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1-16 酪醇对肝癌细胞NQ01的诱导及细胞增殖的抑制
目的研究酪醇使肝癌细胞Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQ01)诱导表达和细胞增殖的抑制以及两者之间的关系.方法肝癌细胞SMMC-7721接种后24 h经β-酪醇处理24 h,分别测定酶活性、mRNA表达和细胞增殖情况.NQ01酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQ01比活性(specific activity)=A(NQ01酶活性)/B(细胞数);mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法.结果 NQ01酶活诱导上,酪醇大于60μg/ml时有明显的剂量-效应关系,且每一浓度点(60、70、80、μg/ml)与空白组比较,差异均有显著性(P<0.05),80μg/ml的酪醇与80μnol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P<0.05),且与酶比活存在明显的相关性(r=0.951,P<0.01);酪醇在70~100μg/ml范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加.另外,细胞增殖与酶比活存在负相关(r=-0.410,P<0.01).结论酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQ01在酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关.
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不同检验方法检验阴道念珠菌病的效果比较
目的:探讨不同检验方法检验阴道念珠菌病的效果差异,指导临床选择合理的检查方法.方法:收治阴道炎患者390例,所有患者均采用手工法、凝集法、显色法和CTB染色法进行检验.对不同检验方法的效果进行比较.结果:手工法检出阳性62例,阳性检出率15.9%;凝集法检出238例,阳性检出率61.0%;显色法检出阳性132例,阳性检出率33.8%;CTB染色检出阳性367例,阳性检出率94.1%.CTB染色法检出率高.结论:CTB染色技术具有操作简便、细菌检出率高等优点.
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苯胺蓝结合染色测定脑脊液蛋白质方法的探讨
脑脊液(CSF)蛋白质测定的方法目前常用的有邻苯三酚红钼络合显色法、比浊法及散射浊度法等~([1-2]).但苯胺蓝结合染色测定CSF蛋白质含量的方法,尚未见有报道.苯胺蓝是一种重要的酸性染料,其在酸性条件下与蛋白质结合成复合物并发生显色反应,用于人血清样品中总蛋白的测定,与澳甲酚绿方法一致~([3]).
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雷公藤药材中雷公藤甲素及总二萜内酯的含量测定
目的 建立雷公藤药材中雷公藤甲素及总二萜内酯含量测定的方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:Platisil ODS柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(45∶55)为流动相进行洗脱,于218nnm波长处检测,测定雷公藤甲素的含量;采用Kedde显色法,在550nm波长处测定吸光度,测定总二萜内酯的含量.结果 以高效液相色谱法测定雷公藤甲素,在0.58~46.40μg·mL-1(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为100.52% (n =6);比色法测定雷公藤总二萜内酯(以雷公藤甲素计)在0.49-39.36μg·mL-1(r =0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为93.28%(n=6);雷公藤药材中雷公藤甲素平均含量为4.20μg·g-1,总二萜内酯为86.64μg·g-1.结论 本实验所建立的方法稳定,精密度良好,适合于雷公藤甲素及总二萜内酯的含量测定,可用于雷公藤药材的质量控制.
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循环引物介导原位标记技术在结直肠癌检测中的应用
引物介导的原位DNA标记(PRINS)是分子生物学领域近年来发展的一项新技术,具有方便、特异性强、敏感性高的优点[1-4].然而,我们在实验中发现单纯的PRINS技术对检测样本拷贝数有着较高的要求,尤其是石蜡切片中mRNA拷贝数量很低,阳性信号表达较弱.为提高检测效果,我们采用PRINS与PCR技术相结合的新方法--循环引物介导的原位标记(cycling-PRINS,C-PRINS),生物素连接辣根过氧化物酶标记,DAB显色法,以提高石蜡切片检测mRNA表达的敏感性.
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显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因
目的建立显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因的方法.方法设计4对地高辛标记引物,扩增结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA和ahpC 4个基因部分片段,根据结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)4条耐药相关基因上8个位点的25种单核苷酸多态性设计探针制作芯片,扩增产物与芯片杂交,显色法判断结果;用该法检测46株结核分枝杆菌临床分离株.结果扩增产物琼脂糖电泳可见4条大小分别为165、181、245、315bpDNA条带;结核分枝杆菌菌液浓度为1.6×103/ml时,该法仍可检测到各位点野生及突变信号;19种非结核分枝杆菌标准株和9种非分枝杆菌标准株扩增产物无DNA条带,与芯片杂交亦无信号,H37Rv结核分枝杆菌标准株芯片检测各位点均为野生型;5株结核分枝杆菌临床分离株重复检测5次,结果完全一致;6份PCR产物的测序结果与芯片检测结果完全一致;46株结核分枝杆菌临床分离株中,RFP耐药株28株,芯片检出突变株24株,突变率为85.7%,RFP敏感株18株,芯片检出突变株2株.INH耐药株31株,芯片检出突变株20株,突变率为64.5%,INH敏感株15株,芯片检出突变株4株.结论显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因具有较高的敏感性和特异性,无需特殊仪器设备,有一定的推广应用价值.
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微量显色酵母菌药敏试验方法初步应用
临床酵母菌目前已成为医院感染的主要菌群之一,体外药敏试验对于合理筛选抗真菌药物,发现耐药菌株等有重要意义[1].为此,我们参照文献[2]介绍一种"YeastOne微量稀释显色法酵母菌药敏试验"方法,并以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的"M27-A"方法为参考,对其方法学特点作初步评价.
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显色型亲和层析法检测糖化血红蛋白的建立及性能评估
目的 利用显色型亲和层析技术,建立一种适用于即时检验的人全血HbA1c快速定量检测方法. 方法 采用水溶性蓝色苯硼酸衍生物与HbA1c糖链特异性结合原理,研制显色型亲和层析定量检测试剂盒.选取472例门诊糖尿病患者的全血标本,检测HbA1c水平,同时进行线性、精密度、特异性、稳定性等评价,并与国外试剂进行对比. 结果 该试剂盒线性范围为3%~18%,测量下限为1.0%.批内和批间CV均<10%,偏倚可接受(P>0.05).葡萄糖、糖化白蛋白、果糖胺等常见干扰物对HbA1c定量无明显影响.试剂保存8个月内相对偏差控制在±10%以内.与Bio-Rad HbA1c试剂盒平行检测472例临床标本,相关性良好(Y=0.180+1.006X,P<0.01),定量偏差无统计学意义(Z=-1.6,P>0.05). 结论 本研究建立了HbA1c显色型亲和层析快速定量检测方法,各项指标均达到临床检测的要求,可用于全血HbA1c含量的床旁快速检测.
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显色法鉴别念珠菌属阴道感染与带菌状态探讨
念珠菌性阴道炎是妇女的常见病之一,常见的病原菌为白色念珠菌和其他念珠菌.目前白带常规涂片只能作念珠菌的孢子、菌丝定性检测.用酚-次氯酸钠显色法鉴别念珠菌属阴道感染与带菌状态,现将试验结果报道如下.
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老年念珠菌尿液检验结果临床分析
目的 探讨适合老年念珠菌尿液检验的方法.方法 采用显色法和凝集法对我院自2010年8月-2011年6月间收治的137例老年患者的尿液中的念珠菌进行检测.结果 观察组70例老年念珠菌患者的尿液样本中的检出率为67.14%,对照组67例老年念珠菌患者的尿液样本中的检出率为37.31%,两组结果差异有统计学意义(P<0.05).而在观察组检出的阳性样本中,以白色念珠菌为主.讨论相对于显色法,采用凝集法对老年念珠菌患者的尿液进行检测更为详细可靠,但两种方法均存在其局限性.
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红霉素片三种溶出度测定方法结果的比较
红霉素片是一种常用的大环内脂类抗生素.目前测定其溶出度的常用方法有三种:占吨氢醇法、硫酸显色法-中国药典95版方法、氢氧化钠法-美国药典23版方法.现将以上三种定量测定方法进行比较,供药检工作参考.
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不同引物标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中应用比较
目的 比较不同标记物在显色法芯片检测结核分支杆菌利福平和异烟肼耐药基因中的影响.方法 分别采用地高辛、荧光素和生物素标记引物,建立地高辛-抗地高辛、荧光素-抗荧光素和生物素-亲和素酶呈色法芯片检测结核分支杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药基因方法,同时用3种方法检测46株结核分支杆菌临床分离株、19种非结核分支杆菌标准株、9种非分支杆菌标准株和结核分支杆菌H37Rv标准株,并对3种方法的敏感性和重复性进行比较.结果 经3种方法平行检测,46例结核分支杆菌临床分离株结果完全一致;19种非结核分支杆菌标准株、9种非分支杆菌标准株结果均为阴性,结核分支杆菌H37Rv标准株结果均为野生型;地高辛系统和荧光素系统敏感度为2.0×103拷贝/ml,生物素-亲和素系统敏感度为2.0 ×104拷贝/ml;3种方法均有良好的重复性.结论 3种方法均具有良好的重复性和特异性,生物素系统敏感度略低于地高辛系统和荧光素系统.
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芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因实验条件优化研究
目的 优化研究芯片显色法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的佳条件.方法 自制DNA芯片,每条寡核苷酸探针片段长度为19 bp,点样浓度在15 μmol/L,以痰液为待检标本,分别用不同引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度等进行多重聚合酶链反应;分别在不同时间、温度下进行杂交,分别在不同酶作用时间和显色时间进行分析,比较不同条件芯片检测结果.结果 引物、Mg2+、核苷酸、DNA聚合酶浓度分别为0.2 μmol/L、1 mmol/L、0.2 mmol/L、5 U效果好,杂交时间和杂交温度分别为0.5 h、60 ℃信号强,酶作用时间和显色时间均为0.5 h时得到佳结果.结论 在佳条件下,该技术的重复性、特异性、灵敏度与可靠性均较好,适合基层医院推广应用.
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实验诊断学讲座(15)
13脂类、脂蛋白和载脂蛋白的测定13.1血清总胆固醇(TC,total cholesterol)13.1.1正常生理参考值酶法:3.1~5.7 mmol/L(119.9~220.4 mg/dl);醋酐硫酸单一试剂显色法:2.61~5.87 mmol/L(101.0~227.0 mg/dl).有些单位已将其上限提高至7.76 mmol/L(300 mg/dl).
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尿蛋白质定量检验
1 尿总蛋白质 1.1方法及参考值①双缩脲法;②邻苯三酚钼络合显色法.40~80(20~120)mg/d.1.2临床意义 1.2.1由于肾小球滤过膜分子筛和负电荷屏障作用以及肾小管重吸收作用,正常尿只有极微量血浆白蛋白和微量肾组织糖蛋白、分泌型IgA.尿蛋白排泌超过150 mg/24 h即为蛋白尿.主要用于肾脏疾病诊断和疗效评价.
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Sysmex CA-7000全自动血液凝固分析仪常见错误信息及排除方法
0 引言CA-7000是一台用于体外诊断的全自动凝血分析仪,能快速并且高精度地分析大量样本.分析方法涵盖了凝固法、显色法及免疫法,分析数据可以保留为存储数据,还可以显示并打印出来.该仪器还有众多内置的功能,包括通过条码来自动设置试剂、STAT样本及质控分析的优先处理.由于众多功能的存在,外加操作人员不可避免的操作误差,应用近来出现了不少故障,以下总结了一些错误信息及其排除方法,仅供同仁参考.
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TRAP银染显色法检测常见肿瘤组织端粒酶活性
端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构,人体端粒DNA是六个核苷酸序列(TTAGGG)n组成[1].端粒酶是由RNA和蛋白质组成的核糖核酸蛋白酶,它能以端粒的3'端为引物,以其RNA组份为模板,蛋白质组份具催化活性,反转录合成延伸端粒重复序列[2,3].为探讨端粒酶在临床常见肿瘤中的作用,我们应用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测端粒酶活性,现将结果报告如下.
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不同样本处理方法对显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的影响
目的:选择一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,用于显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药基因.方法:选择3份含结核分枝杆菌分别为4.325×103、6.857×104、5.356×105 Copies/ml的痰液,分别用Chelex 100树脂法、煮沸法、蛋白酶K消化-异丙醇沉淀法、蛋白酶K消化-酚/氯仿抽提法、碱裂解法、异硫氰酸胍裂解法、盐酸胍裂解法、离心柱法抽提结核分枝杆菌DNA作多重聚合酶链反应,显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因.结果:离心柱法检测结果阳性,其余方法检测结果均为阴性,离心柱法检测灵敏度为2.743×103 Copies/ml.结论:离心柱法是一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,可用于显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因.
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氨基酸分析仪法测定金属硫蛋白
金属硫蛋白(Metallothionein,MT),的化学名称为金属硫组氨酸三甲基内盐,是一类普遍存在于生物体内的低分子量(6-7 kDa)、富含半胱氨酸、热稳定性、可诱导型非酶蛋白[1]它具有重金属解毒、参与必需金属元素的储存、运输和代谢、清除自由基等多种生物功能.金属硫蛋白含量测定方法文献报道有金属结合法[2]、电化学法[3]、免疫法[4]、蛋白质印迹分析法[5]、巯基显色法等.本文建立了氨基酸分析仪法测定金属硫蛋白含量的方法,此方法结果准确可靠、灵敏度高、重现性好.
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人凝血因子Ⅷ活性生物检定统计法(显色法)的建立
目的 依据《欧洲药典》8.0版规定的生物统计检定法原理,建立检测人凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性的显色法.方法 采用斜率比模型中随机区组设计显色法实验,进行数据统计分析及结果计算.以FⅧ国际标准品及FⅧ原液、成品为测试样品,确定其线性范围,并验证其重复性、中间精密度、专属性;用《中国药典》三部(2010版)规定的一期法和建立的方法进行比较.结果 当FⅧ效价在0~ 17.85 IU/L范围内时,标准品和样品的线性相关系数(r)均大于0.99;重复性相对标准偏差(RSD)为2.1%;2位实验人员测定结果经t检验,差异无统计学意义(P>0.05);该方法置信限范围为80%~120%.两种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05).结论 该方法操作简便、快速,测定结果稳定、准确,检测水平符合《欧洲药典》要求,可用于FⅧ活性检测.