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宁夏及其周边地区博尔纳病病毒感染的分子流行病学研究
目的探讨博尔纳病病毒(BDV)在宁夏及其周边地区的流行状况.方法采用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测了52例病毒性脑炎(VE)患者和32名健康人外周血液(PBMC)和脑脊液有核细胞(CSFMC)、53例抑郁症(DD)患者和360只绵羊PBMC中BDV p24基因片段,对阳性产物进行基因序列测定、同源性和氨基酸顺序分析;并绘制系统发生树,分析BDV感染的分子流行病学特点.结果BDV p24基因片段阳性率在VE患者CSFMC为11.54%、DD患者PBMC11.32%明显高于健康人0%(P＜0.05);绵羊的PBMC为7.78%与健康人对比差异无统计学意义(P＞0.05);系统发生树图形表明,绵羊PBMC目的基因片段与人类VE和DD核苷酸序列亲缘关系近,来源于一个分支,并与德国H1766病毒株核苷酸序列亲缘关系近,其变异性较小.结论宁夏及其周边地区部分VE、DD可能与BDV感染有关,健康绵羊存在BDV的自然感染,其流行可能具有一定的地域局限性;人类VE、DD的BDV感染可能存在潜在动物源性,有待于进一步研究.
关键词： 病毒性脑炎 博尔纳病病毒 巢式逆转录酶荧光定量PCR -
新疆伊犁地区不同品种犬博尔纳病病毒自然感染调查
目的 调查新疆伊犁地区不同品种犬博尔纳病病毒(BDV)流行现状和分析其可能的种系来源.方法 采用改进的巢式反转录PCR(nRT-PCR)方法,检测犬外周血单核细胞(PBMCs)BDV磷蛋白(p24)RNA基因片段.用BDV核蛋白(p40)RNA片段和质粒PMD19标准品验证p24阳性产物,排除可能的假阳性.验证后的阳性产物进行基因测序、同源比对、氨基酸序列和系统发生学分析.结果 8个品种150只犬中,仅哈萨克牧羊犬检出BDV p24片段,阳性率为11.0%(10/91).基因序列与德国马He/80和德国绵羊S6病毒株同源相似度分别为99.2%和95.7%,氨基酸相似度为100%和89.3%,亲缘关系与He/80近,其次为S6.结论 新疆伊犁地区哈萨克牧羊犬可能存在BDV自然感染,其流行株与该地区伊犁马感染的He/80和引进德国美利奴绵羊的S6病毒株有关.
关键词： 博尔纳病病毒 磷蛋白RNA 巢式反转录-聚合酶链反应 TaqMan探针 犬 -
博尔纳病病毒感染与病毒性脑炎发病的关系
目的 检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)博尔纳病病毒(BDV)携带情况,分析BDV与标准病毒株之间的同源性.探讨BDV感染性疾病与不明原因病毒性脑炎之间的关系,同时也为部分病毒性脑炎的病因学诊断及其防治提供实验依据.方法 采用荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者及正常人PBMCs BDV p24基因片段,并对其中阳性扩增产物进行基因序列测定,然后采用BLAST软件以及DNAsist 5.0软件对测序结果进行分析.结果 病毒性脑炎组样本BDVp24基因片段FQ-nRT-PCR阳性率(10.17%)显著高于正常对照组(0%)(P＜0.05).病毒性脑炎患者检出BDVp24基因片段的核苷酸序列与马BDV标准病毒株H3915序列同源性为97.67%,与H1766株比较在3个位点出现一致性突变(nt1659 T→C,nt1668 A→G,nt1674 T→C;突变率为3.49%);与strain V株比较在4个位点出现一致性突变(nt1648 C→T,nt1658 G→A,nt1667 A→G,nt1673 T→C;突变率为4.65%),但编码的氨基酸相同.证实扩增所得目的 基因片段确系BDV p24的相应片段.结论 宁夏地区不明原因病毒性脑炎患者中存在BDV感染,提示部分不明原因病毒性脑炎的发生可能与BDV感染有关.且该BDVp24扩增产物核苷酸序列与标准病毒株高度同源性,与马源strain H3915同源性高.
关键词： 博尔纳病病毒 病毒性脑炎 荧光定量巢式反转录酶聚合酶链反应 -
宁夏地区人畜BDV p24基因系统发生树构建和序列分析
目的 了解宁夏及其周边地区博尔纳病病毒(BDV)的感染状况和基因特征及其种系发生来源.方法 采用巢式反转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR),检测119例病毒性脑炎(VE)患者和其密切接触的患病或健康牛205头、绵羊978只及脑血管病患者46例、多发硬化患者13例的外周血单核细胞BDVp24片段,检出的阳性序列连同前期检出的宁夏绵羊、VE患者和抑郁症患者阳性BDVp24基因序列与GenBank中5个国家7个动物种属29例BDVp24基因序列进行比对,分析其核苷酸和氨基酸序列的同源性,重新构建基因系统发生树.结果 23例阳性检测标本连同3例前期检测序列基因聚合分析显示核苷酸之间的同源相似度为96.5%～100.0%,氨基酸的同源相似度为95.3%～100.0%.与德国马源性标准株HE80同源相似度较高.构建基因的系统发生树发现宁夏绵羊、VE患者和抑郁症患者同德国马和绵羊、奥地利马都各自形成了独立的支系,其余样本形成混合支系,其中宁夏的VE患者、牛、绵羊同德围马、日本绵羊形成德国-中国宁夏-日本混合支系.结论 宁夏及其周边地区人和动物BDV的感染,存在区域源性BDV独立株和国外传人基冈保守株的多源状态.
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新疆伊犁地区马群中博尔纳病病毒自然感染调查
目的 了解新疆伊犁地区马群中博尔纳病病毒(BDV)的流行状况,分析该病毒的种系来源.方法 采用改进的巢式反转录PCR(nRT-PCR)方法对新疆伊犁地区120匹马的外周血单个核细胞(PBMC)及脑组织中的BDV p24基因片段进行检测,对阳性产物进行基因序列测定和同源性分析.结果 有3匹马外周血和腩组织中同时检测到BDV,阳性率为2.5%(3/120).扩增产物序列与其他国外马源BDV分离株同源性>93%,与标准株He/80同源性达到98%以上.结论 新疆伊犁地区马群中存在BDV的自然感染.该地区BDV流行株与标准株He/80存在高度的同源性.
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博尔纳病病毒的转录、复制特点和机体抗病毒反应
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是引发新发神经系统感染性疾病病原体的一种,是一种非细胞溶解性,嗜神经性核糖核酸病毒.该病毒具有广泛的感染宿主,能感染从鸟类到灵长类的多种动物,并造成Borna病(Borna disease,BD),[1]临床以中枢神经精神行为功能障碍为特征,早期主要表现为行为改变、易激惹、步态紊乱,终末期表现为认知障碍、记忆丧失、抑郁、共济失调和部分麻痹等,但大多数感染动物为无症状性感染.
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博尔纳病病毒及其分子生物学研究进展
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是一种嗜神经病毒，它能引起动物的进行性脑脊髓灰质炎（博尔纳疾病[1，2]。）
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用蛋白印迹试验检测精神分裂症患者血清中博尔纳病病毒-p24抗体的研究
目的探讨博尔纳病病毒(BDV)感染在我国的流行情况及其与精神分裂症的相关性.方法在对优化表达的GST-BDV-p24融合蛋白进行特异性鉴定的基础上,通过确定融合蛋白与第一抗体、第二抗体间的佳反应条件,建立可行的检测BDV-p24特异抗体的蛋白印迹(Western-blot)方法,进而对黑龙江地区精神分裂症患者和正常人对照血清中BDV-p24特异性抗体进行了检测,并通过血清-GST蛋白吸收后Western-blot实验对阳性血清进行了确认.结果 116例精神分裂症患者中检出BDV-p24阳性血清10例,阳性检出率为8.6%,而正常人血清标本中未检出阳性.结论我国存在博尔纳病病毒的感染,博尔纳病病毒的感染可能与精神分裂症的发生有关.
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新疆伊犁地区动物脑组织博尔纳病病毒p24基因片段的检测
目的 了解新疆伊犁地区动物脑博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染现状,分析该病毒的种系来源,预防我国BDV大规模暴发流行.方法 采用巢式逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法,对新疆地区200匹马、75头驴和100只牧羊犬脑组织标本进行BDVp24基因片段的检测.并对阳性标本进行BDV p40基因片段扩增电泳,同时排除GFP-p24和pMD-19质粒污染,后克隆测序,进行基因同源性和氨基酸序列分析并分析BDV种系发生.结果 3例伊犁马、4例伊犁驴和9例牧羊犬的脑组织标本BDV p24检测阳性,阳性率分别为1.5%、5.3%、9.0%;BDV p40基因片段检测和质粒标准品GFP-p24、pMD-19检测均为阴性;BDV p24扩增产物序列与He/80株的同源性为100%.结论 新疆伊犁地区马、驴和狗可能存在BDV脑内的自然感染,该地区BDV流行株与He/80株存在同源性.
关键词： 博尔纳病病毒 巢式逆转录荧光定量PCR 脑组织 新疆伊犁地区 -
博尔纳病病毒与慢性格林-巴利综合征
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是单股负链RNA病毒,能引起多种动物持续性中枢神经系统感染,导致免疫介导的脑脊髓炎,并与某些人类神经精神疾病有关.本研究旨在探讨BDV感染与格林-巴利综合征(GBS)发病的关系.
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临床病毒性脑炎标本的博尔纳病病毒核酸检测
目的 探讨临床病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)患者与博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染的关系,分析BDV感染的病毒性脑炎患者临床特征.方法 用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)方法检测病毒性脑炎患者及非感染性疾病施行蛛网膜下腔阻滞麻醉的手术患者脑脊液单个核细胞(cerebrospinal fluid mononuclear cell,CSFMC)中BDV p24基因片段,同时用β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,脑脊液(CSF)阳性标本基因测序分析并总结出临床特征.结果 32例病毒性脑炎脑脊液标本BDV p24基因片段检出率为12.5%(4/32),拷贝数＞102/μl.对其中一份CSF阳性标本测序后,与BDV标准病毒株Ⅴ和马源的BDV病毒株H1766序列比较同源性分别为95.35%和98.84%.在4个位点出现基因突变(nt1649 T→C、nt1656 G→A、nt1670 C→T、nt1676 C→T).该目的基因片段与马源的BDV病毒株亲缘关系近.阳性脑炎患者主要以精神行为异常为临床特征.结论 贵州省遵义市部分病毒性脑炎的发生与BDV感染有关,主要以精神行为异常为临床特征.
关键词： 病毒性脑炎 博尔纳病病毒 荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应 -
博尔纳病病毒ORFⅠ基因中部片段的检测
目的通过对中国神经精神病人外周血单个核细胞(PBMC)中博尔纳病病毒(BDV)ORFⅠ中部片段的检测,了解BDV ORFⅠ基因中部片段是否为检测BDV感染敏感的标记物. 方法用套式逆转录聚合酶链反应(nested RT-PCR)同时检测60例BDV感染阳性或阴性的神经精神病人以及60例健康献血者的PBMC中BDV ORFⅠ(P40)基因中部片段. 结果 4例BDV感染阳性的神经精神病人的检测结果均为阳性. 结论该研究结果提示,感染人体的BDV在病毒ORFⅠ基因片段的中间部分存在着高度的保守性,该片段可能是证实BDV感染的另一敏感性的标记物.
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多发性硬化患者博尔纳病病毒p24基因片段的检测
博尔纳病病毒(Boma disease virus,BDV)是引发神经系统感染性疾病病原体的一种.我国重庆、哈尔滨、贵州等地区在病毒性脑炎、抑郁症、精神分裂症、帕金森病等部分疾病患者血液和脑脊液中检出过BDV,但多发性硬化(multiplesclerosis,MS)患者中未见报道.我们在13例MS患者外周血单个核细胞(PBMC)中检测BDV-p24基因片段,2例阳性,报道如下.
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精神分裂症患者血液标本检测博尔纳病病毒核酸
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是一种高度嗜神经的RNA病毒.近年研究发现BDV可能与精神分裂症(schizophrenia,SCH)的发病有关,但对此存在较多争论.本研究通过检测SCH患者外周血单个核细胞(PBMC)中BDVp24核苷酸片段来探讨BDV感染与SCH发病的关系.
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新疆伊犁地区马和驴博尔纳病病毒自然感染的调查
目的 调查新疆伊犁地区伊犁马和伊犁驴博尔纳病病毒(Boma disease virus,BDV)流行现状,分析BDV种系来源.方法 采用荧光定量巢式实时逆转录聚合酶链反应(fluorescence quan-titative nested RT-PCR,FQ-nRT-PCR),对新疆伊犁地区518匹伊犁马和206头伊犁驴外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cell,PBMC)进行BDV p24基因片段检测.对榆测阳性结果 的标本通过BDV p40和质粒标准品的检测进行进一步验证并测序,对其进行基因同源性、氨基酸序列和系统发生分析.结果 5例伊犁马和4例伊犁驴血标本BDV p24榆测阳性,阳性率分别为0.97%和1.94%;9例标本BDV tn0片段检测均阳性,质粒标准品榆测均阴性;BDV p24扩增产物序列与He/80株的同源性为100%.结论 新疆伊犁地区伊犁马和伊犁驴中可能存在BDV的自然感染,该地区BDV流行株与He/80株存在同源性.
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博尔纳病病毒感染和帕金森病
博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)是非溶细胞性嗜神经病毒,能感染多种动物并引起中枢神经系统功能障碍为特征的博尔纳病(Borna disease, BD)[1].我们在进行中国人神经精神疾病与BDV感染关系的研究中,在7例帕金森病(PD)患者周围血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC )中检出BDV P24基因片段1例.现初步报道,并探讨BDV感染与PD发病的可能关系.
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不明原因的颅内感染与博尔纳病病毒感染的研究
目的 分别检测不明原因的颅内感染患者外周血单个核细胞(PBMCs)和脑脊液有核细胞(CSFMCs)中博尔纳病病毒(BDV)p24基因,探讨不明原因颅内感染患者与BDV感染的关系及阳性患者的临床特征.方法 用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)方法检测不明原因颅内感染患者及对照者PBMCs或CSFMCs中BDV p24基因片段,同时用β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,并总结阳性患者的临床特征.结果 PBMCs中BDV p24基因片段检测结果显示,实验组7例阳性,对照组均为阴性,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组进行CSF检查的32例颅内感染患者中4例外周血和CSF标本BDV p24基因片段检测均为阳性,阳性基因片段产物测序后与BDV标准病毒株V和马源的BDV病毒株H1766序列比较,结果同源性分别为95.35%和98.84%,在4个位点出现基因突变(nt1649 T→C,nt1656 G→A,nt1670 C→T,nt1676 C→T);7例BDV p24基因片段阳性患者主要以精神行为异常为起病方式,患者与动物关系密切,其他临床特征无特殊.结论 贵州省遵义市部分不明原因颅内感染的发生与BDV感染有关,主要以精神行为异常为临床特征.
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博尔纳病病毒与人类神经精神疾病
博尔纳病(Borna disease)是一种中枢神经系统感染性疾病,表现为明显的行为、情感异常,炎症细胞在中枢神经系统内浸润及特异性的病毒蛋白在边缘系统中积聚.该病的病原体为博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV).初认为BDV仅感染马,现证实它具有广泛的温血宿主群,包括绵羊、牛、猫及鸵鸟等[1-5].近年来,BDV的抗原、特异性抗体及RNA已频繁地在神经精神疾病患者的外周血单核细胞(PBMCs)和脑组织中被检测到,并在PBMCs和脑组织中已成功分离出病毒体.这些研究结果显示,此"动物病毒"同人类的神经精神疾病的发生和发展存在着密切的联系[6-9].
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博尔纳病病毒的研究进展
博尔纳病病毒（ BDV）是在人与哺乳动物间自然传播的一种动物病原体，人体感染BDV后可导致病毒相关基因组发生变化。目前，随着BDV检测方法的不断发展，检测出的BDV感染例数不断增加，给患者及社会带来沉重的经济负担。本文对BDV的流行病学、病原学、治疗及预防进行综述，为临床提供参考。
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博尔纳病病毒磷蛋白细胞模型的构建与鉴定
目的 建立博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白的细胞模型,并对所建模型进行鉴定.方法 重新扩增和鉴定已有的BDV 磷蛋白(GFP-P24)质粒,使用转染试剂将该质粒转入PC12细胞,并用荧光定量PCR和ELISA的方法对所构建的细胞模型进行鉴定.结果 重新扩增的质粒PCR鉴定阳性,其浓度符合转染的需要,测序后未发现核苷酸的突变;转染PC12细胞的效率高,荧光定量PCR和ELISA检测均为阳性.结论 成功构建了BDV磷蛋白的细胞模型,为研究BDV感染过程中磷蛋白所起的作用奠定了基础.
