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由Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的探讨
目的:探讨Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的作用.方法:利用细胞计数、MTT方法、免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法观察Aβ片段神经毒性对NG108-15细胞的存活率、形态学、胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率的影响.结果:Aβ片段毒性可诱导NG108-15细胞死亡、抑制细胞突起;降低ChAT活性和突触素水平;减少功能性突触的形成.结论:Aβ片段神经毒性可诱导NG108-15细胞产生老年性痴呆相似的病理生理损害.
关键词： Aβ片段 NG108-15细胞 细胞模型 -
由Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的探讨
目的:探讨A β片段神经毒性诱导NG108-15细胞建立老年性痴呆细胞模型的作用.方法:利用细胞计数、MTT方法、免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法观察A β片段神经毒性对NG108-15细胞的存活率、形态学、胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率的影响.结果:A β片段毒性可诱导NG108-15细胞死亡、抑制细胞突起;降低ChAT活性和突触素水平;减少功能性突触的形成.结论:A β片段神经毒性可诱导NG108-15细胞产生老年性痴呆相似的病理生理损害.
关键词： Aβ片段 NG108-15细胞 细胞模型 -
温胆汤改良方对Aβ25-35诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响
目的:温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响.方法:温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立的AD细胞模型,镜下观察细胞生长状况,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化检测bcl-2、bax蛋白的表达.结果:与模型组比较,含药脑脊液组和含药血清组细胞凋亡率降低(p＜0.05),bcl-2表达无显著性差异(p＞0.05),bax蛋白表达减弱(p＜0.01),bcl-2/bax比值升高(p＜0.01).结论:温胆汤改良方能有效地抑制AD细胞模型凋亡,其作用机理可能与其干预凋亡相关基因bax的表达,升高bcl-2/bax比值有关.
关键词： Alzheimer病 脑脊液 NG108-15细胞 凋亡 温胆汤 -
补肾益智方拆方含药血清保护Aβ25-35损伤NG108-15细胞的研究
目的:研究中药补肾益智方拆方亚组的含药血清对AD细胞模型生长、分化等方面的影响,探讨该方药物的配伍规律.方法:将补肾益智方拆分为补肾组、益气养血组和去冰片组(即补肾组+益气养血组)等3个亚组,连同原方组共4组对大鼠灌胃给药分离药物血清.在含各组血清的培养液中,加入Aβ25-35,观察NG108-15细胞的生长状态、细胞增殖数、存活率,突起率及突起平均长度.结果:与AD细胞模型组相比,补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制Aβ25-35对细胞的损伤作用,但各组情况有所不同.各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组＞补肾益智方组＞补肾组＞益气养血组.结论:补肾药配伍益气养血药可增强对Aβ25-35损伤NG108-15细胞的保护作用,其中以补肾药的作用为主,方中冰片的功效有待进一步研究.
关键词： 阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 补肾益智方 NG108-15细胞 -
温胆汤改良方对Alzheimer病细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响
目的:探讨温胆汤改良方含药血清对AD细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响.方法:经老化处理的Aβ25-35(终浓度为5μmol/L)与NG108-15细胞共同孵育24h建立AD细胞模型,运用中药血清药理学方法,以温胆汤改良方含药血清作用于AD细胞模型,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,SABC免疫组化法检测p-JNK、p-c-jun蛋白的表达.结果:温胆汤改良方能显著性降低NG108-15细胞JNK、c-iun的表达,降低细胞凋亡率.与模型组比较,抑制剂组和含药血清组JNK、c-jun的表达降低有显著性意义(P＜0.05).结论:温胆汤改良方保护由Aβ25-35引起的NG108-15细胞损伤作用,可能与其作用于JNK信号转导通路有着密切的关系.
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补肾益智方对由Aβ片段神经毒性诱导NG108-15细胞老年性痴呆模型神经递质释放影响的研究
目的:观察补肾益智方对由Aβ片段神经毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆(AD)模型神经递质释放的影响.方法:利用免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法,观察补肾益智方含药血清处理Aβ片段神经毒性诱导的NG108-15细胞后的胆碱乙酰基转移酶(ChAT)活性、突触素蛋白(synapsin)水平及功能性突触形成率.结果:补肾益智方含药血清组ChAT活性和突触素蛋白水平高于正常对照血清组;含药血清能调节递质释放能力和提高功能性突触形成.结论:补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应,表明该方能拮抗AD的病理发展,并通过提高神经递质释放能力发挥对AD的治疗作用.
关键词： 补肾益智方 Aβ NG108-15细胞 神经递质 老年性痴呆模型 -
补肾益智方对AD细胞模型影响的研究
目的: 观察补肾益智方对由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆(AD)模型的影响. 方法: 利用细胞计数、 MTT及流式细胞仪测定等方法观察补肾益智方含药血清处理由Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞存活率、形态学及细胞周期的改变.结果: 补肾益智方含药血清能增加Aβ片段毒性诱导的NG108-15细胞存活率和细胞突起; 细胞增殖周期分析显示, 含药血清能增加S期细胞数. 结论: 补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应, 表明该方通过拮抗AD的病理发展而发挥对AD的治疗作用.
关键词： 补肾益智方 Aβ NG108-15细胞 -
三七总皂苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤的保护作用
目的:观察三七总皂苷(PNS)对由Aβ25-35片段神经毒性诱导的NG108-15细胞老年性痴呆模型保护作用的影响.方法:利用MTT法、细胞计数法和细胞形态学检测法观察PNS对NG108-15细胞存活率和细胞突起的改变.结果:PNS能增加Aβ25-35片段神经毒性诱导的NG108-15细胞存活率、细胞突起率和细胞突起平均长度.结论:PNS具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应和促进细胞突起生长的作用,表明PNS能对老年性痴呆的病理发展有拮抗作用.
关键词： 三七总皂苷 Aβ片段 NG108-15细胞 老年性痴呆细胞模型 -
褪黑素对阿尔茨海默病样细胞总tau蛋白表达的影响
目的 建立冈田酸(OA)诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究褪黑素对此AD样细胞总tau蛋白表达的影响.方法 以OA处理NG108-15细胞建立AD样细胞模型,褪黑素进行干预,以免疫细胞化学及细胞免疫印迹技术观察细胞总tau蛋白表达的变化.结果 褪黑素可引起AD样细胞总tau蛋白表达明显升高.结论 褪黑素可升高AD样细胞总tau蛋白水平,起到拮抗AD的作用.
关键词： 褪黑素 冈田酸 阿尔茨海默病 NG108-15细胞 总tau蛋白 -
川楝素引起的NG108-15细胞和SK-N-SH细胞形态学变化
实验观察了NG108-15和SK-N-SH细胞在含川楝素的培养基中产生的形态学变化.(1)光镜下发现,川楝素可以引起NG108-15细胞突起变短甚至消失、胞体变圆、细胞萎缩、失去贴壁能力出现飘浮,数量逐渐减少;在有血清培养的情况下,川楝素引起SK-N-SH细胞间界限不清,无血清时,细胞出现飘浮现象.(2)电镜观察显示,川楝素引起NG108-15细胞和SK-N-SH细胞的死亡,大多数具有坏死细胞的特征,仅个别细胞的死亡具有典型凋亡细胞的特征.
关键词： 川楝素 NG108-15细胞 SK-N-SH细胞 -
Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在DPDPE长时程作用的NG108-15细胞中的作用
目的观察阿片类依赖时Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信息通路的变化,以及Ca2+/CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系.方法以NG108-15细胞作为体外的细胞模型,分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ-32P参入法以及RT-PCR测定cAMP水平、钙调蛋白(CaM)活性、CaMKⅡ活性和mDOR的mRNA表达水平的变化.结果 DPDPE长时程作用NG108-15细胞,cAMP水平升高,形成阿片依赖;细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高,该升高可被CaM拮抗剂W-7所抑制,而CaMKⅡ活性的升高可被CaMKⅡ特异性抑制剂KN-62所抑制.W-7或KN-62可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高.阿片依赖时,加入纳洛酮诱发戒断,CaM活性、CaMKⅡ活性进一步增高.而在阿片依赖时,δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化.结论 Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制.
关键词： 阿片类药物 NG108-15细胞 钙调蛋白 钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ -
冈田酸诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化过程中PTEN蛋白水平的变化
目的 探讨冈田酸(OA)诱导NG108-15细胞tau蛋白过度磷酸化过程中PTEN蛋白水平的变化.方法 20 nmol·L-1OA孵育NG108-15细胞不同时间(0,3,6,12,18,24,36,48 h),倒置显微镜观察细胞形态的变化,免疫印迹法观测各时间点Ser396位点磷酸化tau蛋白及PTEN蛋白水平的变化.结果 NG108-15细胞随OA孵育时间的延长逐渐出现细胞胞体变圆,突起回缩,悬浮生长.细胞Ser396位点磷酸化tau蛋白水平于OA作用6 h后显著升高,18 h达高峰,之后逐渐下降,但48 h仍高于基础水平;PTEN蛋白水平于3 h开始上升,18h达高峰,之后逐渐下降,12、18、24 h 3个时间点PTEN蛋白水平显著高于基础水平,36、48 h时间点PTEN蛋白水平与基础值比较差异无显著性.结论 OA诱导NG108-15细胞AD样发生中,PTEN蛋白水平可能升高.
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5-aza-cdr对低氧预适应神经细胞NG108的DNMTs表达的影响
目的：观察低氧预适应和DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase，DNMT）抑制剂5-氮-2＇脱氧胞苷（5-aza-2＇deoxycytidine，5-aza-cdR）对神经细胞系NG108-15的DNMTs表达的影响，研究DNA甲基转移酶抑制剂对重复低氧NG08-15细胞的神经保护作用的可能分子机制。方法 NG08-15细胞随机分为药物处理组（5-aza-cdR）和正常组（ control），每组又分为C组（未低氧）、H组（1％低氧处理8 h）和HP组（1％低氧/21％复氧4个循环后1％低氧预处理后低氧8h）处理，5-aza-cdR的浓度为10.0μM，Q-PCR检测DNMTs mRNA的表达。结果C，H和HP的DNMT1在5-aza-cdR和control组内和组间无显著性变化；在control组中，HP较H的DNMT3A mRNA表达降低（P﹤0.05），HP较C的DNMT3B mRNA降低（P﹤0.05）；5-aza-cdR组中，H较C和HP的DN-MT3B mRNA降低（P﹤0.05）；HP的DNMT3B mRNA在5-aza-cdR组和control组之间有差异（P﹤0.05）。结论单纯低氧预适应可以使 DNMT3A 和 DNMT3B mRNA 表达降低，5-aza -cdR ＋低氧预适应可以影响 DN-MT3BmRNA的表达。
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绞股蓝正丁醇部位含药血清体外对Aβ25-35诱导NG108-15细胞凋亡的抑制作用
目的:研究绞股蓝正丁醇部位含药血清在体外对Aβ25-35蛋白诱导NG108-15细胞凋亡的抑制作用.方法:采用细胞免疫荧光术、流式细胞术检测绞股蓝正丁醇提取部位含药血清对Aβ25-35蛋白诱导NG108-15细胞凋亡的影响,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测绞股蓝正丁醇提取部位含药血清对Aβ25-35蛋白诱导NG108-15细胞凋亡时胞内半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)的水平的影响.结果:绞股蓝正丁醇部位含药血清在体外能明显抑制Aβ25-35蛋白诱导的NG108-15细胞凋亡,降低细胞内Caspase-3水平.结论:绞股蓝正丁醇部位含药血清在体外对Aβ25-35蛋白诱导的NG108-15细胞凋亡有一定的保护作用,其机制可能与降低NG108-15细胞内Caspase-3水平有关.
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二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆细胞模型的佳条件筛选
目的 确定二苯乙烯苷含药血清作用于老年性痴呆(AD)细胞模型的佳条件.方法 利用细胞计数、MTT方法确立β淀粉样蛋白(Aβ)25-35片段在建立AD细胞模型时的浓度及筛选二苯乙烯苷含药血清作用的佳浓度,分别观察不同浓度血清及不同浓度Aβ25-35对AD细胞模型存活率的影响.结果 各种血清以5%浓度组的细胞存活率高.在5%血清浓度下,Aβ25-35 Oμmol/L和5μmol/L浓度组中各合药血清组细胞存活率均明显高于正常大鼠血清组(P<0.05或P<0.01),但在10μmol/L.Aβ25-35浓度时差异无显著性.结论 选用5μmol/L Aβ25-35及5%血清浓度建立NG108-15 AD细胞模型及药效考察体系较为合适,在此条件下能客观地评价二苯乙烯苷含药血清的药效.
关键词： 二苯乙烯苷 痴呆 老年性 β淀粉样蛋白 NG108-15细胞 -
二苯乙烯苷对Aβ25-35致NG108-15损伤的保护作用
目的 观察二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导损伤的NG108-15细胞生长、分化的影响.方法 以Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立痴呆细胞模型后加入二苯乙烯苷培养,观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度.结果 与细胞模型组相比,二苯乙烯苷组能在一定程度上抑制Aβ25-35对痴呆细胞的损伤作用,细胞生长状态良好,细胞存活率、突起率及突起平均长度与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的NG108-15细胞损伤具有保护作用.
关键词： 二苯乙烯苷 老年性痴呆 β淀粉样蛋白 NG108-15细胞 -
含二苯乙烯苷大鼠血清对NG108-15痴呆模型细胞的影响
目的:观察含二苯乙烯苷(TSG)血清对NG108-15痴呆模型细胞的影响.方法:分别用TSG(0.3 g·kg-1)、阳性对照药石杉碱甲(0.02 mg·kg-1)等灌胃大鼠10 d后分离相应的含药血清,以β淀粉样蛋白(Aβ)25-35诱导NG108-15细胞成为痴呆细胞后用相应的含药血清培养,观察NG108-15细胞的生长状态、存活率、突起率及突起平均长度,并与模型组比较.结果:无论在增殖相或分化相中,TSG组细胞生长状态均良好;在增殖相细胞中,TSG组、模型组存活率分别为89.1%、64.6%(P<0.01);在分化相细胞中,TSG组存活率为74.3%,细胞突起率为(50.83±6.66)%,突起平均长度为(21.52±5.19)μm,模型组分别为59.2%、(41.42±7.23)%、(15.59±4.54)μm(P<0.05或P<0.01),TSG组各指标与石杉碱甲组相近.结论:含TSG大鼠血清对Aβ 25-35诱导的NG108-15痴呆模型细胞损伤具有保护作用.
关键词： 二苯乙烯苷 含药血清 大鼠 痴呆模型 β淀粉样蛋白25-35 NG108-15细胞 -
5-aza-cdR对神经细胞NG108-15细胞周期的影响
目的:观察DNA甲基转移酶(DNA methyhransferase,DNMT)抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-aza-2'deoxycytidine,5-aza-cdR)对神经细胞系NG108-15细胞周期的作用,并探讨相关的机制.方法:NG108-15细胞用10 μmol/L 5-aza-cdR处理,RTCA分析细胞指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,8-PCR检测DNMTs及细胞周期相关基因CCND1和CCND2mRNA的表达.结果:5-aza-cdR能抑制NG108-15细胞的增殖,5-aza-cdR处理细胞后使细胞周期发生变化,同时使DNMT1的表达降低(P＜0.05),而DNMT3A和DNMT3B mRNA表达不变,并且CCND1和CCND2mRNA表达也不变.结论:10 μmol/L 5-aza-cdR可以抑制NG08-15细胞的增殖,其抑制作用可能是通过降低DNMT1表达实现的,这种抑制作用不影响CCND1和CCND2的表达.
关键词： NG108-15细胞 5-氮-2'脱氧胞苷 细胞周期 -
星形孢菌素诱导NG108-15细胞凋亡
目的:研究星形孢菌素是否能引起NG108-15细胞的凋亡及它对数种与凋亡相关基因蛋白表达水平的影响.方法:用相差显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察形态学变化；琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯带；免疫印迹法检测凋亡相关基因蛋白的表达水平.结果:经星形孢菌素0.1 μmol/L处理后NG108-15细胞呈典型的凋亡形态学变化.星形孢菌素处理后6 h即出现DNA凋亡梯带，可持续至24 h.Bax蛋白表达在星形孢菌素处理后6 h开始上升，12 h至高峰，24 h后下降.Bcl-2蛋白表达在星形孢菌素处理后3 h明显上升，随后逐渐下降.星形孢菌素处理后6 h可见caspase-3切割产物出现，但Cdk5蛋白的表达水平未见明显变化.p53蛋白表达在星形孢菌素处理12 h后下降.结论:星形孢菌素诱导了NG108-15细胞的凋亡，可能与Bax蛋白表达的增加及caspase-3切割有关，而与p53和Cdk5无明显相关性.
