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正常与异常子宫内膜中Bc1-2、Bax mRNA表达
为了解正常和异常子宫内膜中Bc1-2和Bax mRNA的表达及与凋亡的关系.应用原位杂交方法检测了27例正常子宫内膜,12例子宫内膜增殖症和10例癌变子宫内膜Bc1-2和Bax mRNA的表达情况.结果:正常子宫内膜组织腺细胞Bc1-2与Bax mRNA表达的比例与子宫内膜的周期性变化密切相关,Bc1-2 mRNA表达在增殖期增强,分泌期减弱,Bax mRNA表达则相反.增殖症和癌变子宫内膜组织中,Bc1-2和Bax mRNA表达呈正相关(rs＝0.886,P<0.05),随着子宫内膜由良性增生到恶性增生,Bc1-2 mRNA表达逐渐减弱至丧失表达;Bax mRNA在增殖症子宫内膜中,随着增生的异型化,表达逐渐增强,而在癌变子宫内膜中,随着病理分级的降低,表达逐渐降低.结论:Bc1-2和Bax基因对于维持正常子宫内膜周期性变化的平衡起着重要作用,在增殖症和癌变子宫内膜中表达的异常变化可能与子宫内膜癌生物学行为和预后相关.
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乌头类生物碱对bcl-2基因表达的影响
目的 研究鸟头类生物碱对大鼠视网膜神经细胞细胞增殖周期和bcl-2基因表达的影响,探讨乌头类中药神经毒性的作用机制.方法 体外培养大鼠视网膜神经细胞,分别以0.5%的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱作用细胞5min后,流式细胞仪检测.结果 与阴性对照组比较,乌头碱作用组G2/M期细胞比例从2.3%增加到19.5%,细胞增殖活动被抑制;而bcl-2基因表达量显著增加,表达荧光均值从0.78增加到1.45.新乌头碱和次乌头碱作用组结果与乌头碱类似.结论 在本试验条件下,bcl-2基因可能在乌头类生物碱的神经毒性作用机制中具有重要意义.
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氯化铝对大鼠皮层神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响
目的探讨氯化铝(AlCl3)对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及对bcl-2、bax基因表达的影响.方法体外原代无血清培养至第7天的大鼠皮层神经元,实验组的培养液中加入A1C13(终浓度分别为10、100、1000μmol/L),对照组的培养液中加入等体积分数为0.9%的生理盐水,培养48 h后,用原位末端标记法(TUNEL)测定其细胞凋亡率;培养24h后,用RT-PCR法检测bcl-2、bax基因的表达.结果各染铝组大鼠皮层神经元凋亡率明显升高,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05),并具有明显的剂量-反应关系;bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显升高,bcl-2/bax逐渐下降,与对照组相比,差异有显著性,也具有明显的剂量-反应关系.相关分析表明,大鼠皮层神经元凋亡率与bcl-2基因表达呈负相关,与bax基因表达呈正相关,而与bcl-2/bax呈负相关(P＜0.01).结论铝可以诱导大鼠皮层神经元凋亡,其机制可能与bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调以及bcl-2/bax下降有关.
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醋酸铅对大鼠脑细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响
目的探讨醋酸铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对bcl-2、bax基因表达的影响.方法 SD大鼠腹腔注射醋酸铅5 d,剂量分别为25、50、100 mg/kg体重,第6天取其大脑皮层、海马、小脑组织,用流式细胞仪分别测定其细胞凋亡率和bcl-2、bax基因的表达产物Bcl-2蛋白、Bax蛋白.结果各染铅组大鼠皮层、海马、小脑细胞凋亡率明显升高,与对照组相比差异具有显著性,并具有良好的剂量-反应关系;bcl-2基因表达(FI指数)明显降低,而bax 基因表达则明显增加,与对照组相比差异均具有显著性(P<0.01),并具有良好的剂量-反应关系.Bcl-2/Bax明显下降,与对照组相比差异具有显著性,并具有良好的剂量-反应关系.相关分析表明,大鼠大脑皮层、海马和小脑细胞凋亡率与Bcl-2含量呈负相关,而与Bax含量呈正相关,与Bcl-2/Bax呈负相关.结论铅可以诱发大鼠脑细胞凋亡,其机制可能与脑组织内bcl-2基因表达下调,Bax基因表上调以及Bcl-2/Bax下降有关.
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加味桂枝茯苓颗粒对大鼠良性前列腺增生症微血管密度计数及bcl-2基因表达的影响
目的:了解加味桂枝茯苓颗粒对大鼠良性前列腺增生症微血管密度(MVD)计数、bcl-2基因表达的影响,以期明确加味桂枝茯苓颗粒对前列腺新生血管产生和基质细胞生长干预的分子生物学机制.方法:大鼠80只,分为空白对照组,空白增生组,加味桂枝茯苓颗粒组和非那雄胺组.造模成功后,对应组分别采用不给药,0.9％氯化钠溶液,加味桂枝茯苓颗粒悬液,非那雄胺溶液灌胃治疗.后观察前列腺组织生长情况,免疫组化检测前列腺组织MVD,FCM检测bcl-2基因表达.结果:加味桂枝茯苓颗粒组和非那雄胺组较空白增生组MVD计数、bcl-2表达量为均显著下降(P＜0.01),且两组之间无明显差异.结论:加味桂枝茯苓颗粒可明显降低大鼠前列腺MVD计数、bcl-2的基因表达,减少前列腺组织微血管产生,加速腺细胞的凋亡,明显减少基质细胞产生,可能是其治疗前列腺增生的重要原因.
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复方大七气汤联合顺铂对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤Bcl-2/Bax表达的影响
目的:探讨复方大七气汤(compound Daqiqi decoction,CDQD)联合顺铂对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤细胞凋亡相关因子Bcl-2/Bax的影响,为临床治疗提供理论依据.方法:将成功建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠随机分为5组(n=8):模型对照组、CDQD低、高剂量组、顺铂组、顺铂联合中药组,给药3周后处死所有荷瘤鼠剥离瘤体,测瘤体积、瘤重并绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率,以RT-PCR法和Western blot法检测Bcl-2(B细胞白血病/淋巴瘤-2基因)、Bax(与Bcl-2相关的x蛋白)mRNA及蛋白量的表达.结果:①瘤重显示CDQD各剂量组瘤重均有一定程度减轻,与DDP组相比无统计学意义,顺铂联合中药组低于其余各组(P＜0.01);肿瘤生长曲线显示与模型组比较,各用药组瘤体积均有不同程度缩小(P＜0.01).②RT-PCR结果显示促凋亡基因Bax mRNA的表达:与模型组比较,各用药组表达增高(P＜0.01),其中顺铂联合中药组表达高,与其余治疗组相比较差异有统计学意义(P＜0.01);抑凋亡基因Bcl-2 mRNA在顺铂联合中药组表达低(P＜0.01),CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义.③Western blot法显示与模型组比较,各用药组表达增高(P＜0.01),顺铂联合中药组中Bax蛋白的表达高(P＜0.01),CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义;Bcl-2蛋白在顺铂联合中药组表达低(P＜0.01);CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义.结论:CDQD对卵巢癌皮下移植瘤具有促凋亡作用,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡有关;并且与顺铂联合用药具有增效作用.
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增免抑瘤方联合顺铂对铂类耐药卵巢癌抑瘤率影响的实验研究
目的 观察增免抑瘤方对顺铂耐药卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用顺铂耐药人卵巢癌细胞株COC1/DDP构建裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为中药高、中、低剂量组,顺铂组,联合组(顺铂联合中药),对照组(生理盐水),连续给药3周,剥取瘤体计算瘤重及抑瘤率；定量RT-PCR及免疫组化测定Bcl相关X连锁蛋白(Bcl-associated x protein,Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的表达；电镜观察瘤体细胞超微结构.结果 联合组抑瘤率高,为(59.26 ±6.86)％,与其他各组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR结果显示:促凋亡基因Bax mRNA联合组表达高,对照组表达低(P＜0.01).抑凋亡基因Bcl-2 mRNA对照组表达高,中药高剂量组表达低,联合组Bcl-2 mRNA的表达低于顺铂组(P＜0.01).免疫组化结果显示:联合组Bax蛋白的表达高,Bcl-2蛋白的表达低,与其他各组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).电镜下中药各剂量组与联合组均可见凋亡中、晚期的表现.结论 增免抑瘤方辅助化疗可逆转耐药卵巢癌裸鼠对顺铂的耐药性,增强其抑瘤作用.其机制与上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达,促进耐药卵巢癌细胞的凋亡有关.
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黄芪甲甙保护阿霉素心肌损伤大鼠抗凋亡作用的机制研究
目的 探讨黄芪甲甙(简称黄芪)抗阿霉素所致心肌细胞凋亡的可能机制.方法 取SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪3个剂量(低、中、高)组.空白组腹腔注射生理盐水,余4组分别给予阿霉素造模(15 mg/kg,隔日腹腔注射1次,共6次).黄芪3个剂量组同时用不同剂量黄芪甲甙灌胃治疗,空白组和模型组同时给予羧甲基纤维素钠.采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,细胞免疫组织化学检测bcl-2、bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax基因的表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡发生率增高(P＜0.01),抑制凋亡因子bcl-2基因及蛋白表达下降(P＜0.01),而促进凋亡因子bax基因及蛋白表达增强(P＜0.01),bcl-2/bax mRNA比值降低(P＜0.05).与模型组比较,黄芪高剂量组大鼠心肌细胞的凋亡率显著下降(P＜0.05),bcl-2基因及蛋白水平表达增强(P＜0.05),bax基因及蛋白水平表达下降(P＜0.05),bcl-2/bax mRNA比值明显上升(P＜0.05).结论 高剂量黄芪甲甙治疗可以抑制阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因bcl-2表达有关.
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顺铂诱导肾小管上皮细胞毒性及BCL-2对抗细胞凋亡
目的 探讨顺铂诱导肾小管上皮细胞(RPTC)凋亡的作用机制和BCL-2基因抑制顺铂诱导细胞凋亡的作用途径.方法 应用不同亚细胞结构分布的BCL-2基因体外转染RPTC,激光共焦显微技术和免疫荧光技术分析BCL-2(X)基因表达产物在RPTC线粒体和内质网上的分布定位,采用Hoechst33258染色并进行细胞凋亡计数.结果 不同畸变的BCL-2(BCL-acta,BCL-cb5)分别定位于RPTC的线粒体、内质网,BCL-nt同时定位于上述两种细胞器.BCL-cb5组可见更多BAX被激活,同时可见较多碎裂细胞核.定位于线粒体上的BCL-acta明显抑制顺铂对RFFC诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论 BCL-2抑制顺铂诱导RPTC凋亡主要是通过线粒体途径起作用.
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抗凋亡基因bcl-2在胃癌和癌旁组织中的表达及其临床意义
通过抗凋亡蛋白bcl-2在胃癌、癌旁组织中的表达与分布,探讨bcl-2基因在胃癌恶性转化过程中的作用机制和临床意义.应用 S-P免疫组化法检测33例胃癌、17例癌旁和13例正常胃粘膜中bcl-2蛋白的表达.正常胃粘膜中bcl-2仅一例弱表达.在胃癌和癌旁bcl-2表达均高于正常胃粘膜(P＜0.05～0 .01),但胃癌与癌旁间无差异.bcl-2表达与胃癌的分化程度,病理分期,淋巴结转移等病理特征无统计学差异.结果表明bcl-2基因参与了胃癌的发生.bcl-2蛋白在胃良性病变过度表达,一旦癌变,细胞的阳性表达不再升高,这可能与bcl-2抑制细胞凋亡的强度不再增加有关.
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哮喘小鼠T细胞周期和Bcl-2基因表达的变化
采用腹腔注射和雾化吸入卵蛋白建立小鼠过敏性哮喘动物模型,应用流式细胞术和免疫荧光法观察脾及肺泡灌洗液(BALF)中T细胞数、T细胞周期和Bcl-2基因表达的变化,结果发现哮喘组脾和BALF中淋巴细胞CD3表达率显著高于正常对照组(尤其是BALF明显);脾T细胞S期及G2+M期细胞数明显增多,同时凋亡率增加;Bcl-2基因表达率显著增高.提示哮喘发病时,T细胞增多,脾T细胞活化增殖增加,凋亡增加.同时淋巴细胞Bcl-2基因表达率明显增加.
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BCL-2 基因转染的人胃黏膜上皮细胞株GES-1的建立与鉴定
目的 构成BCL-2基因表达的人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞模型.方法 质粒pcDNA3-BCL-2 经酶切鉴定后,以脂质体法转染人胃黏膜上皮细胞GES-1,经G418筛选获得细胞克隆,荧光免疫组化法鉴定BCL-2基因表达阳性细胞.结果 经酶切鉴定为携带BCL-2基因的质粒pcDNA3-BCL-2,荧光免疫组化结果显示7个克隆中,均有不同程度的BCL-2基因表达.BCL-2主要表达在胞质及细胞核膜.结论 GES-1细胞为BCL-2表达阳性的细胞,为进一步研究BCL-2基因与胃癌的关系提供了理想的细胞模型.
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bcl-2基因在小鼠睾丸及试验隐睾中表达的研究
目的研究bcl-2基因在正常小鼠睾丸中的定位表达及试验隐睾所导致的改变.方法以Western-blotting印迹法从蛋白水平检测bcl-2基因在正常小鼠睾丸及试验隐睾中的表达、变化;地高辛标记bcl-2基因cDNA探针,石蜡组织切片原位杂交技术,从mRNA水平检测bcl-2基因在小鼠生精上皮中的定位及试验隐睾所导致的改变.结果Bcl-2蛋白在正常小鼠睾丸中有较丰富的表达,试验隐睾导致其表达明显降低;bcl-2基因在生精细胞中有较高水平的mRNA转录,表达细胞主要为各级生精细胞,支持细胞和间质细胞未见表达,隐睾术后仍然保持较高水平的mRNA转录.结论Bcl-2蛋白可能在生精细胞主动退化的调节中起着重要作用.
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bcl-2基因转染PC12细胞及其神经保护作用的研究
目的研究基因bcl-2对神经元的生物活性作用. 方法构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞,Western blot和原位免疫组织化学检测外源基因表达;10 μmol/L\,50 μmol/L和100 μmol/L顺铂处理转染重组质粒的实验A组细胞,同样条件处理转染空质粒的对照B组细胞,72 h后比较两者存活的细胞数;流式细胞仪检测分析两者的细胞周期指数. 结果成功构建了真核表达载体pcDNA3-bcl-2,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达Bcl-2的细胞克隆;10 μmol/L\,50 μmol/L和100 μmol/L顺铂处理后,实验A组存活的细胞数分别为276±13、185±11和108±10,而对照B组中存活的细胞数分别为100±9、12±3和2±2,两者相比有显著性差异;流式细胞仪检测显示,实验A组S期细胞所占百分比为8.81%,比对照B组25.79%明显减少. 结论 bcl-2能够拮抗顺铂对神经元的损害作用,促进神经细胞存活,其神经保护作用机制可能通过调控细胞周期来完成.
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大鼠脑冷冻伤模型建立及其Bcl-2基因蛋白的表达
目的建立大鼠脑冷冻伤模型并探讨脑组织细胞冷冻伤中Bcl-2的表达,提供抗损伤治疗的新思路. 方法运用液氮冷冻器作用于大鼠左侧顶部脑组织后2h、6h、12h,建立脑冷冻伤模型,同时观察冷冻伤侧脑组织病理形态学改变与Bcl-2表达的变化. 结果液氮作用后2h,脑组织已出现充血、水肿及神经元坏死的表现,并于12h明显累及海马回神经元.有价值的是,与坏死交界处的健在神经元呈现了Bcl-2的高表达. 结论说明了脑组织中神经元的损伤与Bcl-2基因蛋白的表达有关,提示通过抗细胞凋亡的途径对脑损伤治疗具有应用前景.
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何首乌对脑细胞Bcl-2基因表达的影响实验性研究
目的在基因水平探求何首乌抗衰老的机制. 方法①Wistar大鼠40只,分成何首乌药物组(W1组)20只和对照组(W2组)20只,取大鼠的脑组织切片进行免疫组化检测,比较两组Bcl-2基因表达;②取长爪沙鼠50只随机分5组,单纯何首乌灌药组(M1),单纯手术组(M2),建立急性脑缺血模型;灌药假手术组(M3),手术灌药组(M4),每组10只;对照组10只.各组取脑组织切片免疫组化法测定Bcl-2基因表达并作比较分析. 结果 4组脑细胞均有Bcl-2基因表达,M4组比M2、M3组多(p<0.01,p<0.001)M2组比M3组多(p<0.001),M1组与M3组无差别,即急性脑缺血模型的Bcl-2基因表达出现多.对照组Bcl-2基因表达无数为零. 结论①何首乌能通过增加Bcl-2基因的表达以提高脑细胞抗衰老的能力;②何首乌能通过增加脑细胞Bcl-2基因的表达提高缺血状态下脑细胞的保护作用.
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脑细胞Bcl-2 基因的表达
Bcl-2基因在正常脑细胞中存在,能使脑细胞在缺血、营养因子缺乏、毒素侵袭和外伤等条件下通过对细胞内膜性结构通透性的控制而调节进出膜性结构的化学成分,调节胞液中毒素结合因子的浓度,抑制其他促凋亡(pro-apoptosis)因子的表达,从而避免脑细胞凋亡,增加脑细胞的存活.
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马钱子碱诱导人单核细胞白血病THP-1细胞凋亡及作用机制
本研究旨在探讨马钱子碱对人单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其可能的作用机制.应用CCK-8法检测马钱子碱对THP-1细胞的生长抑制作用;应用AO/EB荧光染色法、Annexin-V/PI双染法检测马钱子碱对THP-1细胞凋亡的影响;PI单染法检测马钱子碱对THP-1细胞周期的影响;RT-PCR检测BCL-2、BAX基因的表达.结果表明,马钱子碱能有效地抑制THP-1细胞的生长,呈剂量和时间依赖关系;THP-1细胞经浓度为400μg/ml马钱子碱作用48 h后,大部分细胞核染色质被EB染成橘红色并呈固缩状,显示为晚期凋亡的细胞形态;0-400 μg/ml范围内的马钱子碱作用THP-1细胞48 h后,随着药物浓度的增高,细胞凋亡率逐渐上升;与对照组相比细胞周期被阻滞于G0/G1期,并出现亚二倍体凋亡峰;RT-PCR结果显示,BCL-2基因表达明显下降,BA基因表达上调.结论:马钱子碱能抑制THP-1细胞生长,诱导其凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与BCL-2基因表达抑制及BAX基因表达激活有关.
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rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响
为探讨rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用rhGM-CSF孵育的HL-60细胞由VP-16诱导的凋亡过程及凋亡相关基因bcl-2和fas的表达变化.应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,凝胶电泳检测DNA的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl-2和fas的表达.实验结果显示,rhGM-CSF可抑制VP-16诱导的HL-60细胞的凋亡,它加强了VP-16对bcl-2表达的下调作用,抑制了VP-16对fas表达的上调作用.由此推测,rhGM-CSF可能是通过下调fas表达降低HL-60细胞对VP-16的敏感性.
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新型bcl-2反义寡核苷酸F951提高白血病细胞对阿糖胞苷的敏感性
为了研究新型bcl-2反义寡核苷酸F951提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,用不同浓度的F951及F951联合小剂量Ara-C与HL-60细胞共培养后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法检测HL-60细胞增殖;用流式细胞术和RT-PCR法检测Bcl-2蛋白及其mRNA表达;以DNA片段化分析和TdT酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞.结果表明,F951与Ara-C联用组细胞生长抑制率高,药物处理96小时后,台盼蓝拒染率明显低于单纯Ara-C处理组:MTT检测A值与未处理组相比,FNS对照组、Ara-C组、F951组、F951+Ara-C组细胞抑制率分别为:2.8%、27.63%、37.66%、57.24%,F951处理后HL-60细胞Bcl-2 mRNA水平下降,Bcl-2蛋白减少,凝胶电泳可见典型的梯形带,F951与Ara-C联用后,诱导DNA ladder的作用更加明显,凋亡细胞多见.结论:F951可下调bcl-2基因表达,促进细胞凋亡而增强Ara-C的抗肿瘤作用.
