052重组有机磷水解酶的研究进展

有机磷水解酶(OPH)是处理有机磷杀虫剂和化学战剂污染有前途的酶.大规模使用需要进行重组.目前的研究主要集中于提高重组有机磷水解酶的表达水平、活性及稳定性.对其在化学防护与洗消、临床和有机磷生物探测器等方面的应用也有研究.

对氧磷酶和谷胱甘肽S转移酶基因多态性与农药暴露花卉种植者的健康关系研究

目的 探讨花卉种植者(花农)对氧磷酶及谷胱甘肽S转移酶基因多态性的分布情况,并分析基因多态性与健康的关系.方法 选择云南省某村136名从事花卉种植的花农作为暴露组(男性74名,女性62名);41名不使用农药的同村居民作为对照组(男性16名,女性25名);进行问卷调查和体格检查,并采集血液样本,分析血常规、肝功能、激素水平、免疫球蛋白(IgM、IgG、IgA)和全血乙酰胆碱酯酶活性.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测PON1-107、PON1 192、GST M1、T1基因型.结果 (1)对照组球蛋白高于暴露组(β=-0.16,t=-2.30,P=0.02),而白蛋白与球蛋白的比(白球比)低于暴露组(β=0.14,t=2.09,P=0.04);(2)PON1 192位点分析显示,QQ基因型个体症状积分高于RR基因型个体(t=-2.78,P=0.006);(3)GSTT1-的个体分析显示,球蛋白高于GSTT1+的个体(β=-0.20,t=-3.01,P=0.00),IgG高于GST T1+的个体(β=-0.15,t=-2.15,P=0.03),而白球比低于GST T1+的个体(β=0.17,t=2.54,P=0.01);(4)农药暴露者心电图异常情况增加(β=1.147,P=0.042).结论 PON1 192和GST T1位点与农药暴露后的花农健康状况相关.

对氧磷酶1 55 Met/Leu、对氧磷酶2 148 Ala/Gly和锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val基因多态性与冠心病

目的 探讨对氧磷酶155 Met/Leu(PON1 55 Met/Leu)、对氧磷酶2148 Ala/Gly(PON2148 Ala/Gly)和锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val(MnSOD 9 Ala/Val)基因多态性与冠心病(CHD)、血浆对氧磷酶(PON)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测262例CHD患者和100名对照组的PON1 55 Met/Leu、PON2 148 Ala/Gly和MnSOD 9 Ala/Val基因多态性的基因型,采用比色法测定血浆PON、T-SOD和MnSOD活性以及MDA浓度.结果 与对照组比较,CHD患者的血浆PON[(349.27±138.36 vs 454.75±166.00)nmol·min-1·ml-1,P＜0.001]、T-SOD[(23.61±16.51 vs.44.01±22.68)U/ml,P＜0.001]和MnSOD活性[(21.56±13.11 vs.28.79±8.65)U/ml,P＜0.001]明显降低,MDA浓度显著增高[(2.47±0.73 vs.2.15±0.55)nmol/ml,P＜0.01];CHD患者的PON1 55 LM杂合子基因型、M等位基因频率,PON2 148 GG纯合子基因型和AG杂合子基因型、G等位基因频率和MnSOD 9 AA基因型、A等位基因频率较对照组明显增多;PON1 55 LM杂合子基因型的PON和T-SOD活性较LL纯合子基因型明显降低;PON2 148GG基因型和AG基因型的PON活性较AA基因型明显降低;MnSOD AA基因型的PON和MnSOD活性较VV基因型明显降低;logistic回归分析显示PON1 55 LM杂合子基因型、M等位基因、PON2148 GG/AG基因型、G等位基因是CHD的危险因子.结论 CHD患者的抗氧化能力明显降低,脂质过氧化物显著增高;PON1 55 Met/Leu、PON2 148 Ala/Gly和MnSOD 9 Ala/Val基因多态性通过影响血浆PON和MnSOD活性而参与CHD的发病.

痰瘀同治方对兔动脉粥样硬化对氧磷酶活性及炎症因子的影响

目的:探讨痰瘀同治方对兔动脉粥样硬化(AS)对氧磷酶活性及炎症因子的影响.方法:将家兔随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组、痰瘀同治方5,2.5,1.25 g·kg-1剂量组;采用主动脉球囊拉伤加高脂喂养造模;造模4周开始给药,给药8周.实验结束后,测定各组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LOL-C)水平,血清对氧磷酶-1(PON-1)活性,C反应蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)含量.结果:与模型组比较,辛伐他汀组和痰瘀同治方5 g·kg-1剂量组家兔TC,LDL-C明显降低,痰瘀同治方5,2.5 g·kg-1剂量组PON-1活性较模型组明显升高,痰瘀同治方各剂量组CRP,TNF-α和IL-6水平较模型组明显降低.结论:痰瘀同治方通过调节血脂,抗炎,保护PON-1活性等途径起到抗AS的作用.

对氧磷酶在有机磷中毒中的防治作用及研究进展

(paraoxonase,PON)于1953年被发现,因其能水解对氧磷而得名对氧磷酶.PON存在于多种微生物、昆虫、爬行动物、鸟类及哺乳动物体内,以兔血清PON活性高.PON主要由肝脏分泌,广泛存在于肝、肾、脑、血液等器官中,以肝和血液中的PON活力高.肝脏中的PON全部存在于线粒体中,血液中的PON主要与高密度脂蛋白(HDL)结合[1].

对氧磷酶与冠心病关系的研究进展

冠心病(coronery artery disease,CAD)由于其发病率的日益升高,已成为21世纪威胁人类健康的主要疾病之一.近年来对氧磷酶与冠心病的关系越来越受到人们的重视.现已证实,对氧磷酶基因家族及其酶活性参与脂质过氧化物的降解,高密度脂蛋白的抗氧化作用和免疫炎症反应,与冠心病的发生发展有密切关系.

对氧磷酶与动脉粥样硬化性脑梗死关系的研究

PON是一类芳香酯酶,它能催化磷酸酯键的水解,降解有机磷酸、芳香羧基酸酯及氨基甲酸酯.由于目前用于检测该酶活性的常用的底物是对氧磷(parason),故该酶命名为对PON.近年的研究表明,PON除能解除有机磷化合物的毒性外,还参与抗脂质过氧化,在一些氧化应激性疾病的发展中起着重要的作用.本文就对氧磷酶基因家族及其活性以及与动脉硬化性脑梗死关系的研究作一综述.

对氧磷酶2基因G/A148多态性与脑出血的关系

近年的研究证实对氧磷酶(PON)基因与动脉粥样硬化及其相关疾病有关.我们采用病例对照研究,探讨了PON2基因G/A148多态性在湖南人群中的分布情况及与脑出血的相关性.

脑梗死患者对氧磷酶-1及活性与颈动脉粥样硬化关系

研究显示对氧磷酶-1(paraoxonase-1,PON1)与动脉粥样硬化及其相关疾病有关,我们通过检测脑梗死患者PON1192Q/R基因型、活性、高敏C反应蛋白(hs-CRP)和颈动脉内膜-中膜厚度(IMT),探讨脑梗死患者PON1192Q/R基因型及活性对颈动脉粥样硬化的影响.

对氧磷酶基因多态性及同型半胱氨酸硫内酯与缺血性卒中的关系

动脉粥样硬化是缺血性卒中为常见的病因[1].近年来发现对氧磷酶(paraoxonase,PON)基因多态性(PON1-L55M、PON1 -Q192R、PON2-C311 S)与动脉粥样硬化有关,同时发现同型半胱氨酸硫内酯( homocysteine thiolactone,HTL)是动脉粥样硬化形成的重要原因之一.本研究观察血浆HTL复合物水平、PON基因多态性与缺血性卒中发生之间的关系,探讨其是否为动脉粥样硬化性缺血件卒中的危险因素.

冠心病患者对氧磷酶1基因Gln/Arg192多态性研究

对氧磷酶与慢性肝损伤

对氧磷酶(PON)是一类催化磷酸酯键水解的芳香酯酶,其基因家族包括PON1、PON2和PON3.PON除在脂类代谢中表现出较强的抗氧化活性外,在慢性肝损伤中也发挥着调节氧化应激平衡、抗炎、抑制细胞凋亡等多种作用,其基因表达主要受到Spl、Ap-1、PPAR等转录因子的调控.本文综述了PON的生物学特性及其在慢性肝损伤中作用的研究进展.

冠心病患者对氧磷酶水平变化及其与冠脉病变的相关性研究

目的 探讨对氧磷酶(PON)在冠心病(CHD)患者中的临床意义.方法 经选择性冠状动脉造影结果将300例入院患者分为冠心病组240例和对照组60例.冠心病组根据临床诊断分为稳定型心绞痛(SAP)组60例和急性冠脉综合征(ACS)组180例;根据冠脉病变类型分为A型病变、B型病变和C型病变组,血清PON水平通过乙酸苯酯法测定.结果 PON水平明显低于对照组,PON水平明显低于SAP组,随冠状动脉病变类型和冠状动脉病变程度的加莺,PON水平逐渐下降.结论 PON是反映冠状动脉粥样硬化斑块局部炎症的较好指标,是决定斑块稳定性的机制之一.

石榴花多酚对糖尿病合并脂肪肝大鼠肝脏中PON表达的影响

探讨石榴花多酚对糖尿病合并脂肪肝大鼠肝脏的影响及作用机制.采用高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)的方法建立糖尿病合并脂肪肝大鼠模型,将成模大鼠随机分为:模型组、二甲双胍组、石榴花多酚低、中、高剂量组(75、150和300 mg·kg-1).干预4周后处死大鼠,取血和肝脏,测定血清空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、血脂、胰岛素水平(fasting insulin,FINS)和血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平；肝脏及血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量；肝脏组织对氧磷酶(paraoxonase,PON1和3)mRNA和蛋白表达,并观察肝脏的病理改变.石榴花多酚各剂量组大鼠血脂、胰岛素抵抗水平和转氨酶显著降低；血清高密度脂蛋白胆固醇含量升高；肝细胞内脂肪滴较模型组明显减少；抗氧化能力增强；肝组织PON1 mRNA和蛋白表达水平显著增加.石榴花多酚可能通过增加肝组织中PON1 mRNA和蛋白的表达,缓解胰岛素抵抗,增强机体抗氧化能力从而改善大鼠肝脏脂肪变性.

人血清对氧磷酶的部分纯化及解毒效应

目的寻求对氧磷酶(paraoxonase, EC 3.1.8.1)作为外源性抗毒剂对抗G类有机磷毒剂的可能性.方法采用亲和凝胶柱层析进行了人血清对氧磷酶的部分纯化,测定了其对于不同底物的米氏常数(Km)以及钙离子对于酶活性的影响,比较了不同种属的对氧磷酶活性,采用体外解毒,体内染毒的方法检测了对氧磷酶对于不同的底物的作用.结果部分纯化的对氧磷酶对于梭曼和对氧磷均有较好的催化水解作用.以对氧磷为底物时,Km值为0.22 mmol·L-1,比活性为375 μmol·min-1·g-1蛋白;以梭曼为底物时,Km值为0.60 mmol·L-1,比活性为434 μmol·min-1·g-1蛋白.不同种属来源的血清对氧磷酶的活性差异较大,是造成不同种属动物对有机磷毒剂中毒敏感性差别的原因之一.部分纯化的对氧磷酶在含1 mmol·L-1 CaCl2的缓冲液中活性良好,加入乙二胺四乙酸(EDTA)后,无论以对氧磷或梭曼为底物,酶活性均受到明显抑制,表明人血清对氧磷酶是钙离子依赖性酶.EDTA的pI50约为1.8 mmol·L-1.人血清对氧磷酶能有效地水解对氧磷、梭曼、沙林、塔崩及敌敌畏,但对VX及乐果无效,表明其对P-F、P-CN及P-O键有选择性,对P-S键无作用.结论对氧磷酶可作为G类毒剂的抗毒剂.

Q型人血清对氧磷酶在杆状病毒感染的昆虫细胞中的表达

目的研究对氧磷酶与心血管疾病的关系.方法采用BAC-TO-BAC杆状病毒系统表达Q型人血清对氧磷酶(PON-1),在已获得人PON-1全长cDNA的基础上,通过PCR扩增,得到上游含EcoRⅠ酶切位点,下游不含终止密码子而含HindⅢ酶切位点的PON-1基因,将其克隆到带有6×His@Tag的pFASTBACⅡCD14质粒中,构建杆状病毒转移载体pFASTBACⅡ-PON-1.将含有PON-1基因的重组质粒pFASTBACⅡ-PON-1转化DH10BAC感受态细胞,使目的基因通过同源重组插入Bacmid DNA中.PCR鉴定正确后再转染入sf9昆虫细胞中,产生有感染力的重组杆状病毒.用乙酸苯酯为底物测定表达上清液中的酶活性.结果比较不同感染复数(MOI)和不同感染时间PON-1在培养上清液中的表达情况,确定感染复数MOI为6～8,感染时间96～108 h为PON-1的佳表达条件,产率约为4.5 mg@L-1上清液.免疫印迹法表明重组蛋白有与抗6×His单克隆抗体结合的抗原性.顺磁共振实验证明,基因工程产人重组血清对氧磷酶rhPON-1能有效清除Fe2+诱导亚油酸脂质过氧化产生的脂质自由基,清除率为55.9%.结论BAC-TO-BAC杆状病毒介导的草地贪夜蛾昆虫细胞sf9可高效表达Q型人血清对氧磷酶.

对氧磷酶1与多囊卵巢综合征的相关性研究

对氧磷酶(PON)是一类能催化水解磷酸酯键的芳香酯酶,能够水解高密度脂蛋白和低密度脂蛋白分子中的氧化型磷脂,具有抗氧化作用.PON 活性异常与动脉粥样硬化发生密切相关,PON日益受到重视.随着临床和分子生物学的进展发现,PON的活性与多囊卵巢综合征及其并发症密切相关,但在国内尚未见报道.现就此研究进展作一综述.

氨硫脲片治疗喉结核的效果及对血清氧磷酶水平的影响

目的 观察氨硫脲片治疗喉结核疗效及其对患者血清对氧磷酶(PON1)的影响.方法 将2010年1月～2015年1月陕西省结核病防治院收治的76例喉结核患者随机分为观察组和对照组,每组38例.所有患者均给予常规抗结核治疗,观察组患者同时给予氨硫脲片治疗,两组疗程均为6个月.治疗后,观察两组疗效及痰菌转阴率.治疗期间,观察两组咳嗽、充血水肿、咽喉肿痛及声音嘶哑等症状的缓解时间.治疗前、治疗后第10、20、30、40、50及60 d分别检测患者血清PON1水平.治疗前后,分别检测患者血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-Aoc)及总抗氧化态(TAS)水平.观察所有患者不良反应发生情况.结果 观察组总有效率及痰菌转阴率分别为94.7％及68.4％,均明显高于对照组(P＜0.05).治疗后,观察组咳嗽、充血水肿、咽喉肿痛及声音嘶哑等症状的缓解时间均明显短于对照组(P＜0.05).观察组于治疗20 d后PON1水平均明显高于对照组(P＜0.05).治疗后,观察组SOD、GSH-PX、T-Aoc及TAS均明显高于对照组(P＜0.05).所有患者均未出现严重不良反应.结论 氨硫脲片治疗喉结核疗效显著,可有效缓解患者症状,增加患者血清PON1水平,且安全性较高,值得进行深入研究.

血清PON1活性与冠状动脉粥样硬化研究新进展

对氧磷酶(Paraoxonase,PON)基因家族有PON1、PON2和PON3三个成员.PON1是一种与高密度脂蛋白(HDL)相关的酯酶,它能够水解有机磷;PON1的遗传多态性与冠心病的发生、发展密切相关,可能是冠心病的独立危险因素;PON1的活性与冠状动脉粥样硬化呈负相关;PON1以HDL为载体,与载脂蛋白A1(apoA1)紧密结合,通过抑制低密度脂蛋白(LDL)的氧化修饰,降低体内氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)水平,并破坏已形成的OX-LDL中的具有细胞毒性的溶血磷脂,因而起到抗冠状动脉粥样硬化的作用.

对氧磷酶2研究进展

对氧磷酶(paraoxonase,PON)基因家族包含3个高度保守的基因:PON1基因、PON2基因与PON3基因,它们都位于染色体7q21.3-22.1区域,三者具有高度的同源性.由于PON2独特的表达特性和分布特性,近年来的研究热点聚焦于此.与PON1和PON3不同,PON2在人体的诸多组织具有表达,包括:肝脏、肾脏、肺脏、心脏、胎盘、睾丸、胃、脾脏、胰腺、小肠、骨骼肌、动脉壁细胞以及巨噬细胞.尽管PON2具有与PON1高度同源的氨基酸序列和相似的结构,但二者的生物学特性具有较大的区别.PON2不具有水解对氧磷酶的活性,但却具有水解酶和内酯酶活性.