首页 > 文献资料
-
传统方法和PCR法在结核分枝杆菌复合群菌种鉴定中的对比研究
目的 对结核分枝杆菌复合群菌种鉴定的传统方法与PCR法进行对比研究,为临床应用提供科学依据.方法 分别采用传统结核分枝杆菌菌种鉴定方法(对硝基苯甲酸和噻吩-2-羧酸肼)和PCR法,对2010年4月至2011年5月新疆喀什胸科医院住院、临床确诊肺结核患者的313份(例)晨痰标本临床分离株进行菌种鉴定.立意抽样法抽出100份结核分枝杆菌、牛分枝杆菌及非洲分枝杆菌Ⅰ型菌株,用Spoligotyping法检测前两种方法结果的可靠性.结果 传统方法检测出结核分枝杆菌253株,牛分枝杆菌60株；而PCR法检测出结核分枝杆菌306株,牛分枝杆菌1株,非洲分枝杆菌Ⅰ型6株,两者间差异无统计学意义(x2 =5.05,P=0.08),两者检测的一致率为79.87％(250/313).传统方法和PCR法鉴定结果差异虽无统计学意义,但传统方法检测出牛分枝杆菌60株,而PCR法仅检测出牛分枝杆菌1株,差异有统计学意义(x2=4.16,P=0.04),故用立意抽检100份菌株,用Spoligotyping检测出牛分枝杆菌2株,结核分枝杆菌90株、非洲分枝杆菌Ⅰ型6株,2株未能检出菌型；其和传统方法与PCR法的一致率分别为38.78％[(2+36)/98]、98.98％[(1+90+6)/98].结论 经过Spoligotyping法检测可知,在结核分枝杆菌复合群菌种鉴定中传统方法较PCR法耗时、繁琐,且不能较准确地鉴定出菌种,而PCR法可准确、快速的将其鉴定到亚种.
-
母牛分枝杆菌菌苗治疗卡介苗反应性淋巴结炎临床分析
目的 评价母牛分枝杆菌菌苗(微卡)在治疗卡介苗反应性淋巴结炎的临床效果,为治疗卡介苗反应性淋巴结炎提供参考依据.方法 搜集2012年1月至2015年7月上海市公共卫生临床中心的住院卡介苗反应性淋巴结炎患儿74例.根据患儿家属的治疗意愿,25例患儿口服异烟肼、利福平抗结核药物治疗(抗结核治疗组),44例患儿接受微卡治疗(微卡组),5例先天性免疫缺陷病患儿口服异烟肼、利福平、乙胺丁醇抗结核十微卡治疗.比较抗结核治疗组和微卡组患儿的治疗效果和不良反应.应用SPSS 21.0软件处理数据,组间比较采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 抗结核治疗组100.0％(25/25)患儿淋巴结肿大均逐渐消退,微卡组95.5％(42/44)淋巴结肿大逐渐消退,两组有效率比较差异无统计学意义(x2=1.170,P＞0.05).抗结核药物治疗组16.0％(4/25)的出现肝功能损伤,微卡组无患儿出现肝功能损伤,两组肝损伤发生率比较差异有统计学意义(x2=7.473,P＜0.05).结论 采用微卡治疗卡介苗反应性淋巴结炎具有较好的效果,且可减少患儿不良反应的发生.
-
卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价
目的 对卡介菌(BCG) CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础.方法 以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌.单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率.经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+ BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数.同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性.结果 BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+％为41％,培养基对照组(NCS)组为27％；t=-4.40,P＜0.05]；促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+ TLR-9+％为2.8％,NCS组为1.1％;t=-5.92,P＜0.05)；上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+％为82％,NCS组为31％;t=-4.32,P＜0.05)；可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+ I-A/I-E+TLR-9+ IL-12+％为2.1％,NCS组为0.1％；t=4.80 P＜0.05).BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28 d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均＜10; H1N1低剂量组滴度＜中剂量组滴度＜高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高.H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30％、50％、90％、100％、100％,显示佐剂可提高40％动物存活率.Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100％病变,疫苗组完全转阴的动物达到30％,而且病变指数＜30的动物达到60％～70％.佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应.结论 BC-C02既能诱导细胞免疫反应,也能诱导体液免疫反应,并能提高疫苗保护效力,可作为一种新型疫苗用佐利的候选佐剂.
-
牛分枝杆菌感染巨噬细胞(THP-1)全基因表达谱变化的研究
目的 分析可用于牛结核病免疫学诊断的候选靶标,同时初步探讨由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起人结核病的免疫学发病机制.方法 牛分枝杆菌(AF 2212/97)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis(H37 Rv))感染人的模式巨噬细胞(THP-1),采用含有22 000个基因全长的基因芯片分析感染72 h后的THP-1细胞全基因组的在转录水平的表达谱变化.在确定所分析的芯片的特异性和稳定性均达到要求的基础上,通过GO显著性统计分析,研究表达变化的基因所对应蛋白的分子功能,生物过程以及细胞组分;进一步采用Pathway显著性统计分析,研究表达差异蛋白之间的相互作用.结果 感染H37Rv后的THP-1细胞,存在290个差异基因表达,其中170个上调表达,120个下调表达,与以往的结果类似.牛分枝杆菌感染的THP-1细胞中有1 899(8.6%)个基因差异表达,其中1 075个基因被上调表达(56.6%),其他43.4%被下调.1 899个基因中1 674个在GenBank有记录,263个是新基因,,基质金属蛋白酶12(H200000442)被上调达60.4921倍;下调幅度大的蛋白丝氨酸/半胱氨酸抑制酶(H200006177)被下调6.29倍.采用GO分析发现,这些基因对应的多为炎症因子蛋白、凋亡蛋白、细胞外基质蛋白、T细胞受体信号通路相关蛋白等.其中与炎症相关的的蛋白有47个,如TNF、IL8、CXCL3、CCL8、CCL7、IFNK、IL-26、CCL28等.随后的Pathway分析差异表达基因对应的2 014个蛋白,展示了一系列的引起结核病发病的重要信号传导通路.结论 基因表达谱研究可为牛结核病发病机制及其诊断研究提供大量有益的生物学信息.
-
化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药结核病的随机对照研究
目的 评价化疗加免疫长疗程方案治疗耐多药肺结核的疗效和安全性.方法 对203例耐多药肺结核患者,采用1:1随机、平行对照的方法 ,分为治疗组和对照组,2组患者除采用对氨基水杨酸异烟肼、利福喷汀、左旋氧氟沙星、丙硫异烟胺(Pt)、克拉霉素和阿米卡星治疗外,治疗组患者加用免疫调节剂母牛分枝杆菌菌苗(M.vaccae,微卡),对照组患者不加用母牛分枝杆菌菌苗,疗程共18个月.结果 治疗结束时(18个月)治疗组和对照组痰抗酸菌涂片阴性同时痰结核分枝杆菌培养阴性(涂阴培阴)分别为74.5%(73/98)和72.5%(66/91),(χ2=0.09,P=0.7599).2组比较差异无统计学意义.X线影像结果 表明,2组的病灶显效率分别为72.4%(71/98)和47.3%(43/91),差异有统计学意义(χ2=12.52,P=0.000 4,P>O.05);有效率分别为90.8%(89/98)和82.4%(75/91),差异无统计学意义(χ2=2.90,P=0.088 6,P>0.05);空洞闭合率分别为33.3%(27/81)和22.1%(17/77),差异无统计学意义(秩和检验F=1.52,P=0.129 4,P>0.05).免疫学指标CD8阳性原细胞在治疗6个月时治疗组高于对照组,CD3阳性原细胞治疗后与治疗前免疫指标差值在3和9个月差异有统计学意义外,其余CD4,CD4/CD8,NK细胞,IL-2R等免疫学指标在各治疗阶段,治疗组与对照组近似,差异无统计学意义.临床症状咳嗽、咳痰、胸痛,呼吸困难,乏力等症状有改善;治疗组改善程度均大于对照组.结论 本研究所设计的方案对耐多药肺结核病均有明确的疗效,具有有效的杀菌、抑菌作用,加用免疫调节剂在促进病灶吸收,症状改善方面有一定的作用.
-
快速检测技术在奶牛结核病检测中的应用研究
目的 评价快速检测技术在奶牛结核病检测中的应用,为改进奶牛结核病检疫工作提供实验室数据支持.方法 2010-2012年对上海市5家奶牛场9355头奶牛采用牛分枝杆菌提纯结核菌素皮内超敏反应方法(PPD试验)进行牛结核病筛查,筛查出223头阳性牛,5家奶牛场分别采用随机数字表法抽取PPD阳性牛,共抽取PPD阳性牛49头;无菌采集肺部淋巴结组织样本,采用MGIT 960液体培养法对奶牛组织中分枝杆菌进行快速分离培养,采用免疫色谱法和基因测序进行快速基因分型及菌种鉴定.结果 49头PPD试验阳性牛的组织样本,经MGIT 960液体培养、免疫色谱法初筛、基因分型和基因序列分析,终病原学检测证实受分枝杆菌感染的奶牛有8头,其中受牛分枝杆菌感染的奶牛1头,受非结核分枝杆菌感染的奶牛7头,分别为鸟分枝杆菌感染6头,不产色分枝杆菌感染1头.结论 建议将分枝杆菌快速分离培养及菌种鉴定检测技术引入到对PPD阳性牛的实验室诊断中,进一步提高牛结核病检测的特异度.
-
母牛分支杆菌菌苗免疫治疗肺结核临床观察--2年随访结果
目的评价母牛分支杆菌(M.vaccae)菌苗免疫治疗缩短初治菌阳肺结核化疗疗程及对耐多药肺结核的疗效.方法 142例初治菌阳肺结核和46例耐多药肺结核,配对随机分为M.vaccae菌苗免疫治疗组和单纯化疗对照组.初治治疗组(A组)采用M.vaccae菌苗深部肌肉注射6次及4个月化疗,初治对照组(B组)采用6个月化疗而不行免疫治疗;耐多药肺结核(C组、D组)均给予18个月化疗,但治疗组(C组)给予M.vaccae菌苗免疫治疗6次,对照组(D组)单用化疗.M.vaccae菌苗免疫治疗结束,A组痰菌阴转率为95.8%(68/71),B组为97.2%(69/71),P＞0.05;C组和D组痰菌阴转率分别为34.8%(8/23)和4.7%(1/23),P＜0.05.本文对疗程结束痰菌阴转且未失访的141例病人进行了2年随访.结果 A组2年复发率为6.3%(4/64),B组为4.5%(3/66)P＞0.05,C组、D组2年复发率分别为11.1%(1/9)和50.0%(1/2),P＞0.05.结论 M.vaccae菌苗免疫治疗可将初治菌阳肺结核的化疗疗程缩短为4个月,痰菌阴转率、2年复发率与对照组无差异,耐多药肺结核痰菌阴转率明显提高,复发率与对照组无差异.因此,M.vaccae菌苗免疫治疗可缩短初治菌阳肺结核的疗程,提高耐多药肺结核的疗效,建议推广应用.
-
宁夏地区人畜BDV p24基因系统发生树构建和序列分析
目的 了解宁夏及其周边地区博尔纳病病毒(BDV)的感染状况和基因特征及其种系发生来源.方法 采用巢式反转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR),检测119例病毒性脑炎(VE)患者和其密切接触的患病或健康牛205头、绵羊978只及脑血管病患者46例、多发硬化患者13例的外周血单核细胞BDVp24片段,检出的阳性序列连同前期检出的宁夏绵羊、VE患者和抑郁症患者阳性BDVp24基因序列与GenBank中5个国家7个动物种属29例BDVp24基因序列进行比对,分析其核苷酸和氨基酸序列的同源性,重新构建基因系统发生树.结果 23例阳性检测标本连同3例前期检测序列基因聚合分析显示核苷酸之间的同源相似度为96.5%～100.0%,氨基酸的同源相似度为95.3%～100.0%.与德国马源性标准株HE80同源相似度较高.构建基因的系统发生树发现宁夏绵羊、VE患者和抑郁症患者同德国马和绵羊、奥地利马都各自形成了独立的支系,其余样本形成混合支系,其中宁夏的VE患者、牛、绵羊同德围马、日本绵羊形成德国-中国宁夏-日本混合支系.结论 宁夏及其周边地区人和动物BDV的感染,存在区域源性BDV独立株和国外传人基冈保守株的多源状态.
-
12个省市自治区水产品霍乱弧菌污染情况调查
目的 了解霍乱弧菌在不同水产品及其流通环节中的污染情况,为制定霍乱预防控制措施提供依据.方法 2005年7-9月在全国12个省、自治区、直辖市对不同种类水产品样本进行调查和霍乱弧菌的检测.结果 共调查检测海、水产品样本12 104份,霍乱弧菌总阳性检出率为0.52%.各类样本以甲鱼阳性率(1.72%)高,其次为养殖水(1.14%)、蛙类(0.50%),贝类低(0.08%).检测61株霍乱弧菌菌株47.54%为产毒株,且79.31%分离自甲鱼和养殖水.甲鱼在多环节的阳性率均较高,以养殖环节阳性率高(2.38%).结论 我国12省(自治区、直辖市)水产品及其流通环节霍乱弧菌污染总体处于较低水平,甲鱼卫生管理问题应受到高度重视.
-
改良奶牛与传统蒙古黄牛的牛奶中雌激素和孕激素含量的比较
目的 测定我国目前市场上销售的改良奶牛的牛奶中雌激素和孕激素的含量,比较改良奶牛和传统蒙古黄牛所产牛奶的雌激素和孕激素含量.方法 用酶联免疫试剂盒测定牛奶中的雌酮、雌二醇、孕酮含量;并通过文献阅读和现场调查比较家庭散养的蒙古黄牛和饲养基地的改良奶牛在饲养和牛奶生产上的差异.结果 本研究中测定的蒙古黄牛奶中雌酮平均浓度为(98.5±12.4)pg/ml,雌二醇平均浓度为(24.6±3.0)pg/ml,孕酮平均浓度为(0.2±0.3)ng/ml.3种晶牌的市售奶之间,雌激素和孕激素的浓度高低不等,雌酮浓度分别为(150.2±8.4)、(131.3±16.3)、(128.9±13.0)pg/ml;雌二醇浓度分别为(35.4±2.2)、(30.3±3.1)、(30.0±2.0)pg/ml;孕酮浓度分别为(20.2±1.5)、(18.1±2.2)、(16.5±2.4)ng/ml.3种市场奶中的雌酮、雌二醇以及孕酮的含量均高于黄牛奶中的含量(雌酮此较:t=5.43,19.23,5.89;雌二醇比较:t=4.14,4.93,14.03;孕酮比较:t=28.47,32.73,22.82;P值均<0.05).文献阅读和现场调查发现家庭散养的传统黄牛在妊娠中后期不产奶,而奶牛饲养基地的改良奶牛在雌激素和孕激素水平显著升高的妊娠中后期继续产奶,改良奶牛的泌乳期明显延长,产奶量明显增加.结论 目前我国市场上销售的牛奶中含有一定量的雌激素和孕激素,含量高于蒙古黄牛生产的牛奶.这一结论不能否定牛奶的营养价值,旨在提醒大家关注牛奶中的雌激素和孕激素可能对健康产生的影响.
-
2013年中国五省牛源金黄色葡萄球菌的耐药谱分布及基因分型
目的 调查2013年中国5个省牛源金黄色葡萄球菌的耐药谱分布,并了解其基因分型情况.方法 于2013年从我国5个省的15个牛群(包括12家规模化养殖场和3家养殖合作社),采集泌乳牛乳头涂抹样品、榨乳杯内衬涂抹样品、隐性乳房炎患牛患病乳区牛奶样品共计680份,应用微量肉汤稀释法检测分离株对10种抗生素的耐药分布;运用PFGE方法对分离株进行基因分型.结果 共分离出111株金黄色葡萄球菌,分离株对7种受试抗生素耐药:青霉素[90.1％(100/111)]红霉素[48.6％ (54/111)],环丙沙星[36.9％ (41/111)],克林霉素[27.9％ (31/111)],庆大霉素[18.9％ (21/111)],氯霉素[9.0％ (10/111)],四环素[7.2％ (8/111)],所有分离株对苯唑西林、万古霉素、复方新诺明均敏感;总体耐药率达92.8％(103/111),多重耐药率达38.7％ (43/111);合作社分离株耐药率[100％(48/48)]高于养殖场分离株[87％(55/63)],差异有统计学意义(x2=4.80,P＜0.05);合作社分离株多重耐药率[54％(26/48)]高于养殖场分离株[27％(17/63)],差异有统计学意义(x2=8.48,P ＜ 0.05).111株菌经PFGE方法分成8个型,6个优势型别占据菌株数量的98.2％ (109/111),分别在2～9个牛群流行,各牛群包含的型别从1～4种不等并倾向于以一种型别为主;牛群内部奶样分离株和涂抹样分离株可归入同一型.菌株耐药谱分布和PFGE分型结果未见相关性.结论 牛源金黄色葡萄球菌分离株耐药严重,尤以合作社分离株为甚,各牛群具有优势基因型别,某些型别可在多个牛群流行.
-
牛血铅成分分析标准物质的研制
目的 研制牛血铅成分分析国家一级标准物质.方法 根据<一级标准物质技术规范(JJG1006-1994)>和ISO 17511要求,按照剂量.效应关系,选择2头雄性健康牛,以醋酸铅为饲料添加物,按每天2～5 mg/ks体重剂量喂养,制作牛血铅模型.当牛血铅分别达到90～100、190～200、280～300μg/L时,采集牛血,分装于密封性良好的耐低温管中,辐射后冷冻保存.进行均匀性检验、稳定性监测及放置室温时间检验.选用核素稀释质谱法(isotopic dilution mass spectrometry,ID-MS)为研制物质铅含量赋值.通过对美国NIST SRM 955b两个浓度样品铅含量的表达验证赋值方法.结果 铅含量分别为90～100、190～200、280～300 μg/L的低、中、高浓度组研制物质均匀性单因素方差分析F值分别为0.61、1.64、0.28,P值均大于0.05,说明3组研制物质均匀.经过14个月监测,3组浓度相对标准偏差分别为0.85%、1.05%和0.49%;与14个月前比较,t值分别为0.787、1.132、0.854,P值均大于0.05,表明研制物质14个月时间数值稳定.3组牛血铅的特性量值±不确定度分别为(102.4±5.5)、(181.2±4.0)、(304.5±3.9)μg/L.通过对美国NIST SRM 955b两个浓度样品铅含量的准确重现,说明赋值方法和程序正确.置常温下4 d内测定,结果稳定.结论 该络合型牛血铅成分分析研制物质的各项指标均达到国家一级标准物质的要求.
-
牛乳头瘤病毒E6蛋白与p73蛋白的相互作用
为进一步探讨和阐明E6蛋白的致癌机制以及充分认识新发现的抑癌基因p73的作用,在体外通过免疫共沉淀法研究p73和牛乳头瘤病毒1型E6蛋白(BPV-1 E6)的相互结合情况,后将表达p73和BPV-1 E6的质粒导入SAOS-2细胞内,进一步研究细胞内E6蛋白对p73蛋白的诱导凋亡和转录活化功能等生物学活性的影响.结果发现,BPV-1 E6与p73蛋白结合较弱,且未检测到E6能诱导p73蛋白的降解.在SAOS-2细胞内,BPV-1 E6 蛋白确实能部分抑制p73蛋白的诱导细胞凋亡的功能,并且 E6蛋白对p73蛋白的转录激活作用也有影响,但这种影响作用颇弱.
-
牛精子头后部质膜分区的研究
目的检测牛精子头后部存在的不同质膜区域. 方法先用钙离子载体A23187诱导精子发生顶体反应,然后用水浴超声波和低速离心法分离得到纯牛精子头.直接用顶体反应后精子和低渗处理的顶体反应后精子头免疫Balb/c母鼠和新西兰公兔,制备抗牛精子抗体,并结合以前制备的抗牛精子sp18单克隆抗体进行间接免疫组织化学分析. 结果牛精子头后部质膜表面存在两个位置互补的荧光区域,即紧邻赤道板和紧邻尾段的荧光区域:前一区域表面稳定存在的主要是sp18族膜蛋白,后者的膜蛋白在顶体反应和洗涤时易解离. 结论依据膜蛋白成分的差异,牛精子头后部质膜可以划分为紧邻赤道板的sp18质膜区域(sp18-rich region)和紧邻尾段的无sp18质膜区域(sp18-free region).
-
牛新孢子虫感染胶体金检测方法的建立
目的 建立快速、灵敏、特异的检测新孢子虫感染牛血清抗体的免疫胶体金试纸条.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒.分别用兔抗SPA和新孢子虫P40蛋白包被硝酸纤维素膜作为质控线和检测线进行反应条件优化,组装胶体金试纸条.对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和保存期进行检测;利用该试纸条检测120份吉林省某养牛场牛血清中的抗新孢子虫抗体.结果 兔抗SPA抗体的佳包被浓度为0.5 mg/ml,新孢子虫P40蛋白的佳包被浓度为1 mg/ml.该试纸条检测牛新孢子虫抗体的灵敏性可达到1∶320(血清稀释度);且不与牛瑟氏泰勒虫感染血清发生交叉阳性反应.用3个不同批次的试纸条进行试验,已知阴性血清及阳性血清显色情况一致.该试纸条置4℃条件下可保存60 d.用该试纸条检测牛血清120份,阳性率为17.5％.结论 建立的牛新孢子虫感染胶体金试纸具有检测快速、灵敏、特异性强等优点,可用于牛新孢子虫感染监测.
-
我国部分地区鹿、牛群中戊型肝炎病毒血清流行病学调查
目的 调查我国部分地区鹿和牛群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况. 方法 采集我国某地区13个鹿场780份鹿血,2个散养鹿群18份血和长春地区牛血80份,分离血清.应用抗HEV抗体酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样品进行抗HEV抗体检测.用χ2检验分析不同养殖场鹿血清HEV抗体水平. 结果 798份鹿血清抗HEV抗体阳性率为43.61%.13个集约化养殖鹿场中有5个鹿场的血清样品抗体呈阳性,阳性率分别为48.02%、47.25%、60.69%、41.94%、40.91%;其余8个鹿场的血清样品均为阴性.两个散养鹿群的抗体阳性率分别为40.00%和46.15%.80份牛血清样品的抗体阳性率为20%. 结论 我国鹿群尤其是散养鹿群普遍存在HEV感染.牛群也存在较高的HEV感染率.
-
应用酶联免疫法检测组织工程骨牛血清白蛋白残余量的实验研究
目的 检测常规体外构建的组织工程骨中牛血清白蛋白残余量,并探讨减少其残留量的方法.方法 体外分离培养人骨髓基质干细胞,取第2代细胞(P2)接种于完全脱钙骨支架材料并成骨诱导培养2周,体外构建组织工程骨.成骨诱导液为含10％胎牛血清的条件培养液,并于检测前1天更换为无血清的条件培养液.待测组织工程骨先经1∶100 (v∶v)生理盐水浸洗3次,然后加入磷酸盐缓冲液(PBS),37℃振荡浸提24 h,获取浸提液.同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液作为对照组.采用酶联免疫法检测样品浸提液中牛血清白蛋白的残余量,比较两者牛血清白蛋白残余量的差异.结果 经生理盐水洗涤3次后,洗涤液中的牛血清白蛋白含量明显降低.酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料的牛血清白蛋白残余量分别为(15.57±5.82)ng和(14.85±5.06)ng,单位重量的牛血清白蛋白残余量分别为(0.254±0.088)ng/mg和(0.306±0.079)ng/mg,两组相比均无显著性差异(P＞ 0.05,n=10).结论 酶联免疫法适用于组织工程骨中牛血清白蛋白残余量的检测.因为支架材料较细胞更易吸附牛血清白蛋白,现有条件下构建的组织工程骨牛血清白蛋白残余量仍然较高,需要继续探索降低其残余含量的新方法.
-
卡介菌多糖核酸注射液效力实验动物模型致敏原的选择
目的 针对目前卡介菌多糖核酸注射液效力试验模型不稳定的现状,比较猪血清、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白3种不同致敏原对小鼠的致敏效果,探讨该动物模型致敏原的选择.方法 猪血清、冻干牛血清白蛋白、冻干鸡卵清蛋白腹腔注射致敏小鼠,隔天1次,共3次,末次致敏后14 d,尾静脉攻击相同的致敏原,观察小鼠的全身发病情况,记录发病指数.结果 牛血清白蛋白的致敏效果差,猪血清和鸡卵清蛋白致敏效果好,但是反复冻融后的猪血清致敏效果较猪血清效果显著性降低(P<0.05).鸡卵清蛋白的致敏浓度选择结果,在5 mg/ml的攻击浓度下,动物的发病指数0.5 mg/ml致敏浓度组高于0.25 mg/ml剂量组和1 mg/ml剂量组.结论 鸡卵清蛋白更适合用于卡介菌多糖核酸注射液效力试验的致敏原,佳的致敏浓度和攻击浓度分别为0.5mg/ml和5mg/ml.
-
卡介菌多糖核酸注射液效力实验动物模型致敏原的选择
目的 针对目前卡介菌多糖核酸注射液效力试验模型不稳定的现状,比较猪血清、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白3种不同致敏原对小鼠的致敏效果,探讨该动物模型致敏原的选择.方法 猪血清、冻干牛血清白蛋白、冻干鸡卵清蛋白腹腔注射致敏小鼠,隔天1次,共3次,末次致敏后14 d,尾静脉攻击相同的致敏原,观察小鼠的全身发病情况,记录发病指数.结果 牛血清白蛋白的致敏效果差,猪血清和鸡卵清蛋白致敏效果好,但是反复冻融后的猪血清致敏效果较猪血清效果显著性降低(P<0.05).鸡卵清蛋白的致敏浓度选择结果,在5 mg/ml的攻击浓度下,动物的发病指数0.5 mg/ml致敏浓度组高于0.25 mg/ml剂量组和1 mg/ml剂量组.结论 鸡卵清蛋白更适合用于卡介菌多糖核酸注射液效力试验的致敏原,佳的致敏浓度和攻击浓度分别为0.5mg/ml和5mg/ml.
-
氯霉素全抗原结合比的定量检测研究
目的 探讨简便、快速定量检测氯霉素(CA)全抗原结合比的方法.方法 以牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,采用混合酸酐法将之与氯霉素琥珀酸酯(CA-HS)偶联,合成CA-BSA全抗原.应用紫外分光光度法对CA-BSA 全抗原进行定性鉴定;分别采用自行改进的三硝基苯磺酸(TNBS)法和紫外分光光度法对CA-BSA 全抗原结合比进行定量检测.结果 紫外分光光度法检测显示CA-BSA 的大吸收峰高于相同蛋白浓度的BSA 大吸收峰,表明CA-BSA 全抗原偶联成功.TNBS 法测得的CA-BSA 全抗原结合比为26,紫外分光光度法测得的CA-BSA 全抗原结合比为23,两种方法的检测结果基本一致.结论 TNBS 法和紫外分光光度法用于氯霉素全抗原结合比的定量检测均具有快速、灵敏、方便和可靠的特点.TNBS 法对半抗原在紫外区无吸收的全抗原结合比测定也可以胜任,因此适用范围更为广泛.
