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1-14 低氧处理对肝癌细胞生长和NQ01酶活性的影响
目的研究低氧环境下肝癌细胞生长是否被抑制,胞内Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)活性是否被诱导增高,以及二者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种于96孔培养板内,5%CO2孵箱培养24h后,换新鲜培养液(已用混合气预先平衡)放入低氧小罐,用5%CO2～95%N2混合气体进行缺氧处理(O2%＜0.1%),分别培养6、9、12、24、36 h后,取出培养板,以MTT比色法检测细胞生长情况;NQ01酶活性采用微孔板直接测定法、细胞数用结晶紫染色法测定,NQ01酶活性结果表达为NQ01酶比活力(specifie activity)=A(NQ01酶活力)/B(细胞数).结果低氧处理6 h后细胞NQ01酶比活力较常氧对照组下降,而细胞生长加快.在9 h后,酶比活力呈现时效性升高,且低氧组酶比活力明显高于对照,而细胞生长则减慢(与常氧对照组比较均为P＜0.01).将细胞生长曲线与酶活时间曲线作相关分析,统计学上差异无显著性.结论低氧处理在短时程内能够刺激肝癌细胞生长加快,抑制胞内NQ01酶活性;而超过这一时间段之后则使细胞生长减缓,诱导NQ01酶活性升高.
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1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P＜0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P＜0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P＜0.01);酪醇在70～100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P＜0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
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高密度脂蛋白胆固醇的直接测定法研究
目的 用甾类糖苷化合物与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶制备的高亲和性酶化合物,结合特殊表面活性剂,通过对测定条件的优化,建立了高密度脂蛋白胆固醇直接法.方法 本方法 与磷钨酸镁(PTA-Mg2+)沉淀法和葡聚糖-氯化镁(DS50-Mg)沉淀结合ALBK法相关性良好,分别为r=0.995、Y=1.029X-0.1496和r=0.997、Y=1.0056X-0.0464,批内变异系数(CV)＜1.6%,日间CV＜2.1%,回收率(100±5)%.三酰甘油(TG)浓度达30 mmol/L,抗坏血酸＜2.5 mmol/L、血红蛋白＜4.8 g/L和胆红素＜300μmol/L时无显著干扰.当用纯的不同浓度的低密度脂蛋白(LDL)加入准确定值的新鲜血清中,观察脂蛋白在血清中的反应.结果 纯低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度在9.4 mmol/L以内对本法无显著干扰.结论 研究建立的高密度脂蛋白胆固醇直接法方法 ,其性能指标符合临床使用要求.标本无需预处理,精密度好,准确性高,适用于各种自动生化分析仪.
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关键词：
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高密度脂蛋白胆固醇的直接测定法研究
目的 建立高密度脂蛋白胆固醇直接测定法法.方法 用甾类糖苷化合物与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶制备的高亲和性酶化合物,结合特殊表面活性剂,通过对测定条件的优化,实现HDL-C的直接测定.结果 本方法与磷钨酸镁(PTA-Mg2+)沉淀法[1]和葡聚糖-氯化镁(DS50-Mg)沉淀结合ALBK法[2]相关性良好,分别为r＝0.9901、Y＝1.016X-0.0818和r＝0.9960,Y＝1.008X-0.063,批内CV＜1.6%,日间CV＜2.1%,线性范围达5.4 mmol/L,回收率100±5%.TG浓度达30mmol/L,抗坏血酸＜3.5 mmol/L、血红蛋白＜4.8 g/L和胆红素＜540 μmol/L时无显著干扰.当用纯的不同浓度的LDL加入准确定值的新鲜血清中,观察脂蛋白在血清中的反应.结果 纯LDL-C浓度在10.0 mmol/L以内对本法无显著干扰;结论本文建立的高密度脂蛋白胆固醇直接法方法,其性能指标符合临床使用要求.标本无需预处理,精密度好,准确性高,适用于各种自动生化分析仪.
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对高密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价
目的 对三种直接法测定血清中HDL进行评价.方法 进行方法学评价试验和方法间比较试验.结果 IS法检测限0.055mmol/L,批内CV低、中、高值分别为1.33%、1.10%、1.31%,日间CV低、中、高值分别为1.81%、1.56%、1.44%,线性范围3.45mmol/L,平均回收率103.5%,血红蛋白5g/L以下,总胆红素420μmol/L以下,甘油三酯5.16mmol/L以下,Vc 50 mg/dL以下无显著性干扰,与PTA法相关,Y=0.948X-0.027,r=0.991.PPD法检测限0.094mmol/L,批内CV低、中、高值分别为3.55%、1.44%、1.65%,日间CV低、中、高值分别为3.61%、2.17%、2.08%,线性范围2.98mmol/L,平均回收率105.1%,血红蛋白5g/L以下,总胆红素350μmol/L以下,甘油三酯5.16mmol/L以下,Vc 50mg/dL以下无显著性干扰,与PTA法相关,Y=0.861X+0.241,r=0.978.清除法检测限0.036mmol/L,批内CV低、中、高值分别为2.28%、2.34%、1.82%,日间CV低、中、高值分别为2.44%、2.58%、2.18%,线性范围3.09mmol/L,平均回收率98.7%,血红蛋白5g/L以下,总胆红素515μmol/L以下,甘油三酯17.19mmol/L以下,Vc 50 mg/dL以下无显著性干扰,与PTA法相关,Y=0.845X+0.271,r=0.978.结论 三种方法均与PTA法相关良好,清除法在抗干扰方面有一定的优势,较适合于临床实验室使用.
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高密度脂蛋白胆固醇的直接测定法与沉淀法的对比
高密度脂蛋白 (high density lipoprotein choleserol, HDL- C)是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白 , 它的含量与动脉管腔狭窄程度呈显著负相关 , 因而可用来评价高脂血症如患动脉粥样硬化、冠心病、高血压等的危险度 [1]. 现将临床检验广泛采用的直接法和沉淀法作一对比 , 旨在说明直接法在临床应用的可行性 , 并对东欧生物工程有限公司生产的 HDL- C直接法试剂进行客观评价 .
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高密度脂蛋白胆固醇直接测定法结果的临床探讨
目的 探讨国产高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)直接测定法在临床上应用的可行性.方法 将国产的直接测定法与硫酸葡聚糖镁(DS-mg2+)沉淀法进行比较分析,观察其精密度、线性范围、准确度及部分干扰因素.结果 直接测定法的CV略小于DS-mg2+法,与DS-mg2+的相关性良好,r=0.78x+0.31,r=0.94,HDL-C含量在2.30 mmol/L时线性良好;黄疸、溶血对直接测定法有一定的影响,对非HDL-C脂蛋白的遮蔽能力优于DS-mg2+法.结论 国产的HDL-C直接测定法试剂,各项方法学指标不差于DS-mg2+法,且快速简便适于自动化分析仪.
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全血中镉的无焰原子吸收光谱测定法
血中镉的含量可反映镉接触者的接触水平,为镉中毒的诊断与治疗提供参考指标,也可作为评价环境中镉污染的手段.国内外用原子吸收光谱法测定血镉的方法虽多[1],但样品需要前处理,或用标准加入法定量.样品前处理时容易受到污染,又费时费试剂;标准加入法不适用于大批量样品的分析.本研究按照"生物材料分析方法的研制准则"[2],建立了全血中镉的无焰原子吸收光谱快速直接测定法,并做了质量控制分析.
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直接测定法与间接计算法测得的HCO-3的比较
HCO-3测定方法主要有两种:直接测定法和间接计算法,前者是取静脉血利用酶耦联反应直接测定,后者是取动脉血利用血气分析中得到的pH及CO2分压值计算得到.2010年5月—2011年6月,我们对同一患者血样,同时进行直接测定法和间接计算法检测HCO-3,共2 236份.直接测定法使用的仪器为OLYMPUS AU640全自动生化分析仪,间接计算法使用的仪器为i-STAT血气分析仪.结果两组数据回归方程为:y(测定值)=0.96x(计算值)+0.68mmol/L,相关系数R2=0.93,说明两者符合度较好.计算值比测定值平均低1.21 mmol/L,两者相差＞3mmol/L比例,为1.4%.
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连续监测法测定糖化血清蛋白及对糖尿病的诊断价值
糖化血清蛋白(Gycosyluted Serum Portion,GSP),它是葡萄糖与白蛋白进行非酶促反应,经缓慢结合产生的酮胺结构化合物,故也称果糖胺,代号FTS或FMN.FTS的测定方法有果糖法、糖醛法、葡萄糖苯腙法、硫代巴比土酸法等,这些方法的缺点是可操作性差、步骤繁琐,不能用在全自动生化分析仪上测定.Lin等[1]根据FTS在碱性条件下与硝基氮唑兰(NBT)反应生成紫色化合物的原理,建立了直接测定法.连续监测法测定FTS也是依据此原理和文献[2,3]建立的方法,适用于全自动生化分析仪测定,为判定糖尿病的病情提供了新的依据.
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低密度脂蛋白胆固醇LDL-C直接透射比浊测定法及其应用
血脂的测定是检查动脉硬化的常规项目.美国血脂学会指出LDL-C是动脉硬化的危险因子,当T-CHO超过6.2 mmoL/L并且LDL-C异常时需对患者限制饮食并采取治疗措施.从测定方法上看,多年来一直以选择沉淀法分离LDL-C部分再显色测定,这样不适于全自动生化分析仪测定.近年来有进口LDL-C双试剂引进,但价格昂贵未能普及,多以测定T-CHO,HDL-C和TG以Friedwaid公式推算LDL-C的结果[1,2].我们根据LDL-C和HDL-C的性质选择了表面活性剂,用分散剂控制LDL-C部分,防止产生大颗粒沉淀,使其反应呈溶胶状,在600～630 nm波长下其吸光度与LDL-C含量成正比.制备了LDL-C直接测定法试剂,在各型半自动和全自动生化分析仪上应用,并取得了良好效果.
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低密度脂蛋白胆固醇直接测定法的应用
低密度脂蛋白胆固醇(LDL)是一个重要的冠心病危险因子,是诊断心血管疾病重要意义的血中脂类指标之一.多数实验室应用F公式计算血清中的LDL浓度(LDL=TC-HDL-TG/2.2)[2].这个公式仅仅是一个经验公式,存在着很多缺点难以得到可靠的结果.近年来,广泛应用于自动化分析仪的直接测定法已经实现了实用化.我们就应用直接测定法观察正常人群体检时的LDL,同时与F公式法得到的结果进行了比较.
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不同血清低密度脂蛋白胆固醇公式在老年群体中的应用
目的 探讨在老年群体中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)直接测定法与多种公式计算法及其校正公式计算法和自推导公式结果的可比性.方法 随机抽取老年患者843例,早晨空腹采静脉血,离心取血清进行总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白(Apo)B和LDL-C测试.并分析与计算Friedewald(F)公式、Planella(P)公式、Delong(D)公式、校正F(F′)公式、校正P(P′)公式、校正D(D′)公式和自推导公式(C公式)的相关性,按TG浓度分成3组,分别为0.33～1.70 mmol/L、1.71～4.52 mmol/L和4.53～11.65 mmol/L进行公式法与直接测定法结果比较.结果 根据直接LDL-C浓度范围分为10组,数据基本为正态分布,其浓度主要集中在1.20～4.79 mmol/L,3.00～3.59 mmol/L为构成比高.TG浓度范围从直方图显示数据基本为偏态分布,浓度主要集中在0.90～3.59 mmol/L,1.80～2.69 mmol/L为构成比高,TG浓度<4.52时,其累计百分数达99.76％.直接测定法和公式法血清LDL-C含量的相关性高为C公式,其次为D公式,低为P公式.均数比较F′公式与直接测定法近,其次为F公式,远为P公式.离散度小为P公式,其次为D′公式,大为P′公式.符合率(|差值|≤10％)从大到小分别为C公式>F′公式>D′公式>D公式>F公式>P公式>P′公式.TG在0.33～1.70 mmol/L组符合率从高到低分别为C公式>D′公式>F′公式>F公式>D公式>P公式>P′公式.TG在1.71～4.52 mmol/L组符合率从高到低分别为C公式>D公式>P′公式=F′公式>F公式>D′公式>P公式.TG在4.53～11.65 mmol/L组符合率从高到低分别为D公式>C公式>F公式=F′公式=P′公式>D′公式>P公式.结论 7种公式法中C公式法具有与直接法良好相关性和一致性(r=0.987,符合率=94.54％),其次D公式(r=0.982,符合率=81.73％)与F′公式(r=0.971,符合率=84.58％)均较好.在TG在0.33～4.52 mmol/L范围内C公式、D公式、F′公式、F公式和D′公式都有较好符合率,在TG>4.52 mmol/L范围7种公式法符合率均不理想.因为绝大多数TG浓度<4.52 mmol/L时(累计百分数可达99.76％),也考虑到经济的因素,LDL-C直接法费用比TC、TG、和HDL-C贵,而公式计算则不需要附加费用,因此通常可以采用公式法测定LDL-C.当TG浓度>4.52 mmol/L或监测LDL-C时,应采用直接法为佳,这样取得更经济、实惠、相对准确的LDL-C结果.
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应用脉搏氧饱和度仪测定新生儿血压的研究
新生儿血压测定的方法有直接测定法和间接测定法.前者虽为测定血压的"金标准"但属侵入性技术,且有较多并发症,其临床应用受限.后者属非侵入性方法,多采用电子动脉搏动描计技术或超声多普勒技术.脉搏氧饱和度仪作为一种非侵入性技术广泛用于监测新生儿血氧饱和度,其原理是基于动脉搏动时氧合的血流通过感应探头吸收不同光谱而得出数据.因此有理由认为除了监测血氧饱和度外,可利用其对血流搏动的感应,用于测定血压.在成人已满意地通过分析脉搏氧饱和度的波形来测定血压[1].本研究是了解这一方法在新生儿病人中应用的准确性和可靠性.
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对低密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价--与聚乙烯硫酸沉淀法比较
流行病学和临床研究证实,血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度与动脉粥样硬化(AS),冠心病(CHD)的发病率呈正相关.高LDL-C被认为是CHD的首要致病因素.国内临床实验室多采用中华医学会检验学会推荐的聚乙烯硫酸沉淀法(PVS)[1],但因其需经预先沉淀,不适于自动分析仪使用.国外近年来相继研制开发出几种不同类型的均相测定法[2～4].标本不需沉淀处理,适用于自动分析.
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试剂盒质量对HDL-C测定结果的影响
血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是血脂检验常规项目和流行病学调查的重要项目之一.目前国内已基本普及直接测定法,但卫生部医政司与中华医学会检验分会推荐的磷钨酸一镁沉淀法(PTA)[1,2]在基层医院仍被广泛采用,同时沉淀法也是鉴定直接法商品试剂可靠性对比方法.
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低密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价
目的评价基于选择性水解原理的两种低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的直接测定法(Ⅰ法和Ⅱ法)的精密度、准确度和特异性。方法将这两种方法与聚乙烯硫酸沉淀法(PVS法)作了比较，并以超速离心分离的HDL和LDL组分分析了对LDL-C测定的特异性与准确性。结果高、低两种LDL-C浓度混合血清所测定的结果表明这两种方法均有良好的精密度，总CV值直接测定Ⅰ法3.96%～4.42%，直接测定Ⅱ法0.78%～3.91%，都可达到临床满意的程度。48份临床标本测定结果(±s)分别为3.68±1.23 mmol/L(PVS法)，3.25±1.11 mmol/L(直接测定Ⅰ法)和3.37±1.21 mmol/L(直接测定Ⅱ法)，直接测定法与PVS法测定结果的差异无统计学意义。PVS法(X)与直接测定Ⅰ法(Y)的回归方程为Y=0.848X+0.121(r=0.9427),与直接测定Ⅱ法(Y)的回归方程为Y=0.914X+0.007(r=0.9353)，两种直接测定法与PVS法有良好的相关。对超离心HDL和LDL组分测定的结果表明两种直接测定法对LDL-C有较好的特异性。稀释试验的结果表明两种直接测定法均有良好的线性，线性范围至少可达9.28 mmol/L。结论以选择性水解法直接测定LDL-C具有较好的精密度，对LDL有很好的特异性，适应自动分析，可以真实反映LDL-C的水平，值得在临床推广应用。
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血清LDL-C直接法测定值与间接换算值的偏差
目的 观察直接法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量与其间接换算值的偏差.方法 血脂测定方法按照标准化的要求进行.LDL-C用直接法测定和根据Friedewald公式换算,收集586例被检者血脂水平.结果 在三酰甘油(TG)低于400 mg/dl (4.52 mmo/L)的血样中,直接法测定LDL-C的水平基本高于其间接换算值,偏差的范围为-59 mg/dl(-0.67 mmol/L) ～ +48 mg/dl (0.54 mmol/L),差值的均值为+15.47 mg/dl (0.17 mmol/L)(P＜0.001).结论 LDL-C含量直接测定与间接换算存在偏差,检测LDL-C含量需注意方法的偏差,建议采用统一的方法.
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对国产高密度脂蛋白胆固醇直接法测定试剂的评价
评价国产慈城生化试剂厂生产的HDL-C直接测定法试剂在临床应用的可行性.将慈城直接测定法试剂与葡聚糖(DS 50)-氯化镁沉淀法和磷钨酸(PTA)-氯化镁沉淀法进行比较,并分析其特异性、线性范围、准确度和干扰因素.慈城试剂与DS 50沉淀法相关良好,r＝0.9717、Y＝1.059X-0.057,与PTA法比较,r＝0.9851、Y＝1.0 88X-0.09.在HDL-C浓度为3.34 mmol/L范围内线性良好,r＝0.9992.HDL-C低、中、高值血清标本的批内和批间CV值分别为2.11%、1.19%、1.10%和2.21%、2.1 5%、2.03%.TG浓度＜8 mmol/L、LDL-C＜7.02 mmol/L不干扰HDL-C测定,血红蛋白、胆红素干扰不明显.慈城HDL-C直接法试剂与DS-Mg和PTA-Mg法相关良好,其性能指标符合临床使用要求.
