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草酸铂对CHO细胞系野生型AA8和突变型UV20的DNA损伤作用
目的 探讨交叉互补集团1基因(ERCC1)蛋白在草酸铂毒性作用的影响,找寻草酸铂药物抵抗性的关键因子.方法 中国仓鼠卵巢细胞系野生型AA8以及ERCC1表达缺失型UV20可以作为细胞对照模型.SRB细胞抑制率实验、改良彗星实验、Rad51免疫荧光实验评价草酸铂染毒后不同时点的DNA损伤程度.结果 AA8和UV20对草酸铂的敏感性不同,IC50相差近16倍.改良彗星实验和Rad51免疫荧光实验同时表明,AA8与UV20相比,具有修复草酸铂所致DNA损伤能力.结论 ERCC1蛋白具有重要的核酸内切酶功能,对于修复草酸铂所致DACH-Pt-DNA加合物具有重要意义.
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1-02 塞替派诱发永生化人支气管上皮细胞的恶性转化*
目的研究塞替派对人类上皮细胞的致癌转化效应.方法利用永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为基本细胞模型,首次进行了塞替派诱导BEAS-2B细胞的恶性转化实验;平行于细胞的转化进程研究了塞替派转化细胞(BEAS-TE)的增殖动力学、细胞周期和锚着独立生长能力等转化表型特征.结果经传代和软琼脂培养基筛选BEAS-TE已具有较为稳定的转化表型和细胞生物学特性,可能是具有较强裸鼠致瘤性的恶性转化细胞.结论塞替派对人支气管上皮细胞具有较强的恶性转化效应.
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1-04 反式BPDE诱导人支气管上皮细胞恶性转化
目的探索苯并(a)芘代谢物反式BPDE诱导人支气管上皮细胞16HBE转化的理想实验方案,构建恶性转化的细胞模型,为后期进一步研究其致癌分子机制提供理想的材料.方法细胞存活率试验及克隆形成率试验确定诱导的剂量,以不同剂量反式BPDE 1次或多次处理细胞,观察培养的不同阶段转化灶出现情况,用软琼脂培养鉴定其锚着依存性生长的恶性特征,比较各组转化细胞的集落形成率.结果以0.1、0.5、1.0、2.0 μmol/L的剂量,对细胞多次间断染毒,传代15次,是反式BPDE诱导16HBE细胞恶性转化的理想方案.其集落形成率分别为2.0‰o、5.5‰、7.0‰、10.5‰,剂量-反应关系呈现良好的直线相关,r=0.974 1.结论反式BPDE能诱导人支气管上皮细胞16HBE转化,构建理想的恶性转化的细胞模型.
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转基因食品致敏性评价细胞模型研究进展
随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一.目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评价的现状,重点对细胞模型方面的研究进展进行了综述.
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人骨肉瘤多药耐药细胞模型的建立
目的:建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系.方法:采用ADM间断冲击法,将MG-63暴露于ADM中,残留存活细胞克隆、扩增建系,并用FITC标记的P-gp抗体检测Mdrl表达情况,用MTT、ABA法及流式细胞术检测肿瘤细胞的耐药特征.结果:本实验建立了六株P-gp表达阳性多药耐药细胞亚系:MG-63/R1、MG-63/R2、MG-63/R3、MG-63/R4、MG-63/R5、MG-63/R6.用免疫荧光术可以检测到P-gp的表达,用MTT可见各亚系细胞相对于亲本细胞对ADM耐药分别增至1.6、4.8、11.8、33、49.2、71.5倍.ABA法显示诱导产生的细胞亚系细胞内ADM累积能力明显下降,这说明Mdrl表达P-gp增加,并用维拉帕米拮抗P-gp的作用,可见细胞内ADM累积能力不同程度上升,柔红霉素荧光直方图可见肿瘤细胞的耐药程度越来越高.结论:MDR1/P170在骨肉瘤的多药耐药的特性上起着至关重要的作用,而且这些骨肉瘤多药耐药细胞亚系为进一步研究骨肉瘤多药耐药的生物学特征及发展新的逆转多药耐药的药物打下基础.
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由Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的探讨
目的:探讨Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的作用.方法:利用细胞计数、MTT方法、免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法观察Aβ片段神经毒性对NG108-15细胞的存活率、形态学、胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率的影响.结果:Aβ片段毒性可诱导NG108-15细胞死亡、抑制细胞突起;降低ChAT活性和突触素水平;减少功能性突触的形成.结论:Aβ片段神经毒性可诱导NG108-15细胞产生老年性痴呆相似的病理生理损害.
关键词： Aβ片段 NG108-15细胞 细胞模型 -
由Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的探讨
目的:探讨A β片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的作用.方法:利用细胞计数、MTT方法、免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法观察A β片段神经毒性对NG108-15细胞的存活率、形态学、胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率的影响.结果:A β片段毒性可诱导NG108-15细胞死亡、抑制细胞突起;降低ChAT活性和突触素水平;减少功能性突触的形成.结论:A β片段神经毒性可诱导NG108-15细胞产生老年性痴呆相似的病理生理损害.
关键词： Aβ片段 NG108-15细胞 细胞模型 -
缺氧盒在建立新生鼠神经干细胞缺氧细胞模型中的应用
目的 探讨缺氧盒在建立新生鼠神经干细胞(NSCs)缺氧细胞模型中的应用. 方法 取2只购自中国人民解放军军事医学科学院、健康、新生1d、体重分别为8 g、9 g、雌雄不限的SD大鼠海马在无血清培养基进行NSCs原代培养并传代,分为两组.缺氧组通入5% CO2+95% N2混合气体,并将培养基更换为无糖培养基,缺氧时间分别为30 min、1h、2 h,在各时相点观察细胞形态学变化,并进行台盼蓝细胞计数和细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测NSCs细胞活性,后迅速复氧、更换无血清培养基,复氧复糖24 h、72 h.常糖常氧为对照组.结果 与对照组比较,缺氧30 min后NSCs死亡细胞数和细胞活性组间差异无统计学意义;缺氧1h、2 h NSCs死亡细胞数明显增多,NSCs细胞活性明显降低,组间差异有统计学意义;死亡细胞数随着缺氧时间的延长而增多;复氧复糖24 h、72 h后细胞活性降低,差异具有统计学意义. 结论 缺氧盒可以成功建立新生鼠 NSCs 缺氧细胞模型.
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生物标志物和细胞模型在环境与健康研究中的意义
环境与健康研究跨越从微观分子水平到宏观生态领域.目前,科学家们对人类大多数疾病是环境与机体交互作用的结果已达成共识.环境因素对机体的作用表现在不同水平的损伤效应,例如分子水平的基因和蛋白质结构和功能的改变、细胞结构损伤和功能紊乱、器官功能的紊乱.
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抗脑损伤中药药效学的体外评价方法概述
收集国内近10年抗脑损伤中药药效学体外实验研究方法的相关文献，并对其进行归纳和总结。研究发现，抗脑损伤中药药效学体外评价主要采用血清或脑脊液药理学的实验方法，常选用的细胞模型有β-淀粉样蛋白毒性模型、低糖低氧模型、1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP＋)毒性模型等，选用的评价指标有病理学、神经细胞凋亡、脑能量代谢及神经细胞氧化应激指标等。科研工作者对中药药效进行评价时，需根据实验目的确定恰当的实验模型和检测指标。
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逍生散对干眼角膜上皮细胞损伤模型的干预研究
目的 观察逍生散对干眼角膜上皮细胞损伤模型的干预作用,探讨逍生散治疗干眼的作用及分子作用机制.方法 人角膜上皮细胞加入苯扎氯铵溶液制备得干眼角膜上皮细胞损伤模型,加入低、中、高剂量逍生散含药血清和空白对照血清孵育后,分别于作用24小时、48小时、72小时时行光镜观察,检测细胞活性、细胞凋亡及角膜上皮细胞中IL-1、IL-6、TNF-α、MMP-9细胞因子的表达情况.结果 中药中、高剂量组能明显抑制细胞体积增大、细胞松解及间隙变大,减少细胞脱壁及溶解、坏死,减少细胞凋亡;中药中、高剂量的细胞活性值和其他组差异有统计学意义(P＜0.05);中药中、高剂量组检测IL-1、IL-6、TNF-α及MMP-9的表达相对较低(P＜0.05),且呈现随药物浓度增加,抑制炎症因子效果相对越好的结果.结论 逍生散含药血清中、高剂量组能明显升高细胞活性;减少细胞凋亡;逍生散可能通过降低IL-1的产生,进而降低产生IL-6、TNF-α等炎症因子以及可能通过降低IL-1的产生,调控MMP-9的数量和活性,发挥保护角膜上皮细胞的作用.
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基于RAW264.7抗炎细胞模型对红活麻活性部位的筛选及其化学成分研究
目的 研究红活麻的抗炎活性部位及其化学成分.方法 萃取法制备不同极性部位,采用脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,检测红活麻不同提取部位对NO释放量的影响,考察其抗炎活性;采用硅胶柱色谱和ODS柱色谱技术对红活麻抗炎活性部位的化学成分进行分离纯化,运用波谱分析技术鉴定化合物结构.结果 利用SAS 9.30软件对给药组和LPS组NO的含量进行t检验,比较组间是否存在差异;与LPS组相比,石油醚部位对NO的释放量影响不明显(P<0.05).二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位在浓度为15.5、31.25、62.5 μg/mL时,均表现出对NO释放量有一定的影响,且差异具有统计学意义(P>0.05).当给药浓度都在62.5 μg/mL时,石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位分别对NO释放量的抑制为11.42%、21. 01%、33%、26.96%,故乙酸乙酯部位对NO释放量影响大,且具有剂量依赖性;从红活麻乙酸乙酯部位 中 分 离 得 到7个 化 合 物,分 别 鉴 定 为:(1)β-Sitosterol;(2)5-Hydroxymethyl-2-furancarboxaldehyde;(3)4-hydroxy-5-methoxy-benzoic acid;(4)Isomeranzin;(5)Dioctyl phthalate;(6)Dibutyl phthalate;(7)Caffeic acid.结论 乙酸乙酯部位为红活麻抗炎活性部位.2,4,5,6为首次从该属中分离得到,7为首次从该植物中分离得到.
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细胞模型发展现状及应用于中药研究的探讨
细胞模型早被用来筛选抗微生物药物,随着高通量药物筛选的需要,细胞模型迅速发展成熟起来.该文综述细胞模型在药物高通量筛选和高通量毒性筛选中的应用,介绍利用Caco-2细胞模型进行药物体外代谢研究.并对细胞模型用于中药研究的前景进行分析,简单探讨了细胞模型用于中药筛选,活性成分确定,药理研究和药物代谢分析的可能方面.
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胰岛素抵抗细胞模型概况
糖尿病是世界范围的常见的流行性疾病之一,其病死率在发达国家仅次于心血管疾病、恶性肿瘤,成为第三位致死疾病.糖尿病是由于胰岛素在体内的绝对或相对不足而引起的糖、脂肪及蛋白质代谢紊乱的疾病,主要分为胰岛素依赖型糖尿病(Ⅰ型即DIDM)和非胰岛素依赖型糖尿病(Ⅱ型即NIDDM),其中Ⅱ型约占90%以上[1].Ⅰ型糖尿病主要是胰岛B细胞的损伤导致胰岛素分泌不足引起.Ⅱ型糖尿病胰岛素分泌正常甚至超过正常量,但机体对其不敏感即产生了胰岛素抵抗.
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老年性痴呆疾病模型的建立
整理近年来老年性痴呆(alzheimer's disease,AD)动物模型相关资料,介绍AD模型的建立方法:物理的损伤方法建立AD模型、化学损伤建立AD模型、多因素综合致病模型、转基因AD动物、自然衰老AD动物等.通过文献整理发现,AD模型建立方法多样,每一动物或细胞模型都各有其优缺点,且建模机制不同,研究者应根据个人研究需要选择和建立合适的AD动物及细胞模型.
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基于脂多糖诱导人冠状动脉平滑肌细胞炎性活化的热毒生风型络风内动细胞模型构建
目的:利用脂多糖(LPS)诱导体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC) TLR4-MyD88炎性反应通路活化,建立热毒生风型络风内动细胞模型,为络风内动研究平台的科学化寻求新突破.方法:体外原代培养HCASMC,MTT法检测不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、5、10、100μg/mL)LPS对HCASMC活力的影响,筛选出HCASMC活力在98％以上的LPS无毒性浓度范围.ELISA法检测无毒性浓度范围内LPS作用不同时间(6、24、48h)对细胞上清IL-6、TNF-α和IL-1β释放水平的影响,筛选出小范围LPS干预浓度和作用时间,RT-PCR法对IL-6、TNF-α、IL-1β、TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA进行半定量检测,Western Blotting法检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达变化,确定终造模条件.结果:LPS在5、10、100μg/mL浓度时细胞活力＜98％,其余浓度均可促进HCASMC生长;0.5、1μg/mL LPS干预24、48h都可显著诱导产生炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α(P＜0.05);1μg/mL LPS作用48h可大程度激活TLR4-MyD88炎性反应通路下游因子基因和蛋白表达(P＜0.05).结论:1μg/mL LPS干预HCASMC 48h可保证HCASMC处于持续的高炎性活化状态,可作为热毒生风型络风内动细胞模型的佳造模条件.
关键词： 热毒生风型络风内动 人冠状动脉平滑肌细胞 脂多糖 炎性反应通路 细胞模型 -
从中西医结合角度建立类风湿关节炎的细胞和动物模型
随着对类风湿关节炎研究的深入,类风湿关节炎细胞模型和动物模型被广泛运用于类风湿关节炎发病机制研究和抗类风湿新药的研发.细胞模型和动物模型模拟人类疾病状态的程度以及评价方法的可靠性和准确性直接影响实验研究结果的价值.查阅相关文献,从造模方法、造模机制、评价指标及方法优劣等方面对类风湿性关节炎的实验模型进行综述,为建立与人类类风湿性关节炎高度相似的类风湿性关节炎模型提供参考.
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PC12细胞作为氧化应激细胞模型的研究进展
在正常机体内,活细胞可以从不同来源持续产生自由基,如线粒体从电子传递链释放自由基,信号转导剂氧化亚氮等形成活性的亚硝基自由基,氧化还原反应中活化的金属通过Fenton反应和Haber-Weiss反应产生自由基,当种种原因导致体内过氧化氢( H2 O2)、一氧化氮(NO)、过氧自由基O2-等各种活性氧化物(reactive oxygen species,ROS)超过了机体内源性的抗氧化能力,则引起机体内氧化/抗氧化系统平衡失调,发生氧化应激损伤[1].多方面的神经病理学研究显示,神经退行性疾病的发生与供体的氧化产物水平增加有密切关系[2-5],因为脑和神经内含有大量的脂质、耗氧量较高,而神经元不能分裂,所以ROS蓄积引起的损伤有可能是疾病发生发展的重要诱因.
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从病证结合角度分析血瘀证血管内皮细胞损伤模型的研究
从病证结合的角度探讨和分析了血瘀证血管内皮细胞损伤模型的研制种类、方法和未来的研究前景,认为血瘀证细胞模型的研究中应该体现"病""证"结合的特点,走"微观"之路,应"宏观"之理,才能成为活血化瘀药物筛选中的重要技术平台,并为中医证候模型的研究提供有益的探索.
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络风内动模型构建的思路与方法
络风内动是针对急性心脑血管事件中西医结合防治策略进行创新性思考和探索之后提出的病机学说,认为在络脉为病过程中出现动风征象即为络风内动.基于络风内动病机学说,从动物、细胞和细胞内超微结构三个层面,多视角、多维度阐释络风内动模型载体构建理念,并结合相关研究的新近的实践研究结果,全面整合研究思路,为实现络风内动研究平台的科学化和标准化寻求新突破.
