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拮抗剂与激动剂长方案促排冻胚移植临床结局分析
目的 比较体外受精-胚胎移植周期中拮抗剂和长方案两种不同刺激方案新鲜周期及冻胚复苏周期的临床结局.方法 回顾性分析2007年8月至2010年7月接受体外受精或卵胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)治疗、新鲜胚胎移植周期有胚胎冷冻的妇女,应用拮抗剂方案妇女189例,应用长方案妇女936例纳入研究,将新鲜周期移植未妊娠者已接受第一次冻胚复苏移植的妇女分为两组:拮抗剂冻胚组(n=92)和长方案冻胚组(n=303),分析二者的临床结局.结果 新鲜胚胎移植周期中两组基础卵泡刺激素(FSH)值、基础窦卵泡数、促性腺激素(Gn)刺激天数、Gn总用量、移植胚胎数目、优质胚胎率、流产率无统计学差异,拮抗剂组获卵数、优质胚胎数明显少于长方案组,临床妊娠率(39.2％)、继续妊娠率(36.5％)低于长方案组(分别为60％、52.5％,P=0.00)；而拮抗剂冻胚组和长方案冻胚组相比,两组移植胚胎数、优质胚胎率、临床妊娠率、种植率、继续妊娠率和流产率无统计学差异.结论 拮抗剂方案在新鲜刺激周期失败后有冻胚保存时,冻胚复苏周期的种植率、临床妊娠率、继续妊娠率、流产率与长方案冻胚复苏周期的结局相似,间接反映拮抗剂对于胚胎质量无不良影响.
关键词： 促性腺激素释放激素拮抗剂 促性腺激索释放激素激动剂 冻融 胚胎 妊娠率 -
冻融后小鼠卵巢移植到雄鼠肾被膜下卵泡的生长发育
目的 探讨冻融小鼠卵巢移植至雄鼠肾被膜下卵泡的生长发育情况. 方法 将1日龄冻融小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾被膜下,分别于移植后2d、7d、14d回收移植卵巢进行形态学、组织学观察,以评价卵巢移植体在成年雄性受体小鼠体内生长及卵泡发育潜能.卵巢组织分为冻融对照组、移植后2d、7d、14d组. 结果 移植体生长增大,各级生长卵泡发育；7日龄移植体卵泡发育到初级卵泡生长,14日龄移植体卵泡发育到窦卵泡阶段. 结论 1日龄冻融小鼠卵巢移植体在雄性受体生理环境中具有正常生长发育和形成窦卵泡的潜能.
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移植冻融小鼠卵巢组织后显微及超微结构的变化
目的 探讨移植过程对冻融小鼠卵巢组织光镜结构及超微结构的改变情况,研究其对小鼠卵巢组织的影响.方法 采用4周龄小鼠全卵巢慢冻速融,并移植到同种异体小鼠肾脏被膜下,分别于移植后24 h、48 h、7 d回收移植物.卵巢组织分为新鲜组、冻融组、移植后24 h、48 h及7 d组.光镜和电镜下观察各组形态学的改变. 结果 光镜下各组小鼠卵巢各级卵泡数具有显著性差异(P<0.01),随着移植后时间的推移各级卵泡数和卵泡存活率逐渐下降;各组卵泡超微结构具有差异性,移植对小鼠卵巢卵泡和间质都有损伤,移植后48 h间质稀疏,大量红细胞渗出,组织损伤严重;移植后7 d可见有微血管生成,卵泡、细胞器及细胞骨架系统修复良好.结论 冻融小鼠卵巢随着移植后时间的推移各级卵泡数和卵泡存活率逐渐下降,组织损伤主要在卵泡和间质,以移植后48 h损伤严重;光镜结合电镜观察能更全面地评价移植过程对冻融小鼠卵巢组织的影响.
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大鼠坐骨神经去细胞基膜管的组织形态学研究
目的:观察采用化学萃取法和反复冻融法制备大鼠坐骨神经去细胞基膜管的组织形态学变化.方法:雌性Sprague-Dawley鼠坐骨神经16条随机分为化学萃取法(chemical extracted nerve,CEN)和冻融法(freeze-thawed nerve,FTN)两组,每组18条.分别予Trinton-100化学萃取、-196℃～20℃反复冻融处理后,光镜、电镜观察其组织、形态学变化.结果:(1)CEN组基膜管管壁完整、贯通,无细胞结构,可见管状神经轮廓.(2)FTN组基膜管管壁破损、管腔堵塞,轴突、髓鞘、雪旺细胞及小血管变性、坏死,可见大量细胞碎片.结论:两种方法均能保持周围神经正常的三维空间结构,CEN制备的周围神经去细胞基膜管更具有组织形态学优势.
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冻融人胎儿卵巢组织异种移植后早期血管生成的实验观察
目的 石观察冻融人胎儿卵巢组织异种移植后1个月内移植物形态学改变,动态了解微血管情况. 方法 将难免流产胎儿的卵巢组织经过冻融,异种移植至18只裸鼠肾被膜下,分别于移植后2d、7d和28d回收移植物.将新鲜、冻融以及移植后不同时间的卵巢组织进行光镜、电镜观察,RT-PCR检测血管相关基因的表达. 结果 移植后2d卵巢组织的微血管密度显著上升,部分血管处于扩张状态;移植后7d微血管密度达到相对高峰且扩张的血管腔消失,微小血管恢复正常形态;移植后28d微血管密度出现轻微下降.电镜观察发现,移植卵巢内多数原始卵泡结构完整;移植后2d间质水肿,血管内红细胞淤积;移植后7d及28d的间质水肿逐渐消退,大量微小血管生长.移植卵巢的人血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素2(Ang-2)mKNA表达均呈双向改变,即在移植后2d上升到高值.此后表达下降. 结论 冻融人胎儿卵巢组织移植后的血管重建在移植后1个月内基本完成,移植后l周是采取措施提高冻融人胎儿卵巢移植效果的关键时期.
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液氮冷冻治疗皮肤病的操作及护理体会
目的探讨液氮冻融治疗小儿皮肤肿物的操作要点和护理方法. 方法根据皮损的性质和大小,采用接触法和喷射法用液氮直接作用于病变部位,观察其治疗和并发症. 结果 200例皮损经液氮冻融治疗后全部治愈,皮损愈合后均无疤痕形成及皮肤颜色改变. 结论液氮冻融是治疗小儿皮肤肿物的有效方法,掌握好冷冻的时间和深度,可以避免并发症的发生.
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不同储存条件和反复冻融对血清和血浆乙酰胆碱受体抗体水平的影响
目的：探讨不同储存条件和反复冻融对血清和血浆乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）水平的影响。方法将1例重症肌无力患者的血清和血浆标本分成数等份，置于不同储存条件下（常温、4℃或－80℃）并经过不同次数的冻融，不同等分的样本使用同一批次商品化ELISA试剂盒双平行孔检测AChRAb水平。计算各种条件下血清和血浆标本AChRAb抑制率的变异系数（CV ），比较不同处理条件下的抑制率以及同一条件下血清和血浆标本的抑制率。结果除常温条件下血浆标本 CV＞10％外，其余条件下 CV均＜10％。4℃条件下血清AChRAb的抑制率显著高于其他条件下血清的抑制率（P＜0.05），4℃和常温条件下血浆的抑制率显著低于其他条件下血浆标本的抑制率（P＜0.05）。4℃条件下血清和血浆标本AChRAb抑制率差异有统计学意义（P＜0.05），而冷冻保存后经过多达5次冻融两者的抑制率差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论－80℃直接储存的血清和血浆标本，即使经过多次冻融，AChRAb水平检测结果仍可较为一致。血清标本在常温、4℃或冷冻保存，血浆标本低温冷冻保存，数日内完成检测结果具有一致性。
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肺靶向阿奇霉素脂质体的制备及其在小鼠体内的分布
目的研究肺靶向阿奇霉素阳离子脂质体的制备方法并考察其在小鼠体内的分布.方法利用旋转薄膜-冻融法制备肺靶向阿奇霉素脂质体.用高效液相色谱法测定给药后小鼠体内各组织中的药物浓度.结果制得的脂质体平均粒径为6.582 μm,表面电荷为+19.5 mV,包封率大于75%,稳定性好.药物体外释药符合Higuehi方程.小鼠尾静脉给药后,阳离子脂质体主要被肺摄取,在肺部的滞留时间明显延长,AUC值约为阿奇霉素溶液的8.4倍.结论采用薄膜-冻融法,添加十八胺可制得具有较高包封率及稳定性的阿奇霉素阳离子脂质体,在小鼠肺部的分布优于注射液,能达到肺靶向目的.
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促肝细胞生长素的质量研究
目的 通过对促肝细胞生长素提取因素的研究,确定终提取工艺,冻干成品,检验合格.方法 首先确定促肝细胞生长素提取的其他因素,然后将另一个因素设定几个梯度,以多肽提取率高者确定其佳水平.结果 这样即可找出提取因素的所有佳水平,冻干同时对其性状鉴别、双缩脲鉴别、蛋白质检查、热原及异常毒性(家兔)、过敏性实验(豚鼠)等方面进行了考察.结论 促肝细胞生长素对重型病毒性肝炎有较好的治疗作用,经临床试验研究药物质量符合国家药典相关标准.
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肺靶向羟基喜树碱脂质体的制备及体外释药性质研究
目的 研究肺靶向羟基喜树碱阳离子脂质体的制备方法并考察其体外释药性质.方法 采用薄膜-冻融法制备羟基喜树碱脂质体;用D-甘露糖修饰脂质体并添加适量十八胺调节脂质体表面电荷;用葡聚糖凝胶柱-高效液相色谱法测定包封率;用正交实验优选处方;用透析法考察药物体外释放性质.结果 制得的脂质体平均粒径为2.286μm,表面电荷为+21.5 mV,包封率大于65%,稳定性好.药物体外释药符合Higuchi方程.结论 采用薄膜-冻融法,用D-甘露糖修饰并添加十八胺可制得具有较高包封率及稳定性的羟基喜树碱脂质体,有助于提高羟基喜树碱的肺靶向性.
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反复冻融对血浆抵抗素和内脂素测定水平的影响
目的 探讨反复冻融对血浆抵抗素和内脂素测定水平的影响.方法 抽取-70℃保存的血浆标本22份,化冻后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆抵抗素和内脂素水平(冻融1次标本),同时将每份标本分装2管,一管放入-20℃冷冻后取出,室温融解,重复3次(冻融4次标本);另一份按相同方法重复5次(冻融6次标本),用同一试剂盒、在同一批内检测血浆抵抗素、内脂素水平.比较3种冻融方式间的差异.结果 标本在冻融1次、4次和6次的情况下,抵抗素测定水平分别为2.24±0.99、2.01±1.05、1.89±1.01 ng/ml,内脂素测定水平分别为16.3±7.6、13.4±6.3、12.1±5.6ng/ml,后两次检测抵抗素水平较第1次分别下降10.3％(t=5.05,P=0.000)和15.6％(t=10.65,P=0.000);内脂素水平较第1次检测分别下降17.8％(t=5.19,P=0.000)和25.8％(=6.58,P=0.000).结论 反复冻融对血浆标本中抵抗素和内脂素的水平有显著影响,提示在血标本贮存运输、测定和分析中要注意这一现象对研究结果的影响,避免标本的反复冻融.
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多种试管婴儿技术与妊娠期高血压的相关性研究
目的探讨不同试管婴儿技术对妊娠期高血压疾病的影响及相关性。方法选取本院2013年6月至2015年6月收治的经试管婴儿技术受孕且终止妊娠的不孕患者600例。按照受精方式的不同分为常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization，IVF）组（342例)，卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）组（258例），按照胚胎转移周期的不同分为新鲜周期进行胚胎移植（简称Fresh）组（407例），冷冻周期胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer，FT）组（193例）。分析不同组患者不孕不育的原因，并分析不同试管婴儿技术对妊娠期高血压疾病的影响。结果所有患者中，管性致不孕的患者有335例，子宫内膜异位患者有75例，排卵障碍有41例，夫精异常患者有136例，其他原因7例，不明原因6例。各组中管性因素导致不孕不育的比例大，分别为IVF组66.7%，ICSI组41.5%，Fresh组52.1%，FT组63.7%。IVF组患者妊娠期高血压的发病率（2.3%）低于ICSI组（5.8%），差异具有显著性（χ2=4.8167，P=0.0282）；IVF组患者子痫前期的发病率（4.97%）低于ICSI组（5.04%），但差异无显著性（χ2=0.0014，P=0.9698）。Fresh组妊娠期高血压的发病率（3.93%）与FT组（3.63%）接近，差异无显著性（χ2=0.0329，P=0.8561）；Fresh组子痫前期的发病率（4.91%）低于FT组（5.18%），差异无显著性（χ2=0.0197，P=0.8884）。结论 ICSI受精技术有增加妊娠期高血压疾病的风险，而胚胎进行移植前是否进行冻融与妊娠期高血压无关。
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卵母细胞冻融的研究进展及应用
卵母细胞冻融具有广阔的应用前景.随着冷冻技术的日趋完善,复苏率有了显著提高,但胚胎种植率及临床妊娠率仍显著低于常规体外受精,可能与纺锤体受损有关.冻融的各个环节均可能对卵母细胞的结构与功能产生影响,特别是对细胞骨架,对纺锤体及皮质颗粒的影响及是否会增加染色体非整倍体的发生尚有待进一步研究.
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保存条件与反复冻融对尿砷形态稳定性的影响
目的 探讨不同温度、不同保存时间及反复冻融对尿中各形态砷稳定性的影响.方法于2011年3月,采集8名健康志愿者的尿液样品.采用氢化物发生-冷阱捕集-原子吸收(HG-cold trap-AAS)法检测不同保存条件[尿样分别置于室温(25℃)和4、-20、-80℃冰箱中继续避光保存1、3个月]和反复冻融(冻融条件:-20、-80℃冻存至少1d,室温2h解冻,再次放入冰箱)3次后尿样中各形态砷[无机砷(iAs)、一甲基砷(MMA)和二甲基砷(DMA)、三甲基砷(PMA)]的浓度.每次检测前解冻,并设立对照.结果仅25℃条件下保存3个月样品中DMA浓度低于对照,差异有统计学意义(P<0.05);其他保存条件下尿样中各形态砷的浓度与对照比较,差异均无统计学意义.在低温(-20、-80℃)条件下反复冻融3次后尿样中各形态砷的浓度与对照比较,差异均无统计学意义.结论低温(4、-20、-80℃)保存3个月内以及冻融3次的尿样中各形态砷浓度仍较为稳定.
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丹参对冻融人胎儿卵巢组织异种移植早期血管生成的影响
目的:研究冻融人胎儿卵巢组织移植早期血管生成过程中微血管形态和密度的改变以及血管生成相关基因mRNA的表达;探讨丹参注射液对移植物血管生成的影响.方法:冻融胎儿卵巢组织异种移植至裸鼠肾被膜下,按给药不同分为对照组(生理盐水)和丹参组(丹参注射液每只0.09g/d),分别于移植后48 h、7 d和28 d回收移植物.结果:移植后两组卵巢组织微血管密度均明显增多;对照组移植后7 d血管密度达峰,丹参组血管密度在移植后48 h即已显著上升,此后两个时间段保持相对平稳.Angiopoietim-2 mRNA表达在移植后48h两组均显著升高,丹参组上升幅度大于对照组(P＜0.05).结论:冻融人胎儿卵巢组织新血管生成开始于异种移植后48h内,移植后7 d组织内微血管密度达峰.丹参在移植早期应用可以促进移植后血管生成,其机制可能与它增加了血管生成相关因子Ang-2 mRNA的表达有关.
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卵细胞冻融及其影响因素
发展卵细胞冻存技术已日趋迫切,能成功冻融卵细胞将给生殖医学带来极大发展.冷冻保护剂和冻融速率为影响卵细胞冻融的主要因素,冻融对卵细胞的透明带、皮质颗粒、纺锤体、细胞骨架和染色体等造成的损伤,降低了冻融后卵子的成活率、受精率和卵裂胚胎的发育能力,改变保护剂和冻融方法以及对冻融后卵子行ICSI处理有利于改善冻融卵细胞的受精率.
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冻融和新鲜睾丸精子行卵胞质内单精子显微注射的妊娠结局对比分析
目的 对比分析冻融睾丸精子、新鲜睾丸精子和新鲜精液精子行卵胞质内单精子显微注射(ICSI)后形成的胚胎移植后的妊娠结局.方法 收集惠州市中心人民医院生殖中心2014年1月至2016年6月总共179个ICSI周期,根据精子来源分为3组,152个周期为新鲜精液精子组,20个周期为新鲜睾丸精子组和7个周期为冻融睾丸精子组.结果 睾丸精子冻融后行ICSI的正常受精率、可利用胚胎率、种植率、临床妊娠率、早期流产率和活产率与其他2组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在ICSI周期中,使用冻融睾丸精子与新鲜睾丸精子、新鲜精液精子获得的妊娠结局差异无统计学意义.冷冻保存睾丸精子可减少无精子症患者反复睾丸活检带来的睾丸损伤,提高睾丸精子利用率.
关键词： 冻融 睾丸精子 卵胞浆内单精子显微注射 -
甲型肝炎减毒活疫苗生产中病毒释放的佳方法探索
目的探索甲型肝炎减毒活疫苗(简称甲肝活疫苗)生产中感染细胞释放病毒的佳方法.方法采用超声波细胞粉碎仪、-70℃及液氮冻融3种方法粉碎细胞,对细胞破碎情况、病毒抗原滴度和感染性滴度进行了比较.结果超声波连续粉碎3次(90秒/次)、-70℃反复冻融粉碎4次和液氮冻融粉碎6次,细胞破碎率分别为94%、82%和81%;病毒抗原滴度和感染性滴度均达高峰;抗原滴度均为1:256,感染性滴度(1og CCID50/ml)分别为8.67、6.5和6.0.继续超声和-70℃冻融粉碎细胞,病毒抗原滴度和感染性滴度基本不变,而液氮冻融至第10次时,抗原滴度无明显变化,感染性滴度下降2.0 1og CCID50/ml.结论超声波破碎率高,细胞碎片小,病毒充分释放,且不损伤病毒;-70℃和液氮冻融破碎率较低,细胞碎片较大,病毒释放效率低,病毒损伤以液氮冻融为重.
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冻融囊胚移植对降低异位妊娠率的影响
目的 评价冻融囊胚移植对体外授精-胚胎移植(IVF-ET)异位妊娠率的影响.方法 回顾性分析西北妇女儿童医院自2012年11月～2013年12月行IVF-ET治疗5 671个周期的妊娠结局,比较新鲜/冻融移植及D3胚胎/D5囊胚移植周期各组的异位妊娠率.结果 冻融周期D5囊胚移植组异位妊娠率低(0.57％),与新鲜D5囊胚组(1.77％)及新鲜D3胚胎组(1.92％)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 冻融周期D5囊胚移植可显著降低异位妊娠风险,临床妊娠率较高.
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人呼吸道合胞病毒的稳定性
目的 观察人呼吸道合胞病毒(HRSV)在不同温度保存、冻融和超声波处理的稳定性.方法 将HRSV A2株接种于KMB17,细胞上适应培养后,收获病毒液,分别置于37、22、4和-20℃条件下保存不同时间,或经冻融和超声波处理后,用微量细胞病变法检测HRSV的感染性滴度,观察其稳定性.结果 HRSV在37℃保存,病毒感染性滴度下降很快,第4天时,降至约1.50 lgCCID50/ml,5 d后降至1.00 lgCCID50/ml以下,几乎检测不到;在22℃保存,病毒感染性滴度下降相对缓慢,第14 天时比原始滴度降低约3.20 lgCCID50/ml;在4℃和-20℃下保存较稳定,分别保存5周和3个月后,病毒感染性滴度下降<0.60 lgCID50/ml.冻融1、2、3次,病毒感染性滴度分别下降1.37、2.55和3.61 lgcCID50/ml,冻融4次后,病毒几乎无感染性.超声波处理后,病毒感染性滴度下降很快,处理1次病毒滴度即下降至原始滴度的50%左右,处理2次后,病毒几乎无感染性.结论 HRSV不宜在37℃和22℃存放,可短暂保存于4℃,在-20℃可保存较长时问;冻融和超声波处理均对病毒感染性滴度有明显影响.
