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白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常
目的 明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位异常.方法 应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平,采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达,同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平.结果 皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处(P＜0.05),MDA水平显著高于正常供皮处(P＜0.05);细胞免疫荧光结果显示,健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达,而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质,胞核中表达量非常低.蛋白质印迹结果显示,核蛋白中Nrf2表达水平,白癜风患者皮损处(0.11±0.03)明显低于正常供皮处(0.27±0.06)和健康对照(0.32±0.02,均P＜0.01);胞质蛋白Nrf2表达水平,皮损处(0.63±0.04)与正常供皮处(0.61±0.03)和健康对照(0.65±0.04)差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常.
关键词： 白癜风 荧光免疫测定 核因子E2p45相关因子2 核转位 -
核因子E2p45相关因子2核转位对黑素细胞生物学活性的影响
目的 探讨核因子E2p45相关因子2(Nrf2)核转位对永生化黑素细胞株B10BR细胞生物学活性的影响.方法 构建电转染野生型和nls缺失型nrf2质粒载体至B10BR细胞,结合叔丁基氢醌(TBHQ)和(或)H2O2处理,Western印迹检测Nrf2,his标签蛋白表达,MTr法测定细胞活性,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,Transwell法测定转染细胞的迁移.结果 TBHQ处理的转染组细胞核中Nrf2表达均显著高于TBHQ未处理组(P＜0.01).转染质粒组间及其与未处理组间细胞酪氨酸酶活性差异均无统计学意义(P＞0.05),H2O2处理使2个质粒转染组酪氨酸酶活性较单独质粒转染组显著下降(pcDNA-nrf2,P＜0.05; pcDNA-nrf2△nls,P＜ 0.05).相对于TBHQ未添加H2O2处理的nrf2组,TBHQ显著增强H2O2处理的野生型nrf2质粒转染细胞酪氨酸酶活性(P＜0.05)；相对于TBHQ未添加H2O2处理的nls组,nls缺失型nrf2质粒转染组细胞酪氨酸酶活性差异无统计学意义(P＞0.05).相对于nrf2未转染组,H2O2对野生型nrf2质粒转染组细胞活性的影响无统计学意义(P＞0.05)；相对于两组的未处理组,H2O2引起未转染组及nls缺失型质粒转染组细胞活性显著下降(未处理组,P＜ 0.05；pcDNA-nrf2△nls,P＜0.01).TBHQ可以保护野生型nf2质粒转染细胞免受H2O2引起的氧化损伤,对nls缺失型质粒转染组细胞无明显保护作用.各处理组黑素细胞迁移差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2核转位异常影响黑素细胞的抗氧化能力、黑素细胞活性及酪氨酸酶活性.TBHQ可以激活野生型Nrf2在细胞核中表达水平,增强酪氨酸酶和黑素细胞活性,进而提高细胞的抗氧化水平.
关键词： 黑素细胞 核因子E2p45相关因子2 核转位 一元酚单氧酶
