酮体水平也有所上升;而葡萄糖、乳酸、丙氨酸、马尿酸、氮氧三甲胺和牛磺酸水平略有降低.偏小二乘分析表明,给药组与对照组的代谢谱有明显差异.大蒜辣素给药后对正常大鼠代谢过程具有显著影响,代谢组学研究有助于认识大蒜的作用机制.
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大蒜辣素提取物及其降解产物的HPLC-MS/MS研究
对大蒜辣素提取物及其降解产物进行研究.采用HPLC-MS/MS一级质谱扫描总离子流、HPLC保留时间、二级质谱或对照品对照进行结构鉴定.并对大蒜辣素提取物在水溶液和不同浓度乙醇溶液中的稳定性分别进行了考察.结果表明大蒜辣素提取液中主要含有5种硫代业磺酸酯类成分.水溶液于-20℃存放3个月,各成分相对稳定,而随着乙醇浓度增加,可见明显的降解,并对降解产物进行了初步鉴定.
关键词： 大蒜 大蒜辣素 稳定性 HPLC-MS/MS -
大蒜辣素前体包芯片的制备
目的:制备大蒜辣素前体包芯片,使其口服后在短时间内促发酶促反应,生成大蒜辣素.方法:以蒜氨酸和蒜酶双层片为片芯,控酸颗粒为外层压制得到包芯片.并以人工胃液为介质小杯法考察包芯片大蒜辣素产率.结果:大蒜辣素前体包芯片在人工胃液中10 min内大蒜辣素产率＞70％.结论:以蒜氨酸、蒜酶及控酸盐组合制备包芯片能够有效避免蒜酶在胃酸条件下失活,达到在体内获得较高产率大蒜辣素目的.
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大蒜辣素对人鼻咽癌KB细胞的促凋亡、周期阻滞以及微管解聚作用
大蒜辣素是大蒜的主要生物活性成分,由其非活性前体蒜氨酸与蒜酶相互作用而产生.在此项研究中,我们观测大蒜辣素对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用与药理机制.研究结果表明,大蒜辣素可明显抑制KB细胞的增殖,具有浓度依赖性,作用48 h的IC50值为(2.2±0.2)μg/mL.而且,大蒜辣素可诱导KB细胞凋亡,作用48 h时诱导凋亡作用在(16～48)μg/mL范围内具有浓度依赖性.大蒜辣素的凋亡诱导作用通过其诱导KB细胞的细胞核凝集、细胞骨架改变以及线粒体膜电势变化得到了进一步确证.大蒜辣素还可阻滞KB细胞周期于S期,在(16～48)μg/mL范围内具有浓度依赖性.此外,大蒜辣素可浓度依赖的解聚KB细胞的微管,其作用类似于已知的微管解聚剂秋水仙碱.大蒜辣素对人鼻咽癌KB细胞的增殖抑制作用可能是通过诱导凋亡,阻滞细胞周期以及解聚微管实现的.
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食蒜有讲究
1、大蒜好生吃.煮熟后大蒜的活性物质和有效成分大多被破坏.2、大蒜要捣碎吃.因蒜头的鳞茎中含有蒜氨酸和蒜酶成分,这两种成分在鳞茎中是独立存在的,把蒜捣烂后有助于这两种物质互相接触,并在蒜酶的作用下,使蒜氨酸得到分解,从而生成有挥发性、杀菌力强的大蒜辣素.
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大蒜素抑制牙龈卟啉单胞菌诱导人肺上皮细胞凋亡的作用
目的：探讨不同浓度大蒜素对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）诱导人肺上皮细胞A549凋亡的影响。方法以微量肉汤稀释法，通过检测不同浓度大蒜素在不同时间点对P. gingivalis的抑制作用，测定大蒜素对P.gingivalis的低抑菌浓度（MIC）以及低杀菌浓度（MBC）。分别于12 h及24 h时，以四唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（64、96、128 mg/L）大蒜素对P.gingivalis感染后的A549存活率的影响，以流式细胞术FITC/PI染色法检测24 h时，P.gingivalis与大蒜素（128 mg/L）分别以及共同作用对A549细胞凋亡率的影响。结果大蒜素对P.gingivalis的MIC为64 mg/L，MBC为128 mg/L。MTT检测结果显示，P.gingivalis感染后，随着大蒜素浓度的增加，细胞存活率增加，差异有统计学意义（P<0.05）。大蒜素（128 mg/L）组的存活率与细胞对照组比较差异无统计学意义，表明大蒜素对A549无明显细胞毒性。流式细胞术检测结果显示，各组细胞凋亡率由高到低为：P. gingivalis组>P.gingivalis+大蒜素组>大蒜素组>细胞对照组，差异有统计学意义（P<0.01），大蒜素对P.gingivalis感染后A549的凋亡有明显抑制作用。结论大蒜素可有效抑制P.gingivalis对肺上皮细胞的感染，对于治疗牙周炎合并肺部感染有良好的应用前景。
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大蒜素治疗红斑狼疮肾炎继发病毒真菌感染1例
红斑狼疮并发肾功能不全患者,由于免疫功能低下,在原病基础上继发病毒、真菌感染,是内科常见病,治疗中如何选用既不损伤肝脏又不损伤肾脏药物至关重要.我院选用植物药大蒜素注射液治疗红斑狼疮肾炎并发病毒及真菌感染,效果较好,现报告如下.
