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HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究进展
丙型肝炎病毒感染显著的特征是慢性化,已经成为严重的社会公共卫生问题.目前治疗方法仅限于干扰素-利巴韦林联合使用,持续疗效有限而且副作用大,因此迫切需要寻找特异有效的抗病毒药物.HCV NS3基因编码的NS3蛋白具有丝氨酸蛋白水解酶、解旋酶和磷酸核苷酶活性,在病毒RNA复制和多聚蛋白前体的加工成熟中有着重要作用.因此,NS3丝氨酸蛋白酶的抑制剂是抗病毒的理想药物.本文就HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究综述如下.
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乳酸左氧氟沙星片溶出度试验方法的探讨
左氧氟沙星属喹诺酮类抗菌药,为氧氟沙星的左旋光异构体.其抗菌力更强,对G+球菌和G-杆菌活性约为氧氟沙星的2倍,它的主要作用机制为抑制细菌DNA旋转酶活性,抑制细菌DNA的复制.
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帝斯曼:助力乳品行业发展——访帝斯曼食品配料部全球销售总监Frederika Tielenius Kruythoff、亚太区销售总监Ken Hazzard和中国区乳品添加剂经理赵少华
乳糖是天然存在于乳制品中的一种糖,它是婴儿的主要能量来源.正常情况下,人体肠道中的乳糖酶会将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖.但是,世界上约有75%的人由于体内乳糖酶活性不足,不能转化所有乳糖,从而出现胃胀气、绞痛、过多排气及腹泻等症状,即乳糖不耐症.
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MaFGF对急性染顺铂小鼠肾损害的保护作用研究
目的 探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对急性染顺铂(DDP)小鼠肾损害的保护作用及其机制.方法 腹腔注射(ip)DDP 10 mg/kg,建立小鼠肾损伤模型,然后每日ip MaFGF 10或20 μg/kg,连续7d.采用全自动分析仪测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量,试剂盒测定丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量和超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,观察肾脏病理学变化.结果 MaFGF可明显降低血清Scr、BUN及肾皮质MDA、NO含量(P＜0.05),引起SOD、GSH-Px活性明显升高(P＜0.05),使受损的肾结构明显改善.结论 MaFGF对顺铂致肾功能损伤有保护作用,其机制可能与抗顺铂的脂质过氧化反应有关.
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铅对大鼠海马神经细胞Ca2+浓度、Ca2+-ATP酶、Na+-ATP酶活性的影响
已知脑海马区是学习和记忆的重要脑区,尤其LTP被认为是学习和记忆的功能单位.许多实验证明体外急性染铅时,神经细胞LTP过程中Ca2+浓度明显升高,Ca2+-ATP酶活性降低[1].在慢性染铅动物体内,铅对上述指标的影响还没有报道,本研究用慢性染铅Wistar大鼠为动物模型,予观察铅对脑海马神经细胞Ca2+,Ca2+-ATP酶,Na+-ATP酶活性及LTP的影响.
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1-14 低氧处理对肝癌细胞生长和NQ01酶活性的影响
目的研究低氧环境下肝癌细胞生长是否被抑制,胞内Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)活性是否被诱导增高,以及二者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种于96孔培养板内,5%CO2孵箱培养24h后,换新鲜培养液(已用混合气预先平衡)放入低氧小罐,用5%CO2～95%N2混合气体进行缺氧处理(O2%＜0.1%),分别培养6、9、12、24、36 h后,取出培养板,以MTT比色法检测细胞生长情况;NQ01酶活性采用微孔板直接测定法、细胞数用结晶紫染色法测定,NQ01酶活性结果表达为NQ01酶比活力(specifie activity)=A(NQ01酶活力)/B(细胞数).结果低氧处理6 h后细胞NQ01酶比活力较常氧对照组下降,而细胞生长加快.在9 h后,酶比活力呈现时效性升高,且低氧组酶比活力明显高于对照,而细胞生长则减慢(与常氧对照组比较均为P＜0.01).将细胞生长曲线与酶活时间曲线作相关分析,统计学上差异无显著性.结论低氧处理在短时程内能够刺激肝癌细胞生长加快,抑制胞内NQ01酶活性;而超过这一时间段之后则使细胞生长减缓,诱导NQ01酶活性升高.
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1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P＜0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P＜0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P＜0.01);酪醇在70～100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P＜0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
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氟对体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞的毒性作用
目的 探讨NaF对体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞细胞周期和琥珀酸脱氢酶(SDH)、5'-核苷酸酶(5'-NT)、酸性磷酸酶(ACP)活性的影响.方法 体外分离纯化培养获得纯度达98%以上的大鼠大脑皮层星形胶质细胞(特异性抗GFAP免疫化学鉴定),分别用浓度为1、2和5mmol/L NaF对星形胶质细胞染毒12、24、48和72h,FCM检测细胞周期构成比,紫外比色法检测SDH、5'-NT、ACP活性.结果 FCM分析细胞周期显示:1～5mmol/L剂量范围内,NaF能够以剂量依赖方式诱导星形胶质细胞周期由S期阻滞向G_2/M期阻滞转变,随着时间延长变化更明显,超出这一范围则主要为subG_1期细胞.紫外比色法检测结果表明,NaF抑制SDH、ACP活性,2mmol/L范围内对5'-NT活性影响无显著性(P>0.1),增加剂量5'-NT失活;SDH、ACP活性与subG_1 DNA期细胞相对含量显著负相关(SDH:r=-0.84148,P<0.05;ACP:r=-0.90416,P<0.01).结论 NaF可诱导星形胶质细胞细胞周期阻滞及凋亡,并可抑制其SDH、5'-NT、ACP活性.
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2015-2016年成都市1～4月龄婴儿肠道乳酸杆菌及生化特性
目的 探索早期婴儿肠道乳酸杆菌的优势菌种及生化特征.方法 收集41名1～4月龄健康婴儿粪便,采用选择培养基分离乳酸杆菌,通过形态、好氧性、碳水化合物代谢(API 50)和16S RNA测序等分析技术对分离菌株进行分类学鉴定,以及使用API ZYM检测其19种酶活性.结果 共收集71株乳酸杆菌,包括副干酪乳杆菌(L.paracasei)30株,格氏乳杆菌(L.gasseri) 13株,唾液乳杆菌(L.salivarius)10株,短乳杆菌(L.brevis)4株,鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)3株,发酵乳杆菌(L.fermentum)和植物乳杆菌(L.plantarum)各1株,未鉴定到种9株.7种乳酸杆菌对49种碳水化合物代谢有异同,有14种碳水化合物均不能发酵,均能发酵的碳水化合物有4种,在其余31种碳水化合物的代谢上具有菌种差异.大多数乳酸杆菌的亮氨酸芳胺酶、半乳糖苷酶和葡萄糖苷酶活性强,其他酶活性因种株不同差异较大.结论 副干酪乳杆菌、格氏乳杆菌和唾液乳杆菌可能是1～4月龄健康婴儿肠道乳酸杆菌的主要菌种.婴儿肠道乳酸杆菌的碳水化合物利用能力和酶活性具有一定的共同特征和种株差异.
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贯众影响衰老模型小鼠不同组织酶活性研究
贯众(Polystichum falcatum Diels)能清热解毒,补阳壮肾,强腰膝,治疗阳痿、遗精、遗尿等功效.已有实验证明,贯众能抗乙肝病毒、流感病毒、艾滋病毒等,对子宫平滑肌有明显的收缩作用,还能抑制体内的白血病细胞[1].贯众可提高果蝇的平均寿命[2],能有效提高果蝇体内SOD的活性,降低MDA的含量[3].本研究进一步探索饲喂贯众水提剂一个月后,衰老模型小鼠不同组织有关酶活性的变化.
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吸烟对大鼠血清及肺组织谷胱甘肽S-转移酶活性的影响
谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)是一组具有多种生理功能的酶系,在体内有重要的解毒作用[1].吸烟对血清GSTs活性的影响已有报道,但吸烟对肺组织GSTs活性的影响则报道较少.本文检测长期被动吸烟大鼠血清及肺组织的GSTs活性.
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维生素A缺乏对大鼠睾丸组织酶活性的影响
生素A(VA)是目前世界上特别是包括我国在内的发展中国家易缺乏的营养素之一 ,其它营养素缺乏也常常伴有VA缺乏.近期调查表明,在我国城市居民中摄入量不足推荐每日膳食中营养素供给量(RDA)的50%的个体,男女分别占46.8%和50.6%,儿童青少年、农村居民摄入不足者更多[1].VA在生长发育以及在维持机体正常生理功能方面都发挥重要作用.V A缺乏会导致暗适应力下降、生长迟滞、睾丸、卵巢等器官萎缩、上皮细胞角化过度等 [2]. 本研究观察了VA缺乏对大鼠生精能力、睾丸标志酶的活性及胆固醇含量的影响,对VA缺乏影响生殖功能的机理作了初步探讨.
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日本香川地区荷斯坦牛乳与娟姗牛乳营养成分的比较
目的 比较日本香川地区荷斯坦和娟姗牛乳中乳清蛋白的总蛋白质含量,乳过氧化物酶(LPO)和乳铁蛋白的一些基本性质.方法 以荷斯坦和娟姗牛乳为对象,经酸沉淀除酪蛋白后,通过离心,SP-Sepharose离子交换层析分离纯化得到乳过氧化物酶和乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝定量、SDS-PAGE定性、ABTS检测乳过氧化物酶活性、后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)确认分子量.结果 娟姗牛乳中乳清蛋白的总蛋白质和乳过氧化物酶含量均高于荷斯坦中乳清蛋白中的总蛋白质和乳过氧化物酶含量.娟姗乳清蛋白中的乳过氧化物酶活性(0.870 5 U/ml)高于荷斯坦乳清蛋白中的乳过氧化物酶活性(0.758 9 U/ml).娟姗乳清蛋白中的乳过氧化物酶和乳铁蛋白分子量分别为786 48.154和831 23.538 kDa,荷斯坦乳清蛋白中的乳过氧化物酶和乳铁蛋白分子量分别为777 64.841和827 65.494 kDa.结论 对于乳酪行业,当考虑养殖奶牛品种生产乳酪同时又想大限度利用需要处理的乳清蛋白和乳铁蛋白的时候,相比于荷斯坦奶牛,娟姗奶牛是更好的选择.
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阿奇霉素治疗社区获得性肺炎的临床效果观察
目的：探讨阿奇霉素治疗社区获得性肺炎的临床效果。方法：2013年1月-2014年1月收治社区获得性肺炎患者90例，随机分为观察组和对照组各45例。两组均给予痰热清20 mL加入5%葡萄糖注射液250 mL混合进行静滴，1次/d；磷酸可待因溶液10 mL，甘草合剂10 mL，茶碱缓释片0.1 g，3次/d，口服。观察组在此基础上给予阿奇霉素0.5 g加入250 mL的生理盐水中进行静滴，1次/d。而对照组则使用头孢呋辛钠注射液0.75 g加入5%的葡萄糖溶液中进行静滴，2次/d。两组疗程均2周，比较治疗效果。结果：观察组的治疗有效率97.8%，对照组8.08%，两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：阿奇霉素的抗菌谱非常广、起效快，在社区获得性肺炎治疗中的应用具有较好的效果，值得推广。
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丙型肝炎病毒聚合酶底物及pH值佳范围研究
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)聚合酶底物及pH值佳范围.方法 构建HCV聚合酶基因的重组原核表达质粒后,测序及读码框架分析结果表明得到相关HCV NS5b RNA聚合酶全基因序列,进一步利用Ni2+金属离子螯和亲和层析将其纯化.结果 研究获得高效表达聚合酶蛋白的适条件,利用DNA-BAND培养96孔板,建立生物素标记检测HCV NS5b聚合酶活性的模型.同时研究细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的HCV聚合酶作用底物及pH值的佳条件.结论 HCV聚合酶的高效表达和有效纯化,以及HCV聚合酶的底物及pH值对聚合酶的佳条件的确定为建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型及筛选药物奠定基础.
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新降糖颗粒对2型糖尿病大鼠糖代谢关键酶活性及肝功能的影响
目的：探讨新降糖颗粒对链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠糖代谢关键酶活性及肝功能的影响。方法：50只雄性SD大鼠除8只给予普通饲料喂养作为正常组外，其余大鼠均采用高脂饲料喂养4周，一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）40 mg·kg-1建立2型糖尿病大鼠模型，随机分为模型组、二甲双胍组（0.15 g·kg-1）和新降糖颗粒高、低剂量组（12.64、6.32 g·kg-1），每天灌胃给药1次，连续8周。干预8周后，检测大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、糖化血红蛋白（HbA1c）、肝糖原，检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）及糖代谢关键酶己糖激酶（HK）、果糖-6-磷酸激酶（PFK）、丙酮酸激酶（PK）及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PDH）活性。结果：与模型组比较，新降糖颗粒能明显降低FBG、FINS、内环境稳态模型法胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、HbA1c及肝功能指标ALT、AST、ALP及γ-GT（P<0.05，P<0.01），增加肝糖原含量（P<0.01），增强糖代谢关键酶HK、PFK、PK及G6PDH的活性（P<0.05，P<0.01）。结论：新降糖颗粒能有效改善2型糖尿病大鼠的症状，推测其机制可能与新降糖颗粒增强肝脏糖代谢关键酶HK、PFK、PK及G6PDH活性，促进肝糖原合成，改善肝功能，下调血清FINS水平，改善胰岛素抵抗等多因素有关，终降低了2型糖尿病大鼠的FBG、HbA1c水平。
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阳春砂果实发育过程中可溶性糖及蔗糖代谢酶活性变化规律的研究
目的：为研究阳春砂果实发育过程中可溶性糖含量、蔗糖代谢酶活性和基因表达量的动态变化规律，并为提高阳春砂的产量提供依据。方法：本研究以阳春砂幼果期、成熟中期和成熟末期的新鲜果实为试验材料，采用高效液相色谱法、紫外分光光度法对可溶性糖含量和酶活性进行测定，并结合3个发育时期果实的高通量测序表达谱数据，分析糖代谢中3个关键酶基因的表达趋势。结果：果糖、葡萄糖和蔗糖是阳春砂果实中的主要糖分，在果实发育过程中，果皮中的己糖（果糖和葡萄糖）含量逐渐降低，种子团中己糖含量先降低后升高；果皮和种子团中蔗糖含量和蔗糖合成酶净活性（合成方向减去分解方向活性）均逐渐升高。结论：基于RNA-seq的糖代谢中的关键酶基因表达趋势分析表明，蔗糖磷酸合成酶、蔗糖合成酶基因的表达趋势以先上升后不变为主，转化酶基因的表达趋势以逐渐上升为主。蔗糖合成酶是催化阳春砂果实中蔗糖合成与分解的关键酶，果实成熟末期是蔗糖合成酶活性和蔗糖含量高的时期。
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制何首乌对大鼠肝CYP1A2酶活性及mRNA表达的抑制作用
目的:考察制何首乌水提物对大鼠肝细胞色素P450酶亚型CYP1A2的酶活性及mRNA表达的影响.方法:水回流提取得制何首乌水提物,HPLC确定主要成分并测定其含量.大鼠随机分为空白对照组、制何首乌水提物组(2 g/kg和20g/kg),给药组每天按10 mL/kg量灌胃给予制何首乌水提物,连续7d.取肝分离肝微粒体,HPLC测定肝微粒体对CYP1A2酶的底物非那西丁的代谢消除率,考察肝微粒体CYP1A2酶活性;实时荧光定量PCR技术检测肝组织中CYP1 A2基因mRNA的表达.结果:与空白对照组相比,制何首乌水提物20 g/kg组大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达均明显降低(CYP1A2酶活性,P＜0.01;CYP1A2的mRNA表达,P＜0.05).结论:制何首乌水提物20g/kg对大鼠肝CYP1A2酶活性和mRNA的表达有明显抑制作用.
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胶原酶与不同药物相配伍对其酶活性影响的研究
目的:观察注射用胶原酶与不同药物相配伍后酶活性变化的情况,探讨胶原酶与不同药物配伍对酶活性的影响.方法:将注射用胶原酶制剂与12种药物分别配伍后,将样品管、底物对照管和酶对照管各加入无水乙醇0.5 ml终止酶反应,冷却过滤.取滤液稀释后置于TU-1800 pc紫外可见分光光度计,将样品管的吸收度减去底物对照管和酶对照管的吸收度,再从标准曲线上查得亮氨酸的μg数,以胶原酶在37℃、pH7.5条件下作用于胶原蛋白,每小时从胶原蛋白中释放的多肽相当于茚三酮显色1 μmol亮氨酸量为一个活性单位来计算注射用胶原酶制剂的活性.结果:12种药物对注射用胶原酶的活性均有不同程度的影响,轻者导致胶原酶的活性下降,重者导致胶原酶的活性丧失.结论:胶原酶的化学本质是蛋白质,任何能改变蛋白质性质的条件,都会使酶的活性下降或失活.忽视胶原酶的化学本质而随意配伍的不规范做法,有悖于酶促反应动力学的基本原理,在临床工作中不应提倡.
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酸枣仁、远志和桔梗水提液对大鼠肝CYP450酶活性及mRNA表达的调控作用
研究中药酸枣仁、远志和桔梗水提液对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用.方法 大鼠ig给予酸枣仁、远志和桔梗水提液7d后取肝脏称重并制备肝微粒体,采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素b5( Cytb5),P450的含量及红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性,高效液相色谱法测定非那西汀O-脱乙基酶(PHD)的活性和对硝基苯酚羟化酶(pNPH),采用RT-PCR技术检测大鼠肝中5种P450同工酶CYP1A1,CYP1A2,CYP2E1,CYP3A1及CYP3A2mRNA的表达.结果 与对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;酸枣仁组显著降低Cytb5含量和ERD活性,增加pNPH活性,远志组显著升高pNPH,极显著降低ERD活性,桔梗组显著降低CYP450含量,并明显升高PHD和pNPH活性；在mRNA水平上,各组的CYP1A1基因均未能检出；酸枣仁组诱导CYP2E1,CYP3A1和CYP3A2基因表达,远志组抑制CYP3A1,诱导CYP3A2的mRNA表达,桔梗组诱导CYP1 A2,CYP2E1,CYP3A2的mRNA表达；酸枣仁的CYP2E1、桔梗的CYP1A2和CYP2E1mRNA水平基本与酶活性水平相平行.结论 酸枣仁、远志水提液诱导CYP2E1的活性；桔梗水提液诱导CYP1A2,CYP2E1的活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现.提示若酸枣仁和远志与经CYP2E1和CYP3A代谢的药物同用,桔梗若与经CYP1A2,CYP2E1,CYP3A代谢的药物同服,有可能会影响这些药物的临床疗效,临床用药时应慎重考虑.
