首页 > 文献资料
-
SET基因缺陷对三氯乙烯诱导人正常肝细胞DNA甲基化水平改变的影响
目的 比较三氯乙烯(trichloroethylene)诱导人正常肝细胞(L-02细胞)和SET基因缺陷L-02细胞(SET缺陷细胞)中DNA甲基化相关指标的变化,探讨SET与三氯乙烯诱导的表观遗传调控作用之间的关系.方法 选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,使用三氯乙烯分别对L-02细胞和SET缺陷细胞进行处理,检测细胞增殖水平、细胞DNA甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases,DNMTs)活性的变化,通过Western blot法从蛋白水平分析DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)的表达变化.结果 三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,两种细胞的增殖水平均呈现下降趋势.使用0、1.0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理细胞后,L-02细胞的相对增殖水平分别为100.00 ±2.70、83.34±2.38、75.56±4.51、71.67±2.77、66.67±1.63(F=58.29,P＜0.001);SET缺陷细胞的相对增殖水平分别为101.12±1.67、85.01±2.33、79.44±1.67、78.337±3.89、76.11 ±3.33(F=42.41,P＜0.001).0、1.0、2.0、4.0和8.0 mmol/L的三氯乙烯处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,L-02细胞的DNA甲基化水平分别为3.77 ±0.08、3.48 ±0.08、3.38 ±0.10、3.14 ±0.15、2.91 ±0.07,呈下降趋势(F =212.87,P＜0.001);SET缺陷细胞DNA甲基化水平分别为3.77 ±0.15、3.57 ±0.15、3.30±0.11、3.35±0.13呈下降趋势(F =79.32,P＜0.001).L-02细胞经0、1.0、2、0、4.0、8.0 mmol/L的三氯乙烯处理24 h后,DNMT1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.03、1.28±0.04、1.20±0.04、1.62±0.05、1.43 ±0.04,表达升高(F=103.00,P＜0.001);而在SET缺陷细胞中DNMT1的相对表达量分别为1.00±0.04、0.96±0.02、1.19 ±0.05、0.85±0.03、0.83±0.03,出现下降(F =44.18,P＜0.001).结论 SET缺陷可以明显抑制三氯乙烯暴露引起的L-02细胞增殖水平及DNMTs活性的下降,改变DNMT1表达水平的变化趋势,提示SET参与了在三氯乙烯诱导下的肝毒性作用和表观遗传学调控机制.
-
垂盆草总黄酮及异鼠李素对对乙酰氨基酚诱导的L02细胞损伤的保护作用
目的:探讨垂盆草总黄酮及异鼠李素对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的人正常肝细胞(L02)损伤的保护作用.方法:以不同浓度的APAP刺激L02细胞,制备损伤模型,筛选APAP的有效刺激浓度;复制APAP诱导的L02细胞损伤模型,用细胞增殖与活性试剂(CCK-8)检测细胞存活能力,分析盆草总黄酮及异鼠李素对APAP诱导的L02细胞活性的影响;检测细胞上清液中丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH)含量,超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量.结果:与正常组比较,不同浓度的APAP处理的L02细胞活力显著降低,筛选出的造模条件为10 mmol· L-1 APAP孵育24 h,模型组肝细胞上清液中MDA含量升高(P ＜0.05,P＜0.01),GSH含量降低,SOD,GSH-Px活性降低,AST和ALT含量升高;与模型组比较,垂盆草总黄酮、异鼠李素均能显著提高APAP损伤细胞的存活率,降低MDA含量,提高GSH含量,提高SOD,GSH-Px活性,降低ALT和AST的释放量(P ＜0.05,P＜0.01).结论:垂盆草总黄酮及异鼠李素对APAP损伤的L02细胞具有较好的保护作用.
-
钙池操纵的Ca2+通道对人肝癌细胞增殖的影响
目的:对比研究人肝癌细胞与人正常肝细胞的钙池操纵的Ca2+通道(store-operated Ca2+channel,SOC)功能改变,探讨SOC对肝癌细胞增殖能力的影响.方法:培养人肝癌细胞(SMMC7721)与人正常肝细胞(HL-7702),应用膜片钳技术检测两组细胞的细胞膜SOC电流,应用激光共聚焦显微镜检测两组细胞的细胞内游离Ca2+离子浓度,应用MTT法检测两组细胞的增殖能力,应用流式细胞仪检测两组细胞的增殖周期.结果:人肝癌细胞的SOC电流密度为19.36 pA/pF±4.9 pA/pF,明显高于人正常肝细胞的电流密度8.90 pA/pF±2.78 pA/pF;人肝癌细胞的细胞内钙荧光强度增加31.81％±8.89％,明显高于人正常肝细胞的21.58％±6.01％; MTT生长曲线显示从第3天开始,人肝癌细胞的增殖能力明显高于人正常肝细胞,且时间越长,增殖能力差别越大；流式细胞仪研究提示人肝癌细胞的S期细胞比例(S-phase cells ratio,SPF)、增殖指数(proliferation index,PI)明显大于人正常肝细胞,从而提示人肝癌细胞的增殖能力明显高于人肝细胞.结论:与人正常肝细胞相比,人肝癌细胞的SOC电流密度增大、细胞内游离Ca2+浓度升高、增殖能力增强,提示人肝癌细胞增殖能力提高与其SOC功能增强有关.
-
肝细胞癌中PGC-1α基因的表达下调及其意义
目的 探讨PGC-1α在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其在肝细胞癌发生发展中的调节作用.方法 采用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析HCC组织和正常肝组织中PGC-1α基因的表达,比较癌组织与正常组织的表达差异.采用siRNA干扰技术体外抑制人正常肝细胞株L02中PGC-1α基因的表达,并在光镜下观察细胞形态,电镜下观察细胞超微结构的改变.应用人全基因组Oligo DNA芯片分析比较肝组织和肝细胞基因的表达变化.结果 HCC组织中PGC-1α基因的表达明显下调,仅为正常肝组织的25.0%.抑制PGC-1α基因的表达可使人正常肝细胞株L02呈现出类似肝癌细胞的形态和超微结构变化,即细胞变小、变圆,胞质减少、核增大,细胞数量减少,成簇分布,线粒体膜呈髓鞘样变性等.基因芯片分析显示,抑制PGC-1α基因的表达可使人正常肝细胞株L02呈现出类似肝癌组织的基因变化趋势,即细胞黏附基因(TNFAIP6、ITGAX、ICAM1、FN1、EMR1、ITGA6、PARVA)、成瘤基因(PMAIP1、CRKL、FHIT、IRF1、PLK)和促进细胞增殖基因(STAT1、CCL3L1、IL6、WARS、PCK1、MUC2、PRKR、IFITM1)表达上调,肿瘤抑制基因(FHIT、PRKR、IL24、DLEU1、RCN2)表达下调.结论 PGC-1α表达下调能诱导人正常肝细胞株L02的肿瘤性转化,PGC-1α在肝癌发生发展中具有重要的调节作用.
-
人肾小管上皮细胞及正常肝细胞在药物毒性器官选择中的应用
目的：探讨人肾小管上皮细胞（HK－2）及人正常肝细胞（L－02）在药物毒性器官选择中的应用。方法以肾毒性药物庆大霉素、顺铂、环孢素A及肝毒性药物硫唑嘌呤作用于HK－2及L－02细胞24 h，考察并比较药物对2种细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标变化的影响。结果肾毒性药物在较低浓度下即可引起HK－2细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标的显著性变化，肝毒性药物则在较低浓度下即可引起L－02细胞相关指标的显著性变化；比较4种药物的IC10值发现：3种肾毒性药物对HK－2的IC10值均小于对L－02的IC10值；而肝毒性药物硫唑嘌呤的IC10值则HK－2大于L－02。结论基于HK－2及L－02细胞评价药物的毒性器官选择性是可行性的。
-
纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布及凋亡作用研究
目的 探讨纳米银在人肝癌(HepG2)细胞株及人正常肝(L02)细胞株内的生物分布及引起凋亡作用差异的可能机制.方法 将HepG2细胞、L02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、20、40、80、160 μg/ml含纳米银的细胞培养液中24、48 h.采用透射电镜(TEM)观察细胞超微结构及颗粒分布;采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位下降细胞比例和活性氧(ROS)水平的变化.结果 染毒24 h时,HepG2和L02细胞的细胞膜受损,在膜周围可见黑色颗粒;染毒48 h时,在HepG2细胞的线粒体及L02细胞的溶酶体和内吞小泡中发现黑色颗粒.与对照组相比,20～160 μg/ml纳米银暴露HepG2细胞24、48 h以及40、80、160 μg/ml纳米银暴露L02细胞24 h及80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞48 h时的线粒体膜电位下降细胞比例均较高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞和L02细胞的线粒体膜电位下降细胞比例均呈上升趋势.与对照组相比,20～160 μg/ml纳米银暴露HepG2细胞24、48 h的ROS水平上升明显,差异有统计学意义(P＜0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞ROS水平呈上升趋势;各剂量纳米银暴露L02细胞中ROS水平无明显变化.结论 纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布不同对这两种细胞的凋亡造成了不同的影响.
-
SET缺陷对三氯乙烯诱导L-02细胞增殖和凋亡及组蛋白去乙酰化酶的影响
目的 比较三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)诱导人正常肝细胞(L-02细胞)和SET基因缺陷L-02细胞(SET缺陷细胞)中细胞增殖、凋亡、组蛋白去乙酰化酶活力及表达水平的变化,探讨TCE染毒对组蛋白修饰的影响及SET在表观遗传调控中的作用.方法 选用前期建立的SET缺陷细胞为研究对象,以未经TCE处理的L-02细胞和SET缺陷细胞作为各自的对照组,用2.00和8.00 mmol/LTCE染毒两种细胞24 h,用CCK-8法和Hoechst 33342染色法检测细胞的增殖水平和凋亡率.用0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mmol/L TCE染毒两种细胞,检测细胞的组蛋白去乙酰化酶活力和蛋白去乙酰化酶的蛋白表达水平.结果 TCE 8.00 mmol/L染毒组SET缺陷细胞与L-02肝细胞比较,增殖水平呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势,且差异均有统计学意义(t值分别为-4.362和23.950,P＜0.05).TCE处理L-02肝细胞和SET缺陷细胞后均引起细胞增殖水平的下降和凋亡率的升高,当TCE浓度达到8.00 mmol/L时,两组细胞间的增殖水平和凋亡率的差异有统计学意义(t值分别为-4.362,和23.950,P值均小于0.05).使用0,0.25,0.50,1.00,2.00,4.00和8.00 mmol/L TCE处理L-02细胞和SET缺陷细胞24 h后,两种细胞的组蛋白去乙酰化酶活力水平均呈现上升趋势.其中,当TCE染毒浓度到达0.50 mmol/L时,与L-02细胞对照组比较,L-02细胞组组蛋白去乙酰化酶活力明显升高,差异有统计学意义(F值为403.26,P＜0.01);TCE为1.00 mmol/L时酶活力高.与SET缺陷细胞对照组比较,当TCE达到1.00 mmol/L时,SET缺陷细胞组蛋白去乙酰化酶活力明显升高,差异有统计学意义(F值为44.01,P＜0.01).与同染毒剂量的L-02细胞比较,当TCE染毒剂量到达0.50 mmol/L时,SET缺陷细胞的组蛋白去乙酰化酶活力均低于L-02细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).与L-02细胞对照组比较,TCE染毒的L-02细胞HDAC2的蛋白表达水平明显上调,差异有统计学意义(F值为79.99,P＜0.01);TCE染毒的SET缺陷细胞HDAC2蛋白表达水平变化无明显规律.结论 TCE染毒可以诱发L-02细胞细胞增殖水平、凋亡率、组蛋白去乙酰化酶活力及相关蛋白表达水平的改变,SET缺陷可以明显抑制TCE染毒引起的细胞增殖、凋亡以及组蛋白修饰的异常.
-
紫薯黄酮对酒精诱导人正常肝细胞氧化损伤保护作用
目的:研究紫薯黄酮对酒精损伤人正常肝细胞 (HL7702) 的保护作用.方法:分别以酒精培养 (摩尔浓度100、200、300、400、500、600、700、800 mm) HL7702, CCK-8检测细胞的生存率以筛查复制模型的佳浓度以及考察紫薯黄酮对细胞的毒性的影响.并使用试剂盒比色法检测各组细胞超氧化物歧化酶 (SOD) 、过氧化氢酶 (CAT) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX) 、过氧化氢 (H2O2) 及总抗氧化能力 (T-AOC) 水平.采用统计分析软件SPSS17.0进行统计学分析.结果:建立酒精诱导损伤模型佳浓度为500 mm;紫薯黄酮适宜的给药范围是100～800μg/m L;200、400、600、800μg/m L的紫薯黄酮可以剂量依赖性的升高酒精损伤模型中HL7702的存活率, 并提高HL7702细胞内的T-AOC、SOD、CAT及GSH-PX水平, 同时降低H2O2的生成.结论:紫薯黄酮能够保护酒损伤的HL7702, 其保护机制与增强T-AOC、SOD、CAT及GSH-PX活性, 降低H2O2含量有关.
-
内质网应激预处理对人正常肝细胞缺氧再复氧损伤的保护作用
目的:研究内质网应激预处理对人肝细胞缺氧复氧损伤的保护作用.方法:将培养的人肝细胞分为4组:正常对照(C)组、细胞缺氧复氧损伤(H/R)组、内质网应激(ER)组、内质网应激预处理(ERP+ H/R)组.收集各组细胞,以流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-bloting及RT-PCR检测内质网应激特异蛋白GRP78表达水平,并通过透射电镜观察各组细胞超微结构改变.结果:ERP+ H/R组细胞凋亡率明显低于H/R组(P＜0.05),ER及ERP+ H/R组GRP78蛋白表达明显高于H/R组(P＜0.05).结论:内质网应激预处理对肝细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用,内质网应激特异性蛋白GRP78可能在肝细胞缺氧复氧损伤中作为一种关键性的保护蛋白出现.
-
亚砷酸钠对L-02肝细胞微小RNA-191与金属蛋白酶组织抑制因子3表达的影响
目的 了解亚砷酸钠(NaAs02)对人正常肝细胞(L-02)微小RNA-191 (miR-191)与金属蛋白酶组织抑制因子3 (TIMP-3)表达的影响.方法 用不同剂量NaAs02[0(对照组)、5、25、50、75 μmol/L]染毒L-02肝细胞24h;用5和25 μmol/L NaAs02染毒L-02肝细胞0(对照)、12、24、48 h;采用抑制剂(miR-191 inhibitor)对miR-191表达进行干预.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-191和TIMP-3 mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测TIMP-3蛋白表达.结果 量-效研究:miR-191和TIMP-3 mRNA、蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=85.674、20.952、123.393,P均＜0.05),其中5、25、50、75 μmol/L组miR-191表达(1.702±0.124、2.077±0.234、2.145±0.105、2.003±0.077)高于对照组(0.990±0.035,P均＜0.05);25、50、75 μmol/L组TIMP-3 mRNA表达(0.848±0.067、0.804±0.081、0.813±0.076)低于对照组(0.996±0.007,P均＜0.05),5μmol/L组TIMP-3 mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义(0.939±0.133比0.996±0.007,P＞0.05);5、25、50、75 μmol/L组TIMP-3蛋白表达(0.846±0.093、0.611±0.123、0.554±0.098、0.529±0.067)低于对照组(1.006±0.003,P均＜0.05).时-效研究:miR-191和TIMP-3 mRNA、蛋白表达组间比较差异有统计学意义(5 μmol/L剂量下,F=86.355、16.404、22.898,P均＜0.05;25 μmol/L剂量下,F=104.321、20.123、52.321,P均＜0.05),其中5、25 μmol/L处理12、24、48 h组miR-191表达(1.392±0.152、1.691±0.167、2.018±0.130和1A56±0.167、1.946±0.178、2.259±0.256)高于对照组(1.001±0.014、1.008±0.027,P均＜0.05);5μmol/L处理48 h和25 μmol/L处理12、24、48 h组TIMP-3 mRNA表达(0.824±0.093和0.897±0.033、0.815±0.089、0.709±0.103)低于对照组(1.004±0.018、0.997±0.057,P均＜0.05),5 μmol/L处理12、24h组TIMP-3 mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义(0.952±0.072、0.929 ±0.121比1.004±0.018,P均＞0.05);5和25 μmol/L处理12、24、48 h组TIMP-3蛋白表达(0.857±0.068、0.832±0.106、0.691±0.112和0.785±0.097、0.620±0.066、0.453±0.075)低于对照组(1.006±0.045、1.004±0.078,P均＜0.05) .miR-191inhibitor处理:各处理组miR-191和TIMP-3蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=104.306、67.015,P均＜0.05),miR-191 inhibitor可以显著抑制砷所引起的miR-191高表达(0.314±0.094比2.051±0.371,P＜ 0.05)并上调TIMP-3蛋白的表达(1.965±0.277比0.541±0.183,P＜ 0.05).结论 L-02肝细胞中miR-191可应答NaAsO2暴露,呈高表达状态,进而在蛋白翻译水平上抑制其下游靶基因TIMP-3的表达.
关键词： 亚砷酸钠 人正常肝细胞 微小RNA-191 金属蛋白酶组织抑制因子3 -
5种常用中药注射剂对人正常肝细胞L-02的影响
目的:观察5种中药注射剂(榄香烯、鸦胆子、华蟾素、康莱特、肝力)体外对人正常肝细胞L-02增殖的影响.方法:将人正常肝细胞L-02进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度、不同时间5种中药注射剂的体外抑制作用.结果:榄香稀、鸦胆子对L-02细胞具有较强的抑制作用,康莱特具有一定的抑制作用,而肝力抑制作用不明显,华蟾素则具有明显的时间依赖性.结论:榄香烯和鸦胆子在体外对L-02细胞具有较强的抑制作用,康莱特抑制作用较弱,肝力则无明显抑制作用,华蟾素各时间点作用差异大.
-
黄连素衍生物(氟[19F]HX-01)体外靶向肝癌的初步研究
氟[18F]标记黄连素衍生物(氟[18F]HX-01)是一种潜在的正电子发射计算机断层显像(PET)肿瘤显像剂,而能量状态不同、无放射性的标准对照品(氟[19F]HX-01)的物理性质及化学性质与其完全相同.本文通过研究氟[19F]HX-01在体外人肝癌细胞和人正常细胞中有无选择性分布的现象,从而为进一步完成活体内氟[18F]HX-01肝癌PET显像奠定基础.本文利用小檗红碱和3-氟丙醇在碱催化作用下,一步反应制备氟[19F]HX-01;课题组选取人正常肝细胞(HL-7702)与人肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721)为实验细胞材料,于荧光显微镜下观察[19F]HX-01在细胞内的定位;用细胞增殖活性检测试剂盒(CCK-8)测定氟[19F]HX-01对上述细胞的增殖抑制作用及其对细胞的毒性作用.本文研究结果显示:①氟[19F]HX-01与人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721的结合能力明显高于人正常肝细胞HL-7702;②氟[19F]HX-01对HepG2、SMMC-7721以及HL-7702的细胞增殖抑制作用具有剂量依赖效应;③氟[19F]HX-01对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用较SMMC-7721、HepG2更低.上述体外研究结果表明:氟[19F]HX-01对人肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721)较人正常肝细胞(HL-7702)具有更高选择性和更高毒性.以此为基础,放射性对照品氟[18F]HX-01有望进一步开发成为潜在肝癌PET显像分子探针.
-
双膦酸盐对肺癌细胞增殖的影响
背景与目的双膦酸盐在临床上被广泛用于多种骨病的治疗,在动物实验中可减少乳腺癌及前列腺癌细胞骨转移的发生,抑制和减少肿瘤在骨上的发展及负累,但对同样易于发生骨转移的肺癌的作用尚缺少研究.本实验的目的是研究几种双膦酸盐(阿仑膦酸钠、埃本膦酸钠、亚甲基二膦酸钠及因卡膦酸二钠)对不同肺癌细胞体外增殖的抑制作用,并验证这种抑制作用的广泛性或者选择性.方法采用磺酰罗丹明B染色法检测不同浓度的双膦酸盐药物对肺癌细胞及人正常肝细胞体外增殖的影响.结果不同浓度的双膦酸盐药物作用72 h后,能不同程度地抑制肺癌细胞的增殖,亚甲基二膦酸钠的抑制效果很小,埃本膦酸钠及因卡膦酸二钠的作用介于亚甲基二膦酸钠和阿仑膦酸钠之间.不同的双膦酸盐对人正常肝细胞的影响具有差异性,亚甲基二膦酸钠、埃本膦酸钠及因卡膦酸二钠均表现出低毒性,而阿仑膦酸钠的毒性显著.不同的肺癌细胞对双膦酸盐的敏感性也有明显差异,H446及SPC-A1相对较为耐受,而H460及A549则较为敏感.结论双膦酸盐药物对肺癌细胞及人正常肝细胞均有不同程度的抑制增殖作用,且这种作用与药物种类、浓度和肺癌细胞的种类有关.
