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干细胞巢研究进展
干细胞巢即干细胞周围的微环境构成,一般包括干细胞的相邻细胞、粘附分子及基质等,但不同的干细胞有不同的巢结构.干细胞巢通过不同信号途径调控着干细胞的行为,使干细胞的自我更新和分化处于平衡状态.根据近年来有关干细胞巢的研究,本文从果蝇生殖系干细胞巢、哺乳动物造血干细胞巢、肠干细胞巢、毛囊表皮干细胞巢和神经干细胞巢等五个系统分别综述了干细胞巢的构成及其对干细胞的调节作用,探讨了干细胞巢作用于干细胞的内在机制.
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肠干细胞与结直肠肿瘤干细胞研究进展
干细胞(stem cell,SC)是一群结构和功能未特化的原始细胞,具有长期自我更新潜能和产生至少一种终末分化细胞的能力.而肠干细胞是位于小肠隐窝下部潘氏细胞上方及结直肠隐窝的底部的成体干细胞,具有增殖和自我维持、能产生许多子代细胞并能在受损伤后再生的特性.近年较多的文献报道结直肠癌组织中存在肿瘤干细胞,而这些具有干细胞特性的瘤细胞可能来自突变的肠干细胞,本文就肠干细胞和结直肠癌肿瘤干细胞的研究进展作一综述.
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AIM2在结直肠癌发生发展中机制的研究进展
黑素瘤缺乏因子2（absentinmelanoma 2，AIM2）是一种细胞质的蛋白质，能够通过PYD（pyrin domain）结构域与接头蛋白（ apoptosis－associated speck－like protein containing a CARD，ASC）相互作用。一旦感知到了胞质dsDNA之后，AIM2就会募集到ASC产生出炎症复合体，进而激活了caspase－l，促进炎性细胞因子成熟与分泌。 AIM2还能够感受到胞质与核内dsDNA所发出的不同天然免疫应答，诱导生成干扰素－β和炎性细胞因子。研究表明，AIM2是一种肿瘤抑制因子，因为在许多恶性肿瘤中，如黑色素瘤、结直肠癌和前列腺肿瘤，AIM2表达存在降低或缺失；同时研究表明结直肠癌患者肿瘤细胞中AIM2表达缺失与其预后不良密切相关，但研究人员并不清楚AIM2如何影响肿瘤的发生。近一些团队研究了AIM2在结直肠癌发生发展中的作用，本文就对此进行总结。
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培养基血清质量和浓度的不同对肠干细胞群分离培养的影响
目的 通过改变细胞培养基中血清的质量和浓度,探索构建小鼠肠干细胞群更合适的血清及浓度.方法 取孕17d昆明系小白鼠的胚胎鼠肠组织,予肠干细胞的培养,将获得的细胞溶于8组细胞培养液,种于24孔板中.细胞培养液共有8组,采用DMEM培养基和新生牛血清或胎牛血清配制,血清的浓度分别为5％、10％、15％及20％,除此以外还含有胰岛素、谷铵酰胺、表皮生长因子以及双抗(青霉素、链霉素)等成分.后进行角蛋白抗体及波形蛋白抗体免疫组化染色鉴定细胞来源.结果 24～48 h后,细胞开始贴壁生长.显微镜下可见,除采用10％新生牛血清的组外,其他组细胞均含有大量的间质细胞,上皮细胞所占比例不足10％.而如采用含10％的新生牛血清培养基培养,则贴壁生长的细胞绝大部分为上皮细胞.经传代后,所培养出的肠干细胞群角蛋白18亚型染色阳性.而其他组的细胞,则基本上为间质细胞.结论 构建肠干细胞群应选用10％的新生牛血清.
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小鼠肠干细胞群的构建
目的 探索利用干细胞体外培养技术构建小鼠肠干细胞群.方法 取孕17 d昆明系小白鼠的胚胎鼠肠组织,剪碎后采用酶消化法分离肠干细胞群;将通过离心获得的细胞溶于选择性培养液并种于一次性培养瓶中;利用角蛋白18亚型抗体行免疫组织化学染色鉴定细胞.结果 细胞培养48 h后,开始贴壁生长.镜下可见,上皮样细胞呈集落状生长,其中,由典型上皮构成的克隆约占30%,由扁平上皮细胞构成的克隆约占20%,混合生长的克隆约占50%.培养出的肠干细胞群在第3、4代达到生长分化的顶峰;而后干细胞逐渐减少,成熟的肠上皮细胞逐渐增多,直至终凋亡.培养出的肠干细胞群角蛋白18亚型抗体染色阳性.结论 在现有技术条件下,体外构建肠干细胞群是完全可以实现的.
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体外辐射模拟P53依赖的小鼠肠干细胞损伤研究
目的 建立6 Gy小鼠肠干细胞体外辐射模型,模拟在体P53依赖的肠干细胞辐射损伤修复过程.方法 分离C57BL/6(野生型)、P53-/-小鼠小肠隐窝,分别于基质胶内接种进行3D培养,24 h后予X线6 Gy照射.比较两组隐窝克隆出芽过程和照后6d克隆存活率.对野生型隐窝克隆用RT-PCR检测照后24 h内不同时间点P53靶基因Bax、Bbc3、Mdm2、P21、Bcl2l1以及肠干细胞特征性基因Lgr5、Olfm4、Ascl2的表达.结果 C57BL/6和P53-/-小鼠小肠隐窝于接种后48 h出芽,在接种后96 ～ 120 h形成类器官样结构.6 Gy辐照可诱导C57 BL/6隐窝细胞24 h内大量死亡,完全抑制克隆出芽,仅(43.84 ±5.73)％的克隆存活;而对P53-/-小鼠隐窝出芽时间无影响,且有(83.69±5.89)％隐窝克隆存活,显著高于对照组(P＜O.01).在野生型隐窝克隆中,P53下游靶基因的表达可被辐射迅速激活,并在24 h内维持高水平,而干细胞特征性基因在12h迅速下降,24 h到达低水平.结论 6 Gy照射小鼠小肠隐窝能较好地模拟在体P53依赖的促凋亡因素对肠干细胞的损伤.
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小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究
目的 探索利用体外细胞培养技术构建的小鼠肠干细胞群对外源性草酸的耐受能力.方法 利用细胞体外原代培养技术分离并培养小鼠肠干细胞群,将获得的细胞群种植于24孔板中;选取8孔生长状态较好的细胞,分别加入含终浓度为40、35、30、25、20、15、10、5 mmol/L草酸钠的细胞培养液,置人CO2恒温培养箱内培养72h后观察细胞状态.结果 经反复实验可见草酸钠浓度为25 mmol/L的孔中,细胞生长速度减慢,出现少许空泡样改变;而浓度大于或等于30 mmol/L孔中,细胞出现大量空泡样改变,甚至崩解、死亡;草酸钠浓度小于或等于20 mmol/L的孔中细胞没有出现异常,生长状态较好.结论 培养基中草酸浓度小于或等于20 mmol/L时,小鼠肠干细胞群能正常生长分化.
