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组织转谷氨酰胺酶基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对肝星状细胞的影响
目的 构建组织转谷氨酰胺酶(tTG)RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,研究其对肝星状细胞(HSC)的影响.方法 设计、合成tTG基因RNAi有效靶序列,与慢病毒载体系统进行连接、转染,获得表达tTG基因的RNAi慢病毒载体质粒(Lenti-siRNA-tTG);将大鼠活化HSC分成阴性对照组(CON)、siRNA-GFP对照组(GFP)和siRNA-tTG组(nTG).应用real-time PCR、Western blot和MTT法检测Lenti-siRNA-tTG感染后HSC中tTG、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(collagen-1)的mRNA和蛋白表达情况以及HSC的增殖情况.结果 成功构建siRNA-tTG慢病毒载体;Lenti-siRNA-tTG感染后,HSC中tTG和collagen-1的mRNA表达水平降低(P<0.05),HSC中tTG、lysine和collagen-1的蛋白表达水平下降(P<0.01),HSC的增殖能力降低(P<0.05).结论 Lenti-siRNA-tTG能通过抑制HSC中tTG基因的表达而抑制HSC的增殖,并降低HSC中collagen-1合成和交联的形成,具有潜在的抗纤维化形成的功能.
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tTG蛋白与子宫内膜癌细胞凋亡和紫杉醇化疗敏感性
目的:探讨组织转谷氨酰胺酶抑制剂(monodansylcadaverine,MDC)对体外培养的人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的诱导作用和对紫杉醇(TS)的化疗增敏性.方法:用MTT法检测逐渐递增的MDC药物浓度和不同作用时间对细胞增殖的影响.用流式细胞技术检测MDC对细胞凋亡和紫杉醇的化疗敏感性的影响.结果:Ishikawa细胞中,MDC处理组和对照组凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05);MDC+TS组的细胞凋亡率亦高于鸭组(P＜0.05);同时,MDC对细胞凋亡的诱导作用呈一定的剂量时间依赖关系.结论:组织转谷氨酰胺酶对维持子宫内膜癌细胞生长有一定作用,抑制酶的活性可以促进细胞凋亡并增加细胞对紫杉醇的化疗敏感性.
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组织转谷氨酰胺酶在肝细胞损伤和增生中的双向调控作用
组织转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,tTG)是一种多功能钙依赖性酶,除具有催化蛋白质形成不可逆的共价交联活性外,还有结合并水解GTP和ATP的活性,在细胞的不同部位发挥不同的作用,参与多种生理和病理过程,包括细胞生长分化,细胞粘连及伸展,细胞凋亡,信号转导,组织纤维化等.肝脏是表达tTG活跃的一个器官,在肝细胞损伤和修复中tTG的表达具有双向调控作用.tTG的核转位、线粒体细胞色素C释放和肝细胞凋亡之间存在复杂的因果关系.
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组织型转谷氨酰胺酶在皮肤增生性瘢痕中的作用
目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tissue tansglutaminase,tTG)在皮肤增生性瘢痕中的作用.方法:免疫荧光检测来自整形患者的增生性瘢痕和正常皮肤tTG的底物纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量,免疫组化检测增生性瘢痕皮肤和正常皮肤tTG的含量,免疫印迹检测增生性瘢痕皮肤和正常皮肤tTG的含量,SDS电泳DNSC荧光显色测定tTG的活力.结果:(1)免疫荧光显示,增生性瘢痕皮肤tTG的底物FN的含量较正常皮肤显著增高(P＜0.01);(2)免疫组化显示,增生性瘢痕真皮组织tTG含量较正常皮肤显著增多(P＜0.01):(3)免疫印迹显示,增生性瘢痕组织tTC含量较正常皮肤明显增多(P＜0.01);(4)增生性瘢痕组织tTG活性高于正常皮肤组织(P＜0.05).结论:增生性瘢痕形成过程与底物(胶原、FN)增加、tTG含量增多、活性增强、交联过度有关.
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组织转谷氨酰胺酶特异性抑制剂预防肝纤维化的实验研究
目的 观察组织转谷氨酰胺酶(tTG)特异性抑制剂六甲烯胺对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化形成的影响.方法 雄性SD大鼠100只,按随机数字表法分成正常对照组(20只)、肝纤维化组(40只)、六甲烯胺组(40只).用腹腔内注射CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,在注射CCl4的前2 d开始腹腔内注射六甲烯胺(112 mg·kg-1·d-1),直到注射CCl4的第4、8周处死大鼠,摘取肝脏并提取血清,应用RT-PCR检测tTG、α-平滑肌抗体(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)等基因的mRNA表达情况,应用Western blot检测tTG和α-SMA蛋白的表达,肝功能和肝脏组织中羟脯氨酸的含量,同时取大鼠肝脏行组织学检查,并对肝纤维化程度进行半定量计分系统分级评分.采用单因素方差分析检测结果.结果 CCl4注射8周后,肝纤维化组肝损伤明显,ALT、总胆汁酸、Tbil、羟脯氨酸、tTG、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白酶、TIMP-1分别为(1313±157)U/L、(99.9±18.5)μmol/L、(10.9±1.6)μmol/L、(55±12)μg/g、145.6±51.2、130.3±44.6、211.3±75.1、162.4±53.5;而六甲烯胺处理后,肝纤维化程度、肝功能指标均显著降低,ALT、总胆汁酸、Tbil、羟脯氨酸、tTG、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白酶、TIMP-1分别为(378±87)U/L、(61.0±12.7) μmol/L、(9.8±1.7)μmol/L、(70±14)μg/g、48.6±12.3、40.7±12.3、63.9±16.0、59.2±23.4.结论 六甲烯胺能通过抑制tTG途径显著改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度.
