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160六价铬诱导P53蛋白活化的机制
本研究探讨了Cr(Ⅵ)诱导P53活化的机制.培养人肺上皮细胞系A549并进行传代.取3×105A549细胞转入一个6孔平皿,于37℃下温孵24h,立即转染1μg报告质粒和1μg β-半乳糖苷酶(β-Gal)质粒,温孵过夜后冲洗,加入含10%FBS的F-12K培养基,再培养24h后加入5、10、20、50和100μmol/L的Cr(Ⅵ)溶液处理(未经处理的为对照),然后加入400μl报道溶解缓冲液,在4℃下抽提细胞2h;取80μl细胞溶解产物测量虫荧光素酶和β-Gal活性,结果以β-Gal标化的相对P53活性(与对照相比)来表示.另取经Cr处理后的A549细胞,抽提细胞经声处理断裂DNA和减少粘度,然后取20μl全细胞溶解产物加热、离心,进行蛋白印迹分析(Westernblot).取细胞溶解产物、20μlRecin/TNT(1:10)和10μg抗体在4℃下温孵过夜并离心,取上清进行Western blot反应.
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逆转录聚合酶链反应在轮状病毒肠炎诊断中的应用研究
1.材料与方法:150份粪便标本于1999年11月至2000年2月取自本院住院的急性腹泻患儿.150例患儿年龄为40天龄~2岁;病程1~14天.收集每例腹泻患儿的新鲜粪便标本2份,1份立即进行乳胶凝集试验,1份置于-20℃冰箱待行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.RT-PCR参照Taniguchi等[1]的方法抽提RNA并做HRV RT-PCR反应,引物由上海生工合成.
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透刺滞针抽提术治疗顽固性面瘫眼睑闭合不全37例
从2001年起,我科采用眼周腧穴毫针透刺并行滞针抽提术对顽固性面瘫眼睑闭合不全患者进行临床疗效观察,现总结如下.
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石蜡包埋组织DNA的快速提取技术
方法提取石蜡包埋组织DNA,步骤繁琐耗时.本实验室以PCR方法检测结核菌为例,摸索出一种不经过脱蜡及酚-氯仿抽提,直接提取石蜡包埋组织DNA简捷而快速的方法.
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戊型肝炎患者血清戊型肝炎病毒RNA的动态观察及意义
目前,国内外对戊型肝炎(HE)患者病毒血症已有研究,各家报道有明显不同,我们采用逆转录-聚合酶链反应方法检测32例HE患者系列血清,探明HE患者病毒血症持续时间和消长规律。 检测对象为中国医大二院传染科1995年1月至1996年10月期间住院患者32例,临床诊断为戊型肝炎。分别收集患者病后0~7 d、8~14 d、15~12 d、22~28d系列血清共125份,用异硫氰酸胍一步法抽提HEV RNA。引入一对外引物序列为:外正向引物(4459-4478)5'- GCATTATGGA GGAGTGT GG-3',外反向引物 (4877-4858)5'- CCAGG GCCC-CAATTCTTG-3',一对内引物序列为:内正向引物(4522--4539)5'-GCGTG-GATCTTGCAGGCC-3',内反向引物(4741-4760)5'-TTCAACTTCAA GCCACA GCC-3',进行2次PCR扩增。
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1例注射甲肝疫苗致过敏性休克的抢救体会
甲肝疫苗为甲型肝炎病毒减毒株接种于人二倍体细胞,培养后,经抽提和纯化,溶于含氨基酸的盐平衡溶液,用于预防甲型病毒性肝炎.我市自1993年以来注射甲肝疫苗14.5万余次,未出现过敏反应.今将1例因注射甲肝疫苗而致过敏性休克报道如下.
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提取大鼠胰腺组织总RNA方法探讨
检测胰腺组织mRNA的表达已经成为研究胰腺疾病的重要手段,但由于胰腺组织富含RNase,抽提胰腺总RNA是分子生物学实验的难点之一.
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人膀胱移行细胞癌细胞系PUMC-91细胞HPV-18感染
为探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV-16/18)与膀胱癌的关系,我们对膀胱移行细胞癌细胞系PUMC-91中的HPV感染情况进行了研究,报告如下。 材料和方法细胞培养:人膀胱移行细胞癌PUMC-91细胞系及宫颈癌HeLa细胞系37 ℃闭式培养于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中。DA的提取:传代培养收集1×106~1×107细胞,常规酚-氯仿抽提DNA,测量吸光度A值,贮存于-2 0 ℃。
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应用全血直接PCR酶切法快速诊断儿童脊肌萎缩症
2003年5月-2004年11月,我们采用改进的无须DNA抽提的全血直接PCR-酶切法,成功地建立了一种更为简单、快速、准确的进行性脊髓性肌肉萎缩症(简称脊肌萎缩症,SMA)分子诊断方法,并将其应用于临床.报道如下.
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醋酸法提取胆红素的工艺研究
本文采用正交试验设计的方法,对猪胆汁钙盐法生产胆红素的工艺进行了研究,使胆红素的收率比原生产工艺增加了约0.015%.本文的工艺方法省去了乙醇沉降过程,节约了原辅材料,缩短了工时,且胆红素含量比较稳定.
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测定大黄蒽醌类成分样品制备方法的研究
大黄中含有多种化学成分,其中以蒽醌衍生物能代表大黄的泻下、抑菌、止血等作用.此类成分测定方法,本文参考文献[1,2],对用氯仿回流提取游离型蒽醌和用硫酸水解蒽苷氯仿抽提的方法进行了研究.
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菌体中大量抽提质粒DNA方法的改进
目的建立简便、快捷的大量制备质粒的实验方法.方法以文献报道方法为依据,将传统的质粒小量抽提的实验方法与大量抽提的实验方法有机结合,以琼脂糖凝胶电泳的方法证明了使用改进后方法的可行性.结果使用该法可以一次大量地制备质粒DNA (690±219) μg,提取效力为(1.4±0.4) μg/ml菌液,并可直接用于酶切.结论改进后的实验方法更加简便、快捷、高效,为分子生物研究中质粒的大量制备提供了更加实用的实验方法.
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不同样本处理方法对显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的影响
目的:选择一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,用于显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药基因.方法:选择3份含结核分枝杆菌分别为4.325×103、6.857×104、5.356×105 Copies/ml的痰液,分别用Chelex 100树脂法、煮沸法、蛋白酶K消化-异丙醇沉淀法、蛋白酶K消化-酚/氯仿抽提法、碱裂解法、异硫氰酸胍裂解法、盐酸胍裂解法、离心柱法抽提结核分枝杆菌DNA作多重聚合酶链反应,显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因.结果:离心柱法检测结果阳性,其余方法检测结果均为阴性,离心柱法检测灵敏度为2.743×103 Copies/ml.结论:离心柱法是一种较为理想的从痰标本中直接抽提结核分枝杆菌DNA的方法,可用于显色法芯片检测结核分枝杆菌RFP和INH耐药基因.
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高效快速提取股骨头中总RNA的方法
背景:从骨组织中有效提取总RNA是进行骨科相关实验的基础,目前所知方法的提取效果不理想.目的:探寻一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法.方法:取健康大耳白兔股骨头迅速置于用液氮预冷过的研钵中,液氮中反复研磨至粉末状,再将其移至预冷的匀浆器内,加入Trizol,充分匀浆后4 ℃离心,取上清,加入氯仿离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA.另取兔股骨头,按传统方法取材后保存,无匀浆过程,传统Trizol法提取总RNA作为对照.紫外分光光度计测定RNA样品浓度、纯度及产率.甲醛变性胶电泳观察RNA的28 S,18 S条带是否清晰,有无降解和DNA污染.结果与结论:实验方法提取的总RNA浓度在0.80~0.90 g/L,A260/A280在1.90~2.00之间,A260/A230在1.4~1.6之间,明显高于传统方法提取的RNA各指标,说明实验方法提取的总RNA纯度高,无DNA、蛋白质污染.甲醛变性胶电泳可清晰显示28 S,18 S两条带,大体观察其比例大约为1∶1,证实RNA提取完整,没有降解.由此可见,实验方法提取的骨组织总RNA质量高,提取方法方便、快捷,可用于骨组织分子生物学研究.
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改进抽提工艺后冻干甲型肝炎减毒活疫苗的稳定性
目的 评价改进抽提工艺制备的冻干甲型肝炎减毒活疫苗的稳定性.方法 采用改进抽提工艺及原抽提工艺分别制备3批冻干甲型肝炎减毒活疫苗,将疫苗于(5±3)和(25±2)℃放置不同时间,对疫苗的外观、水分、滴度及pH等指标进行检定.结果 两组疫苗在(5±3)和(25±2)℃保存不同时间后,外观均为白色疏松体,复溶后无异物;水分、滴度及pH差异均无统计学意义(P>0.05).结论 改进抽提工艺对该疫苗的稳定性无影响.
关键词: 冻干甲型肝炎减毒活疫苗 抽提 稳定性 -
毫针滞针抽提术治疗顽固性网球肘78例
1 临床资料1.1 一般资料 本组78例中,男27例,女41例;发病年龄25~66岁,平均47岁.职业以手工作业工人、打字员、会计、运动员居多.左侧29例,右侧49例.本组病人网球肘症状较重,反复发作,持续1年以上,行保守治疗和局封效果不佳.
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化学键振动共振杀菌抗病毒机理(Ⅵ)——论含多羟基结构的中药可抽提为抗菌药物
笔者自2004年开始,首创提出"化学键振动共振杀菌抗病毒机理[1],认为药物成分中化学键振动的波长刚好等于某种细菌长度范围时发生共振,遭到共振的细菌或病毒立即被杀灭,夺取其生命."并已发表论文5篇[1~5],大量引证了含有多羟基结构的中药有不同抗菌性能的药理记载,并认为药物中化学成分含有3个以上羟基(-OH)结构的,都有很广的抗菌谱.本论点能对抗菌药物的选择性问题(即为什么该种药物对某些细菌起杀灭作用而对另一些细菌没有抗菌作用)能作出直接肯定的解析,主要原因是共振,是长期以来传统药理所无法理解的抗菌机理.
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改进萃取方法提高青霉素中间体的质量和效价
目的:改进萃取方法,提高青霉素的质量和效价.方法:增加水洗设备,用抽提罐代替泡罩机.结果:改进后,中间体的质量和效价大幅度提高.结论:改进后中间体的质量优于改进前,实现了高单位的中间体.
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从滤纸血斑中抽提恶性疟原虫DNA进行长片段PCR扩增
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差异显示PCR分析高脂饮食诱导的肥胖大鼠脂肪组织的基因表达谱
本实验采用高脂饮食饲养SD大鼠,建立肥胖大鼠模型,用差异显示PCR(DD-PCR)方法比较高脂饲料组大鼠与普通饲料组大鼠脂肪组织中基因表达的差异,力求发现受饮食调控的基因,探讨高脂饮食致肥胖的分子机制.一、材料和方法1.动物模型与标本采集:20只SD大鼠分为高脂饲料组和普通饲料组.动物饲养16周.2.脂肪组织总RNA的抽提及处理:(1)脂肪组织总RNA的抽提:取1 g大网膜脂肪组织按照Trizol总RNA抽提试剂盒说明书进行.(2)总RNA的处理:用不含RNA酶的DNA酶处理抽提的总RNA以去除含有的少量基因组DNA.