首页 > 文献资料
-
DNA甲基转移酶在苯并[a]芘致小鼠空间学习记忆功能障碍中的改变
目的 研究DNA甲基转移酶在苯并[a]芘(B[a]P)致小鼠学习记忆功能障碍中的改变,为B[a]P神经毒作用机制的研究提供科学依据.方法 将48只成年雄性SPF级hauschka (ICR)小鼠按体重随机分为4组,每组12只,分别为溶剂(花生油)对照组,0.5 mg/kg(低剂量)、2.0 mg/kg(中剂量),和10.0 mg/kg(高剂量)B[a]P染毒组,隔天腹腔注射染毒1次,连续染毒30次.染毒结束后,用Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆能力.并在染毒第10、20和30次后,用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠大脑皮质DNA甲基转移酶(DNMTs)的基因表达和蛋白活性的改变.结果 水迷宫结果显示,随着染毒剂量的增加,小鼠到达平台的潜伏期逐渐延长,高剂量组潜伏期显著高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);小鼠进入目标象限的总次数和在目标象限的游泳路程逐渐减少,高剂量组显著低于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);与溶剂对照组相比,各染毒组小鼠大脑皮质中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的基因表达量和蛋白激酶的活性均逐渐增强,呈明显的剂量和时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 B[a]P诱导大脑皮质DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因表达水平和蛋白激酶的活性增强,可能是B[a]P致小鼠空间学习记忆障碍的重要机制之一.
-
灵芝孢子粉对长期镉暴露大鼠DNA甲基转移酶和基因p16表达的影响
目的 从基因水平探讨灵芝孢子粉对长期镉暴露大鼠肝组织DNA甲基转移酶(DNMTs)及抑癌基因p16表达的影响.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为4组,每组15只,即正常对照组(C)、单独染镉(Cd)和2个拮抗组[灵芝孢子粉(0.5 g/kg或1.0 g/kg)+ CdCl2,即GCdL和GCdH组].除C组外,所有大鼠隔天腹腔注射CdCl2(2 mg/kg),GCdL和GCdH组每天灌胃灵芝孢子粉混悬液,C组和Cd组大鼠灌胃等体积生理盐水.实验过程观察动物一般表现并定期称重,分别于30、60和90 d处死动物取肝组织,采用实时RT-PCR法检测DNMTs和基因p16表达情况.结果 与对照组比较,灵芝孢子粉可诱导镉中毒大鼠DNM-1 mRNA、DNMT-3A mRNA和DNMT-3B mRNA的表达降低,以及基因p16 mRNA表达升高,且呈剂量效应(P＜0.05).结论 灵芝孢子粉可预防和治疗长期镉暴露大鼠引起的肝损伤,其作用机制可能与调节DNMTs mRNA和p16 mRNA的表达水平有关.
-
N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对哈萨克族食管正常上皮细胞甲基转移酶表达及活性的影响
目的 体外实验检测N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对哈萨克族食管正常上皮细胞DNA甲基转移酶的表达及活性改变,以此探讨亚硝胺类化合物致食管上皮组织发生恶变的表遗传机制.方法 以0、0.75、1.50和3.00 μg/ml MNNG处理哈萨克族正常食管上皮细胞24 h,采用高效液相色谱法(HPLC)和DNA甲基转移酶活性检测试剂盒检测细胞基因组DNA整体甲基化水平和DNA甲基转移酶活性的改变;并采用RT-PCR和Western Blot法检测DNA甲基转移酶mRNA及蛋白表达.结果 1.50和3.00 μg/ml MNNG组与对照组比较细胞基因组DNA整体甲基化水平分别降低8.07％和17.58％,且各染毒组之间比较差异有统计学意义(F=60.342,P＜0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b酶活性均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r=0.967,P＜0.01;r=0.897,P＜0.01;r=0.716,P＜0.01);与对照组比较各染毒组DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA及蛋白表达水平均升高,且与MNNG浓度呈正相关(r =0.814,P ＜0.05;r =0.732,P ＜0.01;r =0.578,P ＜0.05;r=0.944,P＜0.01;r =0.900,P ＜0.01;r=0.887,P＜0.01).结论 MNNG可致哈族正常食管上皮细胞基因组DNA整体甲基化水平下降,提高DNMT1、DNMT3a、DNMT3b表达及活性.
-
外源化学物对DNA甲基转移酶的调控
表观遗传学提供何时、何地及如何应用遗传信息的指令,在时空顺序上控制基因的表达,它不涉及DNA序列改变但可以通过细胞分裂传给子代细胞.表观遗传学修饰主要通过DNA甲基化(DNA methylation)、染色质重塑(chromatin remodeling)、组蛋白修饰(histone modification)、非编码RNA(non-coding RNA)等模式来控制基因的表达.在环境应答状态下,上述几种调控模式相互作用,形成特定的表观遗传调控网络[1].DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)的作用下,在DNA碱基上添加甲基的过程.在哺乳动物细胞中,DNMTs是催化DNA甲基化的主要酶类.近年来研究发现DNMTs的表达异常与疾病如肿瘤的发生发展密切关联,同时DNMTs也是外源化学物作用的靶点,外源化学物通过改变DNMTs的表达水平和酶的活力,影响DNA的甲基化和表观遗传的调节功能.本综述将介绍DNMTs的功能以及与肿瘤发生发展关系的研究进展,重点阐述DNMTs调控与外源化合物毒作用效应之间的关系.
-
体外培养对小鼠植入前胚胎DNA甲基转移酶表达模式影响的研究
目的 研究小鼠植入前胚胎DNA甲基转移酶(Dnmt)1和3b的表达模式及体外培养对其表达的影响.方法 应用荧光免疫细胞化学法检测在体内和体外培养的小鼠植入前胚胎Dnmt1、Dnmt3b的表达.结果 Dnmt1、Dnmt3b在体内组2、4、8细胞胚胎和桑椹胚的胞浆内均呈高表达,在囊胚期则为胞浆内低表达,而核内均无明显表达;Dnmt1、Dnmt3b在体外组囊胚期前胚胎的表达模式均与体内组相似,为胞浆内高表达,而囊胚期则为胞核内低表达.结论 体外培养改变了小鼠囊胚期Dnmt1、Dnmt3b的表达模式,影响基因的表达水平和表达模式.
-
SET基因缺陷对三氯乙烯诱导人正常肝细胞DNA甲基化水平改变的影响
目的 比较三氯乙烯(trichloroethylene)诱导人正常肝细胞(L-02细胞)和SET基因缺陷L-02细胞(SET缺陷细胞)中DNA甲基化相关指标的变化,探讨SET与三氯乙烯诱导的表观遗传调控作用之间的关系.方法 选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,使用三氯乙烯分别对L-02细胞和SET缺陷细胞进行处理,检测细胞增殖水平、细胞DNA甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases,DNMTs)活性的变化,通过Western blot法从蛋白水平分析DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表达变化.结果 三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,两种细胞的增殖水平均呈现下降趋势.使用0、1.0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理细胞后,L-02细胞的相对增殖水平分别为100.00 ±2.70、83.34±2.38、75.56±4.51、71.67±2.77、66.67±1.63(F=58.29,P＜0.001);SET缺陷细胞的相对增殖水平分别为101.12±1.67、85.01±2.33、79.44±1.67、78.337±3.89、76.11 ±3.33(F=42.41,P＜0.001).0、1.0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,L-02细胞的DNA甲基化水平分别为3.77 ±0.08、3.48 ±0.08、3.38 ±0.10、3.14 ±0.15、2.91 ±0.07,呈下降趋势(F =212.87,P＜0.001);SET缺陷细胞DNA甲基化水平分别为3.77 ±0.15、3.57 ±0.15、3.30±0.11、3.35±0.13呈下降趋势(F =79.32,P＜0.001).L-02细胞经0、1.0、2、0、4.0、8.0 mmol/L的三氯乙烯处理24 h后,DNMT1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.03、1.28±0.04、1.20±0.04、1.62±0.05、1.43 ±0.04,表达升高(F=103.00,P＜0.001);而在SET缺陷细胞中DNMT1的相对表达量分别为1.00±0.04、0.96±0.02、1.19 ±0.05、0.85±0.03、0.83±0.03,出现下降(F =44.18,P＜0.001).结论 SET缺陷可以明显抑制三氯乙烯暴露引起的L-02细胞增殖水平及DNMTs活性的下降,改变DNMT1表达水平的变化趋势,提示SET参与了在三氯乙烯诱导下的肝毒性作用和表观遗传学调控机制.
-
康肺扶正方对肺癌荷瘤鼠瘤组织的抑制作用的研究
目的:观察康肺扶正方对肺癌荷瘤小鼠瘤组织的抑制作用及对DNA甲基转移酶1、3β(DNMT1、DNMT3β)、增殖细胞核抗原(PCNA)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、干扰素-γ(INF-γ)等血清指标影响.方法:以人肺癌细胞的裸鼠荷瘤鼠模型作为研究对象,将24只裸鼠荷瘤鼠随机分成4组,分别为模型组,环磷酰胺(CTX)组,康肺扶正方小、大剂量组.模型组给予生理盐水0.4ml/d灌胃;环磷酰胺组予环磷酰胺(20mg·kg-1·d-1)腹腔注射,1次/d;康肺扶正方小、大剂量组分别给予不同剂量的康肺扶正方灌胃,均1次/d,连续4周.检测各组裸鼠肿瘤体积、抑瘤率;且用免疫组织化学方法检测DNMT1、DNMT3β、PCNA表达;用酶联免疫吸附试验盒(ELISA)检测IL-6、IL-10、INF-γ.结果:与模型组相比,小剂量康肺扶正方组的瘤体积有所缩小,但未达到统计学意义;大剂量康肺扶正方组的瘤体积缩小,差异有统计学意义.大剂量康肺扶正方组DNMT1、DNMT3β、PCNA阳性表达率明显减低(P<0.05).大剂量康肺扶正方小鼠血清中IL-6、IL-10、INF-γ 较其他组升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:康肺扶正方的体内抗癌机制可能部分通过抑制肿瘤的增殖活性而实现.
-
果蝇DNA及组蛋白甲基化与寿限
物种寿限受多种因素调控,根据现有假说,DNA甲基化与组蛋白甲基化对寿限起主动作用,并引起特征性形态学改变及衰老性生长停滞.果蝇中DNA 甲基化系统包含唯一的甲基转移酶dDNMT2 及唯一的甲基结合蛋白MBD2/3,二者均显示其在结构上的广泛保守性,且表达的时期恰好与检测到DNA 甲基化的时期高度一致,具有影响胚胎发育、染色体重塑、反转录转座子沉默等重要功能.果蝇中组蛋白甲基转移酶SETDB1和Su(VAR)3-9诱导的H3K9甲基化对DNA甲基化可能在上游起指导作用.H3K4甲基化与H3K27甲基化分别起活化与沉默作用,与DNA甲基化有协同或阻遏效应,越来越多的研究证实果蝇正常寿命的维持与H3K4及H3K27之间的调控密切相关,因此H3K4与H3K27的甲基化模式是新的研究热点.文章对果蝇DNA甲基化及组蛋白甲基化对于果蝇寿限影响的研究进行了综述.
-
DNA甲基转移酶在慢性髓系白血病患者的表达及临床意义
目的:探讨慢性髓系白血病(CML)患者骨髓或外周血单个核细胞DNA甲基转移酶(DNMT)的表达水平及临床意义.方法:应用SYBR Green荧光定量PCR的方法检测94例3个不同时期CML患者及10例正常对照者骨髓或外周血单个核细胞中DNMT mRNA的表达水平.结果:正常对照(NC)组、CML慢性期(CML-CP)、加速期(CML-AP)、急变期(CML-BP)组DNMT1 mRNA的相对表达水平分别为1.45±0.22、1.83 ±0.63、2.95±0.87、3.24±1.39,CML-CP组患者与NC组比较表达水平差异统计学意义(P=0.28);CML疾病进展期包括(CML-AP和CML-BP)较NC和CML-CP组表达水平显著增高(P ＜0.01);CML-AP与CML-BP相比表达水平无统计学差异(P=0.336).NC、CML-CP、CML-AP、CML-BP组DNMT3a mRNA的相对表达水平分别为1.29±0.34、1.34±0.46、2.33±1.05、3.18 ±1.23.CML-CP组患者与NC组比较表达水平无统计学差异(P=0.844);CML疾病进展期较NC组和CML-CP组表达水平显著增高(P＜0.05);CML-AP与CML-BP相比表达水平无统计学差异(P =0.304).NC、CML-CP、CML-AP、CML-BP组DNMT3b mRNA的相对表达水平分别为1.37 ±0.31、16.41 ±22.50、9.36 ±5.50、12.17±13.44,在CML患者较在NC组表达水平显著增高(P＜0.05).CML患者各期之间比较无统计学差异(P＞0.05).结论:疾病进展期CML患者中DNMT mRNA表达增高,DNMTmRNA表达水平与CML疾病进展相关.
-
AS203逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究
本研究旨在探讨三氧化二砷(AS2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制.以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象.采用SRB法检测AS2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨AS2O3,对恶性淋巴瘤细胞周期的影响.结果表明:①AS2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,AS2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5 μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p<0.01);③与未处理组相比,AS2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMTI表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度AS2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加.结论:AS2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长.
-
DNA甲基转移酶在骨髓瘤细胞株中的表达异常及意义
本研究旨在探索多发性骨髓瘤细胞株U266 DNA甲基转移酶(DNMT)活性、基因表达情况并分析其生物学意义.用ELISA方法检测U266细胞DNMT活性,用半定量RT-PCR技术分析DNMT1、3a、3b mRNA在U266细胞中的表达,体外用不同浓度去甲基化化合物异硫氰酸苯己酯(phenyl hexyleisothiocyanate,PHI)处理U266细胞,分析DNMT活性变化及DNMT1、3a、3b在瘤细胞中的表达改变.结果表明,骨髓瘤细胞U266中DNMT总活性升高,DNMT1、3a、3b mRNA均高表达,不同浓度PHI处理U266细胞后,细胞增殖抑制,DNMT活性亦被显著抑制,DNMT1、DNMT3a以及DNMT3b mRNA表达下降并呈浓度依赖性.结论:DNMT活性及其表达增高是骨髓瘤细胞特征之一,当DNMT活性或mRNA表达抑制时瘤细胞发生凋亡,因此DNMT可作为骨髓瘤治疗的新靶点.
-
急性白血病患者DNA甲基转移酶基因的表达其及临床意义
为了探讨DNA甲基转移酶(DNMT)基因在成人急性白血病(AL)患者中的表达及其与临床预后之间的关系,对72例AL患者和20例正常人的骨髓采用RT-PCR方法进行DNMT、p15INK4B、mdr1 mRNA水平的检测;对56例AL患者和14例正常人p15INK4B基因启动子区域CpG岛甲基化率,采用甲基化特异性PCR方法进行检测.结果表明:AL患者组所有3种DNMT表达均明显高于对照组(P＜0.01),改用细胞增殖核抗原(PCNA)为内对照,差别仍有统计学意义.AL患者3种DNMT基因表达之间呈明显正相关,表现为协同的高表达;p15INK4B、mdr1与DNMT表达呈明显负相关.DNMT基因同时阳性患者组完全缓解(CR)率明显高于DNMT基因部分阳性或阴性患者组(P＜0.01).p15INK4B基因在56例AL患者中,31例(55.4%)完全甲基化,12例(21.4%)部分甲基化,14例正常人在同一条件下则无1例甲基化.结论:DNMT基因在成人AL患者有异常高表达,其可能通过促使抑癌基因启动子区域过甲基化,而使其转录失活,从而导致白血病恶性克隆的形成.对于高表达DNMT的AL患者,可能对化疗更敏感,提示DNMT基因高表达可能是临床预后较好的指标.
关键词： 急性白血病 DNA甲基转移酶 DNA甲基转移酶基因 -
乳腺癌BRCA1基因启动子区甲基化与蛋白表达及其与DNA甲基转移酶3a、3b的相关性分析
目的 分析探讨乳腺癌BRCA1基因启动子区甲基化与蛋白表达及其与DNA甲基转移酶3a、3b的相关性.方法 采取免疫组化法对27例乳腺纤维腺瘤以及198例散发性乳腺癌组织中的DNA甲基转移酶3a、3b蛋白的表达情况进行检测分析,对其中112例散发性乳腺癌组织中的BRCA1基因的启动子甲基化状态实施甲基化特异性PCR检测,同时收集各提供乳腺癌组织患者的相关临床资料.结果 198例散发性乳腺癌组织中有114例(57.6％)DNMMT3a蛋白阳性,有109例(55.1％)DNMMT3b蛋白阳性,乳腺癌组织中DNMMT3a蛋白的表达水平显著高于乳腺纤维腺瘤(P<0.05),而DNMMT3b蛋白的表达水平比较则无显著差异(P>0.05);BRCA1基因启动子区甲基化和DNMT3a表达呈正相关关系(r=0.223,P=0.019),而BRCA1蛋白表达水平和DNMT3a表达呈负相关关系(r=-0.169,P=0.019).结论 DNA甲基转移酶3a、3b蛋白的高水平表达现象与乳腺癌细胞的发病过程有相关性,DNA甲基转移酶3a蛋白通过参与BRCA1基因启动子区甲基化,使BRCA1蛋白表达水平降低,抑癌功能降低,从而导致散发性乳腺癌的发病.
-
DNA甲基转移酶1和3A在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理的关系
目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)在结直肠正常组织、腺瘤、腺癌中的表达,及其可能的临床病理意义.方法:以免疫组织化学SP法检测DNMT1和DNMT3A在正常结直肠组织、腺瘤、腺癌中的表达.通过计算染色指数(SI),评估两者的表达水平与年龄、肿瘤大小、分期、分化等临床病理特征之间的关系.采用Kaplan-Meier法进行生存分析.结果:DNMT3A在正常组织和腺瘤中表达明显低于癌组织(SI:10.5±5.7 vs 20.2±9.9,P＜0.05).DNMTl在三者中的表达呈递增趋势,SI分别为10.3±2.7、14.7±6.8、20.1±9.1.淋巴结转移病例DNMT1表达高于未转移病例(18.1±7.9 vs 12.0±6.3,P＜0.05),浸润深度超过肌层病例DNMT1和DNMT3A表达高于未超过肌层病例,差异均有统计学意义(20.1±10.1 vs 15.8±7.9;19.9±8.5 vs 15.4±4.7,均P＜0.05).结论:DNMT1和DNMT3A是结直肠癌发生的早期事件,两者共同促进结直肠癌的发生发展,可能成为结直肠癌治疗的新靶点.
-
DNA甲基转移酶及分泌型卷曲相关蛋白1在糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织中的表达研究
目的 探讨DKD大鼠肾组织中DNA甲基转移酶(Dnmts)及分泌型卷曲相关蛋白1(Sfrp1)的表达变化及意义.方法 16只雄性SD大鼠随机分为DKD组与正常对照(NC)组,每组8只.造模成功10周后处死,检测相关生化指标并计算肾脏指数(KI);HE、Masson染色观察肾组织病理学改变;Western blot检测Dnmts、Sfrp1、β-catenin、GSK3β 、p-GSK3β 、col-Ⅲ 、col-Ⅳ 蛋白表达变化;q-PCR检测Sfrp1 mRNA表达水平;分析Sfrp1与Dnmts相关性.结果 与NC组比较,DKD组血糖[(8.51±1.19)vs(21.00±2.24)mmol/L]、24 hUAlb[(12.22±4.91)vs(65.31±18.03)mg]、KI[(6.80±0.53)vs(12.15±1.57)mg/g]均增高(P<0.01);Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b、β-catenin、p-GSK3β蛋白表达水平上调(P<0.05);Dnmt3l未见明显变化;Sfrp1 mRNA和蛋白表达水平均下调(P<0.05);Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3a、Dnmt3b与Sfrp1的蛋白表达呈负相关(r=-0.811、-0.692、-0.855、-0.858;P<0.01);与Dnmt3l无相关性(r=-0.262,P=0.411).结论 DKD大鼠肾组织Dnmts蛋白表达增加,可能引起sfrp1表达下调,导致对Wnt信号通路的抑制作用减弱,Wnt信号通路异常活化并促进DKD时肾纤维化的发生发展.
关键词： DNA甲基转移酶 分泌型卷曲相关蛋白1 Wnt信号通路 糖尿病肾脏疾病 SD大鼠 -
氧合酶家族分子在叶酸缺乏中对人神经母细胞瘤细胞、淀粉样前体蛋白和β位淀粉样前体裂解酶-1表达的影响
目的 探讨氧合酶家族分子(TET)在叶酸缺乏条件下对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR 32细胞的增殖能力及淀粉样前体蛋白(APP)基因、早老素1(PS1)基因以及β位淀粉样前体裂解酶-1(BACE1)基因表达的影响及机制. 方法 体外培养SH SY5Y、IMR-32细胞,分为叶酸缺乏组、低剂量组、正常对照组,采用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖、实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞中APP、PS1、BACE1、TETs、甲基转移酶(DNMTs)基因mRNA的表达;构建TET1低表达稳转细胞株,采用荧光倒置显微镜观察荧光蛋白,MTT法观察细胞增殖,RT PCR检测细胞中TET1、APP、PS1、BACE1的转录水平. 结果 (1)在叶酸缺乏组及低剂量组,培养120 h和144 h后SH-SY5Y、IMR 32细胞增殖能力明显降低(均P＜0.001);SH-SY5Y细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=80.315、35.386、101.979、786.407、80.331、131.545、28.000、9.165、102.167,均P＜0.05),IMR-32细胞中APP、PS1、BACE1、DNMT1、DNMT3b、TET1、TET2、TET3的mRNA水平升高(F=12.283、93.669、40.815、157.234、24.835、147.594、54.794、73.068,均P＜0.05).(2)构建TET1低表达稳转细胞株,低表达组(SH SY5Y shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.25±0.02,低于阴性对照组1.00±0.09(P=0.007);低表达组(IMR-32-shTET1)细胞内TET1的相对表达量分别为0.28±0.07,低于阴性对照组1.00±0.01(P=0.003).(3)相较于阴性对照组,低表达组(SH-SY5Y-shTET1、IMR-32-shTET1)的增殖能力均增加(均P＜0.01);且细胞内APP、BACE1的mRNA水平降低(P＜0.01或P＜o.05). 结论 在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y、IMR 32中,叶酸缺乏上调TETs的表达,通过TET蛋白去甲基化途径增加细胞中APP、BACE1表达,并抑制细胞生长.
关键词： 叶酸 DNA甲基转移酶 氧合酶 淀粉样蛋白 β位淀粉样前体裂解酶 -
DNA甲基转移酶的作用及甲基化在肿瘤发生中的作用
表遗传学(epigenetics)调节与肿瘤相关基因的转录调控密切相关.DNA甲基化就是基因表遗传学调节的重要机制之一.DNA异常甲基化与肿瘤的发生和演进关系密切,而DNA甲基化是由DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)催化发生并维持的.因此,深入研究DNA甲基转移酶的作用对认识异常甲基化的发生以及异常甲基化在肿瘤的发生和演变中的作用有着重要意义.
-
DNA甲基转移酶在肝细胞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)、3a(DNMT3a)和3b(DNMT3b)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学检测47例HCC癌组织、42例HCC癌旁肝组织及12例正常肝组织中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达情况,分析三者与临床病理特征的关系.结果 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b在HCC中阳性表达率分别为80.9％、68.1％和78.7％,在癌旁组织内分别为50.0％、52.4％和57.1％,均明显高于正常肝组织内的阳性表达(16.7％、16.7％和25.0％).而且DNMT1、DNMT3a和DNMT3b与HCC的病理分化类型及乙肝表面抗原阳性显著相关(P＜0.05).结论 DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的异常表达与HCC的发生发展有紧密的关系.
-
原发性肝癌组织RASSF1A异常甲基化与DNMTs及HBV的关系
目的探讨原发性肝癌ras相关结构域家族1A(ras association domain family 1A,RASSF1A)异常甲基化与肿瘤组织中DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)转录水平变化及HBV感染的关系.方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测61例原发性肝癌组织RASSF1A基因异常甲基化情况,RT-PCR法检测其中三种主要DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)水平的变化.结果61例肝癌标本中RASSF1A基因启动子区异常甲基化45例(73.8%);HBV感染者47例(77.1%),其中MSP阳性32例;无HBV感染者14例,其中MSP阳性13例,RASSF1A基因异常甲基化与HBV感染之间的关系无统计学意义(x2=2.260,P=0.133).肝癌组、肝癌细胞系组及HBV感染组DNMTs表达水平与正常对照组相比均显著升高;组内比较显示肝癌组中DNMT3A、DNMT3B在MSP阳性患者中较阴性患者升高(分别为t=3.494,P＜0.01;t=4.258,P＜0.01),而DNMT1下降(t=3.221,P＜0.05);HBV感染组中,MSP阳性组织其DNMT3B较阴性者升高(t=12.171,P＜0.01).结论肝癌组织DNMTs水平变化与RASSF1A异常甲基化有密切关系;HBV感染与DNMT3B转录水平变化相关.
-
TCDD诱导的胎鼠腭发育过程中DNA甲基化变化
目的 研究2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlrodibenzo-p-dioxin,TCDD)作用于C57BL/6J孕鼠后,胎鼠腭组织基因组DNA甲基化水平变化及DNA甲基转移酶的表达情况.方法 C57BL/6J孕鼠共40只,完全随机分为TCDD组和对照组,每组20只.TCDD组于妊娠第10.5天(GD10.5)以TCDD28 μg/kg一次性灌胃,对照组以等量玉米油一次性灌胃;分别于GD13.5、14.5、15.5、16.5、17.5处死孕鼠,采集各时间点的胎鼠腭组织,分别提取基因组DNA、总RNA.应用MethylampTM基因组DNA甲基化定量试剂盒检测基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR检测DNA甲基转移酶Dnmt1、Dnmt3a和Dnmt3b mRNA的表达量.应用IBM SPSS 20.0软件进行统计分析,两样本间均数比较均采用独立样本t检验,所有结果作K-S检验均符合正态分布,方差不齐者采用校正t检验,P ＜0.05表示差异有统计学意义.结果 GD13.5、14.5和16.5胎鼠腭组织DNA甲基化水平:对照组分别为33.42％±6.78％、30.12％±3.92％和36.45％±3.27％,TCDD组分别为49.52％ ±4.03％、24.10％ ±2.29％和32.77％±0.98％.GD13.5,TCDD组DNA甲基化水平显著高于对照组组(P＜0.01);而在GD14.5、16.5均低于对照组(P＜0.05).GD13.5、16.5胎鼠腭组织Dnmt1 mRNA表达量:对照组分别为1.01 ±0.10和0.81 ±0.01,TCDD组分别为1.28±0.11和1.04±0.05.在GD13.5、16.5,TCDD组Dnmt1 mRNA表达量高于对照组(P ＜0.05,P＜0.01).GD13.5、16.5胎鼠腭组织Dnmt3a mRNA表达量:对照组分别为0.81±0.02和0.96±0.06,TCDD组分别为1.15 ±0.17和1.11 ±0.06.在GD13.5、16.5,TCDD组Dnmt3a mRNA表达量高于对照组(P ＜0.05,P ＜0.05).GD14.5,对照组Dnmt3b mRNA表达量为0.72±0.06,TCDD组为0.97 ±0.06,TCDD组显著高于对照组(P＜0.01).结论 胎鼠腭组织内可能存在复杂的DNA甲基化调控机制,Dnmt1、Dnmt3a表达升高引起腭组织基因组DNA甲基化水平在GD13.5时显著升高,可能是TCDD导致胎鼠腭发育障碍的表观遗传机制之一.
