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乌头碱中毒肝细胞凋亡的观察
乌头碱是中药乌头主要成分,它是一种毒性剧烈的生物碱.中医上常用以治疗多种疾病,时有服用过量、投毒他杀发生中毒死亡.因此需要检测、鉴定.乌头碱口服吸收快,排泄也快,主要在肝脏和肾脏代谢以尿排除体外[1].由于乌头碱易因组织腐败及碱性作用而被水解破坏,因而难以检测.有关乌头碱中毒的实验病理形态学研究,国内外尚未见报道.凋亡是一种程序性细胞死亡,多种因素能够诱导其产生,受多种基因的调控.本实验用小剂量乌头碱中毒诱导肝细胞凋亡,并对结果进行计算机病理学图像分析.期望为乌头碱中毒检测提供合理的形态学依据.
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梗阻性黄疸形成中肿瘤因子与肝细胞凋亡关系的动脉实验研究
目的:探讨梗阻性黄疸形成中肿瘤坏死因子α与肝细胞凋亡的关系.方法:72只wister大鼠随机分为正常组、假手术组和胆总管结扎手术组,以结扎胆总管(1igating common bile duct,LCD)的wister大鼠为模型,采用放射免疫法,测定血清中TNFa含量:Tunel法检测大鼠肝细胞凋亡状态.结果:LCD术后3,7,14,21天TNFa含量明显高于正常组和假手术组,并于LCD术后7-14天达到高峰.LCD术后3,7,14,21天肝细胞凋亡指数(HAI)亦明显高于正常组和假手术组,且亦于7-14大达到高峰.手术组各时相TNFa与HAI呈正相关.结论:在Wister大鼠梗阻性黄疸形成中TNFa对肝细胞凋亡起介导作用.
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基于肝细胞凋亡与网状支架破坏探讨抗肝纤维化中药的作用机制与治法特点
近年研究表明:肝细胞凋亡与网状支架破坏是肝纤维化形成的重要病理机制,抑制肝细胞凋亡及其支架结构破坏是防治肝纤维化的根本措施之一,TNF受体(TNF-R)半胱天冬酶(Caspases)通路是细胞凋亡的分子病理基础,ERK-MMP2途径是网状支架破坏的重要分子病理机制.在既往工作基础上,我们拟以抗纤维化有效中药-扶正化瘀方为对象,首先采用析因设计,动态观察扶正化瘀方影响肝细胞凋亡、网状支架破坏与纤维化之间的关系,继而探讨该方及其扶正与化瘀治法拆方对小鼠体内肝细胞凋亡与网状支架破坏的作用机制与治法特点.随后建立中药影响肝细胞凋亡的药物高内涵分析方法,探讨扶正化瘀方及其拆方对培养小鼠肝细胞TNF-R/Caspase通路信号分子的影响;并将经复方与拆方作用的凋亡肝细胞与原代肝星状细胞共培养,观察该方及其拆方通过抗肝细胞凋亡而影响肝星状细胞活化的作用.该项研究阐明了抗肝纤维化有效中药对肝细胞凋亡与支架破坏的作用机制与治法特点,拓展了抗肝纤维化的治疗新途径与药理研究新领域,为进一步开展中医药逆转肝硬化作用机制的研究奠定基础.
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从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用
目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力；Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡；罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位；Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.
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虫草菌丝水煎液及其有效组分C12对肝纤维化大鼠HGF-α及肝细胞凋亡的影响
目的:研究虫草菌丝治疗二甲基亚硝胺(DMN)模型大鼠肝纤维化有效组分及其作用机制.方法:大鼠ip 0.5％DMN 5 mg·kg-1,每周连续3d,共4周.造模结束后,模型大鼠随机分组,治疗组分别以虫草菌丝水煎液(CsB)及其组分(C12)以生药800 mg· kg-ig,每日1次,共2周；正常组及模型组以等量生理盐水ig.疗程结束后,分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST),血清白蛋白(Alb)及血清总胆红素(TBiL)含量,检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、观察肝组织病理及胶原沉积变化,Western印迹法检测肝细胞生长因子α(HGF-α)的表达,TUNEL染色检测大鼠肝细胞凋亡并计算凋亡数量.结果:与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠血清ALT,AST活性、TBil含量和大鼠肝组织Hyp含量显著降低,Alb含量显著升高(P＜0.05).与6周模型组比较,CsB及C12治疗组的坏死出血、炎性细胞浸润、胶原增生、纤维间隔形成有所改善.与模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝组织的蛋白表达量显著升高(P＜0.01).与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝细胞凋亡数量显著降低(P＜0.01).结论:CsB及C12能够显著改善肝功能,有显著抗肝纤维化作用.CsB和C12能促进HGF-α表达,抑肝细胞凋亡,使肝细胞凋亡和增殖达到平衡状态,阻断和逆转肝纤维化.
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芪蓝糖脂宁胶囊对糖尿病合并高脂血症大鼠肝细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的:探讨芪蓝糖脂宁胶囊治疗糖尿病合并高脂血症的作用机制.方法:采用高糖高脂饲料喂饲2个月,小剂量(30mg/kg)一次性腹腔注射2%链脲佐菌素的方法复制糖尿病合并高脂血症大鼠模型,造模成功后,灌胃给药,采用流式细胞仪观察芪蓝糖脂宁胶囊对糖尿病合并高脂血症大鼠肝细胞凋亡,及相关调控基因Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:模型组大鼠肝细胞凋亡率明显升高,Bax蛋白表达显著增强,Bcl-2蛋白表达显著减弱,芪蓝糖脂宁胶囊能显著降低肝细胞凋亡率,减弱Bax蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达.结论:芪蓝糖脂宁胶囊可通过调整Bax和Bcl-2的蛋白表达强度降低肝细胞凋亡率,为该药调节糖、脂代谢紊乱作用提供实验依据.
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大承气汤对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac、细胞色素C及Caspase-3表达的影响
目的:研究大承气汤对急性肝衰竭大鼠肝组织Smac、细胞色素C及Caspase-3表达的影响.方法:40只大鼠随机分为4组,分为正常对照组,模型组,大承气汤低、高剂量治疗组,每组各10只.大承气汤高、低剂量组大鼠于造模前2d分别灌胃不同剂量大承气汤2mL,其他组予同等剂量0.9％氯化钠溶液灌胃,继而模型、大承气汤高、低剂量组大鼠均采用皮下注射硫代乙酰胺完成急性肝衰竭动物模型,造模完成后继续予药物灌胃3d.处死所有大鼠,行细胞色素C含量测定,肝脏组织细胞凋亡检测,肝脏病理学检测,应用实时荧光定量PCR进行肝组织SmacmRNA表达检测,应用免疫组化方法检测Caspase-3的表达.结果:硫代乙酰胺可引起急性肝衰竭并有广泛的肝细胞凋亡,与模型组比较,大承气汤各剂量组肝组织衰竭减轻,肝细胞凋亡率降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞色素C含量显著下降(P＜0.01),Caspase-3在肝细胞中的表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01),肝组织Smac mRNA表达显著降低(P＜0.05).结论:大承气汤可防治肝细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制Smac基因、细胞色素C及Caspase-3表达,进而影响了线粒体相关因素介导的细胞凋亡调控通路,从而保护肝脏细胞,抑制肝衰竭.
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绞股蓝总皂苷对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化的作用及其肝细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型共造模9周.造模6周后绞股蓝总皂苷组给予200mg/kg鼠重的绞股蓝总皂苷灌胃,而正常组和模型组正常饮水对照灌胃,共3周.观察血清丙氨酸氨基氢移酶(ALT)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,肝组织HE染色、天狼猩红染色、Tunel染色,以及免疫组化以及免疫组化α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)蛋白表达;肝组织α-SMA、ColⅠ、转化生长因子 β1 (TGF-β 1)、血小板源性生长因子β受体(PDGF-β R)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7(caspase 7)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)、Bax、Bak、Bcl-2 mRNA表达.结果:病理观察显示绞股蓝总皂苷有显著的抗损伤和抗肝纤维化作用,与模型组比较,绞股蓝总皂苷组的大鼠血清ALT、肝组织Hyp含量显著降低(P＜0.05),肝组织α-SMA、Col Ⅰ蛋白阳性表达及其mRNA表达显著低于模型组;Tunel染色显示绞股蓝总皂苷组凋亡的肝细胞数明显低于模型组,且TGF-β 1、PDGF-β R、caspase7、caspase9、Bax、BakmRNA表达较模型组显著降低(P＜0.01,P＜0.05),Bcl-2 mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论:抑制线粒体通路介导的肝细胞凋亡是绞股蓝总皂苷抗肝纤维化的重要机制之一.
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凉血化瘀法治疗重型肝炎立法依据探析
凉血化瘀法是温病治疗学中的重要治法,具有清热解毒、凉血散邪、化瘀通络等作用.我们通过对该法作用原理的深入研究,发现热瘀搏结是本法的主要运用指征[1,2],而热瘀搏结亦是重型肝炎关键的病理环节.近年来我们将凉血化瘀法运用于重型肝炎的治疗,取得了较为满意的疗效.经临床研究及动物实验,结果显示凉血化瘀方药在改善肝功能、提高存活率、减轻和修复肝细胞病理损害、抗肝细胞凋亡等方面有较好的效果.现就凉血化瘀法治疗重型肝炎的立法依据作一探讨分析,以期有助于中医药治疗重型肝炎研究的深入和发展.
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凉血化瘀方拮抗内质网应激引起的L02肝细胞凋亡作用及机制研究
内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)启动的细胞凋亡是近年才发现的一种新的凋亡途径,本研究从ERS途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GalN)所致肝细胞凋亡的保护作用.研究发现,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞质内游离钙离子含量明显上升,并使ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞的凋亡,抑制细胞质内游离钙离子含量的增高,并使磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达量呈逐渐下降的趋势.这些发现说明:凉血化瘀方对TNF-α和D-GalN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与维持内质网腔钙稳态平衡和下调ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的表达有关.
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蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞凋亡的保护作用研究
该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)所致肝细胞凋亡的保护作用.体外培养L-02细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分别采用Western和qPCR法检测相关蛋白和mRNA的表达情况.研究发现,TM能够以时间和剂量依赖的方式降低L-02细胞的存活率,与正常组相比,模型组中L-02细胞的凋亡率和ERS相关因子GRP78,PERK,eLF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白水平均显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平均显著下降(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,不同浓度的EWAs处理后,L-02细胞的存活率显著增加,细胞凋亡显著减少,ERS相关因子GRP78,PERK,eLF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),且呈剂量依赖性.这些结果表明,EWAs对TM诱导L-02细胞ERS所致的肝细胞凋亡具有显著的保护作用,其机制可能与下调ERS相关因子GRP78,PERK,ATF4,eLF2α,CHOP,Bax的表达,减轻L-02细胞的ERS,上调Bcl-2的表达,促进受损细胞增殖有关.
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酒精性肝病与内质网应激
酒精性肝病是由于长期饮酒引起的肝脏病变,酒精性脂肪肝,酒精性肝炎,酒精性肝硬化是其常见的三种肝损伤.它们常同时并存并相互发展转化.在酒精性肝病的发病过程中,肝细胞的凋亡和坏死同时存在.内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是细胞的一种自我保护机制,但也可能是引起肝细胞凋亡的一个原因.
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sDR5封闭TRAIL减少内毒素引起小鼠肝细胞凋亡
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在内毒素诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用.方法 内毒素作用于可溶性死亡受体-5(sDR5)封闭TRAIL的小鼠,不同时间检测小鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氧酶(LDH)的含量;HE染色及Annexin V、PI双染法流式细胞术检测小鼠肝细胞凋亡;免疫组织化学法及流式细胞术检测小鼠肝细胞和肝细胞膜表面DR5的表达.结果 内毒素可以上调肝细胞DR5的表达.DR5封闭TRAIL可显著抑制内毒素引起的小鼠肝细胞凋亡和改善肝细胞损伤.结论 内毒素引起疾病过程中TRAIL起重要作用.
关键词： 内毒素 脂多糖 可溶性死亡受体5 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肝细胞凋亡 -
shRNA对TNF-α诱导小鼠肝细胞凋亡的干扰效应
caspase-8能通过自身活化启动凋亡,并调节效应型caspase诱导凋亡发生.阻滞caspase-8表达可抑制caspase途径所致凋亡[1-2].
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LPS提高单核细胞TRAIL表达及诱导肝细胞凋亡的研究
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand, TRAIL)是近年来新发现的TNF家族中成员[1],与TNF、FasL不同,它除了诱导肿瘤细胞及病毒转染细胞发生凋亡外,近研究发现TRAIL同样能诱导正常肝细胞凋亡[2],其在病毒性肝炎发病机理中的作用受到重视.本实验从脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)致单核细胞TRAIL表达情况作研究,探讨LPS通过TRAIL致肝细胞凋亡途径在重型病毒性乙型肝炎致病机理中的可能作用.
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肝硬化患者血浆降钙素原与肝细胞凋亡及Fas/FasL表达的关系
通过检测肝硬化患者血浆降钙素原(procalcitonin,PCT)水平,并同步观察肝细胞凋亡和肝组织凋亡蛋白Fas/FasL的表达状况,探讨它们之间的相互关系及在肝硬化病情演变中的作用.
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黄芪抑制心肺复苏后大鼠肝细胞凋亡的实验研究
目的研究黄芪注射液对心肺复苏后的大鼠肝细胞凋亡的抑制作用.方法SD雄性大鼠30只,随机分为5组:对照组、实验组(复苏后6 h、24 h)、黄芪组(复苏后6 h、24 h),每组6只.采用细胞凋亡原位末端标记法并结合透射电镜观察,分别检测各组大鼠肝细胞凋亡及Bcl-2、Bax、NF-κB的阳性表达.结果在各组大鼠肝组织内均可见肝实质细胞凋亡现象,实验组肝细胞TUNEL阳性表达率6 h组为(56.63±3.41)%,24h组为(47.53±2.15)%,黄芪组的TUNEL阳性表达率6 h组为(38.26±3.0)%,24h组为(28.59±2.31)%,对照组的TUNEL阳性表达率为(3.12±0.56)%;黄芪组Bel-2、NF-κB的表达高于实验组,而Bax的表达低于实验组.结论黄芪注射液对心肺复苏后大鼠肝细胞凋亡有保护作用.
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快速康复外科联合四君子汤对急性胆道梗阻大鼠肝脏缺血-再灌注损伤时肝细胞凋亡的影响
急性梗阻性黄疸患者手术中发生的肝脏缺血-再灌注损伤（hepatic ischemia reperfusion injury， HIRI）是导致患者术后肝功能衰竭的主要原因。HIRI发生机制复杂，目前已知与细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等有关［1］。当前，尚无防治 HIRI的有效治疗措施［2］。快速康复外科（fast-track surgery，FTS）的核心观念是利用术前、术中、术后的综合性措施减少机体应激反应，减少创伤，促进早期康复。其主要措施包括术前不禁食、禁饮，不作机械肠道准备，术中不留置引流，术后早期进食，取消不必要的胃肠减压等与以往传统习惯不同的围手术期处理方式。本研究以FTS 联合中药四君子汤作为干预手段，从抗细胞凋亡的角度研究其对急性梗阻性黄疸大鼠HIRI的保护作用及机制。
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维生素E和硒联合应用对肝损伤的实验研究现状
当前对肝病的病理模型制作方法大致有两种,一种是使用四氯化碳(CCl4)导致动物形成肝损伤;另一种是饲以高脂饲料导致动物形成肝损伤.有研究显示,微量营养素硒(Se)和维生素E缺乏可诱导大鼠肝细胞凋亡;cAMP和细胞内Ca2+可能参与这类细胞凋亡的调控[1].
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肝衰竭肝细胞凋亡和膨胀性坏死分子机制研究进展
肝衰竭是一种重症肝病,可由不同原因引发.但归根结底表现为肝细胞和肝脏内其他类型细胞的过度死亡,因此充分了解肝细胞死亡的分子机制,为肝衰竭的发生、发展以及治疗提供依据有着重大意义.
