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去脂牛血清白蛋白超载对NRK-52E细胞葡萄糖调节蛋白78、氧调节蛋白150及细胞凋亡的影响
目的 探讨去脂牛血清白蛋白(d-BSA)超载大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)对内质网应激(ERS)经典标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、氧调节蛋白150(ORP150)及细胞凋亡率的影响.方法 以不同浓度(1、5、10、20、50 mg/ml)的d-BSA超载NRK-52E细胞为实验组,以正常培养的NRK-52E细胞为对照组,观察各组细胞GRP78、ORP150和细胞凋亡率的情况;观察作用时间(6、12、24 h)对d-BSA(20 mg/ml)超载的NRK-52E细胞GRP78、ORP150和细胞凋亡率的影响情况.通过免疫细胞化学法测定NRK-52E细胞GRP78的表达量,Western blot法测定ORP150的表达量,流式细胞术检测NRK-52E细胞的凋亡率情况.结果 (1)浓度为1 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞24 h后GRP78、ORP150的表达量及细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).(2)浓度为5 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞24 h后,细胞内GRP78、ORP150表达量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且浓度为10、20、50 mg/ml的d-BSA组的表达量显著增加(P<0.01).(3)浓度为5 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞12 h后,细胞凋亡率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且浓度为10、20、50 mg/ml的d-BSA组细胞凋亡率显著增加(P<0.01).(4)浓度为20 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞6 h后,细胞内GRP78、ORP150表达量即有增加(P<0.05);12、24 h后,两者表达量与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).(5)细胞凋亡率在浓度20 mg/ml的d-BSA孵育6 h后即升高,但与对照组相比无统计学差异;12、24 h后,细胞凋亡率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 d-BSA超载NRK-52E细胞可以促进细胞内GRP78、ORP150的表达;当d-BSA浓度过大或者孵育时间过久,细胞凋亡率升高.
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氧调节蛋白150诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的研究
目的:探讨氧调节蛋白150(ORP150)是否能够通过调控内质网应激来对抗蛋白酶体抑制剂介导的甲状腺未分化癌细胞凋亡.方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO、8305C和8505C,分别设空白对照组、siORP150组、随机序列核酸(siRNA)组、ORP150组、siCHOP组和siORP150+ siCHOP组,加或不加蛋白酶体抑制剂MG132(2μmol/L)处理；利用微小RNA干扰技术封闭ORP150及CHOP的表达；实时定量PCR法、蛋白质印迹法及流式细胞仪(FCM)检测CHOP基因表达及各组甲状腺未分化癌细胞凋亡率.结果:FRO、8305C和8505C细胞中,ORP150表达载体组中CHOP mRNA较空白载体组显著降低,P＜0.01；siORP150组中CHOP mRNA较随机序列核酸siRNA组显著升高,P＜0.01.在FRO细胞中,蛋白质印迹法检测CHOP得到相似的结果.FCM检测结果显示,FRO细胞中siORP150组细胞凋亡率为87.72％,而这种增敏效应被siCHOP所抑制,其细胞凋亡率为56.96％,两组差异有统计学意义,P＜0.01;8305C和8505C细胞中也得到相似的结果.结论:氧调节蛋白150通过调节CHOP的表达调控蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺未分化癌细胞凋亡的作用.
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蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌细胞凋亡影响及其机制的探讨
目的:探讨蛋白酶体抑制剂对未分化甲状腺癌FRO细胞中氧调节蛋白150 (ORP150)表达的影响,以及ORP150在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用.方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照组、蛋白酶体抑制剂Lactacystin、PSI、Epoxomycin和MG132处理组；利用微小RNA干扰技术,减少ORP150的表达,实时定量PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞中ORP150 mRNA和蛋白表达；流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂Lactacystin、PSI、Epoxomycin和MG132均显著增加FRO细胞系中ORP150基因表达水平,P＜0.01；与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siORP150处理组中ORP150mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),其凋亡率显著增加,P＜0.01.结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中ORP150基因的表达水平,siOPR150具有特异性降低OPR150基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌FRO细胞凋亡作用.
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胃癌患者血清ORP150水平及其临床意义
目的 探讨胃癌患者血清中氧调节蛋白150(oxygen-regulated protein 150,ORP150)的水平及其临床意义.方法 采用ELISA法检测60例胃癌患者、30例体检正常者血清中的ORP150含量,分析其与胃癌临床病理特征的关系.结果 胃癌患者血清ORP150的水平7.06±0.56ng/ml明显高于正常对照组2.11±0.28ng/ml(P＜0.05);胃癌患者中Ⅲ、Ⅳ期血清ORP150水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05);中低分化组血清ORP150水平明显高于高分化组(P＜0.05);血清ORP150水平随着浸润深度的增加而增高(P＜0.01);淋巴结转移组血清ORP150水平明显高于无淋巴结转移组(P＜0.01);而血清ORP150水平与年龄、性别、肿瘤直径无关.结论 胃癌患者血清ORP150水平增高,与肿瘤TNM分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关.
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氧调节蛋白150与糖尿病心肌缺血/再灌注损伤关系的研究进展
病理过程持续存在或加重可破坏内质网内稳态引起内质网应激(ERS).ERS在高糖高脂、缺血缺氧、钙平衡紊乱等病理情况中发挥重要作用.在糖尿病心肌缺血/再灌注损伤过程中,ERS及其随后发生的非折叠蛋白反应引起的心肌细胞的凋亡加重这一病理过程.实验表明,氧调节蛋白150(ORP150)的过表达可减轻ERS引起的心肌细胞的凋亡,进而减轻糖尿病心肌损伤.本文就ORP150通过对ERS的作用,进而对糖尿病心肌缺血/再灌注损伤中的作用进行了介绍,为糖尿病缺血/再灌注的心肌治疗提供科学依据.
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白藜芦醇对肾纤维化大鼠肾组织ORP150、GRP78、GRP94蛋白表达的影响
目的 探讨白藜芦醇对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织内质网应激分子伴侣氧调节蛋白150 (ORP150)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、GRP94表达的影响.方法 采用UUO大鼠模型,利用随机数字表将大鼠分为假手术组、模型组、依那普利组和白藜芦醇高、中、低剂量组,每组各10只;手术后2周将大鼠处死并收集血清和肾组织,检测肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;采用HE染色观察大鼠肾组织的损害程度并计算损伤参数;采用Masson染色检测大鼠肾间质胶原沉积面积值;采用TUNEL法检测大鼠肾组织中原位细胞凋亡情况;Western blotting法测定大鼠肾组织ORP150、GRP78、GRP94蛋白表达水平.结果 与模型组比较,各治疗组大鼠血清中Scr、BUN均显著降低,肾小管损伤程度明显减轻,肾间质胶原相对面积降低,肾组织中ORP150蛋白表达水平显著升高(P＜0.05、0.01),原位细胞凋亡指数和GRP78、GRP94蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.01).白藜芦醇高剂量组和依那普利组比较各检测指标均差异显著(P＜0.05).结论 白藜芦醇对UUO大鼠肾功能具有保护作用,能够减轻肾脏肾盂积水,降低肾间质胶原沉积面积,诱导内质网应激过程中的关键信号分子ORP150的表达,下调分子伴侣GRP78、GRP94的表达,减缓凋亡的发展,抑制因细胞凋亡沉积而带来的肾间质纤维化进程.
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内质网应激和胰岛素抵抗
2型糖尿病的发病机制主要涉及胰岛素抵抗.近年来研究表明内质网应激可诱导胰岛素抵抗的形成,并使与改善胰岛素受体敏感性相关的内质网应激标志物分子氧调节蛋白150和转录因子X盒结合蛋白-1表达增强,表明内质网应激对细胞具有双重作用,一方面可诱导胰岛素抵抗,另一方面激发对应激的适应反应.
关键词： 胰岛素抵抗 内质网应激 氧调节蛋白150 转录因子X盒结合蛋白-1 -
缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内质网应激相关因子的表达
目的 观察内质网应激相关因子氧调节蛋白150(ORP150)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑皮质内的表达,探讨内质网应激在新生大鼠HIBD中的作用.方法 新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组和缺氧缺血(HI)组.每组按照观测的时间点不同分为3h、6h、12h、24h、3d、7d6个亚组,每个亚组8只.在每个时间点将大鼠断头后取皮质脑组织匀浆,用Western blot方法检测不同时间点其脑皮质ORP150及CHOP的动态变化.用原位末端标记法检测相应时间点光镜下其脑皮质组织的凋亡细胞数.结果 1.HI组CHOP表达水平在HIBD后各时间点均高于假手术组(P＜0.05),且在24h达到高峰；ORP150表达水平在完成HIBD后3h开始增加,6h达到高峰,后逐渐下降,7d时与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).2.HI后3h,HI组即发现结扎侧脑皮质有少量的凋亡细胞,随着HI时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24h达到高峰后下降.3.CHOP的表达变化与神经细胞凋亡时间趋势呈正相关(r=0.911,P＜0.05).结论 HIBD诱发了内质网应激,可能通过上调ORP150表达参与启动末折叠蛋白反应过程,而通过上调CHOP表达诱导神经细胞凋亡的发生.
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氧调节蛋白ORP150在胃肠道肿瘤患者血清中的水平变化及意义
目的:探讨血清氧调节蛋白150(ORP150)在胃肠道肿瘤诊断与分期过程中的参考意义.方法:选取2014年1月至2015年4月间于我院就诊胃肠道肿瘤患者,收集临床资料与患者血清,检测患者血清ORP150水平,并按照肿瘤部位、病理诊断、浸润深度与转移情况分组比较.结果:各分组患者间在年龄、性别方面无明显差异;不同肿瘤部位患者间血清ORP150无明显差异(P＞0.05);除黏液腺癌与高分化腺癌组与对照组间无统计学差异外,各组患者血清ORP150相比于对照组均有明显升高,中低分化腺癌组相比于高分化腺癌组ORP150水平升高明显(P＜0.05);随浸润深度的增加,患者血清ORP150水平逐渐升高,肿瘤浸润至浆膜层后,ORP150升高明显(P＜0.05);患者血清ORP150水平在不同转移组间无明显差异(P＞0.05).结论:胃肠道肿瘤患者血清ORP150水平与肿瘤分化程度以及浸润情况相关,可以作为患者治疗与预后指导的参考指标,在胃肠道肿瘤诊断与分期过程中具有一定参考意义.
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ORP150在重症急性胰腺炎大鼠胰腺中表达变化的研究
目的 探讨氧调节蛋白150(ORP150)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺损伤中的表达变化.方法将40只雄性Wistar大鼠随机分为:假手术组(SO组,10只)、SAP组(30只,其中SAP 3、6及12h3个时相各10只).SO组开腹后仅翻动胰腺则关腹,SAP组则经胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备SAP模型;测定SO组术后12 h和SAP组造模后3、6及12 h的腹水量、血清淀粉酶(AMY)及谷氨酸氨基转移酶(ALT)水平;于光镜下进行胰腺组织病理学评分;用RT-PCR法检测胰腺组织中ORP150 mRNA的表达.结果 SAP组各时相腹水量,AMY及ALT水平和胰腺病理评分均明显高于SO组(P＜0.05).SAP组腹水量在造模后3h和6h之间差异无统计学意义(P＞0.05),而12h较前2个时相均明显增高(P＜0.05).SAP组的AMY及ALT水平和胰腺组织病理学评分在造模后各时相两两间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).ORP150 mRNA在SO组呈低表达,在SAP组造模后各时相的表达强度均较SO组增强,其中造模后3h表达强度高,6h和12h依次降低.结论 ORP150mRNA在SAP胰腺组织中呈高表达,提示ORP150可能在SAP胰腺损伤的发生、发展过程中起着一定的作用.
