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酵母转化大黄结合型蒽醌研究
目的：从酵母菌中筛选出能将中药大黄结合型蒽醌转化为游离型蒽醌的菌株，为减轻生大黄的峻烈泻下作用提供一种选择。方法：通过考察培养基组分、种龄、发酵时间和装液量等因素对菌株转化中药大黄结合型蒽醌的影响。结果：筛选到菌株KM12，经26S rRNA分子鉴定为马克思科鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）。薄层层析表明，在酵母膏1.0%、葡萄糖2.0%、大黄2.0%的培养基中，按5%的接种量接种，培养36~48 h种子液到装有50 mL发酵培养基的250 mL三角瓶中，200 rpm摇床30℃发酵4 d，可将中药大黄中具有峻烈泻下作用的结合型蒽醌大部分解或转化成游离型蒽醌。结论：可通过KM12菌株发酵法炮制大黄，使结合型蒽醌分解或者转化成游离型蒽醌，减轻大黄的峻烈泻下作用。
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大黄结合型蒽醌含药血清指纹图谱研究
目的 采用血清药物化学研究方法建立大黄结合型蒽醌含药血清指纹图谱,并分析其中的药源性成分.方法 大鼠灌胃大黄结合型蒽醌提取物制备含药血清,HPLC测定10批含药血清指纹图谱,建立指纹图谱共有模式,与空白血清指纹图谱比较,标定含药血清中药源性成分共有峰,与结合型蒽醌提取物指纹图谱色谱峰保留时间和光谱图比对,对共有峰进行归属分析,与混合对照品指纹图谱色谱峰保留时间和光谱图比对,对部分成分进行鉴定.结果 10批含药血清指纹图谱标定药源性成分共有峰20个,其中14个为体外原型成分,6个为体内代谢产物,14个原型成分中的13个分别被鉴别为芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚,其余1个原型成分和6个代谢产物也具有蒽醌类成分的紫外吸收特征.结论 本实验建立的方法准确、可行,可用于大黄结合型蒽醌含药血清中的药源性成分分析.
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大孔吸附树脂法纯化大黄中结合型蒽醌总提取物的研究
大黄为常用中药,主要成分为蒽醌类、二苯乙烯苷类、色酮类及鞣质等化合物.结合型蒽醌类成分水溶性大,通常认为是利胆和泻下的主要成分,而大黄酚、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌苷元几乎无泻下活性.传统提取工艺复杂,且提取物杂质含量较高,特别是制备注射剂时蒽醌苷元及鞣质类成分常常对溶液的澄明度产生较大的影响.我们以大孔吸附树脂柱色谱法分离大黄中结合型蒽醌提取物,采用比色法考察总提取物中结合型蒽醌的含量,为大黄提取物的纯化与精制生产工艺作一新的尝试.
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一种提高大黄饮片中结合型蒽醌的原药材炮制方法研究
[目的]建立一种提高大黄饮片中结合型蒽醌原药材的炮制方法。[方法]将大黄原药材置密闭蒸锅内，采用隔水蒸方式将大黄蒸透，进行切片，同时应用高效液相色谱（HPLC）法对饮片中蒽醌类成分进行测定比较。[结果]大黄炮制的饮片中总蒽醌含量与传统炮制的饮片基本一致，结合型蒽醌含量显著高于传统炮制饮片。[结论]提高大黄饮片中结合型蒽醌的原药材炮制方法生产周期短，节约成本，适宜大生产，可作为其炮制方法之一。
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HPLC法同时测定大黄中芦荟大黄素等11种成分的量
目的 建立HPLC法同时测定大黄中5种游离型葸醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)、4种结合型葸醌(芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷和大黄素-8-O-葡萄糖苷)及没食子酸、儿茶素共计1 1种成分的定量方法.方法 采用Symmetry C18色谱柱,流动相为甲醇-0.1％磷酸水梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm.结果 没食子酸、儿茶素、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在0.062 4～1.560 0、0.180 0～4.500 0、0.041 2～1.030 0、0.030 6～0.765 0、0.051 0～1.275 0、0.028 8～0.720 0、0.019 8～0.495 0、0.050 5～1.262 5、0.063 7～1.592 5、0.098 0～2.450 0和0.163 0～4.075 0 μg进样量与峰面积积分值线性关系良好(r≥0.999 5),平均加样回收率为95.37％～98.93％,RSD＜2.36％.结论 该法简便、准确、专属性强,可用于大黄中11种成分的测定.
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正交试验法优选大黄中蒽醌类成分提取工艺
目的 优化大黄中蒽醌类成分提取工艺.方法 HPLC法测定大黄药材中8个结合型蒽醌、5个游离型蒽醌共计13个原型蒽醌及总蒽醌质量分数,选用L9(34)正交表,以乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素,分别以总蒽醌、5个游离型蒽醌、8个结合型蒽醌提取率为考察指标,优化大黄总蒽醌、游离型蒽醌、结合型蒽醌提取工艺参数,并对优化的工艺进行放大验证试验.结果 总蒽醌和游离型蒽醌佳提取工艺为5倍量75％乙醇,回流提取5次,每次30 min,采用该工艺原型蒽醌类成分和总蒽醌提取率均在90％左右,游离型蒽醌提取率超过160％;结合型蒽醌佳提取工艺为5倍量95％乙醇,回流提取3次,每次60 min,采用该工艺原型蒽醌类成分提取率接近90％,结合型蒽醌提取率超过80％.结论 优化的工艺简单、稳定、可行,重复性好,可分别用于大黄中总蒽醌和游离型蒽醌、结合型蒽醌的提取.
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HPLC法测定灌胃虎杖提取物大鼠粪便及尿液中大黄素和大黄素甲醚
蒽醌类化合物具有消炎、抗菌、致泻、利尿以及抗肿瘤、抗病毒等作用,是大黄、虎杖、何首乌、决明子等中药的主要活性成分.蒽醌类化合物有游离型和结合型两种存在形式.结合型蒽醌不吸收,在肠道内被细菌代谢后产生泻下作用[1],因此结合型蒽醌在肠道内的吸收、代谢与其药动学有关.已有的药动学研究均为测定血清或血浆中的蒽醌类成分[2,3],由于代谢物中成分复杂,干扰较多,因此本实验建立了测定大鼠灌胃虎杖提取物后的粪便和尿液中的游离型和结合型大黄素总量的非水反相液相色谱法.
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不同方法炮制的大黄中总蒽醌含量比较
中药经不同辅料、不同方法炮制后,在性味、功效、作用趋向、归经和毒副作用方面都会发生某些变化,从而大限度的发挥疗效.本文运用HPLC法测定了不同炮制方法的大黄中蒽醌的含量[1-2].实验表明,经不同方法炮制的大黄,游离蒽醌、结合蒽醌含量变化有差异:酒炙大黄结合性葸醌有所减少,大黄素、大黄素甲醚等游离葸醌总量几乎没有影响;炒大黄:葸醌减少约50%,结合性葸醌转化成为游离蒽醌增多;醋炙大黄:总蒽醌、结合型葸醌含量较生品明显下降,游离型蒽醌含量有所增加;炭炒大黄炭:结合葸醌含量极少,大黄酸含量增加,以上内容为揭示大黄不同炮制品的科学内涵提供实验依据.
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润肠通乐丸中何首乌的提取工艺研究
目的 研究润肠通乐丸中何首乌的佳提取工艺.方法 采用正交试验设计,以乙醇浓度、溶剂用量、提取时间、提取次数为考察因素,以结合型蒽醌含量和80％乙醇浸出物为指标优选佳提取工艺.结果 佳工艺为8倍量60％乙醇回流提取3次,每次1.5h.结论 该工艺合理,稳定,可行,适合于润肠通乐丸中何首乌的提取.
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大黄不同煎煮时间对小承气汤中结合型蒽醌含量的影响
目的:探讨大黄不同煎煮时间对小承气汤中结合型蒽醌含量的影响,以确定大黄的佳煎煮时间.方法:采用高效液相色谱法对大黄不同煎煮时间的小承气汤中结合型蒽醌的含量进行测定.色谱柱:WatersX Bridge C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相:甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)；流速:1 ml/min;检测波长:254 nm;柱温:25℃.结果:小承气汤中结合型蒽醌在大黄煎煮30分钟时含量高.结论:小承气汤中大黄的佳煎煮时间为30分钟.
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何首乌蒸制后结合型蒽醌含量与泻下作用相关性研究
目的 探讨何首乌高温清蒸后泻下成分与泻下作用的关系,为制订制何首鸟的质量标准提供依据.方法 用紫外分光光度法测定何首乌中两种饮片规格(块0.8～1 cm,厚片2～4 mm)蒸制过程中的结合型蒽醌含量,观察小鼠服用两种规格制何首鸟饮片的泻下作用.结果 何首乌块(0.8～1 cm)清蒸6 h无泻下作用,结合型蒽醌含量为2.09 mg/g;何首乌厚片(2～4 mm)清蒸4 h无泻下作用,结合型蒽醌含量为2.0 mg/g.结论 何首鸟高压蒸制后无泻下作用,结合型蒽醌含量明显降低,可考虑将结合型蒽醌含量作为制何首乌的限定指标.
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陕产大黄结合型蒽醌转化游离型蒽醌的发酵条件优化
目的:利用正交试验优选大黄结合型蒽醌转化为游离型蒽醌的发酵条件.方法:以大黄中游离型蒽醌的转化率为指标,以发酵时间,发酵温度,摇床转速,装液量为考察因素,正交试验选择较优发酵条件.结果:当发酵温度为35℃,发酵时间为7d,装液量50 mL,摇床转速为140 r/min时,游离型蒽醌的转化率可达到42.369％.结论:酵母菌发酵能够使大黄中的结合型蒽醌有效地转化为游离型蒽醌,从而降低大黄的峻泻作用.
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动物腹泻模型的实验方法概述
笔者对近年来有关动物腹泻模型的实验方法进行归纳总结，将动物腹泻模型根据致泻原因分为药物型、感染型、应激型、抗生素型和过敏型腹泻［1］，以期为开展与腹泻／泄泻相关的研究提供参考。
1药物型腹泻模型1．1番泻叶番泻叶中大部分结合型蒽醌不经小肠吸收，直接进入大肠，在肠内多种细菌（酶）作用下经水解、还原等不同途径代谢成为大黄酸蒽酮及其衍生物，这些成分一方面可阻止葡萄糖和 Na＋的跨肠壁转运，抑制Na＋-K＋-A T P酶活性，增加肠腔内容积继而刺激肠壁反射性地使小肠和结肠蠕动增强；另一方面刺激肠粘膜释放前列腺素（PG ），在保护肠粘膜的同时，炎性介质导致肠上皮细胞通透性增加等引发腹泻。另外番泻苷可经胃、小肠吸收后，在肝中分解，分解产物经血行而兴奋骨盘神经节以收缩大肠引起腹泻［2］。
