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亚砷酸钠单次染毒大鼠后唾液及血液总砷含量变化比较
目的 比较亚砷酸钠单次染毒后大鼠血液及唾液中总砷含量随时间变化情况.方法 健康清洁级SD大鼠21只,适应性饲养一周后一次性灌服亚砷酸钠20mg/kg.于给药前(0 h)和给药后1～2、4～5、7～8、11 ～ 12、17 ～ 18和23 ～ 24 h时间段分别收集血液和唾液,利用原子荧光分光光度计(AFS-230)检测血砷含量,电感耦合-等离子体质谱(ICP-MS)测定唾液砷含量.结果 大鼠摄入亚砷酸钠后,其血液中砷含量急剧上升,在1～2小时便达到峰值,随后下降,但在第7～8小时又出现第二个峰值.唾液中砷含量上升趋势较血砷缓慢,在第7～8小时达到峰值,随后逐渐下降.唾液砷与血砷随时间变化趋势基本一致,且两者之间存在明显的正相关性,r =0.678 (P ＜0.01).结论 砷在唾液中的代谢及排泄速率与血液相比较为缓慢,但总体趋势基本一致,表明唾液砷也能够反映机体砷暴露水平.
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无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响
目的探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。方法采用细胞划痕染料标记示踪技术，以荧光染料在细胞间的扩散作为评价缝隙连接通讯的指标，观察亚砷酸和砷酸对原代培养的人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯的影响。结果亚砷酸可显著抑制人皮肤成纤维细胞间荧光黄染料的扩散，在0.005～5.0 μmol/L浓度范围内有明显的剂量依赖关系。砷酸也可明显抑制荧光黄染料在人皮肤成纤维细胞间的扩散，但剂量依赖关系不明显。进一步的研究发现，亚砷酸可显著增高人皮肤成纤维细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C的活性，其中对胞膜蛋白激酶C活性的作用更为明显。结论无机砷可显著抑制人皮肤成纤维细胞缝隙连接通讯，提示它们在癌症发生的促长阶段扮演重要角色。无机砷对细胞缝隙连接通讯的抑制可能与其引起细胞内蛋白激酶C的异常活化有关。
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亚砷酸钠对生长发育影响的分子遗传机制研究
目的利用基因芯片技术研究亚砷酸钠对生长发育相关基因表达的影响,探讨砷的分子遗传学机制.方法将正常肝细胞cDNA克隆库的基因点在芯片上(每个克隆是什么基因尚未知),然后与暴露于不同亚砷酸钠浓度肝细胞中得到的cDNA第一链杂交,对表达有差异的克隆进行基因测序,明确是什么基因,后筛选出与生长发育相关的基因.结果两个染毒组人甲状腺激素结合蛋白基因(p55)的表达水平分别是对照组的2.21和2.93倍,说明亚砷酸钠增强了p55基因的表达.两个染毒组与对照组基因表达水平相比,胎盘催乳素基因(PL)分别是0.13和0.27,同源框基因(HOXA10)分别是0.22和0.35,表明亚砷酸钠抑制PL基因和HOXA10基因的表达.结论亚砷酸钠对生长发育相关基因表达有影响,初步揭示了砷对生长发育影响的分子遗传学机制.
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缺氧诱导因子1α在砷所致人肝细胞上皮间质转化及其恶性转化中的作用
目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在亚砷酸钠(NaAsO2)所致人肝细胞(L-02细胞)上皮-间质转化(EMT)及其在恶性转化中的作用.方法 用2.0μmol/L NaAsO2慢性处理L-02细胞0、10、20或30代,以0代为对照组.用LipofectamineTM2000将缺氧诱导因子1α对照小干扰RNA(con siRNA)和HIF-1α小干扰RNA(siRNA)转染砷诱导的恶性转化人肝细胞(T-L-02)后,将其分别设定为T-L-02+con siRNA和T-L-02+HIF-1αsiRNA组,并设立L-02组及T-L-02对照组.采用Western blots检测不同组别的EMT指标及HIF-1α表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验检测HIF-1α与Snail的结合水平,软琼脂集落形成实验检测细胞恶性程度,侵袭转移实验检测细胞侵袭转移能力.结果 NaAsO2处理10、20和30代L-02细胞后,其E-钙黏附蛋白水平均低于0代细胞组,P值均<0.05;而N-钙黏附蛋白和转录因子Snail相对表达量及HIF-1α水平均高于0代细胞组,P值均<0.05.siRNA处理后,T-L-02+HIF-1αsiRNA组的HIF-1α、N-钙黏附蛋白、Snail水平低于T-L-02对照组,而细胞E-钙黏附蛋白水平高于T-L-02对照组,P值均<0.05.同时,HIF-1α直接靶向Snail调控其表达,使其表达升高.细胞侵袭实验发现,T-L-02+HIF-1αsiRNA组细胞的集落形成数、侵袭细胞数和转移细胞数均低于T-L-02对照组,P值均<0.05.结论 HIF-1α通过调控Snail参与砷所致人肝细胞EMT及其恶性转化.
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RANKL在佐剂性关节炎大鼠滑膜中的表达及亚砷酸对其影响
目的:研究细胞核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)在佐剂性关节炎大鼠发病中的作用,探讨亚砷酸对RANKL的影响及其对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用.方法:40只大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、低剂量亚砷酸组(LSA,1.5 mg.kg-1.d-1)、高剂量亚砷酸组(HSA,3.0 mg.kg-1.d-1),正常对照组与模型组给予生理盐水2 ml/d.免疫组化、原位杂交方法检测各组RANKL蛋白及其mRNA的表达;HE染色观察各组滑膜组织形态变化.结果:与正常对照组比较,模型组RANKL蛋白及其mRNA大量表达(P＜0.01);与模型组比较,LSA组及HSA组RANKL蛋白及其mRNA表达降低(P＜0.01),且HSA组更明显.结论:RANKL在大鼠佐剂性关节炎发生发展中具有重要作用;亚砷酸能下调RANKL蛋白及其mRNA的表达,提示亚砷酸对RA有一定的治疗作用.
关键词： 核因子κB受体活化因子配基 亚砷酸盐类 关节炎 类风湿 大鼠 -
亚砷酸诱导肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡的实验研究
目的探讨亚砷酸(As2O3)对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法应用细胞计数、FITC-TUNEL染色后荧光摄象及流式细胞仪技术探讨亚砷酸对肝癌HepG-2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.结果亚砷酸能明显抑制肝癌HepG-2细胞的生长,5μmol/LAs2O3组抑制程度明显大干1μmol/L As2O3组(P＜0.01),二者与不加药阴性对照组相比均有显著性差异(P＜0.01),亚砷酸对肝癌细胞的生长抑制具有时间依赖性,5μmol/L As2O3组已表现出细胞毒作用;1μmol/L As2O3组作用d 3开始出现凋亡细胞,FITC-TUNEL染色后荧光摄象可见典型的凋亡细胞.流式细胞仪可观察到凋亡细胞具有时间依赖性.结论亚砷酸能够抑制肝癌HepG-2细胞的增殖,且能诱导肝癌细胞的凋亡,具有治疗肝癌的潜在价值.
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亚砷酸化疗对肝移植大鼠肝癌复发的抑制作用
目的 探讨亚砷酸全身化疗对大鼠肝移植术后肝癌复发的影响.方法 采用联合免疫抑制与循环肿瘤细胞攻击大鼠肝脏建立肝移植术后肝癌复发模型,40只Sprague-Dawley大鼠经门静脉注射肝癌Walker-256细胞株并随机分成对照组和化疗组.两组术后均给予免疫抑制剂,化疗组术后同时给予亚砷酸(1 mg/kg)全身化疗,观察大鼠存活和肿瘤复发情况,免疫组织化学染色法检测肝癌组织内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.比较两组生存时间和肿瘤肝内复发情况、荷瘤肝质量、荷瘤肝体质量比、肿瘤肝外转移及肿瘤组织中PCNA表达的差异.结果 对照组和化疗组大鼠存活时间分别为(17.2±7.3)d和(28.3±5.3)d,long-rank法显示差异有统计学意义(χ2=13.06,P<0.01),肝内复发率分别为100%(20/20)和95%(19/20, χ2=1.026, P>0.05), 荷瘤肝质量分别为(14.6±0.3)g和(12.7±0.3)g (t=2.205, P<0.05), 荷瘤肝体质量比分别为(7.21±0.12)%和(6.24±0.09)% (t=2.440, P<0.05),肿瘤肝外转移率分别为40%(8/20)和10%(2/20, χ2=4.80, P<0.05), PCNA指数分别为(80.8±2.1)%和(61.3±1.0)%(t=3.209,P<0.05).结论 静脉使用亚砷酸对肝移植术后肝癌复发大鼠肿瘤的恶性生长及肝外转移有一定的抑制作用.
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儿童急性早幼粒细胞白血病76例随访报告
目的 探讨儿童急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗及预后,并评估砷剂在儿童APL中的疗效.方法 对76例初治APL患儿进行疗效及预后相关因素分析.采用SPSS10.0软件进行统计学分析.结果 本组76例APL患儿,6例早期死亡.其余70例患儿依据诱导方案的不同分成3组:1组44例,单用全反式维甲酸(ATRA);2组7例,单用三氧化二砷(As_2O_3);3组19例,联合应用ATRA和As_2O_3.1组的完全缓解率为100%,2组+3组的完全缓解率为100%.6例临床复发,2例分子生物学复发,复发部位均为骨髓.5年累计复发率为13.8%,5年累积无事件生存(EFS)率、无病生存(DFS)率、总生存(OS)率分别为79.5%、86.3%和90.5%.在1组与2组+3组之间的5年EFS、DFS没有明显差异.初诊时白细胞计数可能是影响儿童预后主要的因素.结论 ATRA治疗儿童APL疗效好.砷剂治疗儿童APL的疗效亦较好,耐受性好.砷剂可以用于不能耐受ATRA副作用的患儿,亦可用于初治和复发的儿童APL.
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亚砷酸治疗淋巴瘤作用机制研究进展
淋巴瘤治疗目前主要以联合化疗及放疗为主,对难治及晚期患者可通过造血干细胞移植进行治疗.近年来国内外学者用亚砷酸(As2O3)治疗淋巴瘤获得了一定疗效.就As2O3对淋巴瘤细胞的实验研究及临床研究的进展进行综述.
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蛋白酶体抑制剂联合亚砷酸对白血病细胞株NB4的凋亡诱导效应
目的 观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(BOR)联合急性早幼粒细胞白血病(APL)凋亡诱导剂亚砷酸(ATO)对NB4细胞株的作用.方法 BOR单独及联合ATO作用于NB4细胞,应用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;RT-PCR方法检测survivin mRNA的表达.结果 MTT法显示BOR对NB4细胞具有生长抑制作用,且能增强ATO对细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测可见明显凋亡峰及G2/M期细胞周期阻滞;RT-PCR检测发现两药单独应用均能下调survivin mRNA的表达,联合作用时具相加效应.结论 ATO与BOR联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性,细胞周期G2/M期的阻滞及survivin mRNA表达的下降是蛋白酶体抑制剂及亚砷酸对白血病细胞株联合诱导凋亡的可能机制.
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亚砷酸联合LY294002对人鼻咽癌CNE细胞的抑制作用
目的 探讨亚砷酸(As2O3)联合PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对人鼻咽癌细胞株CNE(简称CNE细胞)的抑制作用.方法 应用MTT法检测CNE细胞对As2O3和LY294002的敏感性,Western blot方法检测p-PTEN、p-AktsSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的表达水平.结果 As2O3与LY294002均可显著抑制CNE细胞的生长,而且该作用呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性.As2O3与LY294002的联合应用对CNE细胞生长的抑制作用具有协同效应.LY294002 (10 μmol/L)处理4h即可使CNE细胞内p-AktsSer473、p-AktThr308、p-PDK1蛋白表达下调,p-PTEN蛋白表达上调.As2O3(4μmol/L)单独作用12h后,CNE细胞内蛋白p-Aktser473表达下调,p-AktThr308、p-PDK1、p-PTEN蛋白变化不明显.LY294002(10 μmol/L)与As2O3(4μmol/L)联合处理12h,CNE细胞内p-AktsSer473、p-AktThr308、p-PDK1等信号分子的下调水平与p-PTEN蛋白的上调强度显著强于LY294002或As2O3的单独作用.结论 AS2O3联合LY294002对CNE细胞具有协同杀伤作用.
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亚砷酸诱导人低分化鼻咽癌细胞系肿瘤抑制基因表达
目的 探讨亚砷酸对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z的作用及其可能机制,进一步认识亚砷酸的抗肿瘤作用.方法 体外培养的CNE-2Z细胞分别加入不同浓度的亚砷酸,作用不同时间.台盼蓝染色法筛选出亚砷酸抑制CNE-2Z细胞生长的佳浓度,检测IC50值;流式细胞术检测细胞周期的改变;同时应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测P16 mRNA、Ras相关结构域家族1A基因(ras association domain family 1A,RASSFlA)mRNA和DNA甲基转移酶3B(DNAmethyltransferase,DNMT 3B)mRNA表达.结果 亚砷酸对细胞增殖的抑制作用具有明显的时间和剂量效应,不同浓度亚砷酸作用于细胞24、48、72小时后,IC50值分别为(1.50±0.05)、 (1.09±0.13)、(0.65±0.04)pmol/L.亚砷酸使细胞周期阻滞于S期和G2/M期,并能上调RASSF1A mRNA的表达,但对P16 mRNA表达没有明显影响.结论 亚砷酸能够抑制CNE-2Z细胞增殖,其可能机制是通过诱导抑癌基因RASSF1A表达上调,恢复其活性,抑制CNE-2Z增殖.
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亚砷酸钠对人胚胎肺成纤维细胞p53基因表达的诱导作用观察
目的 探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对体外培养的人胚胎肺成纤维细胞(HELF)p53基因表达的影响.方法 以0、3、9、15μmol/L的NaAsO_2处理体外培养的HELF 24h,然后用Real-time PCR榆测p53 mRNA的表达,免疫组化SABC法检测p53蛋白水平.结果 3、9、15μmol/L NaAsO_2处理24h后,HELF中p53 mRNA及蛋白表达均明显增高(P＜0.05),且除9、15μmol/L组间p53mRNA表达无明显差异外,其余各组mRNA及蛋白表达水平均随NaAsO_2剂量升高而增加(P＜0.05).直线相关分析显示,HELF中p53 mRNA及蛋白表达均与NaAsO_2剂量呈正相关(r=0.947,P＜0.01;r=0.992,P＜0.01).结论 NaAsO_2可诱导HELF中p53mRNA和蛋白表达增加,并与剂量呈正相关.
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人脐静脉内皮细胞水通道蛋白9磷酸化与砷耐受性的关系
目的 探讨人脐静脉内皮细胞株ECV-304和抗砷性ECV-304(AsRE)细胞株中水通道蛋白AQP9的表达及其磷酸化水平以及其对亚砷酸钠(NaAsO2)耐受性之间的关系.方法 采用CCK8法测定NaAsO2 2.5~40 μmol·L-1作用24 h对ECV-304和AsRE细胞株的毒性.NaAsO2 2.5~20 μmol·L-1处理ECV-304和AsRE细胞株2 h,实时定量PCR法测定AQP9 mRNA表达水平,Western印迹法检测AQP9和p38蛋白表达水平;免疫印迹法检测AQP9蛋白磷酸化水平;电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)法测定细胞内砷含量.结果 NaAsO2在AsRE和ECV-304细胞的IC50分别为12.59和4.06 μmol·L-1.在NaAsO2同浓度下,AsRE细胞内砷摄入量均低于ECV-304细胞(P<0.05).NaAsO2处理ECV-304和AsRE细胞后,AQP9 mRNA表达水平均有所下调,但在AsRE细胞中的下调幅度显著高于ECV-304细胞(P＜0.05);AQP9蛋白水平在AsRE细胞呈浓度增加而下降,而ECV-304细胞中则无明显变化;ECV-304细胞中AQP9磷酸化水平随浓度有所上升,AsRE细胞中AQP9磷酸化水平则一直维持在更高的表达水平.NaAsO2处理后,p38蛋白及其磷酸化水平在两个细胞株间无明显变化.结论 AsRE细胞中AQP9的磷酸化水平与砷耐受性有明显相关性,其可能机制是AQP9通过影响细胞对砷的摄入影响砷的耐受性.
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联合序贯治疗急性早幼粒细胞白血病62例临床研究
目的 探讨短疗程三氧化二砷(ATO)与全反式维A酸(ATRA)联合序贯治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的疗效与不良反应.方法 62例APL患者按随机数字表法分为治疗组(40例)和对照组(22例),均采用ATRA单诱导或ATRA与ATO双诱导达完全缓解(CR),CR后均给予3个周期的DA方案巩固治疗,此后,分别采用短疗程ATO和常规疗程ATO与DA方案、ATRA序贯治疗.结果 对照组1例退出治疗,余61例均处于CR状态.治疗组与对照组比较,皮肤色素沉着或皮疹、末梢神经炎、肝功能损害、肾功能损害、心电图改变等不良反应明显减轻,差异有统计学意义(P<0.05).结论 短疗程ATO与ATRA联合序贯治疗APL具有疗效好、不良反应轻等优点.
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亚砷酸治疗急性早幼粒细胞白血病时肝功能损害的特点及保肝药物应用现状
急性早幼粒细胞白血病（ APL）是急性髓细胞白血病中的一种特殊类型，99％的 APL有染色体t（15；17）（q22；q12）易位和早幼粒白血病基因与维甲酸受体基因融合基因的形成。近年来，由于亚砷酸等靶向药物的应用，APL的治疗效果大大提高。但亚砷酸应用的同时所带来的不良反应也引起了越来越多的关注，尤其是对肝脏，进而影响着亚砷酸在肝脏转化为活性产物中的疗效。该文针对亚砷酸治疗APL的肝功损害特点以及保肝药物应用的现状进行了综述，旨在合理化监测肝功能及保肝药物的应用，以使亚砷酸的疗效达到佳。
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联合砷剂治疗难治复发性多发性骨髓瘤疗效观察
目的 探讨联合砷剂治疗难治复发多发性骨髓瘤的疗效及其应用价值.方法 30例难治复发性多发性骨髓瘤患者分为2组,分别采用亚砷酸联合VAD方案化疗和亚砷酸联合VitC.其中,亚砷酸10mg/d静脉滴注,连续10天,VitC(2g/d),连用10d,每月1次,4～6个周期判断治疗效果及毒副作用.结果 联合亚砷酸化治疗难治复发性多发性骨髓瘤的总有效率为76.7%,其中显效30.0%、进步46.7%;亚砷酸+VAD方案有效率80.0%;亚砷酸+Vit C方案有效率73.4%.长期随访16例,8例保持持续缓解状态达1年以上.主要不良反应为白细胞减少、继发感染、消化道反应、肝功能损害.结论 联合砷剂治疗难治复发性多发性骨髓瘤总有效率较高,且亚砷酸联合维生素C治疗毒副反应低,耐受性好,很有临床应用前景.
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亚砷酸钠对角质形成细胞增殖力和细胞周期的影响
目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤永生化角质形成细胞(HaC8T)增殖活力及细胞周期的影响.方法以体外培养的HaCaT细胞株为对象,用不同浓度的NaAsO2处理细胞,用AlamarBlue摄入法定量检测细胞增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期分布.结果 NaAsO2浓度小于10μmol/L时,AlamarBlue的还原率明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05),50 μmol/L时,还原率明显下降,差异有显著性(P＜0.05);10 μmol/L组G0/G1期比例减少,S期和G2/M期比例增高.各组凋亡率差异无显著性(P＞0.05).结论低浓度NaAsO2可促进HaCaT细胞的增殖,高浓度可抑制其增殖活力;一定浓度的NaAsO2可使合成期细胞增多.
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三氧化二砷与干扰素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响
目的 观察三氧化二砷(As2O3)、干扰素(IFN-α1、IFN-α2、IFN-β)及其两者联合对人类骨髓瘤细胞株(RPMI8226)的增殖的影响.方法 以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)测定RPMI8226细胞的增殖活性,并观察不同类型、不同浓度干扰素和亚砷酸对RPMI8226细胞增殖的影响以及两者联合对RPMI8226细胞的增殖作用.结果 As2O3对RPMI8226细胞增殖有显著的抑制作用;IFN-α1对RPMI8226细胞生长无抑制作用,当IFN-α2浓度大于500 kU/L和IFN-β浓度大于1 000 kU/L时对RPMI8226细胞增殖有抑制作用(P<0.05);且IFN-α2与As2O3联合对RPMI8226细胞增殖抑制有协同作用(P<0.05).结论 As2O3对骨髓瘤细胞增殖有抑制作用,而干扰素须达到一定浓度才对RPMI8226细胞增殖有抑制作用.
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APL患者亚砷酸治疗后骨髓中巨噬细胞增多及细胞化学染色1例
1例急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)患者,用亚砷酸治疗32 d后,骨髓中出现多数巨噬细胞.我们对骨髓涂片中巨噬细胞进行了10种细胞化学染色,探讨吞噬物的成分,现报告如下.
