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茶多酚与茶色素对大鼠肝癌前病变组织细胞周期调节因子的影响
目的利用大鼠肝癌前病变模型探讨茶多酚和茶色素对细胞周期因子的影响.方法采用改良的Solt-Farber大鼠肝癌癌前病变模型,分别饮用0.1%或0.1%茶多酚,喂养56 d.采用Western blot方法观察细胞周期素D1、P21WAF1/CIP1、GADD45和PCNA蛋白的表达;用RT-PCR在mRNA水平观察Cdk4的表达.结果茶多酚和茶色素显著抑制细胞周期素D1、Cdk4和PCNA表达,诱导P21WAF1/CIP1和GADD45蛋白表达.结论茶多酚和茶色素通过调节细胞周期调节因子而诱导细胞周期阻滞,抑制细胞过度增殖.
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Shh、Ptch、Glil与CyclinB1-CDK1在肝癌发生发展过程中的改变
目的 观察大鼠诱发肝癌过程中shh信号通路相关蛋白及细胞周期蛋白的表达变化,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用.方法 利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,通过HE染色观察肝组织的形态学变化,应用免疫组织化学方法检测Shh、Ptch、Gli1、CyclinB1、CDk1蛋白在诱发性肝癌发生过程中的表达变化.结果 根据HE染色结果将实验动物分为正常对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期.shh、Ptch、Gli1蛋白阳性表达细胞主要分布在增生结节、癌结节、小叶间胆管上皮细胞和癌周组织中,其阳性表达率均随肝癌发生发展过程逐渐增高的趋势:CyclinB1和CDK1阳性表达的细胞主要分布于门管区、肝小叶的周边及癌结节内,在肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期大鼠肝组织中表达均高于正常对照组.结论 Shh信号通路被激活后,可通过影响CyclinB1和CDK1蛋白的表达促进细胞G2/M期转变,完成有丝分裂,导致细胞失控性增殖,促进肝癌的发生发展.
关键词： 肝肿瘤 二乙基亚硝胺 细胞周期蛋白B 细胞周期蛋白质依赖激酶类 Shh信号通路 -
乐卡地平对老年大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨大鼠血管平滑肌细胞( VSMCs)发生衰老过程中,乐卡地平对细胞增殖和凋亡的影响和作用机制.方法 取原代培养的4月龄和24月龄Wistar大鼠VSMCs分别为青年组、老年组,青年和老年大鼠加乐卡地平10μmol/L处理24 h分为青年实验组和老年实验组.采用免疫荧光染色、Western blot法、流式细胞分析仪和Realtime共聚焦等技术检测各组细胞核内p21蛋白结构含量的变化、细胞的增殖及凋亡指数和凋亡率.结果 与青年组比较,青年实验组大鼠VSMCs分裂指数明显下降,相差13倍(P＜0.05).与青年组大鼠比较,乐卡地平对老年组大鼠的细胞内钙的抑制作用更强.与老年组比较,老年实验组大鼠细胞分裂指数和凋亡指数降低,差异有统计学意义[(2.08±0.22)％vs(0.7±0.06)％,P＜0.05],凋亡率明显下降,差异有统计学意义[(16.1±2.04)％vs(2.3±0.88)％,P＜0.01].与青年组和老年组比较,老年实验组大鼠细胞核内p21蛋白随乐卡地平剂量增加而增强,蛋白结构发生变化,增殖性核抗原表达减少.结论 乐卡地平通过改变p21蛋白的结构和含量表达,从而抑制增殖性核抗原表达,抑制VSMCs的增殖,降低老年大鼠VSMCs凋亡,减缓衰老.
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Flavopiridol对大鼠局灶性脑缺血后神经元细胞周期蛋白依赖蛋白激酶-4蛋白表达的影响
目的观察大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白依赖蛋白激酶-4(cdk4)的蛋白表达与神经细胞凋亡的关系以及cdk4阻滞剂--Flavopiridol对其的影响.方法采用线栓法大鼠大脑中动脉持续栓塞模型,应用免疫组织化学和原位末端标记(TUNEL)染色方法观察缺血组、Flavopiridol治疗组[根据剂量多少又分为FH(多剂量)组和FL(少剂量)组]和假手术组神经元阳性细胞染色数量和分布情况.结果cdk4蛋白和凋亡细胞自缺血后12 h开始表达,前者缺血后48 h达高峰,后者缺血后72 h达高峰;FH组和FL组各相应时间点cdk4蛋白表达均明显减少(P＜0.01);FL组各相应时间点凋亡细胞明显减少(P＜0.01),FH组仅在缺血48 h凋亡细胞明显减少.相邻切片可见cdk4蛋白表达和凋亡细胞染色区域基本相同.结论cdk4的蛋白表达可能诱发缺血神经细胞的凋亡,Flavopiridol通过抑制cdk4的表达而减少缺血后神经细胞的损害,但同时Flavopiridol本身也可能引起神经细胞凋亡.
关键词： 脑缺血 细胞周期蛋白质依赖激酶类 细胞凋亡 神经元 免疫组织化学 -
胃癌组织中细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白质依赖激酶6的表达与预后的关系
目的检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白质依赖激酶6(CDK6)在胃癌组织中的表达情况,分析其表达与胃癌的临床病理因素和预后之间的关系.方法用Western blot 法测定48例胃癌组织及其邻近的正常胃黏膜中cyclinD1和CDK6的表达量.结果Cyclin D1在58%的胃癌组织中呈异常高表达,且其表达与胃癌的浸润深度、淋巴转移和TNM分期相关.CDK6的表达水平在69%的胃癌组织中异常升高,并与组织学分类、淋巴转移和TNM分期相关.未发现cvclinD1和CDK6在胃癌组织中的表达存在线性相关关系.包括cyclin D1和CDK6过表达在内的多个因素与胃癌患者的5年生存率相关,但只有TNM分期和CDK6是患者预后的独立影响因素.结论Cyclin D1和CDK6的异常高表达有可能在胃癌的发生、发展过程中发挥重要作用.
关键词： 胃肿瘤 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
细胞周期素E及细胞周期素依赖性激酶2在胃癌组织中的表达及意义
目的探讨胃癌组织中细胞周期素E(cyclin E)及细胞周期素依赖性激酶2(CDK2) 的表达与胃癌临床病理因素的关系。方法应用蛋白质印迹法测定36例胃癌组织标本及其相应的正常胃粘膜中cyclin E及CDK2的表达情况。结果胃癌组织中cyclin E及CDK2表达水平均明显高于正常胃粘膜(P＜0.05)。在低分化、有淋巴结转移和(或)远处转移及浸润胃壁全层的胃癌中cyclin E表达水平明显增高(P＜0.05)，在有淋巴结转移和(或)远处转移的胃癌中CDK2表达水平明显增高(P＜0.05)。结论 Cyclin E及CDK2的表达水平与胃癌的恶性潜能有关，可作为判断胃癌预后的一项重要指标。
关键词： 胃肿瘤 细胞周期蛋白E 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌细胞及移植瘤干预作用
目的 检测细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞及移植瘤的干预作用.方法 应用流式细胞仪和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)检测flavopiridol作用后卵巢癌细胞系AO的细胞凋亡率和细胞周期,应用实时荧光定量PCR技术检测flavopiridol作用前、后AO细胞中细胞周期蛋白(cyclin)D和活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3的表达情况.建立卵巢癌裸鼠皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol干预后裸鼠的生存情况及肿瘤体积的变化,TUNEL和免疫组化方法分别检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况和微血管密度(MVD).结果 AO细胞在150、300、500 nmol/L浓度的flavopiridol作用下,凋亡率分别为4.1%、10.7%和7.6%;G1期细胞比例显著增加,S期比例显著降低(P＜0.05).flavopiridol作用后AO细胞cyclin D的表达量(0.25)显著下降,活性caspase-3的表达量(2.55)轻度升高,高于flavopiridol作用前的0.69(P＜0.05)、2.49(P＞0.05).flavopiridol干预后裸鼠的累积生存率显著提高(P＜0.05);裸鼠的平均生存时间为(141±14)d,显著高于磷酸盐缓冲液(PBS)作用后的(106±11)d,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);在flavopiridol干预后53 d时抑瘤率为40%.flavopiridol干预后裸鼠的肿瘤组织中有细胞凋亡发生,MVD为(12±5)个,显著高于PBS作用后的(35±10)个,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 flavopiridol能显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤的生长,延长荷瘤裸鼠的生存期.
关键词： 卵巢肿瘤 肿瘤移植 细胞周期蛋白质依赖激酶类 黄酮类 哌啶类 -
中国汉族人群PARK16基因多态性与帕金森病易患性的关联
目的 探讨PARK16基因单核苷酸多态性(SNP)与帕金森病(PD)易患性的关系,分析其SNP的基因型和等位基因频率及不同基因型的优势比(OR)和其临床特征.方法 采用病例-对照研究选择PD患者226例和362名健康对照,利用TaqMan荧光定量PCR方法检测中国汉族人群中PARKl6基因Rs947211和Rs823128基因多态性,并对不同基因型临床资料进行分析.结果 PARKl6基因的多态性位点Rs947211在PD组基因型频率为∶GG 34.1%(77/226)、AG 46.0%(104/226)、AA 19.9%(45/226),对照组分别为23.8%(86/362)、53.0%(192/362)、23.2%(84/362),2组基因型频率差异具有统计学意义(以野生型GG为参考,AG∶OR=0.57,95%CI 0.38～0.85,P=0.006;AA∶OR=0.55.95%CI,0.34～0.85,P=0.015).以PD组野生型GG为参照,暴露于A等位基因型(AA+AG)的OR=0.56,95%CI0.38～0.82,P=0.003.晚发型PD(LOPD)Rs947211的基因型频率与对照组比较差异亦有统计学意义(AG∶OR=0.46,95%C/0.27～0.78,P=0.004∶AA∶OR=0.35,95%C/0.18～0.68,P=0.002).PD组3种基因型在临床表现上差异没有统计学意义.Rs823128在PD组基因型频率分布与对照组差异无统计学意义(以野生型AA为参照,AG∶OR=1.12,95%CI0.75～1.68,P=0.568;GG∶OR=0.99,95%CI0.35～2.76,P=0.994).结论 中国汉族人群中PARK16基因与PD易患性相关.
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细胞周期调控因子在中耳胆脂瘤上皮中的表达
目的根据细胞周期调控基因表达情况探讨中耳胆脂瘤上皮细胞增殖的分子机制.方法采用免疫组织化学方法检测胆脂瘤上皮细胞和胆脂瘤患者外耳道上皮细胞中周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)及其抑制因子p15、p16的表达,并结合炎症及骨质破坏程度作统计学分析.结果CDK4、p16在胞核、胞浆以棕黄色或棕褐色颗粒表达,并以胞核为主,而p15仅以胞核棕黄色或棕褐色颗粒表达.与皮肤相比,CDK4、p15、p16在胆脂瘤上皮细胞的表达显著增强,上皮下重度炎症可增强CDK4的表达;不同的骨质破坏程度上述指标的表达无显著性差异.结论胆脂瘤上皮细胞增殖活性增强,同时抑制细胞增殖的机制也增强;局部炎症可增强胆脂瘤上皮细胞的增殖活性.
关键词： 胆脂瘤 中耳 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
永生化人晶状体上皮细胞细胞周期调控相关基因表达的检测
目的探讨人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells, HLEC)周期调控中的细胞周期蛋白E、细胞周期蛋白激酶(cyclin dependent kinase 2, CDK2)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(cyclin-dependent-kinase inhibitor, CKI)p21基因的表达,阐明HLEC增殖和晶状体后囊膜混浊(posterior capsule opacification, PCO)的分子机制.方法体外培养永生化HLEC系HLE-B3,用二步过量胸苷阻断法进行细胞周期同步化;流式细胞仪检测细胞周期;收集不同时相的细胞提取总RNA.用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)方法检测细胞周期蛋白E、CDK2和p21的mRNA表达;分别用免疫组织化学染色和Western blot法检测细胞周期蛋白E和CDK2及p21的蛋白表达.结果流式细胞仪检测:HLE-B3细胞周期处于G1期,占33.5 %;S期,占46.1%;G2期,占20.4%;处于S期及G2期细胞的比例约占总数的66.5%.RT-PCR检测:可见不同周期时相的HLE-B3细胞(细胞周期蛋白E和CDK2)mRNA的表达,但在不同步化的细胞时相中未检测出细胞周期蛋白E的表达.而在同步化的S期细胞中有少许p21 mRNA表达.免疫组织化学染色未检测出细胞周期蛋白E阳性细胞,仅可检测出少部分p21阳性细胞.Western blot法检测结果:CDK2阳性表达以S期细胞明显,G1期和G2期略低于S期表达.不同步化细胞也有CDK2的表达.提示细胞周期蛋白E、CDK2 与p21的mRNA蛋白表达不平衡.结论体外培养HLE-B3细胞周期过程中存在细胞周期蛋白E、CDK2 和p21的表达,且存在表达不平衡.细胞周期蛋白E、CDK和CKI间的表达不平衡有可能是其体外增殖细胞周期分子机制之一.
关键词： 晶体 上皮细胞 细胞培养 细胞周期蛋白E 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
gax基因对血管平滑肌细胞中PCNA和CDK2表达的影响
目的研究增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)在gax基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法以携带大鼠gax基因表达序列的重组腺病毒载体(AdCMV-gax)转染VSMC后,检测gax、PCNA和CDK2的表达及3H-TdR掺入量的变化.结果 AdCMV-gax转染后,SMC中Gax蛋白的表达比转染前显著增高; AdCMV-gax转染后VSMC的PCNA和CDK2表达较未转染组显著降低; AdCMV-gax转染使VSMC的3H-TdR掺入量显著降低.结论 gax基因抑制VSMC增殖的机制与其抑制PCNA和CDK2的表达有关.
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IL-1和IL-4对肾小球系膜细胞p27和CDK2表达的影响
探讨白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-4(IL-4)对肾小球系膜细胞细胞周期调节蛋白p27和周期素依赖性蛋白激酶CDK2表达的影响.利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞观察IL-1促进系膜细胞增生前后p27和CDK2的表达变化,及同时应用IL-4后对上述表达变化的影响. 结果发现,IL-1可以明显促进系膜细胞增生,同时观测到p27表达下降而CDK2表达增高;IL-4可以抑制IL-1诱导的系膜细胞增生,同时发现p27表达增加而CDK2表达减弱.提示IL-1和IL-4对系膜细胞增生的促进和抑制作用与细胞周期调节蛋白的表达变化密切相关.
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人CDK7基因真核表达载体的构建与鉴定
目的：构建带Myc标签的细胞周期蛋白依赖性激酶7（cyclin－dependent kinase 7， CDK7）的真核表达载体，获得其表达产物，并验证该激酶与已知相互作用蛋白P53之间的相互作用。方法应用PCR技术从人乳腺文库中扩增出CDK7全长编码区基因，将其克隆到pXJ－40载体中；继而重组质粒转染人胚肾293 T细胞，以SDS－PAGE和Western印迹鉴定表达情况；免疫共沉淀检测Myc－CDK7与FLAG－p53的相互作用。结果双酶切和基因测序鉴定显示，Myc－CDK7真核表达质粒克隆构建成功；SDS－PAGE和Western印迹结果表明，Myc－CDK7转染人胚肾293T细胞后成功表达；免疫共沉淀显示，重组Myc－CDK7与已知相互作用蛋白P53在蛋白质水平上具有相互作用，证实其具有生物学活性。结论成功构建Myc－CDK7的真核表达载体，为进一步探讨Myc－CDK7对细胞周期的调控奠定了实验基础。
关键词： 细胞周期蛋白质依赖激酶类 基因 P53 真核表达 -
Rett综合征患儿甲基化CpG结合蛋白2基因和细胞周期依赖性激酶样5蛋白基因的突变
目的 了解Rett综合征(RTT)患儿甲基化CpG结合蛋白2基因(MECP2)和细胞周期依赖性激酶样5蛋白基因(CDKL5)突变及热点突变,建立适合临床诊断的检测方法和策略.方法 对1987至2007年北京大学第一医院儿科神经专业组诊断的177例散发RTT患儿抽取外周抗凝血提取DNA,用PCR-DNA测序方法对MECP2的全部外显子进行突变筛查,如未发现突变,用多重连接依赖的探针扩增(MLPA)法进行基因剂量分析.对MECP2未发现突变的患儿用变性高效液相色谱法(DHPLC)进行CDKL5突变筛查.结果 在177例患儿中发现145例MECP2突变,1例CDKL5突变,总的突变率82%.MECP2突变中错义突变频率高(39%);其后依次为无义(28%)、移码(17%)和大片段缺失突变(14%).所有突变中8种常见突变依次为p.T158M(13%)、p.R168X(12%)、c.806delG(7%)、p.R255X(6%)、p.R270X和p.R133C各(5%)、p.R306C(4%)、p.R106W(3%).11%的患儿存在一个或多个外显子的缺失.结论 中国RTT患儿MECP2突变谱和国外报道相似,有热点突变.c.806delG是中国人群特有的一个热点突变.
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细胞周期依赖性蛋白激酶5/p35在2,5-己二酮中毒大鼠神经组织中的表达
目的 探讨细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)在2,5-己二酮(HD)中毒性周围神经病发病过程中的作用.方法 30只雄性Wistar大鼠,随即分为对照组、200mg/kg HD染毒组和400mg/kg HD染毒组,每组10只.染毒途径为腹腔注射,每周5次,连续8周,建立HD中毒性神经病模型.利用Western blotting方法检测大脑、脊髓和坐骨神经胞浆蛋白和膜蛋白中CDK5、p35和p25的相对含量.结果 与对照组相比,P35蛋白含量在200、400mg/kg HD染毒大鼠大脑和脊髓胞浆蛋白组分中明显降低,而在脊髓和坐骨神经膜蛋白组分中含量明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);p25变化趋势与p35基本一致.CDK5在200、400mg/kg HD染毒大鼠大脑胞浆和膜蛋白中均明显下降;除坐骨神经膜蛋白组分中未检出外,在脊髓和坐骨神经中CDK5含量明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HD中毒后大鼠神经组织中CDK5及其激活因子p35和p25发生明显改变,这种改变可能与HD中毒性周围同神经病的发病机制有关.
关键词： 己烷类 细胞周期蛋白质依赖激酶类 神经组织 -
细胞周期蛋白依赖激酶K4在石英致人细胞恶性转化中的作用
目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶K4(CDK4)在石英致人胚肺成纤维细胞(2BS)恶性转化过程中所起的作用,为石英致癌机制提供理论依据.方法用基因重组和基因导入的方法将表达反义CDK4 RNA的pXJ41-CDK4导入石英恶性转化的2BS细胞中.采用原位杂交和免疫组化方法检测细胞中CDK4基因表达情况,分析反义CDK4 RNA导入前后,细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变.结果石英诱导2BS细胞恶性转化过程中CDK4基因过表达,CDK4基因mRNA表达水平的平均灰度值由26.58±4.78增加到303.47±72.39,蛋白表达水平平均灰度值由28.37±6.09增加到255.82±28.33;反义CDK4 RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖,CDK4基因mRNA表达从303.47±72.39降至43.73±10.12,蛋白表达从255.82±28.33降至41.92±3.25.与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41-CDK4转染细胞培养至第8天时,生长速率下降77.43%;倍增时间从21.0 h延长到42.7 h;G1期细胞比例从45.1%增加到58.0%,S期由40.3%下降到30.0%;克隆形成率明显下降,且克隆明显变小.结论CDK4的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的CDK4对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用.
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石英致MAPK/cyclinD1-CDK4信号转导通路的活化
目的 探讨石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)/细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin D1-CDK4)信号转导通路的活化.方法两种处理方式:(1)石英刺激细胞2h后,收获细胞;(2)石英长时间(2个月)作用于细胞,使细胞具有部分转化细胞的特征(S-HELF),检测信号蛋白因子和细胞周期的变化.分别采用Western blot、免疫细胞化学和流式细胞术方法检测细胞内信号蛋白和细胞周期的改变.选用特异化学抑制剂或分子抑制剂抑制上游激酶,检测下游激酶的变化.结果 HELF暴露于石英粉尘2h后,可以导致MAPK家族中ERK1/2、p38和JNK1/2 3个亚家族的磷酸化水平升高.在S-HELF中,只有细胞外调节蛋白激酶(ERK)和C-Jun氨基末端激酶[JNK1(p46)]较未处理的HELF磷酸化水平增高,而JNK2(p54)的磷酸化水平没有变化,p38的磷酸化水平反而下降.cyclin D1和CDK4蛋白在S-HELF中较HELF中表达增多.抑制ERK和JNK活化或者抑制核转录因子活化蛋白1(AP-1)的活化后,S-HELF中cyclin D1和CDK4蛋白过表达得到控制.而抑制p38的活性不能改变cyclin D1和CDK4蛋白过表达.结论石英刺激HELF2h后可诱导ERK、JNK和p38的活化,而S-HELF中ERK、JNK活化,p38没有被活化.S-HELF中,cyclin D1和CDK4蛋白质过表达与ERK、JNK和AP-1活化有关.
关键词： 石英 丝裂素活化蛋白激酶 细胞周期蛋白类 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
急性白血病患者细胞周期蛋白B1表达的临床意义
目的探讨细胞周期蛋白B1(cyclin B1)在白血病发生、发展中的作用及对成人急性白血病(AL)预后的判断价值.方法对85例成人AL初治患者,并对其中47例达到缓解及18例复发的患者、10例持续完全缓解(CCR)期的AL患者采用流式细胞术检测cyclin B1、p21cip1蛋白表达水平和细胞周期分布;采用半定量RT-PCR检测cyclin B1、p21cip1、增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA水平.结果 85例初治AL患者全周期或G1/S期cyclin B1蛋白表达水平明显高于正常对照(P＜0.001);缓解患者cyclin B1蛋白表达与正常对照组比较差异无统计学意义(P=0.21),复发患者cyclin B1蛋白表达高于正常对照(P＜0.05),但低于AL初治组(P＜0.01),CCR组cyclin B1与正常对照组比较差异无显著性(P=0.694);初治AL患者的cyclin B1表达率高于正常对照组(P＜0.001);cyclin B1蛋白高表达者均有G1期异常高表达;cyclin B1与p21的蛋白表达呈负相关;cyclin B1蛋白表达与其mRNA水平呈正相关;cyclin B1表达与细胞增殖指数(PI)及PCNA表达水平呈正相关;cyclin B1表达水平高的患者有较高的治疗缓解率(P＜0.01),但有较高的复发率(P＜0.01),cyclin B1高表达者有较高的生存率.结论 cyclin B1在成人AL患者中有过度表达和周期分布,其异常表达水平与AL的疗效及预后密切相关,是影响成人AL治疗效果的重要因素之一,可以作为预后较好的标志.
关键词： 白血病 细胞周期蛋白B 酶抑制剂 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
三氧化二砷对骨髓瘤细胞周期及其调节蛋白表达的影响
目的研究三氧化二砷(As2O3)对骨髓瘤细胞周期及其调节蛋白表达的影响,探讨As2O3的药理机制.方法利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O3对骨髓瘤细胞系HS-Sultan周期的影响;用RT-PCR方法进一步研究As2O3对细胞周期负性调控因子P15、P16和P21 mRNA表达的影响.结果 As2O3使HS-Sultan细胞主要阻滞于G0/G1期,少部分阻滞于G2/M期,诱导S期细胞凋亡;未经As2O3处理的HS-Sultan细胞P15和P16 mRNA均无表达,在1.0?μmol/L As2O3作用24?h后P15 mRNA出现弱的阳性条带,48?h和72?h后变为强阳性,P16 mRNA则在48?h后见弱的阳性条带,72?h后呈强阳性,P21 mRNA在原有表达的基础上明显增强.结论 As2O3的药理作用之一是使细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P15、P16和P21重新表达或表达增强,从而影响细胞增殖周期.
关键词： 砷剂 多发性骨髓瘤 细胞周期 酶抑制剂 细胞周期蛋白质依赖激酶类 -
ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析
目的:研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制.方法:用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染脐带间充质干细胞(UCMSCs),将其分别置于33℃和37℃培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性及细胞周期,Western Blot法检测周期素(Cyclin)D1、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)2、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:细胞在33℃时培养24、48、72 h的PCNA阳性表达百分率均高于37℃时,差异有统计学意义(P＜0.01).转染tsSV40LT抗原基因后,细胞在33℃培养箱时的端粒酶活性和Plx值高于37℃时,差异有统计学意义(P＜0.01).33℃时的Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6及Nestin表达量高于37℃时,P16、P21、NSE和GFAP的表达量低于37℃时,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:通过tsSV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控.
