首页 > 文献资料
-
CKS2shRNA慢病毒表达载体的构建及其抑制卵巢癌A2780细胞增殖
目的 构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并探讨CKS2敲除对卵巢癌细胞A2780增殖的影响.方法 根据siRNA原理设计两对靶向CKS2的shRNA序列(shRNA1、shRNA2)及阴性对照NC shRNA,并克隆到慢病毒表达载体PL-KO.1/puro中;将上述质粒转染到293T细胞并包装出慢病毒,用慢病毒感染卵巢癌细胞A2780,实时定量PCR及Westernblot检测CKS2表达;MTT法检测A2780细胞增殖;Western blot检测PARP-1的剪切;流式细胞术检测凋亡.结果 成功构建CKS2 shRNA慢病毒表达载体能明显降低A2780细胞中CKS2 mRNA及蛋白表达(P＜0.05);能显著抑制A2780靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,并包装出慢病毒;感染A2780细胞后,细胞增殖受抑(P＜0.05);能诱导PARP-1蛋白的剪切及凋亡(P＜0.05).结论 成功构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达载体,能显著抑制A2780细胞增殖.
-
稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系的建立与鉴定
目的 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响.方法 根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒);先用pLV-tTR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染OVCAR3细胞;在此基础上再用pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述OVCAR3细胞;对上述两次慢病毒感染的OVCAR3细胞,用强力霉素(DOX)处理72 h后,用real time PCR及Western blot检测CKS2 mRNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖.结果 构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染OVCAR3细胞;建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中CKS2在mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.05,P＜0.01);CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞的增殖.结论 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,DOX诱导的CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞增殖.
-
人结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位差异表达基因的验证
目的：验证细胞周期聚合酶链反应（PCR）芯片筛选出来的差异表达基因。方法胃泌素刺激的SW480细胞作为实验组，无胃泌素刺激的SW480细胞作为对照组。用蛋白免疫印迹（Western blot）法对胃泌素刺激前后的钙周期素结合蛋白（CacyBP/SIP）表达定位进行检测；用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对细胞周期PCR芯片筛选出的差异表达基因周期素依赖性蛋白激酶8（CDK8）和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2（CKS2）进行验证。结果胃泌素刺激前CacyBP/SIP主要表达于细胞质，刺激后可同时表达于细胞质和细胞核；同细胞周期PCR芯片结果一致，基因CDK8和CKS2在实验组的表达量较对照组明显上调（P<0.05）。结论胃泌素刺激可使CacyBP/SIP发生核转位；基因芯片筛选出的差异基因大体可靠，对筛选出的差异基因可以进行进一步研究。
-
CKS2在结直肠癌中的表达和临床意义
细胞周期蛋白依赖性激酶亚基(CKS)家族在细胞周期调节中起重要作用.研究发现其家族成员CKS2在一些恶性肿瘤中呈高表达,并与肿瘤的高侵袭性行为和预后不良相关.目前关于CKS2与结直肠癌关系的文献报道较罕见.目的:研究CKS2在结直肠癌中的表达和临床意义.方法:应用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测23例临床结直肠癌手术标本癌组织、癌旁非癌组织和正常组织中的CKS2 mRNA和蛋白表达.结果:CKS2mRNA和蛋白在结直肠组织中的相对表达量依次为:癌组织＞癌旁组织＞正常组织,癌组织与正常组织间差异有统计学意义(P＜0.01).性别对CKS2 mRNA在不同结直肠组织中的表达趋势无明显影响.癌组织中的CKS2蛋白表达与肿瘤大小和pTNM分期呈正相关(P＜0.01),与肿瘤部位无关.结论:CKS2蛋白在结直肠癌中呈高表达并与肿瘤临床病理特征相关,有望成为结直肠癌新的分子标记物和治疗靶点.
-
基因表达谱整合分析揭示胰腺导管腺癌相关特异信号转导途径
背景与目的 因为常规癌症治疗对胰腺导管腺癌(pancreatic duct adenocarcinoma,PDAC)而言疗效不佳,所以胰腺癌严重威胁着人类的健康.微阵列研究报道许多与胰腺癌相关基因,但是并未对微阵列数据进行深入整合分析.本研究利用与胰腺癌相关的6个微阵列基因表达谱来探讨与PDAC相关的基因和信号转导途径.方法 采用信号通路网络方法分析6个已经发表的胰腺癌基因表达谱数据(GSE71989、GSE15471、GSE16515、GSE32676、GSE41368和GSE28735).根据癌症基因组图谱和国际癌症基因组联合会数据库中的数据来评估PDAC相关基因的表达对胰腺癌患者存活时间的潜在影响,在我们医院收集的102例PDAC患者中检测到了一种候选基因(CKS2)的表达,其与患者存活相关.在PDAC细胞系BxPC-3和CFPAC-1中检测CKS2敲低后的影响.结果 称为"癌症途径"的KEGG信号途径可能在胰腺癌的发生和发展中有重要作用.该途径中的5个基因(BIRC5、CKS2、ITGA3、ITGA6和RALA)与PDAC患者的生存时间显著相关.CKS2在我们医院PDAC样本中过表达,这些患者CKS2的高表达与较短的生存时间相关.体外敲低CKS2能够抑制PDAC细胞的增殖.结论 整合目前微阵列数据集的分析可以确定"癌症通路"是PDAC的一个重要信号途径.这种整合方法可能对鉴别癌症相关基因和途径非常有效.
