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苯甲酸钠对PC12细胞的增殖抑制及MAPKs活化表达的影响
目的 观察苯甲酸钠(sodium benzoate,SB)对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖的抑制作用及在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,为进一步了解SB的神经毒性及相关的分子机制提供实验依据.方法 大鼠PC12细胞在含0～ 50 mmol/L浓度SB的培养基中培养24 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Western blot检测JNK和ERK磷酸化水平的改变.结果 SB可呈一定的时间和浓度依赖性抑制PC12细胞增殖,其中40 mmol/L SB作用24 h对PC12细胞的抑制率为47.81％ ±5.23％;Western blot结果显示,SB处理可增加JNK的磷酸化水平并降低基础的ERK磷酸化水平;预孵SP600125 30 min后再加入SB,则能短暂降低JNK的磷酸化水平.结论 SB能够明显抑制PC12细胞的增殖,JNK和ERK信号转导通路可能参与了SB对PC12细胞的毒性作用机制.
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1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P＜0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P＜0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P＜0.01);酪醇在70～100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P＜0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
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锰对PC12细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究
目的 筛选锰对PC12细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系,观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点,探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制.方法取对数生长期PC12细胞株,用200、400、600、800μmol/L MnCl2培养液分别培养1、2、3、4天,噻唑蓝(MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量,台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线;western-blot法检测p-Erk,p-p38.结果 MTT和平板克隆结果显示200～800μmol/L MnCl2作用1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用,且呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl2 作用4天对PC12细胞的抑制率达50%以上.Western-blot结果显示600μmol/L MnCl2作用1～4天,p-Erk2逐渐降低,作用2天时较对照降低了75%(n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4天时,p-Erk逐渐降低,400μmol/L MnCl2作用4天较对照降低了78%(n=3,P<0.01);600μmol/L MnCl2作用1～4天可见p-p38逐渐升高,作用3天时较对照组增加6.6倍 (n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl2分别作用4d时,p-p38逐渐升高,当400μmol/L MnCl2作用4天时较对照组升高了4.7倍(n=3,P<0.05).结论锰的神经毒性可能是通过阻抑p-ERK通路上调p-p38引发细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡实现的.
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植酸对胃癌细胞恶性增殖的抑制作用研究
目的 研究植酸对bax、bcl-2表达影响与抑制胃癌细胞增殖作用及其机制.方法 采用MTT实验法观察植酸对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜下观察植酸对细胞基本生长状态的改变及形态的变化;单细胞凝胶电泳实验观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用;Western blotting检测凋亡相关基因bax及bcl-2的蛋白表达.结果 MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量与时间的效应关系;倒置显微镜下的形态学观察表明加药组细胞的生长状态不佳;植酸作用组细胞出现了典型凋亡的彗星施尾,且存在剂量-效应关系;植酸能够下调bcl-2蛋白的表达,植酸处理组细胞中bax蛋白比对照组表达增加,且均呈现剂量-反应关系.结论 植酸对SGC-7901细胞具有抑制增殖作用,bax及bcl-2参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制.
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白花丹醌对人肝星状细胞的增殖抑制、凋亡及细胞外基质分泌功能的影响
目的:研究白花丹醌对人肝星状细胞株(HSC-LX2)的作用,观察该药对细胞的增殖抑制率、细胞凋亡、分泌细胞外基质和金属蛋白酶功能的影响.方法:HSC-LX2与药物孵育48 h,以MTT法检测细胞增殖抑制率;以流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫组化法观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1和MMP-13表达的部位和面积.结果:白花丹醌低、中、高浓度均可抑制HSC-LX2细胞增殖,诱导细胞发生凋亡,降低Ⅰ型和Ⅲ型胶原分泌水平,并增加其分泌MMP-1及MMP-13的能力.以上作用具有剂量依赖性,有统计学差异(P＜0.05);中、高剂量组上述的作用比秋水仙碱强.结论:白花丹醌具有抑制HSC-LX2细胞增殖、诱导细胞发生凋亡、降低细胞外基质的分泌,并增加纤维蛋白降解酶分泌水平的能力,而对肝纤维化进程有干预作用;上述能力均有剂量依赖性;且中、高剂量组的干预能力强于秋水仙碱.
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姜黄素对人胰腺癌细胞增殖抑制作用及对Wnt信号通路的影响
目的:探究姜黄素对人胰腺癌SW1990细胞增殖抑制作用及对Wnt信号通路的影响.方法:低/中/高剂量观察组人胰腺癌SW1990细胞分别以终浓度为20、50、100μmol/L姜黄素处理,100μL/孔,对照组细胞则以等体积生理盐水处理,分别干预24、48、72 h.以噻唑蓝(MTT)法及Annexin-V/FITC双染法分别检测人胰腺癌细胞SW1990增殖及凋亡情况,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法及细胞爬片免疫细胞化学技术检测人胰腺癌细胞SW1990β-链蛋白(β-Catenin)mRNA及β-Catenin蛋白表达情况.结果:干预72 h后低/中/高剂量观察组人胰腺癌SW1990细胞增殖抑制率(％)分别为(4.59±1.32)、(40.01±3.87)、(60.98±5.97);对照组及低/中/高剂量观察组人胰腺癌SW1990细胞凋亡率(％)(8.14±1.25)、(13.04±1.03)、(27.15±1.62)、(59.21±1.46);β-Catenin蛋白免疫细胞化学(ICC)评分(分)分别为(5.78±0.56)、(4.42±0.61)、(2.57±0.58)、(1.38±0.63).观察组凋亡率显著高于对照组,β-Catenin mRNA相对表达量及β-Catenin蛋白ICC评分显著低于对照组(P<0.05),且增殖抑制率、凋亡率随姜黄素作用浓度增加逐渐升高(P<0.05),增殖抑制率亦随干预时间延长逐渐升高(P<0.05);β-Catenin mRNA相对表达量及β-Catenin蛋白ICC评分随姜黄素作用浓度增加逐渐降低(P<0.05).结论:姜黄素可有效下调人胰腺癌细胞SW1990β-Catenin基因表达,抑制Wnt信号通路活化,具有显著的增殖抑制作用,且具有明显的时间-剂量依赖性.
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奥沙利铂和7-羟基星形孢菌素联合用药对HCT116细胞的抑杀作用
目的:观察奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)与7-羟基星形孢菌素(7-hydroxystaurosporine,UCN-01)单独及联合应用对结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,探讨其诱导细胞死亡的作用机制.方法:应用MTT法检测L-OHP,UCN-01单药及联用对HCT116细胞的增殖抑制作用；应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理的结肠癌细胞凋亡；应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变.结果:低浓度L-OHP(6.25 μmol·L-1)与UCN-01(100 nmol·L-1)联用对结肠癌HCT116细胞的杀伤可产生协同作用,效果明显强于单独用药组；两药联用Annexin V阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别,但死亡细胞明显增加；两药联用HCT116细胞的形态发生改变,巨核多核细胞较单独用药组增多约10％.结论:L-OHP与UCN-01联用对HCT116细胞的增殖具有协同抑制作用,诱导细胞发生凋亡和丝裂灾变.
关键词： 奥沙利铂 7-羟基星形孢菌素 增殖抑制 结肠癌细胞HCT116 -
基于雌激素受体信号通路雷公藤甲素抗乳腺癌作用及机制研究
目的:研究雷公藤甲素体(TP)外对小鼠乳腺癌细胞系4T1的抑制作用,基于雌激素受体信号通路探讨TP抗肿瘤药效及其机制,为其临床治疗乳腺癌提供相关的实验依据.方法:MTT法检测TP对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的影响,采用流式细胞仪FITC-Annexin V/PI法检测TP诱导4T1细胞凋亡率;Western blot技术检测4T1细中胞雌激素受体信号通路相关蛋白ERα、p-ERα、ER β、p-ER β、ERK、p-ERK、MEK1/2、p-MEK1/2、p38-MAPK、p-p38 MAPK、SAPK/JNK、p-SAPK/JNK的表达.结果:TP浓度为100、10、1、0.1μmol/L时对4T1细胞均有增殖抑制作用,其中10、1、0.1μmol/L时能诱导4T1细胞凋亡,并能降低MEK1/2、p-MEK1/2、ERα、p-ER α、ERβ、p-ER β的表达,但对ERK、p-ERK、p38 MAPK、p-p38 MAPK、SAPK/JNK、p-SAPK/JNK的表达没有影响.结论:一定浓度范围内,TP对小鼠乳腺癌细胞4T1具有增殖抑制作用,且其能诱导4T1细胞凋亡,可能与下调ERα、ERβ、MEKl/2的蛋白表达及其磷酸化有关.
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云南琵琶甲提取物抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡的研究
目的:研究云南琵琶甲粗提物对人子宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,并进一步探讨其提取物抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法:用水提反复冻融法得到云南琵琶甲提取物,倒置显微镜观察、MTT法检测琵琶甲提取物对HeLa细胞的抑制作用,荧光染色观察、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法检测药物诱导细胞凋亡的作用.结果:云南琵琶甲粗提物对HeLa细胞有明显的增殖抑制作用,IC50为413μg/mL,荧光染色可见细胞皱缩,染色质凝集并边缘化,琼脂糖凝胶电泳可以看到梯状条带,流式细胞术发现S期细胞增多.结论:确定云南琵琶甲提取物可抑制HeLa细胞增殖,并初步推测云南琵琶甲粗提物能够诱导HeLa细胞凋亡.
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漆姑草诱导人白血病细胞株K562凋亡的实验研究
目的:研究漆姑草(HSJ)提取物对人白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响,探讨兵诱导凋亡的作用机制.方法:采用不同浓度的HSJ作用K562细胞后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;TdT酶介导的末端缺失原位标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达;比色法检测Caspase-3和Caspase-9的活性.结果:HSJ对K562细胞的增殖抑制率随药物剂量增大而增加;HSJ作用后细胞凋亡率增加;Bcl-2蛋白阳性表达率下降,平均透光度增加;Bax蛋白阳性表达率增加,平均透光度下降;Caspase-3和Caspase-9的活性增强,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:HSJ能够诱导K562细胞凋亡;其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平,增强Caspase-3和Caspase-9的活性有关.
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翼核果素对肝癌HepG2细胞凋亡及细胞骨架蛋白F-actin的影响
目的:研究翼核果素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法:以不同浓度的翼核果素作用于体外培养的HepG2细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,HE、吖啶橙染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率和周期,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin形态学变化.结果:翼核果素可明显抑制人肝癌HepG2细胞的增殖且呈剂量依赖性,作用于HepG2细胞24 h的IC50值为124.77 μmol·L-1.显微镜可见细胞核变形、染色体聚集等典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示,60、90 μmol·L-1翼核果素给药组细胞凋亡的百分率显著高于对照组,G2/M期细胞比例显著高于对照组,细胞骨架蛋白F-actin呈现解聚断裂状态.结论:翼核果素可抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞、细胞骨架蛋白F-actin解聚有关.
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苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖抑制及其机制研究
本研究采用MTT法检测苦参素在体外对人食管癌Eca-109细胞增殖率的影响、采用流式细胞术检测对细胞周期的影响,探讨苦参素对人食管癌Eca-109的增殖抑制作用,为苦参素应用于食管癌治疗提供实验依据.
关键词： 苦参素 增殖抑制 Eca-109细胞系 -
氧化苦参碱抑制HepG_2细胞增殖的研究
目的:探讨氧化苦参碱对人肝癌细胞株(HepG_2)增殖抑制的影响及其作用机制.方法:以0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.8,1,2,5,8,10,15 g·L~(-1)的氧化苦参碱处理HepG_2细胞,四噻唑蓝法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;苏木精-伊红(HE)染色比较细胞形态差异;免疫组化染色进一步检测HepG_2细胞肿瘤相关蛋白表达量的变化.结果:不同浓度氧化苦参碱处理HepG_2细胞,低于1 g·L~(-1)对细胞抑制不明显;1～8 g·L~(-1)对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时间和剂量依赖性;大于8 g·L~(-1)时,对细胞虽有明显的抑制作用,但未表现出明显的时间和剂量依赖性.进一步免疫组化分析结果显示,HepG_2细胞肿瘤相关蛋白P53和Bcl-2表达量明显减少,而Bax表达量明显增加.结论:氧化苦参碱对HepG_2细胞增殖具有明显的抑制作用;其作用机制可能是通过上调或者下调肿瘤相关蛋白的表达来实现的.
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柠檬醛胁迫下K562细胞生长增殖抑制和凋亡诱导研究
目的:研究柠檬醛对人白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法:采用本实验改良的MTT比色法和Annexin-V/PI双染色流式细胞术测定柠檬醛对K562细胞的增殖抑制率和凋亡诱导率;采用基于分光比色原理的各种试剂盒定量分析柠檬醛胁迫下K562细胞内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性.结果:K562细胞经柠檬醛作用后,6.9～444 mg·L-1柠檬醛抑制K562细胞增殖呈时效性及量效性;111,222mg·L-1柠檬醛可诱导K562细胞凋亡,前者主要表现为诱导早期凋亡活性(4 h:4.3%,24 h:36.6%),后者则主要表现为诱导晚期凋亡活性(4 h:23.9%,24 h:52.4%);柠檬醛作用于K562细胞引起细胞氧化应激的改变,111 mg·L-1柠檬醛作用3 h使K562细胞MDA水平上升为对照组的3.29倍,而GST活性几乎完全抑制.不同浓度柠檬醛作用均引起细胞GSH水平下降.结论:柠檬醛胁迫可有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,细胞内GSH含量下降、柠檬醛高蓄积及ROS水平上升可能是其抑制作用的重要分子机制,而ROS途径可能是柠檬醛诱导细胞凋亡机制之一.
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白花蛇舌草注射液对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响
目的 探讨白花蛇舌草注射液(HDI)抑制多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖作用及机制.方法 采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测HDI对RPMI 8226抑制作用并筛选研究浓度;通过流式细胞技术使用Annexin V-PI检测细胞凋亡、PI单染检测细胞周期分布、FITC-CD44、PE-CD49d双标检测黏附分子表达;ELISA检测细胞上清IL-6、VEGF含量;RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin、IL-6、VEGF mRNA的表达.结果 HDI可抑制RPMI 8226增殖,同时诱导该细胞株早期凋亡,将细胞周期阻滞于G1期,且呈浓度依赖.经0、20、40、60 μL/mL HDI作用后RPMI 8226上清VEGF含量降低且呈浓度依赖(P<0.01),IL-6含量增高(P<0.01),细胞表面CD44、CD49d表达水平呈浓度依赖上调.经40 μL/mL HDI作用后,该细胞株Survivin mRNA表达显著下调(P<0.01),Bcl-2、IL-6、VEGF mRNA显著上调(P<0.01),Bax、Caspase-3 mRNA则上调不明显(P>0.05).结论 HDI可抑制RPMI 8226增殖,其机制可能和诱导细胞早期凋亡,细胞周期G1期阻滞,降低VEGF分泌,下调Survivin转录水平等有关.
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白头翁皂苷D诱导U87MG细胞凋亡
目的 探讨白头翁皂苷D对人脑胶质瘤细胞系U87的增殖抑制和促凋亡效应及其机制.方法 用MTT法检测细胞增殖抑制作用,并求得IC25、IC50和IC75,按浓度和时间分组,Annexin-Ⅴ/PI双染、流式细胞术和TUNEL/PI染色检测凋亡,Hoechst33342染色、透射电子显微镜、DNA-ladder检测细胞系改变,细胞免疫染色和Western blot检测相关凋亡蛋白表达.结果 白头翁皂苷D在14.016 nmol/mL下对U87MG抑制率为94.034％ (P ＜0.05);处理组细胞形态呈凋亡改变,细胞超微结构中发现自噬小体;处理组caspase-3、8 、Bax和FasL表达上调(P＜0.05),Bcl-2表达下调(P＜0.05).结论 白头翁皂苷D对U87MG细胞有呈时间和浓度依赖的增殖抑制作用,且通过FasL/Fas途径诱导其发生凋亡.
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桂皮酸抑制舌鳞癌细胞Tca8113的增殖
目的 探讨桂皮酸(CINN)对舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响及机制.方法 舌鳞癌细胞Tca8113经CINN处理后,倒置显微镜下观察细胞增殖和形态;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;免疫组化检测KLF6、Bcl-2、P53、cyclin D1、c-Jun及PTEN的蛋白表达.结果 CINN呈时间-剂量依赖性显著抑制Tca8113细胞增殖(P＜0.05);可见典型的Tca8113细胞分化的形态学特征;CINN处理后,G1、G2期细胞显著减少,S期细胞显著增加,细胞明显被阻滞于S期(P ＜0.05);CINN处理后KLF6和P53的蛋白表达上调(P＜0.05),Bcl-2、cyclin D1及c-Jun的蛋白表达下调(P＜0.05).结论 CINN可抑制舌鳞癌细胞Tca8113的增殖并将其阻止于S期,同时诱导细胞凋亡.
关键词： 舌癌细胞Tca8113 增殖抑制 桂皮酸 KLF6 -
糖皮质激素及其受体对细胞数量稳态调节的作用
糖皮质激素(GC)/糖皮质激素受体(GR)能够抑制体内多种细胞的增殖,近年来还发现GC/GR对多种凋亡诱导因子导致的细胞凋亡具有拮抗作用.我们因此提出GC/GR可能通过上述作用来维持细胞数量的稳定,这种对细胞数量的稳态调节可能是GC/GR对机体稳态调节的一个重要方面.本文结合我们自身的工作综述了GC/GR抑制细胞增殖和抗凋亡的作用,并简述了其作用机制的研究进展.这方面的研究有助于充分了解GC的生理和药理作用以及副作用产生的机制,有助于临床合理用药.
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家蝇幼虫抗菌肽粗提物与8种纯化物对SUP－B15细胞增殖抑制和诱导的凋亡作用
将家蝇三龄幼虫抗菌肽粗提物利用反相高效液相色谱仪（ RP－HPLC）进行分离纯化，得到8种与对照组有差异的蛋白分别命名为I1、 I2、 I3、 I4、 G1、 G2、 G3、 G4组。通过CCK－8试剂盒检测发现，其中有4种蛋白及粗提物（ E0组）对sup－b15细胞有增殖抑制作用，生存率均值分别为I1：0．714、 I2：0．785、I4：0．641、 G2：0．686、E0：0．561。采用流式细胞仪检测其诱导凋亡的效果，其凋亡率均值分别为I1：16．73、 I2：9．79、 I4：18．60、 G2：11．85、E0：35．94。对比发现，粗提物（ E0）对sup－b15细胞的抑制率明显高于纯化物，证明粗提物较纯化物对肿瘤细胞抑杀作用更为明显，间接的说明各种纯化蛋白之间具有某些协同作用。
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熊果酸对t(8；21)白血病细胞kasumi-1的抗肿瘤作用机制的研究
本研究旨在探讨熊果酸对急性髓系白血病t(8;21)阳性细胞株kasumi-1细胞的抑制增殖、诱导凋亡机制.采用CCK-8法检测细胞增殖抑制,瑞氏染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法及Western blot法检测kasumi-1细胞内相关基因mRNA及蛋白的表达.结果表明,经熊果酸处理后的ka-sumi-1细胞的生长增殖受到抑制,出现凋亡形态学改变;在熊果酸2.5、5、10、20、50 μmol/L浓度梯度以及在12,24,36,48,60,72 h时间梯度下,Annexin V阳性细胞比率随药物浓度的增加及作用时间的延长呈上升趋势;细胞内AMLl-ETO、KIT、MYC、CCND1、BCL2、MDM2 mRNA的表达随作用时间的延长及用药浓度的增加而呈显著的下降趋势,而P53及BAX的mRNA表达逐渐增高;Western blot显示AML1-ETO、C-kit、C-MYC、BCL-2蛋白表达减低,而P53蛋白表达增高.结论:熊果酸呈浓度和时间依赖性抑制kasumi-1细胞的增殖并诱导其凋亡,从而发挥抗白血病的作用.这为t(8;21)白血病靶向治疗方案的选择提供理论依据.
