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散发性乳腺癌COMT、p21和NuMA基因多态性研究
目的 探讨山东省内女性人群中,儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)、细胞周期循环激酶抑制基因p21WAF1 、核有丝分裂器蛋白(NuMA)单核苷酸多态性与散发性乳腺癌发生的关系.方法 采用等位基因特异性扩增法(ASA)对山东省122例正常对照者和140 例乳腺癌患者的COMT 基因Val158Met、p21WAF1 基因Ser31Arg、NuMA 基因Ala794Gly 单核苷酸多态性进行检测,比较两组中各种基因型分布频率的差异,并进行统计学分析.结果 27.1%(38/140)散发性乳腺癌患者和8.2%(10/122)正常对照者的COMT 基因发生纯合变异,两组间Met/Met 纯合基因型分布频率的差异有统计学意义(χ2 ＝15.638,P ＜0.001);随着乳腺癌临床分期(OR ＝5.00,P ＜0.001)、组织学分级(OR ＝5.40,P ＜0.001)的升高及淋巴结转移增多(OR ＝3.00,P ＝0.002),COMT 突变基因型所占比例明显增大.而p21WAF1 基因与NuMA 基因各基因型分布频率在病例组和对照组间的差异无统计学意义(χ2 ＝0.373,P ＝0.541;χ2 ＝0.020,P ＝0.886).结论 COMT 基因Val158Met 单核苷酸多态性可能与散发性乳腺癌的发生有关,可作为乳腺癌早期基因诊断的一个指标.
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血小板衍生生长因子-BB通过转化生长因子-β信号系统调节大鼠血管平滑肌细胞内p21~(WAF1)表达
目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)-BB是否通过诱导转化生长因子(TGF)-β_1,表达及其信号系统调节p21~(WAF1)表达.方法 采取8～9周龄雄性Sprague-Dawley大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)进行体外培养,分为对照组、中和性抗TGF-β_1抗体组(20μg/ml,抗体组)、PDGF-BB组(40 ng/ml)、PDGF-BB+中和性抗TGF-β_1抗体组(PDGF-BB+抗体组),实验时间为48 h.逆转录酶-聚合酶链式反应检测TGF-β_1mRNA的表达,ELISA方法检测TGF-β_1蛋白的表达.Western blot检测p21~(WAF1)及TGF-β信号系统下游蛋白表达,后者包括TGF-β_1I类受体(在VSMC内表现为ALK-5)、Smurf2、pSmad2/3、Smad4、Smad7.结果 PDGF-BB组的TGF-β_1 mRNA(24 h)和TGF-β_1(48 h)蛋白分子表达水平分别为(447.716±23.911)和(0.309±0.034)ng/ml,明显高于对照组(250.435±17.869)和(0.104±0.013)ng/ml(P均＜0.01).p21WAF1蛋白表达在对照组0.621±0.046和抗体组0.657±0.058之间差异无统计学意义,PDGF-BB组表达仅为0.204±0.033,与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01),PDGF-BB+抗体组表达为0.530±0.043,与对照组和抗体组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),与PDGF-BB组比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).PDGF-BB组ALK-5 0.634±0.060、pSmad2/31.894±0.184、Smad4 1.129±0.136及Smurf2 0.559±0.047的表达水平分别高于对照组和抗体组0.288±0.049和0.300±0.047、0.972±0.096和0.887±0.059、0.665±0.055和0.709±0.058、0.158±0.040和0.224±0.064(P均＜0.01),对照组与抗体组之间差异无统计学意义,以上蛋白PDGF-BB+抗体组的表达分别比PDGF-BB组低了(85±9.5)%、(79±12)%、(91±17)%和(84±5)%.Smad7蛋白表达在对照组0.461±0.035与抗体组0.458±0.031之间差异无统计学意义,PDGF-BB组0.160±0.028与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01),PDGF-BB+抗体组0.375±0.039与PDGF-BB组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PDGF-BB调节p21~(WAF1)的表达部分通过TGF-β_1及其信号系统.
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p21和p27在肿瘤发生机制中的作用与耐药性
人类肿瘤的发生是由于细胞生长和死亡的不平衡导致的.控制这个平衡的关键是调节细胞周期的蛋白.目前发现的与密切调节细胞周期特定阶段效应分子包括细胞周期蛋白,细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases CDKs)和CDK抑制因子.G1期检测点的CDK抑制因子-p21(CDKN1 A)和p27(CDKN1 B)影响许多恶性肿瘤的发生发展.越来越多的证据表明p21或p27功能的缺失可以促进耐药.而另外一些实验证明p21和p27能促进肿瘤的发生发展.在本文中,我们将讨论这两个CDK抑制因子的功能,在肿瘤发生机制以及在耐药性中的作用.
关键词： 周期素依赖激酶抑制剂p21 周期素依赖激酶抑制剂p27 抗药性 肿瘤 -
Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系
目的 探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin Dl、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系.方法 选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin DI、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析.结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8％、40.5％、65.4％及80.0％,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0％、11.5％、0.0％、6.3％,P＜0.005).相关分析显示,cyclinD1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(p=0.001)呈正相关.生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差.Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关.Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(p=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素.结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值.
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粗毛豚草素对人肺癌细胞A-549的抑制作用研究
目的 探讨粗毛豚草素体外对人肺癌细胞A-549增殖的抑制作用及其作用机制.方法 粗毛豚草素作用人肺癌细胞A-549后,应用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot 检测周期蛋白cyclinD1,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21和p27的表达;免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的阳性表达.结果 A-549细胞经不同浓度(15、30、60、120 μmol/L)粗毛豚草素作用72 h后,细胞存活率分别为(57.30±3.92)%、(43.91±4.32)%、(17.82±2.73)%和(13.20±2.46)%,均低于对照组(96.30±2.08)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).粗毛豚草素(15、30 μmol/L)作用A-549细胞24 h,可使细胞发生G1/S期阻滞.3种浓度(15、30、60 μmol/L)的粗毛豚草素作用24 h,可抑制A-549细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4的表达,使p21蛋白表达增高,但对p27蛋白表达无明显影响.粗毛豚草素(15、30、60 μmol/L)可显著抑制PCNA表达,其表达强度分别为(35.7±2.3)%、(26.6±2.1)%和(14.1±2.2)%,均低于对照组(45.2±3.3)%(P﹤0.01).结论 粗毛豚草素可抑制肺癌细胞A-549增殖,其机制可能与改变细胞周期分布,下调cyclin D1、CDK4表达,上调p21的表达等有关.
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ts-SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析
目的:研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)转基因干细胞增殖活性的温度调控机制.方法:用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染脐带间充质干细胞(UCMSCs),将其分别置于33℃和37℃培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性及细胞周期,Western Blot法检测周期素(Cyclin)D1、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)2、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:细胞在33℃时培养24、48、72 h的PCNA阳性表达百分率均高于37℃时,差异有统计学意义(P＜0.01).转染tsSV40LT抗原基因后,细胞在33℃培养箱时的端粒酶活性和Plx值高于37℃时,差异有统计学意义(P＜0.01).33℃时的Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6及Nestin表达量高于37℃时,P16、P21、NSE和GFAP的表达量低于37℃时,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:通过tsSV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控.
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P21 P27和P53蛋白在结肠癌组织中的表达
目的 分析研究P21、P27和P53蛋白在结肠癌组织中的表达水平及关联.方法 选择2011年2月至2014年11月来我院就诊的144例经外科手术切除的原发性结肠癌组织标本进行分析研究.采用免疫组织化学染色方法进行染色,根据相关评价标准计算出阳性细胞率和染色强度,并终确定阳性率等级.结果 P21蛋白在有淋巴结转移的结肠癌组织中的阳性率达70.5％,高于无淋巴结转移的结肠癌的阳性率(30.3％),差异具有统计学意义(P＜0.05),与其他临床病理因素的关联性很小(P＞0.05).P27蛋白在无淋巴结转移的结肠癌组织中的阳性率达84.8％,高于有淋巴结转移的结肠癌的阳性率(55.1％),差异具有统计学意义(P＜0.05);在结肠癌高中分化阳性率(80.6％)高于低分化阳性率(69.4％),差异具有统计学意义(P＜0.05),但是与其他临床病理因素的关联性很小(P＞0.05).P53蛋白在结肠癌组织的阳性表达率与TNM分期、分化程度及浸润深度相关性大(P＜0.05),但是与其他临床病理因素的关联性小(P＞0.05).结论 P21、P27、P53蛋白表达可以作为结肠癌的辅助诊断指标,3种蛋白在判断结肠癌的生物学行为上具有协同作用.
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p21在氧诱导视网膜新生血管模型小鼠视网膜中的表达
视网膜新生血管(RNV)生成主要依赖于血管内皮细胞的不断分裂、增生[1].p21是细胞周期中重要的负性调控因子,能够广泛结合并抑制各种细胞周期蛋白依赣性激酶(CDK)复合物的磷酸化活性,主要参与细胞周期中G1/S期的调控,使细胞阻滞于G1期进而抑制细胞增生[2].有研究发现,p21在细胞异常增生性疾病中处于低表达[3].为探讨p21在RNV形成过程中的作用及机制,我们观察了p21和CDK2在氧诱导RNV小鼠视网膜中的表达.现将结果报道如下.
关键词： 周期素依赖激酶抑制剂p21 视网膜新生血管化/病因学 基因表达 疾病模型 动物
