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酵母转化大黄结合型蒽醌研究
目的：从酵母菌中筛选出能将中药大黄结合型蒽醌转化为游离型蒽醌的菌株，为减轻生大黄的峻烈泻下作用提供一种选择。方法：通过考察培养基组分、种龄、发酵时间和装液量等因素对菌株转化中药大黄结合型蒽醌的影响。结果：筛选到菌株KM12，经26S rRNA分子鉴定为马克思科鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）。薄层层析表明，在酵母膏1.0%、葡萄糖2.0%、大黄2.0%的培养基中，按5%的接种量接种，培养36~48 h种子液到装有50 mL发酵培养基的250 mL三角瓶中，200 rpm摇床30℃发酵4 d，可将中药大黄中具有峻烈泻下作用的结合型蒽醌大部分解或转化成游离型蒽醌。结论：可通过KM12菌株发酵法炮制大黄，使结合型蒽醌分解或者转化成游离型蒽醌，减轻大黄的峻烈泻下作用。
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HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素等11种成分的量
目的 建立HPLC法同时测定大黄中5种游离型葸醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)、4种结合型葸醌(芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷和大黄素-8-O-葡萄糖苷)及没食子酸、儿茶素共计1 1种成分的定量方法.方法 采用Symmetry C18色谱柱,流动相为甲醇-0.1％磷酸水梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm.结果 没食子酸、儿茶素、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在0.062 4～1.560 0、0.180 0～4.500 0、0.041 2～1.030 0、0.030 6～0.765 0、0.051 0～1.275 0、0.028 8～0.720 0、0.019 8～0.495 0、0.050 5～1.262 5、0.063 7～1.592 5、0.098 0～2.450 0和0.163 0～4.075 0 μg进样量与峰面积积分值线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率为95.37％～98.93％,RSD＜2.36％.结论 该法简便、准确、专属性强,可用于大黄中11种成分的测定.
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"大承气汤"颗粒质量标准的研究
对"大承气汤"颗粒进行了定性定量研究.通过薄层色谱法鉴别大黄、厚朴、枳实;反相高效液相色谱法测定方中君药大黄游离型蒽醌和总蒽醌的含量,采用ODS(3)5 μm色谱柱,4.6 mm×250 mm,流动相:甲醇-1%高氯酸水溶液(85∶15),流速为1.0 mL/min,检测波长:254 nm;测定回收率:游离型蒽醌以大黄素、大黄酚为指标,回收率为101.97%,RSD=3.44%,总蒽醌以大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为指标,回收率为98.99%,RSD=1.53%.测定结果:3 批样品的平均含量,游离型蒽醌为0.030 3 mg/g,总蒽醌为13.614 mg/g.
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测定大黄蒽醌类成分样品制备方法的研究
大黄中含有多种化学成分,其中以蒽醌衍生物能代表大黄的泻下、抑菌、止血等作用.此类成分测定方法,本文参考文献[1,2],对用氯仿回流提取游离型蒽醌和用硫酸水解蒽苷氯仿抽提的方法进行了研究.
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正交试验法优选大黄中蒽醌类成分提取工艺
目的 优化大黄中蒽醌类成分提取工艺.方法 HPLC法测定大黄药材中8个结合型蒽醌、5个游离型蒽醌共计13个原型蒽醌及总蒽醌质量分数,选用L9(34)正交表,以乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素,分别以总蒽醌、5个游离型蒽醌、8个结合型蒽醌提取率为考察指标,优化大黄总蒽醌、游离型蒽醌、结合型蒽醌提取工艺参数,并对优化的工艺进行放大验证试验.结果 总蒽醌和游离型蒽醌佳提取工艺为5倍量75％乙醇,回流提取5次,每次30 min,采用该工艺原型蒽醌类成分和总蒽醌提取率均在90％左右,游离型蒽醌提取率超过160％;结合型蒽醌佳提取工艺为5倍量95％乙醇,回流提取3次,每次60 min,采用该工艺原型蒽醌类成分提取率接近90％,结合型蒽醌提取率超过80％.结论 优化的工艺简单、稳定、可行,重复性好,可分别用于大黄中总蒽醌和游离型蒽醌、结合型蒽醌的提取.
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不同方法炮制的大黄中总蒽醌含量比较
中药经不同辅料、不同方法炮制后,在性味、功效、作用趋向、归经和毒副作用方面都会发生某些变化,从而大限度的发挥疗效.本文运用HPLC法测定了不同炮制方法的大黄中蒽醌的含量[1-2].实验表明,经不同方法炮制的大黄,游离蒽醌、结合蒽醌含量变化有差异:酒炙大黄结合性葸醌有所减少,大黄素、大黄素甲醚等游离葸醌总量几乎没有影响;炒大黄:葸醌减少约50%,结合性葸醌转化成为游离蒽醌增多;醋炙大黄:总蒽醌、结合型葸醌含量较生品明显下降,游离型蒽醌含量有所增加;炭炒大黄炭:结合葸醌含量极少,大黄酸含量增加,以上内容为揭示大黄不同炮制品的科学内涵提供实验依据.
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陕产大黄结合型蒽醌转化游离型蒽醌的发酵条件优化
目的:利用正交试验优选大黄结合型蒽醌转化为游离型蒽醌的发酵条件.方法:以大黄中游离型蒽醌的转化率为指标,以发酵时间,发酵温度,摇床转速,装液量为考察因素,正交试验选择较优发酵条件.结果:当发酵温度为35℃,发酵时间为7d,装液量50 mL,摇床转速为140 r/min时,游离型蒽醌的转化率可达到42.369％.结论:酵母菌发酵能够使大黄中的结合型蒽醌有效地转化为游离型蒽醌,从而降低大黄的峻泻作用.
