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补骨脂异黄酮对A375细胞黑素合成的影响
目的 观察补骨脂异黄酮对A375细胞黑素合成的影响,探讨其作用机制.方法 将细胞按随机数字表法分为空白组,雌二醇组,补骨脂异黄酮10-3、10-2、10-1、1、10、100μmol/L组.雌二醇组给予10-3μmol/L的雌二醇溶液干预,补骨脂异黄酮10-3、10-2、10-1、1、10、100μmol/L组分别给予10-3、10-2、10-1、1、10、100μmol/L补骨脂异黄酮溶液进行干预.分别采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法检测细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;采用RT-PCR法测定TYR、酪氨酸酶相关蛋白(tyrosinase related protein,TRP)-1及TRP-2 mRNA表达.结果 与空白组比较,10、100μmol/L补骨脂异黄酮组细胞增殖率下降(P<0.01);补骨脂异黄酮1、10-1、10-2μmol/L组细胞黑素含量、TYR活性下降(P<0.01或P<0.05);1μmol/L补骨脂异黄酮组TYR[(0.303±0.003)比(0.628±0.012)]、TRP-1[(0.313±0.008)比(0.677±0.022)]、TRP-2[(0.456±0.028)比(0.687±0.020)]mRNA表达降低(P<0.01).结论 补骨脂异黄酮可能通过抑制TYR活性和TYR、TRP-1/2 mRNA表达从而抑制黑素合成.
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庆大霉素对豚鼠血管纹黑色素的影响及其机制
目的了解庆大霉素(gentamicin,GM)对豚鼠血管纹黑色素的影响及其作用机制.方法豚鼠杂色40只和白色20只每日肌内注射庆大霉素150 mg/kg体重7 d后用脑干诱发电位仪检测两种豚鼠的听阈变化,以透射电镜观察杂色豚鼠用药前后血管纹内黑色素含量及酪氨酸酶活性的变化,并用免疫组化法观察血管纹增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的变化.结果庆大霉素作用后,杂色和白色豚鼠的听阈与用药前比较,差异有非常显著性意义(P<0.001),且两组豚鼠间的阈移差异也有非常显著性意义(P<0.001).杂色豚鼠对照组和实验组(各10只)血管纹中间细胞内平均(±s,以下同)每个观测区域(300 μm2)的黑素体含量分别为(19.83±2.74)个和(58.33±16.22)个,差异有非常显著性意义(P<0.001);酪氨酸酶活性反应产物面积与测定区域面积之比从1.65%±0.40%增加为3.45%±0.41%,差异有非常显著性意义(P<0.001);但对照组与实验组PCNA阳性中间细胞分别为(14.08±2.76)个和(13.58±2.09)个,差异无显著性意义(P>0.05).结论庆大霉素作用后血管纹内黑色素含量的增加,可能是由于药物促进了酪氨酸酶活性的增强,而不是促进黑素细胞的增殖能力增强.黑色素可保护豚鼠内耳免受庆大霉素的耳毒性作用.
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人酪氨酸酶抗原表位肽的表达、纯化及在白癜风患者中的抗原性检测
目的 表达人酪氨酸酶抗原表位肽,探讨其在白癜风患者自身抗体检测中的应用.方法 目的基因合成后克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和Western印迹鉴定目的蛋白表达,以此蛋白为抗原,检测100例进展期白癜风患者和30名正常人血清IgG抗体情况.结果 成功构建重组表达载体,重组蛋白成功表达.应用凝胶分析系统分析蛋白表达量发现,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的70%.融合蛋白经过谷胱苷肽S-转移酶试剂盒纯化后,其蛋白纯度达90%以上.100例白癜风患者中64例血清与目的蛋白结合反应呈阳性,30名正常人血清结合反应均呈阴性.结论 成功表达了人酪氨酸酶抗原表位肽,其在白癜风患者血清中具有抗原性.
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InnVit/FBXO11在白癜风中的表达及其对酪氨酸酶输出内质网的影响
目的 通过检测InnVit(即FBX011)在白癜风患者中的表达及其对内质网形态和酪氨酸酶输出内质网的影响,探讨INNVit基因对黑素细胞功能的影响.方法 收集10例表皮片移植白癜风患者皮损区与正常供皮区组织,免疫组化检测InnVit蛋白的表达情况.化学合成InnVit基因特异性siRNA片段及构建过表达质粒载体P3XF-P120,Lipofectamine TM 2000脂质体方法转染BIOBr细胞,电镜观察不同处理组细胞的内质网形态变化;激光共聚焦显微镜观察酪氨酸酶蛋白及钙网蛋白在内质网中的共定位情况;Western印迹检测转染细胞中InnVit蛋白、酪氨酸酶及钙网蛋白的表达水平.结果 10例白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达明显低于正常供皮区.未处理组与质粒转染组的黑素细胞内质网形态正常,而siRNA转染组的细胞内质网有明显膨胀,且其相对膨胀率(1.97±0.48)与未处理组(1.28±0.09,P=0.001)和质粒转染组间(1.24±0.13,P=0.001)比较,差异均有统计学意义.未处理组与质粒转染组细胞中酪氨酸酶的表达范围部分地超出了钙网蛋白的标记范围,而siRNA转染组细胞中酪氨酸酶几乎与钙网蛋白共定位于内质网中.siRNA转染组InnVit蛋白的相对表达量(0.030±0.004)低于未处理组(0.320±0.020)和质粒转染组(0.710±0.040),质粒转染组高于未处理组(均P＜0.01);钙网蛋白3组间差异无统计学意义(P＞0.05);siRNA转染组酪氨酸酶(1.040±0.060)高于质粒转染组(0.720±0.030)和未处理组(0.350±0.030),质粒转染组高于未处理组(均P＜0.01).结论 白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达下降;InnVit基因的表达影响了黑素细胞内质网的形态,并可以调控酪氨酸酶在内质网中的输出,进而影响黑素细胞的功能.
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鞣花酸抑制黑素细胞黑素合成及黑素传递的实验研究
目的：观察鞣花酸对黑素细胞（melanocyte, MC）合成黑素以及传递黑素的影响并探讨其机制。方法分别纯化培养来自人包皮的表皮黑素细胞和角质形成细胞(keratinocyte, KC)，传第2代后以1∶10的比例将两细胞接种到3 cm×3 cm的小培养皿中，单独或混合培养的细胞经高、中、低（100、10、1 mg/L）3种浓度的鞣花酸干预48 h后，分别检测干预前后黑素细胞中黑素含量、酪氨酸酶活性的变化，采用流式法检测混合培养细胞中黑素传递的情况，以10 nmol/L熊果苷为阳性对照。结果3种浓度鞣花酸浓度均可下调细胞酪氨酸酶活性，并呈浓度依赖性。除了1 mg/L的鞣花酸对黑素细胞黑素合成无明显作用，其余浓度的鞣花酸均可降低黑素含量。鞣花酸同时具有抑制黑素传递的作用。结论鞣花酸可抑制黑素合成及黑素传递，或可作为一种皮肤美白剂应用。
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亚砷酸钠对黑色素瘤细胞A375和G361色素代谢的影响
目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对黑色素瘤细胞A375(以下简称A375)和G361(以下简称G361)的色素水平及酪氨酸酶(TYR)活力的影响,以及两种细胞色素代谢能力的差异.方法 以0.0(对照)、0.1、1.0 μmol/L NaAsO2作用于A375和G361细胞,72 h后,以阿尔玛蓝还原法检测细胞活力水平,同时测定细胞中黑色素水平及TYR的活力水平.结果 NaAsO2作用72h后,0.1 μmol/L剂量组的A375和G361细胞均呈轻度增殖表现,细胞活力[A375:(103.32±1.26)％；G361:(104.10±1.76)％]与对照组[A375:(100.00±1.08)％；G361:(100.00±1.79)％]比较,差异无统计学意义(P均＞0.05)；1.0μmol/L剂量组细胞活力[A375:(75.32±1.59)％；G361:(78.26±2.10)％]与对照组相比均显著下降(P均＜0.05).对照、0.1、1.0μmol/L剂量组的G361细胞的黑色素水平[(7.19±0.35)、(7.34±0.83)、(8.19±0.86) pg/细胞]均高于A375细胞[(4.35±0.72)、(4.54±0.01)、(4.60±0.59)pg/细胞,P均＜0.05],G361细胞的TYR活力水平[(54.13±1.21)、(54.56±0.21)、(56.25±0.85)贝克勒尔(Bq)]均高于A375细胞[(42.00±0.21)、(42.90±0.54)、(42.91±0.01)Bq,P均＜0.05].2种细胞的黑色素生成水平及TYR活力水平均随NaAsO2剂量增高而呈增高趋势,但组间比较,差异均无统计学意义(P均＞ 0.05).结论 砷致色素代谢异常可能与砷暴露致黑色素水平及TYR活力增高有关；不同个体间色素代谢差异,可能与个体的黑色素代谢本底水平及TYR本底活力差异有关.
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人皮肤黑素生成调控机制的研究进展
人皮肤黑素在黑素细胞的黑素小体内合成,受多重因素的复杂调控,包括转录调节、细胞内信号传导通路调节、产物的反馈调节,以及核受体、细胞因子等对黑素生成的正向(刺激)和负向(抑制)调节.在正常黑素生成过程中,小眼畸形相关转录因子是转录调控酪氨酸酶及其相关蛋白的重要分子;环磷酸腺苷/蛋白激酶A通路、丝裂原激活的蛋白激酶通路、一氧化氮/环磷酸鸟苷/蛋白激酶G通路、二酯酰甘油/蛋白激酶C通路是参与黑素生成的主要4条细胞内信号传导通路.对黑素生成有正向(刺激)作用的分子及其受体主要有G蛋白耦联受体及其配体、干细胞生长因子及其受体、核受体及其配体.对黑素生成有负向(抑制)作用的分子及其受体主要有Agouti信号蛋白及其受体、G蛋白耦联受体及其配体、细胞因子和生长因子及其受体.
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酪氨酸酶抑制剂及对黑素生物合成的影响
酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶、限速酶,可以酪氨酸酶为靶点筛选增白美容的药物,用于治疗色素沉着性皮肤病.综述了已用于临床的氢醌、熊果苷、曲酸、壬二酸等药物,以及近年来通过各种途径筛选得到的酪氨酸酶抑制剂及其脱色素的机制.
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葛根素促进黑素细胞黑素合成及其机制的初步探讨
目的 探讨葛根素对正常人黑素细胞黑素合成的影响和可能机制.方法 用噻唑蓝(MTT)法、NaOH裂解法观察葛根素对黑素细胞增殖及黑素合成作用,RT-PCR及Western印迹法检测葛根素对黑素细胞小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP-1)基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 1～ 40 μmol/L浓度范围内葛根素对体外培养的黑素细胞增殖影响与正常对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).与正常对照组相比,40 μmol/L葛根素可显著促进黑素细胞的黑素合成(P＜0.05),并可显著增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达(P＜0.05).40 μmol/L葛根素使MITF、TYR、TRP-1的蛋白表达量分别比正常对照组增加8.69％,10.28％和10.58％(P＜ 0.05);并使MITF、TYR、TRP-1的mRNA表达量分别比正常对照组增加2.48倍,1.91倍和1.63倍(P＜0.05).结论 葛根素能增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达水平,促进黑素合成.
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核因子E2p45相关因子2核转位对黑素细胞生物学活性的影响
目的 探讨核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位对永生化黑素细胞株B10BR细胞生物学活性的影响.方法 构建电转染野生型和nls缺失型nrf2质粒载体至B10BR细胞,结合叔丁基氢醌(TBHQ)和(或)H2O2处理,Western印迹检测Nrf2,his标签蛋白表达,MTr法测定细胞活性,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,Transwell法测定转染细胞的迁移.结果 TBHQ处理的转染组细胞核中Nrf2表达均显著高于TBHQ未处理组(P＜0.01).转染质粒组间及其与未处理组间细胞酪氨酸酶活性差异均无统计学意义(P＞0.05),H2O2处理使2个质粒转染组酪氨酸酶活性较单独质粒转染组显著下降(pcDNA-nrf2,P＜0.05; pcDNA-nrf2△nls,P＜ 0.05).相对于TBHQ未添加H2O2处理的nrf2组,TBHQ显著增强H2O2处理的野生型nrf2质粒转染细胞酪氨酸酶活性(P＜0.05)；相对于TBHQ未添加H2O2处理的nls组,nls缺失型nrf2质粒转染组细胞酪氨酸酶活性差异无统计学意义(P＞0.05).相对于nrf2未转染组,H2O2对野生型nrf2质粒转染组细胞活性的影响无统计学意义(P＞0.05)；相对于两组的未处理组,H2O2引起未转染组及nls缺失型质粒转染组细胞活性显著下降(未处理组,P＜ 0.05；pcDNA-nrf2△nls,P＜0.01).TBHQ可以保护野生型nf2质粒转染细胞免受H2O2引起的氧化损伤,对nls缺失型质粒转染组细胞无明显保护作用.各处理组黑素细胞迁移差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2核转位异常影响黑素细胞的抗氧化能力、黑素细胞活性及酪氨酸酶活性.TBHQ可以激活野生型Nrf2在细胞核中表达水平,增强酪氨酸酶和黑素细胞活性,进而提高细胞的抗氧化水平.
关键词： 黑素细胞 核因子E2p45相关因子2 核转位 一元酚单氧酶 -
人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响
[目的]探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制.[方法]人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2～5代细胞进行实验.采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化.[结果]体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μ mol/L人参皂苷Rbl作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义(P＞0.05),黑素含量呈浓度依赖性增加(与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4％±5.7％、155.7％±6.3％、217.2％±11.7％),酪氨酸酶活性增加(相对酪氨酸酶活性分别为117.9％±5.7％、158.2％±9.6％、182.6％±10.0％).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶(225.4％±12.8％)、MITF(313.5％±16.7％)蛋白表达明显升高(与溶剂对照组相比,P值均＜ 0.01),CREB磷酸化明显增加(322.5％±21.1％)(与溶剂对照组相比,P＜ 0.01).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用黑素细胞8h,MITF蛋白表达无明显变化；作用24h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P＜ 0.01.10 μmol/L的蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rbl引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均＜ 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加.[结论]人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性.PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制.
关键词： 黑素细胞 人参皂甙 一元酚单氧酶 小眼畸形相关转录因子 黑素生成 -
全反式维A酸对UVB照射的A375细胞酪氨酸酶代谢及铜锌超氧化物歧化酶的影响
目的 探讨全反式维A酸(ATRA)对中波紫外线(UVB)照射的人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶及铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)的影响.方法 将培养的A375细胞分为6组:ATRA+UVB组:A375细胞照射UVB后加入全反式维A酸；氢醌+UVB组:照射UVB后加入氢醌；UVB组:仅照射UVB;ATRA组:A375细胞加入ATRA；氢醌组:A375细胞加入氢醌；阴性对照组:A375细胞只加入相应溶媒,既不照射UVB,也不加入药物.分别培养,于24 h、48 h和72 h测定黑素含量及酪氨酸酶活性；于培养24 h,Western印迹检测酪氨酸酶蛋白的变化,实时定量PCR法分别检测酪氨酸酶和Cu/Zn SOD在mRNA水平的变化.结果 UVB照射的A375细胞加入全反式维A酸后24 h、48 h、72 h黑素含量及酪氨酸酶活性均下降.UVB照射A375细胞后24 h酪氨酸酶蛋白及mRNA测定值分别为0.72±0.070、1.400±0.135,加入全反式维A酸24 h后酪氨酸酶蛋白及mRNA值分别为0.42±0.056(P＜ 0.01)、0.810±0.062(P＜ 0.01)；UVB照射A375细胞后24 h Cu/ZnSOD mRNA水平为0.323±0.066,加入全反式维A酸后Cu/ZnSOD在mRNA水平增高为0.625±0.103(P＜ 0.01).结论 全反式维A酸能够通过酪氨酸酶途径抑制UVB辐射导致的A375细胞黑素含量增加,并可提高Cu/ZnSOD水平.
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N-乙酰氨基葡萄糖对酪氨酸酶活性及小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响
/L N-乙酰氨基葡萄糖显著抑制B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性(分别为0.1003±0.0404、0.0130±0.0053)及酪氨酸酶蛋白的表达(13.2700±0.9741、8.5667±2.0345,P<0.05或P<0.01).结论 N-乙酰氨基葡萄糖抑制培养的小鼠B16黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成.
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内皮素拮抗剂对鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的研究
目的 研究天然提取的内皮素拮抗剂对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞的生物学作用.方法 比较观察了内皮素拮抗剂和甘草黄酮对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率的影响,以及内皮素拮抗剂对内皮素(ET-1)引起的B16细胞酪氨酸酶活性变化的作用.结果 在实验浓度下,甘草黄酮具有浓度依赖性黑素合成抑制作用,内皮素拮抗剂对培养的B16黑素瘤细胞黑素生成没有直接的抑制作用,但能特异性抑制内皮素对黑素瘤细胞分化和酪氨酸酶的激活作用,200μg/mL该拮抗剂即可显著拮抗0.5μg/mL ET-1对黑素瘤细胞的刺激增殖作用,与甘草黄酮相比,细胞毒性较小.结论 内皮素拮抗剂是一种安全的皮肤美白物质,在UVB照射后内皮素增加引起的皮肤色素沉着中,具有广泛的应用前景.
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卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响
目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.
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三种表达肽检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶抗体的比较
目的 应用三种表达肽TYR240-300,TYR240-479和TYR检测进展期白癜风患者血清酪氨酸酶IgG抗体,比较三者的抗体检测差异,筛选优势抗原.方法 原核表达、纯化三种表达肽TYR240-300,TYR240-479和TYR,Western印迹鉴定纯化蛋白;以纯化的三种表达肽作为抗原,以提取的黑素细胞总蛋白作为阻断抗原,进行阻断ELISA分析;以纯化的三种表达肽作为抗原,检测100例进展期白癜风患者血清中酪氨酸酶IgG抗体,比较三种表达肽的抗体检测阳性率及滴度差异.结果 三种表达肽均能被天然的黑素细胞抗原所阻断,100例进展期白癜风患者血清中,抗TYR240-300 IgG抗体与抗TYR240-479 IgG抗体阳性率分别为32.0%和62.0%,不同型别患者两种抗体检出阳性率差异较大,泛发性(8例)分别为4例和7例,局限性(8例)分别为3例和4例,散在性(48例)分别为31.3%和60.4%,肢端性(19例)分别为20.0%和52.6%,节段型(17例)分别为47.1%和82.4%.40例进展期白癜风患者血清中抗TYR240-479 IgG抗体与抗TYR IgG抗体的阳性率相近,分别为62.5%和60.0%.表达肽TYR240-479和TYR检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体高滴度均为1:320,而表达肽TYR240-300检测的进展期白癜风患者血清中IgG抗体高滴度均为1:160.结论 TYR 240-479是用于白癜风患者中酪氨酸酶抗体检测的优势抗原.
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芪白合剂对培养的人黑素细胞生长及酪氨酸酶、MITF基因表达的影响
目的 研究芪白合剂对黑素细胞生长及黑素细胞酪氨酸酶、小眼相关转录因子(MITF)基因表达的影响.方法 芪白合剂组方黄芪、党参、白芷、白蒺藜、鸡血藤,水煎煮浓缩成3 g/mL,取青紫蓝兔,按12 mL·kg-1·d-1连续灌胃3天后于末次给药1 h,2 h和5 h无菌采血,收集血清;采用体外培养正常人黑素细胞,观察不同采血时间的芪白合剂含药血清对黑素细胞生长、酪氨酸酶的活性、黑素合成以及用RT-PCR的方法测定其对酪氨酸酶、MITF基因表达的影响.结果 含药血清与对照血清比较,能明显促进黑素细胞生长,上调酪氨酸酶的活性和黑素合成(P＜0.05),以1 h和2 h所采血清作用明显.并可以促进酪氨酸酶和MITF的基因表达.结论 芪白合剂可以通过直接作用于黑素细胞和酪氨酸酶通道来促进黑素合成.
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人酪氨酸酶抗原表位肽的表达、纯化及生物学活性分析
目的 探讨人酪氨酸酶抗原表位肽在白癜风患者自身抗体检测中的表达.方法 目的 基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE分析和蛋白质印迹鉴定目的 蛋白表达,ELISA检测其生物学活性.结果 成功构建重组表达载体,SDS-PAGE和蛋白质印迹结果表明,重组蛋白成功表达.应用凝胶分析系统分析蛋白表达量发现,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的90%.融合蛋白经过试剂盒纯化后,其蛋白纯度达95%以上.ELISA检测纯化蛋白的生物学活性,结果表明,纯化蛋白具有结合白癜风患者IgG的能力.结论 成功表达了人酪氨酸酶抗原表位肽,其表达蛋白具有生物学活性.
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18味中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响
目的研究中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.方法以MTT法测定培养的B16黑素瘤细胞的增殖活性;NaOH法测定黑素生成量;体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性.结果与空白对照组相比,18种中药乙醇提取物中,有9种提取物对1种以上指标有显著性作用(P＜0.05或P＜0.01).沙苑子、甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黄芩、黑芝麻、墨旱莲可明显促进B16黑素瘤细胞增殖,甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、何首乌、黑芝麻、墨旱莲明显增加黑素含量,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻、墨旱莲明显增加酪氨酸酶活性,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻和墨旱莲的提取物对3种指标均有显著性作用(P＜0.05或P＜0.01).结论山慈姑等6种中药的乙醇提取物具有促进黑素细胞增殖和合成黑素的作用.
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中药对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响及致色素作用
目的 探讨中药对皮肤酪氨酸酶基因表达、色素生成和黑素细胞增殖的影响.方法 选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用的旱莲草等7种中药,以棕色豚鼠为动物模型,采用mRNA原位杂交观察中药外涂对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响,并用Schmorl法染色和多巴-氧化酶染色观察中药促色素生成及黑素细胞增殖的作用.结果 原位杂交显示中药处理组的酪氨酸酶阳性细胞数和杂交信号明显高于对照组(P＜0.01),尤其以旱莲草、夏枯草、刺蒺藜等显著.Schmorl法和多巴-氧化酶染色示7种中药能使豚鼠表皮基底层内含有黑素颗粒的细胞数和多巴阳性细胞的数量增多(P＜0.05),但7种中药的两种作用并不完全平行(P＞0.1).结论 旱莲草等7种中药均具有上调豚鼠皮肤酪氨酸酶的基因表达、促进黑素生成和黑素细胞增殖的作用,提示中药的作用不仅限于转录水平,有可能影响黑素细胞的增殖和黑素颗粒的生成.
