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五倍子含药血清对呼吸合胞病毒感染人支气管上皮细胞损伤及NF-κB核转位和表达的影响
目的:探讨五倍子含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染人支气管上皮细胞损伤及细胞核因子-κB(NF-κB)核转位和表达的影响.方法:实验分为正常组、病毒处理组、含药血清组,给予相应处理后,进行指标检测.结果:病毒处理组在细胞内病毒核酸的相对表达量和对细胞增殖的抑制率随着浓度的增加而增加,且出现明显的晚期凋亡现象,含药血清能明显抑制上述现象;免疫荧光和Western blot结果显示,RSV感染后NF-κB发生了核转位,而含药血清能明显抑制NF-κB的核转位.结论:五倍子含药血清能抑制RSV病毒的复制,同时通过抑制NF-κB发生核转位,抑制RSV诱导的人支气管上皮细胞的凋亡,进而降低细胞增殖的抑制率.
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二氯化钴致人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位
目的 观察和探讨低氧可否引起人结肠癌细胞系CacyBP/SIP核转位.方法 用人结肠癌细胞系HCT-116的cDNA序列,用分子克隆法构建过表达CacyBP/SIP的绿荧光慢病毒载体,转染至结肠癌SW480细胞,用CoCl2作为刺激因子,激光共聚焦显微镜和Western blot检测CacyBP/SIP的表达及定位.结果 构建了过表达CacyBP/SIP的慢病毒载体,转染至结肠癌细胞,CoCl2刺激前CacyBP/SIP定位和表达主要在细胞胞质,刺激后CacyBP/SIP定位和表达在细胞胞质和胞核.结论 CoCl2刺激后可致CacyBP/SIP核转位.
关键词： CacyBP/SIP CoCl2 核转位 结肠癌 -
异丙酚对急性肺损伤大鼠肺组织凋亡及NF-κB p65的影响
目的 探讨不同剂量异丙酚对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)凋亡及NF-KB p65的影响.方法 60只SD大鼠随机(随机数字法)分为5组:空白对照(NS)组,模型(All)组和不同剂量丙泊酚干预(P1,P2,P3)组.HE染色和血气分析评估模型制备成功与否,流式细胞术及蛋白免疫印迹法通过单因素方差分析,检测肺组织凋亡和NF-KB活化情况.结果 模型组肺部损伤达到Au标准,模型制备成功;丙泊酚干预组肺损伤较模型组明显减轻,且呈剂量依赖性;与对照组比较,模型组肺组织细胞凋亡率显著增加,NF-κB P65核转位显著增加,核浆比显著高于对照组(P<0.05);与模型组比较,异丙酚干预组肺组织凋亡率显著减少,核转位显著减少,P1,P2,P3组核浆比显著低于模型组,(P<0.05).结论 异丙酚对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤具有保护作用;异丙酚能显著抑制肺组织细胞凋亡和NF-κB核转位;异丙酚对脂多糖诱导大鼠ALI的拮抗作用可能与抑制肺组织凋亡和抑制NF-κB P65核转位有关.
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长春新碱诱导人胃癌耐药细胞表达P-糖蛋白由核因子-κB活化调控
目的:研究核因子-Kappa B(NF-κB)在胃癌长春新碱耐药细胞中的活化情况,及其对细胞膜P-糖蛋白(P-gp)表达的调控作用.方法:以胃癌细胞SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药株SGC7901/VCR为研究对象.采用凝胶电泳迁移率分析检测NF-κB DNA结合活性,细胞-ELISA法检测细胞内IκB-α蛋白和细胞膜P-糖蛋白(P-gp)的表达,免疫细胞化学法观测细胞内P65核转位.结果:SGC7901/VCR耐药细胞中NF-kB的基础活性比敏感细胞高1.4倍.不同浓度VCR(5,10,20,50 μg/L)均可引起耐药细胞NF-κB DNA结合活性增强、Iκ3-α蛋白表达下降和P-gp表达增强,而亲本敏感细胞产生的上述效应均不及耐药细胞明显;SGC7901/VCR耐药细胞中,NF-κB活性与P-gp的表达呈正相关(r=0.977,P＜0.01),且NF-κB活化的同时伴有P65核转位.NF-κB抑制剂MG-132可抑制VCR诱导的NF-κB活化及IкB-α降解,同时还能抑制P-gp高表达.结论:胃癌长春新碱耐药细胞中NF-кB活性增强,可能参与调控VCR诱导的细胞膜P-gp高表达.
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表皮生长因子受体与非小细胞肺癌预后之间的关系
目的 探讨细胞膜及细胞核内表皮生长因子受体(EGFR)水平与非小细胞肺癌(NSCLC)预后之间的关系.方法 选取2010年4月至2013年4月间南京市溧水区人民医院保存的60例非小细胞肺癌患者的病理档案,采用免疫组化的方法分析其病理组织切片中细胞膜及细胞核内EG-FR及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 39例(65.0％)样本细胞膜EGFR呈阳性,7例(11.7％)样本细胞膜EGFR呈强阳性;18例(30.0％)样本细胞核EGFR呈阳性和5例(8.3％)样本细胞核EGFR呈强阳性.Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验发现非小细胞肺癌患者细胞膜EGFR强阳性与总体生存率(OS)无明显相关,差异无统计学意义(P＞0.05),细胞核EGFR强阳性组与总体生存率(OS)呈负相关,差异有统计学意义(P＜0.01).细胞核EGFR表达水平与Cyclin D1之间正相关,差异有统计学意义(P＜0.05),细胞膜EGFR表达水平与Cyclin D1之间无明显相关,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 细胞核内EGFR水平与非小细胞肺癌患者的预后相关,核内EGFR强阳性者预后差.
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EV71抑制Ⅰ型干扰素信号通路中ISGF3的核转位
目的 探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染对Ⅰ型干扰素信号通路中核转位复合物干扰素刺激基因因子3(ISGF3)核转位的影响.方法 Western印迹检测VR1432感染VeroE6对干扰素诱导的STAT1和STAT2磷酸化的影响.将pEGFP-C1-STAT1重组质粒转染Vero E6细胞,随后进行EV71感染以及IFN-o2b刺激,将细胞进行亚细胞分离检测ISGF3的核转位情况.结果 VR1432以感染复数(MOI)为1感染Vero E6细胞后来影响干扰素刺激的STAT1和STAT2的磷酸化;亚细胞分离后Western印迹检测磷酸化的STAT1,结果显示VR1432感染后,p-STAT1在细胞核内表达水平明显降低,说明EV71感染抑制了p-STAT1的核转位.结论 EV71感染抑制Ⅰ型干扰素信号通路中ISGF3 (STAT1/STAT2/IRF9)的核转位,从而影响干扰素效应途径中抗病毒蛋白的表达.
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DEDD抑制Smad3活性、促进肿瘤细胞凋亡和生长停滞
探讨DEDD调节Smad3活性和促进凋亡的分子机制.利用免疫印迹、免疫荧光、免疫共沉淀、流式细胞术和MTT法检测了DEDD全长以及其两个截短突变体N-DEDD和C-DEDD对Smad3核浆分布、Smad3磷酸化、Smad3与Smad4间相互作用以及对细胞凋亡和增殖能力的影响.结果显示,DEDD和N-DEDD抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化及入核,并抑制Smad3-Smad4复合物形成.DEDD及其两个截短突变体均能促进细胞凋亡并诱导细胞生长停滞.结果表明,DED结构域介导了DEDD对Smad3功能的负调节作用,DEDD的两个截短突变体都参与了对细胞凋亡和细胞生长的调节.
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二苯乙烯苷对肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB核转位的影响
目的 探讨二苯乙烯苷(TSG)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞损伤的保护性作用及其对内皮细胞NF-κB核转位的影响.方法 取新生儿脐带分离原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用因子Ⅷ鉴定内皮细胞.按照分组,HUVEC分别与TNF-α 60 μg·L-1,TNF-α+TSG 1,10,25,50和100 μmol·L-1进行孵育,TSG 预孵24 h,再加TNF-α处理3 h.显微镜观察TSG对TNF-α诱导HUVEC的保护性作用,MTT法检测细胞存活率,免疫荧光法检测细胞NF-κB的核转位现象.结果 因子Ⅷ相关抗原检测显示,分离的细胞为内皮细胞.显微镜观察显示,TSG对TNF-α诱导的HUVEC损伤具有明显的抑制作用,TSG 100 μmol·L-1使内皮细胞形态几乎接近正常组水平.MTT结果显示,TSG可显著提高TNF-α诱导后的细胞存活率,并呈浓度依赖性(r=0.9657,P<0.01).免疫荧光检测表明,TNF-α诱导NF-κB发生核内转移,TSG作用后可抑制这种核转位,TSG 100 μmol·L-1处理组的核转位抑制作用明显.结论TSG可能通过抑制NF-κB的激活发挥保护血管内皮的作用.
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mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响
目的 构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白( mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响.方法 利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体.将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度.结果 质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确.载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象.c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生.结论 成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc.载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能.
关键词： 巨噬细胞集落刺激因子受体 真核表达载体 TEL 豆蔻酰化 信号转导和转录激活因子 核转位 激酶抑制剂 -
凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位
目的：探讨凋亡相关分子TFAR19 在TF-1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法：以TFAR19的单克隆抗体为工具，采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段，观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位，分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果：TFAR19蛋白在撤除GM-CSF的TF-1细胞中表达水平显著增高，伴有明显的核转位现象，且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论：TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一, 这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应，以及对细胞凋亡的多方位研究提供了新的线索和思路。
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白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常
目的 明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位异常.方法 应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达,同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平.结果 皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处(P＜0.05),MDA水平显著高于正常供皮处(P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达,而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质,胞核中表达量非常低.蛋白质印迹结果显示,核蛋白中Nrf2表达水平,白癜风患者皮损处(0.11±0.03)明显低于正常供皮处(0.27±0.06)和健康对照(0.32±0.02,均P＜0.01);胞质蛋白Nrf2表达水平,皮损处(0.63±0.04)与正常供皮处(0.61±0.03)和健康对照(0.65±0.04)差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常.
关键词： 白癜风 荧光免疫测定 核因子E2p45相关因子2 核转位 -
创伤医学
一、基础研究[1]"严重创伤后早期全身性损害与组织修复的基础研究"被确立为国家"973"项目以来,我国创伤基础研究在过去1年多里又取得了明显进展:(1)围绕糖皮质激素(GC)及其受体(GR)、细胞内信号转导通路,初步揭示了创伤后应激紊乱的发生机制,提出了严重创伤后中枢神经系统海马神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)的特性改变及其对GC反馈作用减弱可能是创伤后下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)亢进的重要原因.严重创伤后GR基因转录表达抑制、蛋白质翻译合成减少以及GR核转位和再循环利用功能障碍等是创伤后GR减少的重要机制.
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表皮生长因子受体在人头颈部鳞状细胞癌中的作用研究进展
头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是常见的恶性肿瘤,恶性程度较高,患者常出现复发和转移.表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是重要的癌基因,在头颈鳞癌中广泛过表达,且与HNSCC患者的预后呈负相关,是重要的治疗靶点.但HNSCC中的EGFR靶向治疗效果却不如在非小细胞肺癌治疗中那么有效.近几年的研究发现,EGFR促进肿瘤细胞对治疗耐受的机制可能与其过表达、突变、单核苷酸多态性、入核和自噬有关.本文将就这几个方面进行综述,并探讨如何在HNSCC的治疗中更有效地利用EGFR这一靶点,为探索HNSCC的治疗策略提供新的方向.
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人结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位差异表达基因的验证
目的：验证细胞周期聚合酶链反应（PCR）芯片筛选出来的差异表达基因。方法胃泌素刺激的SW480细胞作为实验组，无胃泌素刺激的SW480细胞作为对照组。用蛋白免疫印迹（Western blot）法对胃泌素刺激前后的钙周期素结合蛋白（CacyBP/SIP）表达定位进行检测；用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对细胞周期PCR芯片筛选出的差异表达基因周期素依赖性蛋白激酶8（CDK8）和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2（CKS2）进行验证。结果胃泌素刺激前CacyBP/SIP主要表达于细胞质，刺激后可同时表达于细胞质和细胞核；同细胞周期PCR芯片结果一致，基因CDK8和CKS2在实验组的表达量较对照组明显上调（P<0.05）。结论胃泌素刺激可使CacyBP/SIP发生核转位；基因芯片筛选出的差异基因大体可靠，对筛选出的差异基因可以进行进一步研究。
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miRNA-7对食管癌细胞TE-1化疗耐药的影响
目的 探讨微小RNA-7(miRNA-7)过表达对食管癌细胞TE-1顺铂敏感性的影响及其可能机制.方法 用Lipofectmin 2000法向食管癌细胞株TE-1转染组瞬时转染miRNA-7 mimic ,向转染对照组瞬时转染mimic Negative Control,通过RT-PCR检测以上2组及空白对照组的miRNA-7以及表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达情况.Western blot法分别检测转染组与转染对照组总EGFR及细胞浆、细胞核内的EGFR蛋白表达.CCK-8检测转染组与转染对照组TE-1的顺铂半数抑制浓度(IC50).免疫荧光共聚焦显微镜观察转染组与转染对照组EGFR的表达.结果 转染组较转染对照组及空白对照组的miRNA-7表达显著增高,EGFR mRNA表达下降(均P<0.001);转染组较转染对照组总EGFR降低,核内EGFR增高(均P<0.01),胞浆EGFR表达降低(P<0.05);CCK-8结果显示,TE-1中miRNA-7过表达后顺铂(48 h)IC50较转染对照组增高(P<0.01);免疫荧光示转染组较转染对照组核内EGFR增高且胞膜与胞浆EGFR表达减少.结论 食管癌细胞TE-1中miRNA-7过表达可通过EGFR核转位增多使顺铂产生耐药性.
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小儿泌尿系统疾病诊治进展
现将2005年我国小儿泌尿系统疾病诊治进展总结如下.1原发性肾病综合征(NS)有关激素耐药的研究受到临床关注,中南大学湘雅二院观察糖皮质激素受体(GR)2种亚型GRα和GRβ在外周血单个核细胞及肾组织中的表达,发现耐药者GRβ表达显著高于激素敏感者,过表达的GRβ可导致GRα核转位能力下降,影响糖皮质激素效应的发挥,从而导致耐药.
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PTPMeg2的PTP结构域对磷酸化STAT3入核的抑制作用
目的：探讨PTPMeg2结构域对磷酸化STAT3核转位的影响。方法采用免疫共沉淀技术研究PTPMeg2与STAT3不同结构域的相互作用，采用GST pull down实验研究STAT3与PTPMeg2不同结构域的相互作用，用激光共聚焦显微镜直接观察PTPMeg2对磷酸化STAT3细胞定位的影响。结果 STAT3与PTPMeg2的所有结构域均有相互作用，PTPMeg2的PTP结构域和△SEC结构域（ PTP结构域＋LK结构域）可以抑制磷酸化STAT3入核。结论 PTPMeg2的PTP结构域对磷酸化STAT3的入核具有抑制作用。
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碱性成纤维细胞生长因子的研究进展
bFGF是一种作用广泛的细胞因子,其显著的作用是促进细胞分裂,因此在肿瘤的发生发展、促进损伤组织修复等方面受到关注.除了通过经典的受体途径发挥作用外,高分子量bFGF还具有核转位现象,其核转位只发生在G1-S过渡期.应用酵母双杂交系统发现了能与bFGF发生相互作用的蛋白质,为研究bFGF作用的分子机制提供了有益的线索.
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组织转谷氨酰胺酶在肝细胞损伤和增生中的双向调控作用
组织转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,tTG)是一种多功能钙依赖性酶,除具有催化蛋白质形成不可逆的共价交联活性外,还有结合并水解GTP和ATP的活性,在细胞的不同部位发挥不同的作用,参与多种生理和病理过程,包括细胞生长分化,细胞粘连及伸展,细胞凋亡,信号转导,组织纤维化等.肝脏是表达tTG活跃的一个器官,在肝细胞损伤和修复中tTG的表达具有双向调控作用.tTG的核转位、线粒体细胞色素C释放和肝细胞凋亡之间存在复杂的因果关系.
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芳香烃受体及其核转位蛋白在胃癌及其多阶段癌前病变中的表达及意义
胃癌的发生与环境因素有关.现代工业社会中存在诸多环境有毒化学物质污染,如多环芳烃、卤代芳烃、杂环胺类、氮亚硝基化合物等.研究发现介导这类化学物质毒性的重要转录因子为芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR).AhR与肺癌、肝癌、乳腺癌、泌尿系统肿瘤的发生和转移相关[1-3].本研究检测和分析AhR与AhR核转位蛋白(Ah receptor nuclear translocator,ARNT)在胃癌及其多阶段癌前病变组织中的表达及相关性,探索环境和宿主因素相互作用下的胃癌致病机制.
