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不同新生牛血清对胰腺癌BxPC-3细胞增殖的影响
目的 观察在其他培养条件相同的情况下,不同类型新生牛血清对胰腺癌BxPC-3细胞体外培养的影响,探讨胰腺癌BxPC-3细胞生长适应的血清类型.方法 胰腺癌细胞系BxPC-3细胞分别用含20%无噬菌体低内毒素新生牛血清、20%无支原体新生牛血清的高糖DMEM培养基培养,镜下观察细胞形态,MTr法检测细胞活力及生长曲线的比较.结果 无噬菌体低内毒素新生牛血清对于胰腺癌BxPC.3细胞形态、增殖及生长曲线,无噬菌体低内毒素新生牛血清明显好于无支原体新生牛血清,两组血清培养BxPC-3细胞的增殖有统计学差异(P＜0.05).结论 胰腺癌BxPC-3细胞能较好地适应无噬菌体、低内毒素新生牛血清,而不适应无支原体新生牛血清,甚至发生死亡.
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影响泌尿生殖道沙眼衣原体分离培养的关键因素
笔者多年从事沙眼衣原体分离培养研究，取得点滴经验如下。 标本采集：同时采集患者宫颈及尿道标本或间隔1周连续多个宫颈标本，用细头拭子需插入宫颈口3～5 cm,旋转1周（5～10 s）取出；男性患者在症状出现7～8 d后，采集尿道(3～5 cm)拭子，以不含精液为好。标本采集前应避免使用避孕药及抗生素。 标本培养：初次分离培养细胞系以McCoy敏感。培养基以RPMI-1640、DMEM好，其中加入庆大霉素、制霉菌素或万古霉素，勿用青霉素，因其影响富含半胱氨酸的蛋白质合成，阻止始体向原体转变，不能形成感染性原体。10%新生牛血清有助于包涵体形成，培养液中尚需加入放线菌酮（终浓度为1 μg/ml），抑制宿主细胞的核酸、蛋白质合成，以便有充足的营养和大分子前身物质供衣原体利用。
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人膀胱移行细胞癌细胞系PUMC-91细胞HPV-18感染
为探讨高危型人乳头状瘤病毒(HPV-16／18)与膀胱癌的关系，我们对膀胱移行细胞癌细胞系PUMC-91中的HPV感染情况进行了研究，报告如下。 材料和方法细胞培养：人膀胱移行细胞癌PUMC-91细胞系及宫颈癌HeLa细胞系37 ℃闭式培养于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中。DA的提取：传代培养收集1×10６～1×10７细胞，常规酚-氯仿抽提DNA，测量吸光度A值，贮存于-2 0 ℃。
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灭能与未灭能新生牛血清培养细胞效果的比较
目的 比较灭能与未灭能新生牛血清培养Vero细胞和MRC-5细胞的效果,为细胞培养的相关研究和生产提供参考.方法 分别采用照射剂量为8和16 kGy的60Coγ-射线及56℃30 min加热灭能新生牛血清,用两种方式灭能的血清及未灭能的新生牛血清培养Vero细胞和MRC-5细胞,显微镜观察细胞的生长情况,计数并计算细胞倍增时间及存活时间.结果 未灭能新生牛血清培养的两种细胞增殖更多更快速;热灭能的新生牛血清培养的两种细胞的增殖速度和数量明显低于γ-射线照射灭能及未灭能血清培养的细胞.结论 未灭能的新生牛血清比灭能后的血清培养Vero细胞和MRC-5细胞的效果好,其促细胞生长增殖效果佳.
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新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响
目的 考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响.方法 选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养.待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率.根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度.结果 SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5× 106个/mL,活细胞数不低于2.1×106个/mL,细胞存活率不低于60％;2BS细胞总细胞数不低于7.0× 105个/mL,活细胞数不低于4.2× 105个/mL,细胞存活率不低于60％.腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID50/mL之间,平均值为6.28 lgCCID50/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID50/mL之间,平均值为5.8 lgCCID50/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致.结论 新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小.
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新生牛血清血红蛋白含量测定能力的验证
目的 验证各实验室检测新生牛血清血红蛋白含量的能力.方法 采用纤维蛋白原析出法制备验证样品,并采用单因素方差考察样品的均匀性,t检验考察稳定性.组织24家实验室采用《中国药典》三部(2015版)规定的方法对验证样品进行检测,以各实验室结果的中位值作为样品血红蛋白的指定值,标准化四分位距(normalised interquartile range,NIQR)作为变动性度量值(目标标准偏差),计算Z比分数(Z值).结果 验证样品具有良好的均匀性及稳定性.24家实验室中,2家退出,20家检测结果为“满意”(|z|≤2),2家为“不满意”(|z|≥3).结论 参加验证的实验室满意率总体达89.5％,未取得满意结果的实验室可通过分析问题,找出原因并采取相应的整改措施.
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中药复方对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响的实验研究
1实验材料中药材:中药人参(Radix Ginseng)、黄芪(Radix Astragali)、大黄(Radix et Rhizoma Rhei)、水蛭(Hirudo)均购自大连市医药采购供应站,由辽宁省药品检验所鉴定.细胞:大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供.试剂:MEM细胞干粉培养基Gibco;新生牛血清(FCS),鼎国生物;胰蛋白酶(1:250);乙二胺四乙酸二钠(EDTA);二甲基亚砜(DMSO);L-谷氨酰胺西宝生物;噻唑蓝(MTT)Amresco;其余试剂均为分析纯或生化纯试剂.主要仪器:HEAL FORCE HF-1200超净工作台,上海力申科学仪器有限公司;CK30-12PHP倒置显微镜,OLYMPUS;MDFU4086S-86382L超低温冰箱,日本三洋;HERAEUS BB16 CO2培养箱HERAEUS;TECAN GENIOS酶标仪,奥地利;FACSCalibur流式细胞仪,美国BD公司;96孔培养板;可调式移液器Eppendorf.
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60Coγ射线照射的新生牛血清对培养细胞的影响
为了获得质量合格的牛血清用于大规模细胞培养,以3种不同剂量γ射线照射的新生牛血清加入细胞培养液,并用加热灭活的牛血清做对照培养CHO-C28细胞,观察两种灭活方法对除去牛血清中热原的效果及对细胞贴壁、生长增殖及分泌HBsAg的影响.结果表明,γ射线照射可除去牛血清中的热原质,在培养前期试验组牛血清对细胞贴壁和细胞生长增殖效果优于对照组.在培养中期,当γ射线的照射剂量为20KGy时,细胞生长增殖和分泌HBsAg与对照组接近,两者无显著性差异(P＞0.05).当照射剂量≥30 KGy时,可抑制细胞分泌HBsAg,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).因而在细胞培养中采用γ射线照射牛血清以除去热原质是可行的,但照射剂量应≤20KGy.
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细胞生长促进试验筛选新生牛血清
目的 建立适合人二倍体细胞培养血清的筛选方法.方法 通过测定细胞倍增时间和进行细胞生长促进试验对15批次的新生牛血清作了筛选,并将筛选出的11批次血清用于大规模细胞培养,观察细胞的生长维持情况.结果 发现细胞倍增时间与相对生长率无明显相关性(P>0.05).在大规模细胞培养中,相对生长率97%以上的血清更适合二倍体细胞生长.结论 细胞生长促进试验比细胞倍增时间测定更能客观地反映血清促人二倍体细胞的生长能力.细胞生长促进试验可能是较佳的,筛选适合人二倍体细胞培养的血清的方法
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培养基血清质量和浓度的不同对肠干细胞群分离培养的影响
目的 通过改变细胞培养基中血清的质量和浓度,探索构建小鼠肠干细胞群更合适的血清及浓度.方法 取孕17d昆明系小白鼠的胚胎鼠肠组织,予肠干细胞的培养,将获得的细胞溶于8组细胞培养液,种于24孔板中.细胞培养液共有8组,采用DMEM培养基和新生牛血清或胎牛血清配制,血清的浓度分别为5％、10％、15％及20％,除此以外还含有胰岛素、谷铵酰胺、表皮生长因子以及双抗(青霉素、链霉素)等成分.后进行角蛋白抗体及波形蛋白抗体免疫组化染色鉴定细胞来源.结果 24～48 h后,细胞开始贴壁生长.显微镜下可见,除采用10％新生牛血清的组外,其他组细胞均含有大量的间质细胞,上皮细胞所占比例不足10％.而如采用含10％的新生牛血清培养基培养,则贴壁生长的细胞绝大部分为上皮细胞.经传代后,所培养出的肠干细胞群角蛋白18亚型染色阳性.而其他组的细胞,则基本上为间质细胞.结论 构建肠干细胞群应选用10％的新生牛血清.
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增菌液及增菌时间对空肠弯曲菌检测率的影响
目的 了解不同增菌液、不同增菌时间对空肠弯曲菌检测结果的影响,摸索空肠弯曲菌分离鉴定的优化条件.方法 对多重PCR检测阳性的样品参照GB/T 4789.9-2008提供的方法分离鉴定空肠弯曲菌,比较不同增菌液、不同增菌时间检测空肠弯曲菌的结果差异.结果 300份样品在布氏肉汤和改良布氏肉汤及添加5％新生牛血清的布氏肉汤和改良布氏肉汤中,经24 h增菌对空肠弯曲菌的检出率分别为9.67％、15.00％、15.00％、16.67％;经48 h增菌的检测率分别为9.00％、13.67％和14.00％、14.33％.增菌48 h的检出率较24h有下降趋势.结论 添加5％新生牛血清的布氏肉汤、改良布氏肉汤较适合作为空肠弯曲菌分离鉴定的增菌液,增菌时间以24h较为适宜.
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新生牛血清对大鼠脂肪来源细胞生长的影响
目的 探索新生牛血清对大鼠脂肪来源细胞生长状态的影响.方法用新生牛血清代替传统的胎牛血清对脂肪来源细胞进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态,与胎牛血清培养条件下的脂肪来源细胞形态进行比较.结果新生牛血清培养条件下的大鼠脂肪来源细胞镜下呈短梭形或多角形,与胎牛血清培养的脂肪来源细胞形态相似,但细胞在P2～P3代即出现了衰老趋势.结论新生牛血清对体外培养的脂肪来源细胞的活力有负面影响,可能不适用于脂肪来源细胞的培养.
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新生牛血清中乙脑抗体的检测及其方法的建立
对新生牛血清中的抗乙型脑炎病毒的抗体进行检测,并且建立一种有效可行的检测方法.以四个厂家共16批新生牛血清用蚀斑减少中和法(PRNT)对其中的乙脑抗体进行了检测.结果显示该方法检测出部分批次的新生牛血清中含有抗乙脑病毒抗体,且乙脑抗体阳性牛血清可将乙脑病毒抗原中和,对蚀斑数有较明显影响.证明作为检测牛血清中乙脑抗体的有效方法,PRNT法具有灵敏度高、重复性好的优点.以上检测说明新生牛血清中存在乙脑抗体,能将乙脑病毒中和.用于乙脑减毒活疫苗生产的新生牛血清除按照<中国生物制品主要原辅材料质控标准>进行质控外,还应进行乙脑抗体的检测.
