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氯唑沙宗在C57BL/6小鼠体内的代谢及药代动力学参数研究
目的 通过氯唑沙宗(CZX)经口灌胃C57BL/6雄性小鼠,确定血浆中CZX和代谢产物6-羟基-氯唑沙宗(6-OH-CZX)的浓度-时间曲线,计算药代动力学参数,并与文献报道的CZX药代动力学参数进行比较和讨论.方法 72只SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机分成20和200 mg/kg·bw 2个剂量组,经口灌胃给药.在灌胃前和灌胃后2、5、10、15、20和30 min,1、2和4h分别取4只小鼠采血,通过高效液相-串联质谱测定血清中的CZX和6-OH-CZX浓度,并利用DAS 2.0软件计算药代动力学数据.结果 20 mg/kg·bw CZX组小鼠灌胃后30 min,CZX和6-OH-CZX在血浆中均达到高浓度,分别为57.61和1.84 nmol/ml.200 mg/kg·bw CZX组小鼠灌胃后10和15 min,CZX和6-OH-CZX血浆中的浓度分别达到高峰,为332.56和5.96 nmol/ml.药代动力学参数结果表明,20和200 mg/kg·bw剂量组的CZX半衰期t1/2分别为63.11和53.80 min.200 mg/kg·bw剂量组的CZX和6-OH-CZX的浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为20 mg/kg· bw剂量组AUC的3.71和2.91倍.结论 C57BL/6小鼠在经口灌胃CZX的剂量为20 ～ 200 mg/kg·bw时,可以选择检测灌胃后5～ 20 min内血浆CZX和6-OH-CZX的浓度,以便在进行同一种属小鼠的CYP2E1酶活性相关研究中,达到较好的对比效果.
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毒物代谢酶的基因多态性与慢性苯中毒易感性
目的 探讨毒物代谢酶CYP2E1、MPO、NQO1、GSTT1和GSTM1基因多态性与慢性苯中毒遗传易感性之间的关系.方法 选择100名慢性苯中毒工人为病例组及90名同期接苯但无苯中毒表现的同工种工人为对照组,应用PCR-RFLP及多重PCR方法判定CYP2E1、MPO、NQO1、GSTT1和GSTM1基因基因型.结果 携带NQO1 C609T T/T基因型(纯合突变型)个体发生苯中毒的危险性是具有C/T基因型(杂合型)和C/C基因型(野生型)个体的2.82倍(95% CI:1.42～5.58,P＜0.05),是具有C/C基因型(野生型)个体的2.94倍(95% CI:1.25～6.90,P＜0.05);携带GSTT1缺失型(null)基因型个体发生苯中毒的危险性是具GSTT1非缺失型(non-null)基因型个体的1.91倍(95% CI:1.05～3.45,P＜0.05).未发现CYP2E1、MPO、GSTM1基因型与苯中毒之间的关系.同时携带NQO1 C609T纯合突变型(T/T)、GSTT1缺失型(null)与GSTM1缺失型(null)个体接苯时发生苯中毒的危险性高,是NQO1 C609T杂合型(C/T)和野生型(C/C)、GSTT1非缺失型(non-null)与GSTM1非缺失型(non-null)个体的20.41倍(95% CI:3.79～111.11,P＜0.01).结论 基因之间的交互作用在苯中毒的发生中起重要作用.同时携带NQO1 C609T纯合突变基因型(T/T)、GSTT1缺失基因型(null)和GSTM1缺失基因型(null)个体发生苯中毒的风险大,可考虑作为苯中毒的重要生物标志物.
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CYP2E1介导氧化应激反应在二甲基甲酰胺致小鼠急性肝损伤中的作用
目的 观察二甲基甲酰胺(DMF)小鼠肝急性毒性效应以及对机体抗氧化能力的影响,探讨细胞色素单加氧酶P450 2E1(CYP2E1)在高剂量DMF致肝脏氧化损伤中的作用.方法 SPF级健康C57 BL/6小鼠72只,随机分为1个对照组和5个DMF染毒组,每组12只,雌雄各半.DMF剂量为1500 mg/kg· bw,单次经口灌胃染毒.试验前后称量体重并观察动物的一般毒性反应,分别于染毒后8、12、24、48和72 h处死,取血并解剖肝,进行生化组织病理学检查.应用化学比色法测定肝组织中脂质过氧化产物(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;荧光定量PCR和Western blot方法分别检测肝组织Cyp2e1基因mRNA以及蛋白表达情况.结果 DMF染毒后24 h,雌性小鼠肝重量和脏器系数较对照组明显增加;雄性小鼠体重下降明显,脏器系数呈现波动性改变.雌性小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)浓度于染毒后24 h快速上升,72 h达到峰值;雄性小鼠于48 h急剧升至高峰,与对照及其他各组比较,差异均存在统计学意义(P＜0.01).雌、雄性小鼠天冬氨酸转氨酶(AST)峰值分别出现在48和72 h,较对照组和其他各组升高,差异有统计学意义(P＜0.01).组织病理学检查发现,DMF染毒各组存在不同程度的肝细胞变性、凝固性坏死灶以及淋巴细胞浸润等病理变化,以雄性小鼠肝损伤更为持久和严重.DMF染毒后肝MDA含量一过性升高;24～72 h SOD酶活性明显减弱,雄性小鼠GSH消耗明显,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).雄性小鼠肝Cyp2e1 mRNA表达在DMF染毒后8h明显上调,随后24 ～72 h基因表达水平快速下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);雌性小鼠该基因表达下调.Western blot检测发现DMF染毒后雌、雄小鼠肝CYP2E1蛋白水平均出现下降趋势.结论 高剂量DMF通过氧化应激及脂质过氧化诱发C57BL/6小鼠肝急性毒性反应,雄性病变更为严重.DMF暴露初期,Cyp2e1 mRNA表达增强可能促进了肝氧化损伤的发生.
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大蒜油对大鼠正己烷代谢酶的影响
目的 研究大蒜油(garlic oil,GO)对正己烷(n-hexane)染毒大鼠CYP2E1、CYP2B1和ADH的影响及其机制.方法 雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常对照组、大蒜油对照组、正己烷模型组、正己烷+大蒜油低、高剂量组(n=10)；模型组、大蒜油低、高剂量组大鼠分别给予2000 mg/kg·bw正己烷灌胃,大蒜油低、高剂量组大鼠于正己烷灌胃前1h分别给予40和80 mg/kg·bw大蒜油灌胃,大蒜油对照组给予80 mg/kg·bw大蒜油灌胃,每周6次,持续10周.每2周测步态评分,监测大鼠周围神经损伤情况.10周末,检测肝组织中CYP2E1、CYP2B1和乙醇脱氢酶(ADH)表达及活性,以及血清中2,5-己二酮(2,5-HD)含量变化.结果 与模型组相比,大蒜油低高剂量组步态评分分别降低了38.2％和41.2％(P＜0.05),血清2,5-HD含量分别降低47.7％和78.7％ (P ＜0.01)；肝脏CYP2E1含量及活性分别降低了32.9％、39.1％和27.4％、44.5％ (P ＜0.01)；肝脏CYP2B1含量及活性高剂量组升高了57.2％和52.6％ (P ＜0.01)；肝脏ADH含量变化不明显,但活性显著降低了25.3％和86.0％ (P ＜0.01).结论 大蒜油能保护正己烷所致的大鼠周围神经损伤,机制可能与肝脏CYP2E1、CYP2B1及ADH表达或活性改变,正己烷转化为2,5-HD减少有关.
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三氯乙烯对3种细胞色素P450酶基因表达的影响
目的探讨三氯乙烯( Trichloroethylene, TCE )对人体淋巴细胞瘤细胞株(MCL-5)中3种细胞色素P450酶基因(CYP1A1、CYP2E1、CYP3A4)表达的影响,并研究剂量反应关系和时间反应关系.方法用常规的细胞培养方法,0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L TCE处理细胞12、24、48、72 h.利用提纯RNA和合成cDNA的药盒,合成cDNA,然后逆转录聚合酶反应(RT-PCR)表达3种CYP450基因,以β-Actin作为内对照,分析不同处理剂量和时间时基因表达的强度.结果在MCL-5细胞株中都有基本的表达,CYP1A1表达在用1.0、1.5、2.0 mmol/LTCE处理48 h后有被上调的趋势,而且上调趋势随处理时间延长而加强;CYP2E1、CYP3A4表达不受TCE处理时间长短的影响.3种CYP450酶基因的表达受TCE剂量的影响,3随0.5 mmol/L,1.0、1.5、2.0 mmol/L剂量的增加有上调的趋势.结论 TCE对CYP450酶系统中的CYP2E1、CYP1A1、CYP3A4基因有明显的诱导作用,这些基因被诱导后的结果,可能会导致相对应酶活性的增加,同时加强对TCE的代谢,使TCE的代谢产物增加.
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CYP2E1在小鼠1,2-二氯乙烷中毒性肝损伤中的作用
目的 探讨亚急性1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)染毒对小鼠肝微粒体中CYP2E1表达的影响及其在1,2-DCE中毒性肝损伤中的作用.方法 (1)将32只昆明种雌性小鼠随机分为对照组及1,2-DCE低、中和高剂量染毒组,染毒剂量分别为0.225、0.45和0.9 g/m3.采用静式吸入方式对小鼠染毒10 d,末次染毒的次日,处死小鼠,迅速取血和肝组织.对肝组织进行病理学观察,并检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和活性.(2)将60只昆明种雌性小鼠随机分为空白对照组、玉米油对照组、二烯丙基硫化物(DAS)对照组、单纯染毒组及低和高剂量DAS干预组(150和300 mg/kg).将DAS溶于玉米油中,于1,2-DCE染毒前4h通过灌胃给予DAS.1,2-DCE染毒时间及检测指标同上.结果 (1)中、高剂量染毒组小鼠肝组织出现不同程度病理性损伤;高剂量染毒组小鼠血清中ALT活性显著高于对照组(P＜0.05);中、高剂量染毒组小鼠肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和活性与对照组相比均显著升高(P＜0.05).(2)高剂量DAS干预组小鼠肝细胞病理损伤明显改善,其小鼠血清中ALT活性也显著低于单纯染毒组(P＜0.05);低、高剂量DAS干预组小鼠肝微粒体中CYP2E1蛋白表达和酶活性均显著低于单纯染毒组(P＜0.05).结论 1,2-DCE染毒可明显诱导肝微粒体中CYP2E1蛋白的表达,并导致肝组织损伤,DAS通过抑制CYP2E1蛋白的表达可以减轻1,2-DCE引起的肝损伤.
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慢性苯中毒遗传易感性与细胞色素P4502E1基因多态性关系的初步探讨
为探讨细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因多态性与苯中毒遗传易感性的关系,应用PCR-RFLP方法对35例苯中毒病例、44例苯作业工人及26例正常对照组的细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因RsaⅠ和DraⅠ多态进行检测.结果显示,CYP2E1基因RsaⅠ位点基因型(c1/c1、c1/c2和c2/c2)及等位基因(c1、c2)和DraⅠ位点基因型(DD、CD和CC)及等位基因(D、C)在三组间的分布频率均无统计学意义.提示CYP2E1基因RsaⅠ和DraⅠ多态位点与苯中毒遗传易感性可能无关.
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CYP2E1基因1019位点多态性与肺癌易感性的Meta分析
目的:研究CYP2E1基因1019位点多态性与肺癌易感性的关系.方法:检索数据库,按纳入标准进行筛选,对纳入文献用Review Manager 4.2软件进行Meta分析,得到合并OR值(95％CI),并进行一致性检验及发表偏倚检验.结果:共纳入文献11篇,累积病例1278例,对照1568例,与野生纯合基因型c1c1相比较,突变杂合基因型c1c2、突变纯合基因型c2c2和(c1c2+-c2c2)合并的OR值分别为0.74(0.63,0.87)、0.90(0.63,1.28)和0.73(0.63,0.86).结论:CYP2E1基因1019位点c2突变子是肺癌的保护因素.
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乳香没药对细胞色素P450活性的影响
目的:考察乳香没药对细胞色素P450活性的影响.方法:56只小鼠分为对照组和乳香+没药3.15,2.10,1.05 g·kg-1剂量组,连续ig给药7 d；48只小鼠分为对照组和乳香、没药、乳香+没药组,ig给药3.15 g·kg-11次.所有小鼠末次药后30 min ip给予戊巴比妥钠,观察乳香没药对P450的影响.40只大鼠分为对照组、乳香组、没药组、乳香+没药组,以3.00g·kg-1连续ig给药14d,取肝脏制备各组动物肝微粒体,并用cocktail探针法考察乳香没药对大鼠CYP1 A2,CYP2E1,CYP3 A4的影响.结果:乳香+没药3.15,2.10,1.05 g·kg-1剂量连续给药7d均可使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率降低(P ＜0.05,P＜0.01),而单次给药3.15g· kg-1有使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率升高的趋势.乳香、没药及乳香+没药混合物组大鼠肝微粒体体外对非那西丁、氯唑沙宗代谢率显著高于对照组,而氨苯砜无明显差异.结论:乳香、没药连续用药均使CYP1A2,CYP2E1活性增强,而对CYP3A4则无显著影响.
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葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体CYP450含量及CYP2E1活性的影响
目的:考察经典解酒方葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450( CYP450)含量及细胞色素P450-2E1( CYP2E1)活性的影响.方法:实验小鼠分葛根散高、中、低剂量组、正常对照组和模型对照组,各给药组分别给予葛根散水煎剂(按生药量计,20,10,5 g·kg-1)ig,对照组代以等体积蒸馏水,每天1次,连续10 d；每天给药30 min后,模型对照组和各给药组以15 mL·kg-1 56％白酒ig,正常对照组代以等体积蒸馏水,以血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肝脏系数为参考指标,制备急性酒精性肝损伤小鼠模型；取小鼠肝组织检测葛根散对肝微粒体CYP450含量及CYP2E1活性的影响.结果:与正常对照组比较:模型对照组血清ALT、AST水平及肝脏系数显著升高(P＜0.01),肝微粒体蛋白含量无明显变化,CYP450含量及CYP2E1活性显著提高(P＜0.01).与模型对照组比较:葛根散各剂量组血清ALT,AST水平及大剂量组肝脏系数呈明显降低(P ＜0.05或P＜0.01),肝微粒体蛋白含量无明显变化,CYP450含量明显增多(P＜0.01)且有剂量差异性(P＜0.05),CYP2E1活性显著降低(P＜0.01)且有剂量差异性(P＜0.01).结论:葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能具有良性干预作用,能提高酒精性肝损伤小鼠肝微粒体CYP450含量和降低CYP2E1活性.
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999感冒灵对不同种属CYP2E1酶活性的影响
目的:研究999感冒灵(感冒灵)对大鼠肝脏的影响,比较感冒灵对大鼠、小鼠和人不同种属CYP2E1酶活性的影响,为临床安全性再评价及合理使用提供实验依据.方法:大鼠随机分为空白组、感冒灵组(4.53 g·kg-1),单次灌胃给药,14d后动物称重,处理;全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),尿素氮(BUN),肌酐(SCr),肌酸激酶(CK),取肝脏、肾脏及心脏,计算脏器指数;对肝脏进行苏木素-伊红(HE)染色,光学显微镜下观察其组织形态学变化.将人、大鼠和小鼠肝微粒体分别与不同浓度的感冒灵或对乙酰氨基酚(APAP)在37℃预孵育15 min后,加入CYP2E1的探针底物氯唑沙宗和还原型辅酶Ⅱ(NADPH)继续孵育30 min,用LC-MS/MS方法测定6-羟基氯唑沙宗的生成量,计算半数抑制浓度(IC50).结果:与空白组比较,感冒灵组大鼠肝脏、肾脏及心脏指数、血清生化指标、肝脏病理组织学无明显变化.感冒灵在人、大鼠和小鼠的肝微粒体中对CYP2E1的IC50分别为6.516,344.2,932.8 mg·L-1,APAP在人、大鼠和小鼠的肝微粒体中对CYP2E1的IC50分别为52.4,453.8,806.5 mg·L-1.各种属中感冒灵和APAP对CYP2E1抑制程度趋势一致.结论:不同种属对感冒灵抑制CYP2E1活性敏感程度依次为人、大鼠及小鼠,该差异可能与大剂量感冒灵对大鼠肝脏无明显毒性影响有关;提示药物在进行临床前安全性评价时宜采用不同种属动物尤其是考察对肝脏代谢的影响,在临床需关注含有APAP的复方感冒药与其他药物联合用药时对体内药酶代谢的互相作用的影响,为临床合理用药提供依据.
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二陈汤及桃红四物汤对非酒精性脂肪肝CYP2E1活性影响的实验研究
目的:观察二陈汤及桃红四物汤对大鼠非酒精性脂肪肝模型肝细胞色素酶CYP2E1活性的影响,探讨二陈汤及桃红四物汤在非酒精性脂肪肝治疗中的作用.方法:制备非酒精性脂肪肝大鼠动物模型,用二陈汤及桃红四物汤分别治疗.实验结束后,检测肝细胞微粒体蛋白含量以及CYP2E1活性.结果:脂肪肝大鼠存在明显的肝细胞微粒体蛋白降低以及CYP2E1活性增强.与模型组相比,二陈汤对脂肪肝大鼠肝细胞微粒体蛋白具有明显升高作用(P<0.05);而对CYP2E1活性则具有明显降低作用(P<0.01).桃红四物汤也有一定作用趋势,但无统计学意义.结论:二陈汤不仅能够改善高脂血症状态,也能降低CYP2E1活性,防治因此而导致的过氧化损伤过程,从多方面治疗非酒精性脂肪肝.
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何首乌水提物对大鼠肝脏CYP1A2,CYP2E1酶活性及mRNA表达抑制作用研究
大鼠连续灌胃不同剂量的何首乌水提物(1,10g·kg-1)7 d,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法和实时荧光定量PCR技术观察何首乌水提物对大鼠肝脏主要CYP450酶活性及mRNA表达的影响.与空白对照组相比,1,10g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP2E1酶活性和mRNA的表达均受到明显抑制(CYP2E1酶活性,P＜0.01;CYP2E1的mRNA表达1 g·kg-1组P＜0.05,10 g·kg-1组P＜0.01),CYP3A1酶活性虽显示明显升高(P＜0.01),但mRNA的表达没有显著变化;10 g·kg-1何首乌水提物组大鼠肝脏CYP1A2酶活性和mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.01).
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丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响
目的:研究丹参酚酸A对大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量以及CYP1A2和CYP2E1活性的影响.方法:将大鼠分成溶剂对照组和丹参酚酸A给药组,每组10只,雌雄各半,丹参酚酸A给药组尾静脉注射给予丹参酚酸A 20 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续给药5 d;溶剂对照组给予相同剂量的溶剂,紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450和细胞色素b_5含量;探针底物法评价CYP1A2和CYP2E1的活性.结果:丹参酚酸A尾静脉注射连续给药5 d后,大鼠细胞色素P450和细胞色素b_5含量与对照组比较均无显著性差异;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较也无显著性差异.结论:丹参酚酸A对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用,与经过CYP1A2和CYP2E1代谢的药物发生相互作用的可能性较小.
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细胞色素P4502E1基因RsaⅠ/PstⅠ位点多态性与中国人食管癌发病风险关系的Meta分析
目的 通过Meta分析的方法 系统评价细胞色素P450 2E1(CYP2E1)基因RsaⅠ/PstⅠ位点多态性与中国人食管癌发病风险的相关性.方法 检索PubMed、Embase、CBM、CNKI、VIP和WANFANG数据库中1990年1月1日至2011年11月30日有关CYP2E1基因多态性与食管癌发病风险关系的文献,进行文献筛选、质量评价和数据提取后,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析.结果 终纳入18篇病例对照研究共19个试验,其中食管癌患者1663例,对照2603例.Meta分析结果 显示CYP2E1基因多态性与食管癌的关联有统计学意义[c2 vs.c1:OR=0.64,95% CI=0.50~0.81,P=0.0003;c2/c2 vs.c1/c1:OR=0.70,95% CI=0.56~0.89,P=0.003;c1/c2 vs.c1/c1:OR=0.54,95% CI=0.38~0.75,P=0.0003;c2/c2 vs.(c1/c1+c1/c2):OR=0.73,95% CI=0.58~0.92,P=0.008;(c1/c2+c2/c2)vs.c1/c1:OR=0.48,95% CI=0.34~0.70,P=0.0001];汉族的亚组分析结果 也显示CYP2E1基因多态性与食管癌的关联有统计学意义[c2 vs.c1:OR=0.71,95% CI=0.57~0.89,P=0.002;c2/c2 vs.c1/c1:OR=0.75,95% CI=0.59~0.95,P=0.02;c1/c2 vs.c1/c1:OR=0.62,95% CI=0.46~0.84,P=0.002;c2/c2 vs.(c1/c1+c1/c2):OR=0.78,95% CI=0.61~0.99,P=0.04;(c1/c2+c2/c2)vs.c1/c1:OR=0.56,95% CI=0.40~0.79,P=0.001].结论 对目前相关研究结果 的Meta分析显示CYP2E1基因多态性与中国人群食管癌发生风险具有相关性,其RsaⅠ/PstⅠ位点的c2等位基因可能是食管癌的保护或抑制因素.
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全反式维甲酸对酒精性肝损伤大鼠肝脏retinoids含量和CYP2E1表达的影响
目的:研究补充小剂量全反式维甲酸(ATRA)对酒精喂养大鼠肝脏维生素A类物质(retinoids,主要是维生素A和RA)含量、维生素A类物质极性代谢产物(PRMs)形成,细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达和肝细胞损伤的影响.方法:将30只SD大鼠随机分为A组(正常对照组),B组(单纯乙醇组)、C组(无水乙醇8 g/kgig 8 wk+150 μg/kg ATRA)、D组(无水乙醇8g/kg ig 8 wk+1.5 mg/kg ATRA ig 4 wk)四组.光镜下观察肝组织病理变化,高效液相色谱(HPLC)技术测定肝组织中Vitamin A类物质(retinoids)的含量,Western blotting检测肝脏CYP2E1的表达.结果:B组大鼠肝脏RA、维生素A(Retinol)和维生素A棕榈酸酯(retinyl palmitate)与A组相比含量显著降低(0.077±0.029 nmol/g vs 0.183±0.037 nmol/g,8.13±1.379 nmol/g vs 21.43±2.944 nmol/g,132.6±6.472 nmol/g vs 221.1±10.35 nmol/g,P＜0.01),且肝脏中出现明显的PRMs.C组RA和Retinol含量恢复至A组水平,retinyl palmitate含量也部分恢复.D组RA和retinyl palmitate完全恢复至正常水平,而Retinol水平较A组升高(27.26±3.149 nmol/gvs 21.43±2.944 nmol/g,P＜0.05).两种剂量的ATRA均可完全阻止PRMs形成.病理组织学检查显示补充ATRA可明显减轻肝细胞肿胀、脂肪变性,但对CYP2E1的表达没有明显影响.结论:小剂量ATRA能恢复酒精性肝病(ALD)大鼠肝脏retinoids含量,阻止PRMs产生,从而减轻肝细胞损伤.
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二甲双胍、吡格列酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏CYP2E1表达的影响
目的:观察二甲双胍、吡格列酮对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏细胞色素P4502El(CYP2E1)的影响.方法:SD大鼠随机分为正常对照组(普通饲料喂养)、非酒精性脂肪肝组(高脂饮食喂养)、二甲双胍干预组[高脂饮食喂养加二甲双胍500 mg/(kg·d)灌胃]、吡格列酮干预组[高脂饮食喂养加吡格列酮15 mg/(kg·d)].饲养12 wk末处死大鼠,检测血清丙氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(bioactive alkaline phosphatase,ALP)活性、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(total glyceride,TG)、游离脂肪酸(floating free acid,FFA)含量；测量空腹血糖(fasting blood-sugar,FBG)及胰岛素(level and insulin,FINS),计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR);采用HE染色及Masson染色(显示胶原纤维),观察肝脏病理形态学的改变；采用RT-qPCR和免疫组织化学法分别检测肝脏中CYP2E1 mRNA及蛋白的表达.结果:与非酒精性脂肪肝组相比,二甲双胍干预组的ALT(79.86 U/L±10.40 U/L vs 143.80U/L±26.34 U/L)、AST(221.30 U/L±34.21 U/Lvs 358.76±97.20 U/L)、ALP(153.32 U/L±24.20 U/L vs 207.47 U/L±35.39U/L)、TC(1.70mmol/L±0.34 mmol/L vs 2.76 mmol/L±0.28mmol/L)、TG(3.96 mmol/L±0.23 mmol/Lvs 5.67 mmol/L±0.54 mmol/L)、FFA(493.19μmol/L±38.89 μmol/L vs 654.40 μmol/L±71.74μmol/L)以及FBG(5.47 mmol/L±0.42 mmol/Lvs 8.05 mmol/L±0.48 mmol/L)、FINS(20.89mU/L±3.12 mU/L vs 27.51 mU/L±4.02 mU/L)、HOMA-IR(5.08±1.20 vs 9.84±2.11)均明显降低(P＜0.05),吡格列酮干预组的ALT(84.73U/L±9.18 U/L vs 143.80 U/L±26.34 U/L)、AST(235.23 U/L±33.62 U/L vs 358.76 U/L±97.20 U/L)、ALP(160.02 U/L±25.32 U/L vs 207.47 U/L±35.39 U/L)、TC(1.68 mmol/L±0.26 mmol/L vs 2.76 mmol/L±0.28 mmol/L)、TG(3.60 mmol/L±0.30 mmol/L vs 5.67 mmol/L±0.54 mmol/L)、FFA(495.21 μmol/L±43.67Lmol/L vs 654.40 μmol/L±71.74 μmol/L)以及FBG(5.32 mmol/L±0.37 mmol/L vs 8.05 mmol/L±0.48 mmol/L)、FINS(21.01 mU/L±2.86 mU/L vs 27.51 mU/L±4.02 mU/L)、HOMA-IR(4.97±0.97 vs 9.84±2.11)均明显降低(P＜0.05),肝脏脂肪变性及纤维化程度均明显改善,CYP2E1mRNA及蛋白的表达明显降低(P＜0.05),且两干预组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:二甲双胍、吡格列酮均通过降低CYP2E1的表达,预防NAFLD的发生.
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细胞色素p4502E 1遗传多态性的研究进展
目的:总结国内外细胞色素p4502E1(CYP2E1)的基因多态性与临床疾病相关性、肿瘤易感性及群体遗传学等领域研究的现状.方法:应用PubMed及CHKD期刊全文数据库检索系统,以"细胞色素p450、CYP2E1、遗传多态性及肿瘤易感性"等为关键词,检索1996-01-2008-06的相关文献93篇.纳入标准:1)细胞色素p450基因多态性研究进展;2)CYP2E1基因多态性;3)CYP2E1基因多态性与肿瘤易感性的关系.根据纳入标准,精选56篇文献,后纳入分析30篇文献.结果:CYP2E1是细胞色素p450超家族中的一员.CYP2E1在人群中存在着5种限制性片段长度多态性,即TaqI、DraI、RsaI、MspI以及5'端的RsaI/PstI.其中DraI和5'端的RsaI/Ps-tI影响CYP2E1的表达,并且不同的表型决定了CYP2E1对特定的外来化合物及内源性物质在反应上的差异,即表现为个体对致癌物的不同易感性.结论:对CYP2E1基因多态性的进一步认识不仅丰富我国民族遗传资料数据库,在临床疾病的诊治、个体化治疗以及合理用药等方面起重要作用.
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异烟肼和利福平致小鼠原代肝细胞损伤时CYP2E1和CYP3A酶活性的变化
目的 研究异烟肼和利福平对小鼠原代肝细胞的损伤作用及对CYP450同工酶CYP2E1和CYP3A酶活性的影响.方法 从小鼠肝脏中分离出肝细胞,原代培养3 d后,加入药物后孵育2 d.收集细胞培养上清液,测定其中的乳酸脱氢酶(LDH)释放量以反映药物对肝细胞的损伤作用.测定CYP450酶活性的细胞分别加入CYP2E1和CYP3A的特异性底物(对硝基酚和咪达唑仑)孵育2 h,反应终止后用高效液相色谱-质谱法测定特异性底物的浓度,浓度减少程度代表CYP2E1和CYP3A活性的变化.结果 与对照组比,异烟肼中、高浓度组,利福平高浓度组,合用中、高浓度组LDH的释放量显著增加.与对照组比较,异烟肼组与合用组CYP2E1底物对硝基酚浓度均显著降低;利福平组与合用组CYP3A底物咪达唑仑浓度均显著降低.结论 高浓度的异烟肼和利福平均对小鼠原代肝细胞有损伤作用,两药合用时,低浓度能引起肝细胞损伤.异烟肼和利福平对CYP2E1和CYP3A酶活性的诱导可能是其导致肝损伤的机制之一.
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低氧对大鼠CYP2E1活性和蛋白表达的影响
目的 探讨模拟高原低氧对大鼠肝脏中CYP2E1活性和蛋白表达的影响.方法 将12只健康雄性Wistar大鼠随机分成对照组(1500 m)和低氧组(4100 m).低氧组置于高原模拟氧舱,3d后解剖,取大鼠肝脏、提取肝微粒体,用于CPY2E1的分析.采用Thermo AcclaimTM120 C18柱(3 mm×150 mm,3μm),流动相:甲醇-水(V∶V)60∶40,流速:1.0ml·min-1,柱温:25℃,检测波长:280 nm,进样体积:20 μl,建立测定氯唑沙宗浓度的HPLC方法,Western blot方法检测大鼠肝脏中CYP2E1的蛋白表达.结果 活性测定结果显示,对照组氯唑沙宗在孵育体系中的平均反应速度为0.1384±0.0148μg·min-1,其酶动力学参数:大反应速度(Vmax)为2.06 μg·min-1,米氏常数(Km)为116.38±3.46μg·m1-1.低氧组氯唑沙宗平均反应速度为0.0822±0.0071 μg·min-1,Vmax为2.60μg·min-1,Km为142.88±5.66 μg ·ml-1. Western blot结果显示,对照组CYP2E1的蛋白表达量是低氧组的9.88倍.结论 与对照相比,低氧组大鼠的CYP2E1活性降低,蛋白表达量降低.
