首页 > 文献资料
-
三氯乙烯的毒理学研究新进展
三氯乙烯是一种工业上应用广泛的有机溶剂,三氯乙烯及其主要代谢物在体内外实验中可引起癌变、突变、畸变及免疫毒性作用等.本文综述了近5年来国外对这一有机化合物在体内外的主要代谢途径和各种毒性损伤及机制等的研究.
-
CYP3A4沉默细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响
目的 构建CYP3 A4基因沉默载体,转染L02肝细胞,建立CYP3A4沉默细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响.方法 根据GenBank提供的CYP3A4基因mRNA序列设计合成shRNA,将shRNA连接到pLKO.1-puro中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞.用嘌呤霉素进行筛选得到CYP3A4沉默细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定.用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP3A4沉默细胞进行染毒12h,观察凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)表达变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的干扰序列与设计的序列一致,荧光定量PCR检测CYP3A4沉默细胞CYP3A4基因表达比正常L02肝细胞下降77.3％,Western blot实验显示CYP3A4沉默细胞CYP3A4蛋白表达水平比正常L02肝细胞下降84.6％.CYP3A4沉默细胞经三氯乙烯染毒后Bcl-2表达水平显著高于L02细胞的表达水平；Caspase-3表达水平无明显改变；Caspase-8仅在TCE高剂量组表达下降；Caspase-9在TCE剂量≥1.0 mmol/L表达水平下降；癌基因c-fos、c-myc、k-ras和p53表达水平都有一定程度下降,部分剂量组存在显著差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 三氯乙烯对正常肝细胞和CYP3A4沉默细胞凋亡基因和癌基因表达存在明显差异,提示CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系.
关键词： 肝细胞 CYP3A4 慢病毒载体 CYP3A4基因沉默细胞 三氯乙烯 -
三氯乙烯变态反应皮炎病人外周血肝代谢酶基因表达水平研究
目的 探讨三氯乙烯(TCE)变态反应皮炎病人外周血肝代谢酶基因(CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4) mRNA表达变化情况.方法 抽取健康人(对照组)与4例三氯乙烯变态反应皮炎病人(病例组)抗凝外周血并提取RNA,采用实时荧光定量PCR( Real-time quantitative PCR)技术检测外周血中CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4的mRNA表达水平.结果 3例男性病人和1例女性病人CYP基因改变比较接近,无明显性别差异；4例病人CYP基因表达数据合并后结果显示:病例组CYP1A2的mRNA表达水平比对照组增加8.23倍(P＜0.01),CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4比对照组分别增加3.16、4.18和4.85倍(P＜0.01或P＜0.05),CYP2A6表达水平和对照组比较差异无统计学意义.结论 三氯乙烯可引起肝代谢酶基因表达水平改变,提示肝代谢酶基因在TCE的毒性作用中发挥重要作用.
-
SD大鼠与NIH小鼠对三氯乙烯反应的比较
三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)作为金属脱脂清洗剂普遍应用于电镀、五金和电子等行业,可使部分职业工人发生药疹样皮炎.TCE药疹样皮炎为一种变态反应,对国内相关行业已造成极大的危害[1],但其发病机制目前仍未明了.我们着眼于TCE变态反应动物模型的研究,对SD大鼠及NIH小鼠进行TCE体内致敏及体外刺激的实验,为进一步研究TCE免疫异常反应病的机制奠定基础.
-
三氯乙烯致敏小鼠免疫器官病理学及炎性因子水平的变化
三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)作为一种工业原料广泛应用于有机合成、五金和电子等行业,可对接触人群造成多脏器损害 [1],尤其是引起药疹样皮炎危害十分严重,发病者以皮肤过敏性损害为主要表现,严重者表现为全身弥漫性剥脱性皮炎、大疱性表皮坏死松解症等 [2].本研究通过对BALB/c小鼠采用背部皮内注射TCE的染毒方式,建立TCE所致的过敏性皮炎动物模型,检测致敏动物免疫器官组织病理学改变及血清中炎性因子水平的变化,探讨该皮炎的发病机制,进一步阐述TCE对生物体的毒性作用.
-
维生素E和银杏叶提取物对3种氯代烯烃细胞毒性的拮抗作用
目的探讨维生素E和银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GbE)对三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene,PCE)和二氯乙烯(dichloroethylene,DCE)所致人角质形成细胞(keratinocyte,KC)细胞毒性的拮抗作用.方法利用中性红吸附(neutral red uptake,NRU)试验和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放试验分别测定细胞活力和细胞毒性,分析维生素E和GbE对3种氯代烯烃的细胞毒性拮抗作用.结果维生素E和GbE对3种氯代烯烃的细胞毒性具有明显的拮抗作用,在10～100mmol/L(mg/L)范围内呈明显的剂量-效应关系,当维生素E浓度达到50 mmol/L,GbE浓度达到150 mg/L时,细胞基本恢复为正常的状态.结论vE和GbE对3种氯代烯烃所致KC细胞毒性的拮抗作用可能与它们稳定细胞膜结构,减少细胞膜损伤有关.
-
三氯乙烯对3种细胞色素P450酶基因表达的影响
目的探讨三氯乙烯( Trichloroethylene, TCE )对人体淋巴细胞瘤细胞株(MCL-5)中3种细胞色素P450酶基因(CYP1A1、CYP2E1、CYP3A4)表达的影响,并研究剂量反应关系和时间反应关系.方法用常规的细胞培养方法,0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L TCE处理细胞12、24、48、72 h.利用提纯RNA和合成cDNA的药盒,合成cDNA,然后逆转录聚合酶反应(RT-PCR)表达3种CYP450基因,以β-Actin作为内对照,分析不同处理剂量和时间时基因表达的强度.结果在MCL-5细胞株中都有基本的表达,CYP1A1表达在用1.0、1.5、2.0 mmol/LTCE处理48 h后有被上调的趋势,而且上调趋势随处理时间延长而加强;CYP2E1、CYP3A4表达不受TCE处理时间长短的影响.3种CYP450酶基因的表达受TCE剂量的影响,3随0.5 mmol/L,1.0、1.5、2.0 mmol/L剂量的增加有上调的趋势.结论 TCE对CYP450酶系统中的CYP2E1、CYP1A1、CYP3A4基因有明显的诱导作用,这些基因被诱导后的结果,可能会导致相对应酶活性的增加,同时加强对TCE的代谢,使TCE的代谢产物增加.
-
银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞凋亡的影响
目的 研究体外培养条件下银杏叶提取物(ginkgo biloba leaf extracts,EGb)对三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)诱导的正常人表皮角质形成细胞(normal human epidernis keratinocyte,NHEK)凋亡的影响.方法 体外培养条件下,用中性红吸附试验(NRU)测定TCE对NHEK的中性红吸附减少50%的质量浓度(NR50值)和EGb的低有效保护质量浓度.用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞仪(flow cytometer,FCM)测定细胞DNA含量并计算凋亡发生率.结果 TCE对NHEK的NR40值为4.53(3.92～5.13)mmol/L;用10、50、100、150和200 mg/L EGb预孵育NHEK 2 h时,由2.0 mmol/L TCE引起的细胞活力的下降随EGb剂量的增加逐渐恢复,且150 mg/L为低有效保护剂量.TCE可引起NHEK的超微结构呈凋亡改变,凋亡发生率呈剂量依赖式增加.与0.125、0.5和2.0 mmol/LTCE暴露组相比,150 mg/L EGb预孵育组,细胞超微结构恢复到正常对照组水平,凋亡发生率明显减少.结论 体外培养条件下,EGb可以抑制TCE诱导的NHEK的细胞凋亡.
-
T、B淋巴细胞及相应细胞因子在TCE诱发接触性的过敏反应
目的三氯乙烯(TCE)是具有致敏活性的小分子化学物,我们利用TCE染毒的小鼠模型,研究T、B淋巴细胞及相应细胞因子在TCE诱发过敏反应中的作用.
-
三氯乙烯对L-02肝细胞活力及SET蛋白表达的影响
三氯乙烯( Trichloroethylene,TCE)是工业上广泛应用的一种有机溶剂,主要通过呼吸道和皮肤进入人体产生职业性危害,吸收后主要蓄积于肝脏、脑、心脏等器官.SET蛋白,又称I2PP2A或TAF-1β,1992年因首次鉴于伴有SET基因染色体易位的未分化型白血病患者SE而命名[1],该蛋白在细胞中广泛存在.SET是肿瘤抑制因子蛋白磷酸酶2A( protein phosphatase 2A,PP2A)的胞内抑制蛋白,有文献报道SET抑制组蛋白乙酰化参与转录[2].但目前尚不清楚SET蛋白在TCE致肝细胞毒性中的作用.本文以人正常肝细胞L-02为受试细胞,建立了TCE致L-02肝细胞的剂量-效应关系,同时研究了TCE对SET蛋白表达变化的影响,为探讨TCE致肝损害发病机理及其治疗提供科学依据.
-
三氯乙烯的遗传毒性研究
目的检测三氯乙烯的遗传毒性.方法 Ames试验采用剂量为50 000、10 000、2 000、400和80μg/皿的三氯乙烯对鼠伤寒沙门氏菌株TA97、TA98、TA100、TA102进行染毒,并于37℃培养48 h后观察其菌落数.微核试验设3个剂量组(三氯乙烯剂量分别1 706、853和427 mg/kg体重)和1个溶剂对照组(花生油)、1个阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg体重),经口灌胃给予受试物,用30 h给受试物法,即2次给受试物间隙24h,第2次给受试物后6 h处死动物,制片,观察并计数嗜多染红细胞的微核率,并与阳性对照组和阴性对照组进行比较分析.
-
三氯乙烯诱发豚鼠过敏性皮炎的免疫学效应
目的研究三氯乙烯(TCE)诱发豚鼠过敏性皮炎的免疫学效应.方法采用豚鼠大值法建立TCE致敏动物模型,应用ELISA双抗体夹心法定量检测血清中IgG含量;用MTT法测定刀豆蛋白A刺激下T淋巴细胞的增殖转化功能,用乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞功能.结果TCE的致敏率为66.7%,属强致敏物.TCE致敏豚鼠血清总IgG含量明显高于阴性对照组(P＜0.05).TCE致敏豚鼠脾T淋巴细胞增殖转化功能及NK细胞对瘤细胞的杀伤活性与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论体液免疫在TCE诱发过敏性皮炎过程中发挥一定的作用.在本染毒方式和染毒剂量下,未见TCE对豚鼠T淋巴细胞和NK细胞活性的影响.
-
三氯乙烯作业人群外周血淋巴细胞染色体损伤研究
目的 探讨三氯乙烯(TCE)致作业人群外周血淋巴细胞染色体损伤的作用.方法以91名TCE暴露工人和59名对照作为研究对象,调查职业史、年龄、性别、吸烟和饮酒等信息.收集班后尿,测定尿中三氯乙酸(TCA)水平反映TCE暴露内剂量.抽取肘静脉血,胞质分裂阻滞微核法制备外周血淋巴细胞涂片,计数微核、核质桥和核芽发生率,评价染色体损伤水平.结果 两组研究对象在年龄、性别、吸烟、饮酒状况等方面均无显著性差异.暴露组平均TCE作业工龄为1.8年.暴露组尿中TCA水平为57.5mg/L,远远高于对照组0.9mg/L.两组研究对象的微核率及核质桥率无显著差异,但暴露组核芽率[(1.6±1.0)‰]显著高于对照组[(1.2±0.8)‰,P =0.05].核芽率的升高在尿TCA≥50.0 mg/L组和TCE作业工龄≥1.8年组中表现更为明显.同时,尿TCA≥50.0 mg/L的工人,其微核率[(1.8±0.9)‰]也显著高于对照组[(1.4±0.7)‰,P =0.05].未发现年龄、性别、吸烟、饮酒对微核率、核质桥率、核芽率的显著影响.结论 TCE暴露可致作业工人染色体损伤增加,核芽可以较为敏感的检出由TCE职业暴露所引发的基因组不稳定性.
-
低剂量三氯乙烯诱导人正常肝细胞损伤耐受差异表达基因的研究
目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L-02)损伤耐受差异表达的基因.方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L-02毒性剂量-效应关系,选择5μmol/L的三氯乙烯为低剂量,40μmol/L为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量刺激24小时,再用高剂量刺激6小时),然后用荧光差异显示PCR(Fluoro DD-PCR)寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定.结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到51个差异条带.对其中的11个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中9个已知基因,2个新基因.结论用荧光差异显示PCR方法寻找TCE诱导L-02损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究TCE诱导L-02的损伤耐受的机理提供科学依据.
-
醛、醇脱氢酶基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎易感性的关系
目的研究醛脱氢酶、醇脱氢酶基因多态性与三氯乙烯药疹样皮炎易感性的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,比较108例三氯乙烯药疹样皮炎病人和145例健康三氯乙烯接触工人醛脱氢酶2(ALDH2)、醇脱氢酶2(ADH2)和醇脱氢酶3(ADH3)的基因多态性分布,并计算相对危险度(OR).结果ADH2和ADH3基因型分布在病人与接触对照工人中无显著性差异;ALDH2变异型基因(ALDH2*1/*2+ALDH2*2/*2)频率在病人中显著低于接触对照工人(分别为27.8%和43.4%,P=0.011),使三氯乙烯药疹样皮炎的危险性显著降低(OR=0.50,95% CI=0.29～0.85).结论高活性ALDH2可能是导致三氯乙烯药疹样皮炎个体易感性差异的原因之一.
-
EB病毒转化人外周血B淋巴细胞的影响因素研究
目的 探讨人类疱疹病毒(EBV)转化外周血B淋巴细胞试验的影响因素.方法 用B95-8细胞制备EBV,实时荧光定量-PCR(real time-PCR)法测定EBV滴度以确保病毒有效性,Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,研究环孢霉素A(CSA)的浓度、CSA加入时间、淋巴细胞浓度3个因素对EBV转化外周血B淋巴细胞试验的影响,选择优化条件对三氯乙烯接触工人的B淋巴细胞进行转化.结果 制备的病毒滴度分别为5.45×10~6/ml和1.06×10~6/ml.不同浓度CSA(0.2、1和2μg/ml)作用以及不同加入时间(同时加入或2h后)B淋巴细胞均成功永生化;正常人B淋巴细胞转化时淋巴细胞浓度不低于2×10~6/ml时方能成功水生化,而接触三氯乙烯工人的淋巴细胞在1×10~6/ml浓度下亦转化成功.不同条件下转化成功的B淋巴细胞永生化细胞系在形态上无明显差别,显微镜下可见B淋巴细胞体积增大并聚集成团.结论 在建立B淋巴细胞永生化细胞系的过程中,CSA浓度和加入时间对转化结果未见影响,而淋巴细胞与EBV接触时的细胞浓度是影响实验成败的关键因素,接触三氯乙烯工人的B淋巴细胞在1×10~6/ml浓度下亦转化成功,推测与淋巴细胞致敏状态有关.
-
三氯乙烯所致接触性皮炎小鼠免疫功能的变化
目的 研究三氯乙烯(TCE)刺激BALB/c小鼠产生接触性皮炎,观察TCE对小鼠免疫功能的影响.方法 采用背部皮内注射TCE染毒BALB/c小鼠,观察脾脏、胸腺脏器系数的变化情况,对脾和胸腺细胞进行体外淋巴细胞活力和增殖功能测定,腹腔巨噬细胞吞噬功能测定,NK细胞杀伤活性测定及小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-a)、干扰素(IFN-γ)含量的测定.结果 TCE实验组胸腺脏器系数显著低于阴性对照组(P＜0.01):TCE实验组T淋巴细胞活力及增殖能力显著高于阴性对照组(P＜0.01);TCE实验组的巨噬细胞吞噬率和NK细胞杀伤活性显著高于阴性对照组(P＜0.01);TCE实验组小鼠血清中TNF-a的含量显著高于阴性对照组(P＜0.01).结论 三氯乙烯能够诱发接触性皮炎,其中毒机制属于迟发型超敏反应.
-
职业性三氯乙烯药疹样皮炎诊疗体会
目的：探讨三氯乙烯致药疹样皮炎的治疗与护理。方法阐述因职业接触三氯乙烯致皮肤及肝、肾严重损伤患者的病情，对其采用激素、抗生素及加强皮肤黏膜护理等综合治疗。结果患者诊断为职业性三氯乙烯药疹样皮炎，伴有发热、肝、肾等脏器损害，因感染性休克、弥散性血管内凝血（DIC）死亡。结论三氯乙烯致药疹样皮炎属变态反应性疾病，无剂量－效应关系。及早、足量激素治疗效果明显，做好皮肤黏膜护理很关键。
-
一起职业性三氯乙烯中毒死亡案的调查与行政处罚
作者通过对一患病女工死亡事故的调查,查获了一外商独资企业未按照<中华人民共和国职业病防治法>(下称职业病防治法)的规定对建设项目进行职业病危害预评价的卫生审核和竣工时的卫生验收,未向卫生行政申报职业病危害项目,致使作业场所空气中三氯乙烯浓度在286.3～396.7mg/m3,在该场所工作的一名女工因职业性三氯乙烯中毒而死亡,据其违法事实依法对该公司予以卫生行政处罚,并对该案件中女工未用实名制工作这一社会问题进行了初步探讨.
-
使用三氯乙烯企业的主要职业危害与整改措施探讨
目的 对存在三氯乙烯(TCE)作业的52家企业调查了解其职业危害并提出预防控制措施.方法 制定《三氯乙烯企业职业卫生专项检查考核表》,确定检查考核项目与各项目考核分值,对52家三氯乙烯企业进行5大方面的检查.结果 6家三氯乙烯企业没有开展职业病危害项目申报;7家企业虽开展了三氯乙烯检测,但三氯乙烯浓度超过国家职业卫生标准;7家企业没有将三氯乙烯清洗房分开设立,不符合有害作业与无害作业分开的原则;5家企业的三氯乙烯作业岗位没有职业病危害警示标识与警示说明;11家企业虽然安排新人厂工人培训,但基本上没有职业卫生知识培训内容.本次检查52家企业的低分是42分,高分91分,平均63.8分.结论 大部分三氯乙烯企业仍存在许多隐患,不符合《职业病防治法》的要求,必须下决心整改,才能从根本上预防三氯乙烯中毒的发生.
