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芦荟中蒽醌类化合物的测定及药理作用
应用双波长标准加入分光光度法同时测定芦荟中蒽醌类化合物芦荟大黄素甙和芦荟大黄素的含量.根据两种物质的吸收光谱,选择芦荟大黄素甙为标准加入组份,在芦荟大黄素的等吸收波长361.4nm和480.9nm处进行标准加入测定.芦荟大黄素甙和芦荟大黄素浓度在0-1×104mol/L范围内均符合比尔定律.对库拉索芦荟中芦荟大黄素甙和芦荟大黄素含量测定的相对标准偏差(n=6)＜2%.
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HPLC法测定保健食品中蒽醌类成分的含量
目的 建立测定保健食品中大黄酸、芦荟大黄素、1,8-二羟基蒽醌、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的高效液相色谱法.方法 使用Symmetry@C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以甲醇+0.1%磷酸水溶液(80+20)为流动相,检测波长为254 nm.结果 大黄酸、芦荟大黄素、1,8-二羟基蒽醌、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚在0.014～0.280、0.014～0.280、0.0126～0.0252、0.0156～0.104、0.025～0.500和0.025～0.500μg/ml浓度范围内具有良好线性关系;平均加标回收率分别为91.5%、90.2%、85.3%、105.3%、87.7%和102.1%;相对标准偏差分别为6.21%、5.82%、7.11%、8.50%、7.35%和9.42%.结论 该方法简便、准确,有良好的重现性,技术参数指标符合食品理化分析的要求,可用于蒽醌类保健食品的质量控制.
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渴络欣胶囊的血清药物化学研究
目的：研究渴络欣胶囊吸收入血的主要物质基础及特征。方法：采用HPLC-DAD体系，建立渴络欣胶囊大鼠血清的HPLC指纹图谱；差示分析渴络欣胶囊、空白血清及含药血清指纹图谱，获得大鼠口服渴络欣胶囊后血液中移行成分概况。结果：所建大鼠血清指纹图谱方法具有良好的精密度、重复性和稳定性；基于该方法分析渴络欣胶囊大鼠含药血清，共检出移行成分13个，其中原型成分9个、代谢成分4个，原型成分中包括芦荟大黄素及大黄酸。结论：吸收入血的13种成分可能是渴络欣胶囊发挥药效的主要物质基础。
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芦荟大黄素联用顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨芦荟大黄素(AE)单用或联用顺铂(CP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,用5,10,20,30,40,50μmol·L-AE,2,4,8,12,24,36 μmol·L-1 CP,或不同浓度AE联用CP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h,另设空白组,MTT法检测细胞增殖;Annexin Ⅴ FITC/PI双染和流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;Western blot分析Bcl-2相关X蛋白(Bax),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-xL蛋白表达的变化.结果:与空白组比较,AE单用显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,半数抑制浓度(IC50)为22.21 μmol·L-1,与CP联用时IC50为9.51μmo1·L-1.联用指数CI50＜1,表明两药物有协同作用;AE单用使细胞周期阻滞在G1期,并诱导细胞凋亡,联用CP则增强阻滞,凋亡率明显增加;两药联用显著抑制Bcl-2和Bcl-xL的表达,并上调Bax的表达,与空白组比较均具有明显的统计学差异(P ＜0.05,P＜0.01).结论:芦荟大黄素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并通过上调促凋亡蛋白和下调抗凋亡蛋白,诱导凋亡.与顺铂联用能增强其促凋亡作用,两药存在协同作用.
关键词： 芦荟大黄素 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 凋亡 顺铂 -
芦荟大黄素对肝癌HepG2细胞生长、迁移及纤维状肌动蛋白的影响
目的:探讨芦荟大黄素对肝癌HepG2细胞生长、迁移及纤维状肌动蛋白(F-actin)的影响.方法:通过对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的药物毒性实验筛选出芦荟大黄素对人正常肝细胞无明显毒性的大无毒浓度(TC0);以TC0为高浓度并稀释成3个不同的芦荟大黄素浓度,作用于体外培养人肝癌HepG2细胞为芦荟大黄素组,另设置未加药物HepG2细胞为空白组;通过噻唑蓝(MTT)比色法检测两组细胞作用48 h后细胞增殖抑制率;采用细胞小室移动实验及划痕实验检测两组细胞迁移能力;高内涵细胞成像系统分析芦荟大黄素对HepG2细胞F-actin表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS),核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达.结果:芦荟大黄素对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的TC0为50μmol·L-1,以TC0为高浓度,将芦荟大黄素(10,30,50 μmol·L-1)作用于HepG2细胞;与空白组相比,芦荟大黄素组细胞培养48 h后增殖抑制率升高,且呈剂量递增型(P＜0.01);芦荟大黄素组细胞培养48 h后划痕距离增宽,迁移能力降低,且呈剂量递减型(P＜0.01);F-actin面积缩小,排列紊乱且不规则,边缘模糊,且呈浓度递减型(P＜0.01);芦荟大黄素组细胞NF-κB p65表达增多,p-eNOS表达减少,且呈浓度递减型(P＜0.01).结论:芦荟大黄素可能通过增强NF-κB p65,降低p-eNOS表达,促进F-actin解聚,减少微丝形成,从而降低肝癌HepG2细胞的增殖和迁移能力,发挥其抑制肿瘤的作用.
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HPLC测定双黄祛毒片中7种成分的含量
目的:建立测定双黄祛毒片(盐酸小檗碱、大黄、五倍子)含量的方法.方法:采用HPLC在同一色谱条件ZORBAX SB-Pheny色谱柱(4.6mm×150 mm,5μm)对没食子酸、盐酸小檗碱、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚进行含量测定.结果:线性范围分别为0.12 ～2.4 μg(r=0.999 9),盐酸小檗碱线性范围0.11 ～2.2 μg(r =0.999 9),0.015～0.3 μg(r=0.9998),0.02～0.4 μg(r=0.9998),0.008～0.16 μg(r=0.9999),0.013 ～0.26 μg(r=0.9998),0.006 ～0.12 μg(r =0.999 9),平均回收率分别为100.97％,100.20％,99.01％,99.76％,101.10％,101.97％,101.56％.结论:该方法简便、快速、准确,重复性好,可作为双黄祛毒片中没食子酸、盐酸小檗碱、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚含量测定方法.
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多指标正交试验法优选温胃阿亚然及片的提取工艺
目的:优选温胃阿亚然及片的提取工艺.方法:以芦荟苷、芦荟大黄素、总葫芦素含量和浸膏得率的综合评分为指标,采用L9(34)正交设计考察乙醇体积分数、提取次数及加醇量对温胃阿亚然及片提取工艺的影响.结果:佳提取工艺为加15倍量80％乙醇提取3次,每次1h.结论:优选的提取工艺简单、可行,可用于该制剂的工业化生产.
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清肺通络膏的体外经皮渗透试验考察
目的:研究清肺通络膏中大黄游离蒽醌类成分的体外透皮吸收特性,考察辅药大蒜对各成分透皮特性的影响.方法:以清肺通络膏中主要成分芦荟大黄素、大黄素、大黄酸为指标,采用体外透皮吸收试验及HPLC考察该制剂的体外透皮特性,并评价该制剂不同配伍组中指标性成分的累积透过量及渗透速率.结果:大黄素的单位面积累积透皮量及透皮速率大,芦荟大黄素次之,大黄酸小;大黄酸的透皮时滞长(0.419 h),大黄素时滞短(0.006 h);清肺通络膏中大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的体外经皮渗透曲线分别为Q =12.144t-14.880(r=0.97),Q=10.111t-3.886(r =0.93),Q=1.389t-0.583(r =0.95).全方组中大黄素、芦荟大黄素、大黄酸的8h累积透过量为分别为(86.059±0.168),(83.079±3.303),(12.819±0.569)μg·cm-2,透皮速率分别为12.144,10.111,1.389 μg.cm-2·h-1,与主药组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:清肺通络膏的体外经皮渗透符合零级动力学过程,大蒜对清肺通络膏中指标性成分的经皮渗透有促进作用.
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多指标均匀设计法优选痤疮消凝胶提取工艺
目的:优选痤疮消凝胶的提取工艺,为该制剂的临床应用提供参考.方法:以大黄游离总蒽醌、栀子苷、咖啡酸含量的综合评分为指标,采用均匀设计法考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间和提取次数对提取工艺的影响.采用HPLC测定大黄游离总蒽醌、栀子苷、咖啡酸含量,流动相分别为甲醇-0.1％磷酸溶液(85: 15),甲醇-水(23:77),乙腈-0.1％磷酸溶液(10: 90),检测波长依次为254,238,323 nm.结果:佳提取工艺参数为加12倍量80％乙醇提取3次,每次1h.大黄游离总蒽醌、栀子苷、咖啡酸质量浓度分别为1 260.33,1 597.56,32.19 mg·L-1.结论:优选的痤疮消凝胶提取工艺合理可行、重复性好,为该制剂生产工艺参数的确定提供实验依据.
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HPLC法测定清热解毒方芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量
目的:建立反相高效液相色谱法测定清热解毒方中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法.方法:采用HPLC法,色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸(85:15)为流动相,流速:1.0 mL·min-1,检测波长:254 nm,柱温:35℃.结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.0125～16.2μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、0.625～10 μg范围内呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 1,0.999 8,0.999 7,0.999 4,0.999 6,平均回收率分别为101.4%,102.0%,101.7%,102.1%,100.8%.结论:该方法操作简单、准确,且重复性好,可作为清热解毒方质量的控制指标之一.
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HPLC法测定清胰片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的含量
目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定清胰片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚的含量.方法:色谱柱为TIANHE-C18(4.6 mm×250 mm,10μm),流动相:甲醇-0.1%高氯酸(75:25),检测波长254 nm,流速为1.0 mL.min-1,柱温为25℃.结果:芦荟大黄素、大黄素在(0.062 4～0.312)μg·mL-1范围内线性良好;芦荟大黄素,:0.999 9、大黄素,:0.999 2;大黄酸、大黄酚在(O.156～0.780)μg·mL-1范围内线性良好,大黄酸r=0.999 8、大黄酚r=0.999 9;样品平均回收率为:芦荟大黄素99.31%,RSD=1.71%;大黄酸99.65%,RSD=0.56%;大黄素99.10%,RSD=1.82%;大黄酚99.51%,RSD:1.24%.结论:该方法可靠、准确,专属性强,重复性好,可用于该制剂质量控制.
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河南产大黄类药材质量分析
目的:比较河南不同产地大黄的质量,为该药材的利用与开发提供参考.方法:检查土大黄苷,利用薄层色谱进行定性鉴别,采用HPLC测定游离蒽醌类成分的含量,流动相甲醇-0.1％磷酸溶液(85∶ 15),检测波长254 nm.结果:9批药材中4批含有土大黄苷,鉴别为土大黄,来源为波叶组大黄的华北大黄;5批不含土大黄苷,大黄游离蒽醌类成分质量分数均＞1.5％,符合《中国药典》2010年版的规定,平顶山鲁山县的大黄中游离蒽醌类成分的含量较高(4.65％),洛阳嵩县次之(4.38％),2种大黄来源分别为药用大黄、掌叶大黄.结论:河南不同产地分布的药用大黄、掌叶大黄药材符合《中国药典》2010年版的规定,具有开发利用前景;华北大黄不能作为大黄药材应用于临床.
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HPLC法同时测定润肠降脂胶囊中5种蒽醌类成分含量
目的:建立HPLC同时测定润肠降脂胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量测定方法.方法:采用Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇0.05％磷酸溶液,梯度洗脱(0-6min:80％-85％甲醇;6-22min:85％甲醇);检测波长:254nm;流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL.结果:线性范围分别为:芦荟大黄素2.65-42.4μg/mL、大黄酸0.545-8.72μg/mL、大黄素2.55-40.8μg/mL、大黄酚12.60-201.6μg/mL和大黄素甲醚5.20-83.2μg/mL.平均加样回收率分别为:芦荟大黄素95.87％、大黄酸99.77％、大黄素100.15％、大黄酚97.52％、大黄素甲醚96.72％.结论:该法简单、快捷、重复性好,可作为润肠降脂胶囊的质量控制方法之一.
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HPLC同时测定小承气汤中4个化学成分
目的:建立小承气汤中肉桂酸、大黄酸、芦荟大黄素和川陈皮素的HPLC同时测定方法.方法:采用Apollo C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈和0.011%冰乙酸溶液,梯度洗脱,时间25min,流速1mL/min,检测波长为254nm.结果:肉桂酸、大黄酸、芦荟大黄索和川陈皮素的线性范围分别为0.08-0.47、0.58-2.02、0.19-0.37和0.02-1.39μg,精密度为0.44%、0.17%、0.52%和0.33%,平均回收率分别为97.3%、99.1%、99.3%和100.5%.结论:建立的方法简便、灵敏、准确,可用于小承气汤的质量控制.
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芦荟大黄素促进皮肤创伤修复作用机理研究
目的:研究芦荟大黄素对皮肤创伤的修复作用及作用机理.方法:(1)MTS法测定含芦荟大黄素100、200、300、400 μg/ml的培养液对大鼠成纤维细胞增殖的作用；(2)使用含芦荟大黄素100、200、300、400 μg/ml的药液治疗大鼠皮肤创伤模型,检测创缘组织bFGF、EGF、vEGF表达量及羟脯氨酸含量.结果:(1)含400 μg/ml芦荟大黄素的培养液使细胞成活率高；(2)含300 μg/ml芦荟大黄素的药液对大鼠创伤的疗效佳.结论:芦荟大黄素可有效促进创伤愈合,其促进创伤愈合的机理之一为增强皮肤及皮肤血管相关的生长因子的表达,从而促进创面的修复愈合.
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通腑颗粒质量标准研究
目的 建立通腑颗粒的质量标准.方法 采用薄层色谱法对方中的大黄、枳实、厚朴进行定性鉴别,用高效液相色谱法对芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进行含量测定.结果薄层色谱斑点清晰,分离度良好,阴性对照无干扰.芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在0.038～0.610、0.048～0.780、0.068～1.076、0.056～0.904、0.022～0.336 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,平均回收率依次为96.01%、94.67%、100.94%、90.06%、92.37%,RSD分别为1.90%、2.77%、2.18%、1.88%、2.84%.结论 定性定量方法 简便、结果准确可靠,所建立的标准可用于通腑颗粒的质量控制.
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HPLC同时测定唐古特大黄地上部分6种化学成分含量
目的 建立HPLC同时测定唐古特大黄地上部分中大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、番泻苷A和番泻苷B共6种成分含量的方法.方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1％磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0 min,70％B;5 min,65％B;8～16 min,60％B;18～23 min,55％B;25～30 min,45％B;32～39 min,35％B;49～57 min,24％B;65～72 min,20％B);流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温为室温,按外标法定量分析.结果 大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素、番泻苷A、番泻苷B在一定范围内与峰面积积分值线性关系良好(r≥0.9995),方法的精密度RSD为0.75％～1.17％,重复性RSD为0.99％～2.06％,稳定性RSD为0.97～1.76％,平均加样回收率为99.7％～100.4％.唐古特大黄根和地上部分6种化学成分含量存在差异.结论 所建立的方法能同时测定唐古特大黄地上部分6种成分的含量,可作为大黄地上部分化学成分含量测定的参考方法.
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HPLC测定药用芦荟中芦荟苷和芦荟大黄素含量
目的：以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑溴化盐([BMIM]Br)为萃取剂超声辅助萃取,高效液相色谱法同时分离测定芦荟中的芦荟苷和芦荟大黄素。方法采用Phenomenex C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相：甲醇-0.3%冰醋酸水溶液(65∶35)；流速：0.80 mL/min；紫外检测波长：360 nm；柱温：35℃。结果芦荟苷和芦荟大黄素分别在0.000336～1.68μg(r＝0.99996)、0.000608～3.04μg(r＝0.99976)范围内线性关系良好,检出限分别为0.0506、0.262 ng/mL,平均加样回收率分别为95.99%、95.80%。结论本法操作简单快速、定量准确、灵敏度高、成本低,且对环境友好,是检测及分离芦荟中蒽醌类化合物的有效方法。
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HPLC测定藏药六味能消散中蒽醌类成分含量
目的：建立测定藏药六味能消散中蒽醌类成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Eclipse XDB C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(88∶12),检测波长为254 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在0.076～0.380μg(r＝0.9996)、0.068～0.340μg(r＝0.9998)、0.076～0.380μg(r＝0.9999)、0.070～0.349μg(r＝0.9999)、0.071～0.355μg(r＝0.9997)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系,平均加样回收率分别为97.88%(RSD＝0.72%)、97.52%(RSD＝0.96%)、98.79%(RSD＝0.95%)、97.77%(RSD＝1.18%)、96.34%(RSD＝2.00%)。结论本方法简便、准确、重复性好,可用于藏药六味能消散的质量控制。
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炮制方式对大黄汤中芦荟大黄素含量的影响
目的考察不同炮制方法对大黄汤中芦荟大黄素含量的影响,为临床合理使用大黄提供科学依据.方法采用反相高效液相色谱法测定各种大黄煎液中芦荟大黄素的含量.结果及结论不同炮制方法对大黄汤中芦荟大黄素含量有明显影响,其中以生大黄汤中芦荟大黄素含量高.说明中医用药讲究炮制有其内在的科学性.
