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AKT/mTOR在胃癌组织中的表达及意义
目的 研究蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)在胃癌组织中的表达水平及与临床病理因素的关系.方法 应用免疫组化染色测定磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)在胃癌(32例)、癌旁组织(20例)中的表达情况.结果 p-AKT在胃癌、癌旁组织中的阳性表达分别为71.9％、25.0％.p-mTOR在胃癌、癌旁组织中的阳性表达分别为62.5％、20.0％.p-AKT、p-mTOR的表达与胃癌组织分化程度、TNM分期存在相关性(P＜0.05),p-AKT、p-mTOR的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤直径大小无相关性(P＞0.05).结论 胃癌组织中p-AKT与p-mTOR蛋白的表达与病理分化程度呈负相关.AKT/mTOR信号通路在大部分胃癌组织中过度表达可能是胃癌发生发展的重要机制之一.
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子宫内膜缺血在子宫内膜异位症中的作用及分子机制
目的 探讨子宫内膜缺血在子宫内膜异位症发生中的作用及分子机制. 方法 选择SPF级,8～10周龄雌性C57BL/6小鼠,建立子宫内膜缺血预处理(IPC)以及缺血(ISCH)模型.根据供体小鼠处理方式分为对照组(CON组)、预缺血处理组(IPC组)、缺血处理组(ISCH组)、ISCH+ IPC组以及Akt抑制剂预处理的ISCH+IPC组(ISCH+IPC+LY组);采用HE染色检测异位移植内膜病灶大小,TUNEL法测定细胞凋亡指数,RT-PCR测定子宫组织Akt、Bcl-2以及Bax基因表达,Western blot检测子宫组织p-Akt、Bcl-2以及Bax蛋白表达. 结果 (1)IPC组成模率高于CON组(P＜0.05),IPC+ ISCH组成模率以及内膜存活率均高于ISCH组(P＜0.05).(2)CON组细胞凋亡指数(AI)与IPC组差异无统计学意义(P＞0.05);IPC+ISCH组AI低于ISCH组但高于IPC组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)RT-PCR显示,IPC组Akt-mRNA、Bcl-2-mRNA以及Bax-mRNA表达均高于CON组(P＜0.05);ISCH组及IPC+ ISCH组Akt-mRNA、Bcl-2-mRNA表达均低于IPC组,而Bax-mRNA表达高于IPC组(P＜0.05);IPC+ISCH+LY组Akt-mRNA、Bcl-2-mRNA表达低于IPC+ISCH组,而Bax表达高于IPC+ISCH组(P＜0.05).(4) Western blot显示,IPC组p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白表达高于CON组(P＜0.05);ISCH组p-Akt、Bcl-2蛋白表达低于IPC组(P＜0.05),IPC+ISCH组p-Akt、Bcl-2蛋白表达高于ISCH组、而Bax蛋白表达低于ISCH组(P＜0.05);IPC+ ISCH-+LY组p-Akt、Bcl-2蛋白表达低于IPC+ISCH组(P＜0.05),而Bax蛋白表达高于IPC+ ISCH组(P＜0.05). 结论 子宫内膜预缺血处理能够抑制异位移植后内膜细胞凋亡,而这一机制可能与Akt信号通路磷酸化以及上调其下游靶蛋白Bcl-2、下调Bax有关.
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急性心肌缺血损伤中P13K/Akt信号通路表达的研究
目的 通过检测pAkt、Akt、Caspase3和p38在急性心肌缺血大鼠心肌与骨骼肌组织中的表达,探讨P13K/Akt介导的信号通路对急性心肌缺血的影响.方法 采用异丙肾上腺素(ISO)腹腔注射制备急性心肌缺血大鼠模型,检测心电图及血流动力学指标;采用免疫斑点试验与Wesmm blot检测急性心肌缺血与正常大鼠的心肌与骨骼肌pAkt、Akt、Caspase3和p38的蛋白表达水平.结果 与正常大鼠比较,模型组大鼠心电图S-T段下移≥0.1mv.pAkt(P＜0.05)、Caspase3(P＜0.05)和p38(P＜0.05)蛋白表达水平升高.Akt表达水平与对照组比较变化不明显(P=0.477).结论 急性心肌缺血大鼠pAkt、Akt及相关凋亡分子Caapase3和p38的表达水平升高.Akt表达水平变化不明显.
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人心肌细胞缺血再灌注损伤后ERK、Akt的表达以及黄芪多糖的干预作用
目的 观察人心肌细胞在缺血再灌注损伤过程中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)又称Akt,与细胞外信号调节激酶1/2(extracellar signal-regulated kiase,ERK1/2)的表达规律及其与细胞凋亡的关系,以探索黄芪多糖产生心肌保护作用的机制.方法 培养原代人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMEC),通过缺氧再复氧刺激细胞损伤,模拟缺血再灌注损伤的实验技术平台,建立缺血再灌注损伤模型,继而采用黄芪多糖进行干预,随机分为:HCMEC正常对照组(对照组)、HCMEC损伤组(损伤组)、HCMEC损伤组+低浓度的药物(低药物组)、HCMEC损伤组+中浓度的药物(中药物组)、HCMEC损伤组+高浓度的药物(高药物组),进而采用Western Blot方法检测ERK、p-ERK、Akt蛋白表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 从流式细胞仪结果显示:对照组为5.43%;损伤组细胞凋亡程度增高明显,为92.88%;高药物组次之,为29.78%;低药物组及中药物组细胞凋亡程度较轻,生存状态较佳,分别为12.15%和6.08%.Western Blot结果显示:与对照相比较,p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平在各组中表达均显著下降(P<0.05);与损伤组相比,低药物组、中药物组和高药物组三组p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平升高(P<0.05);与低药物组相比,中药物组中p-ERK、ERK及Akt磷酸化水平升高(P<0.05).结论 黄芪多糖可提高人心肌细胞缺血再灌注损伤后ERK、Akt的活性,减少细胞凋亡.
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葛根素对心肌梗死大鼠心肌iNOS,eNOS蛋白表达及AKT磷酸化水平的影响
目的:探讨葛根素诱导血管生成的分子机制.方法:通过大鼠心肌梗死动物模型,运用Western-blot的方法检测心肌iNOS、eNOS,AKT,p-AKT的蛋白表达.结果:葛根素120mg/kg腹腔注射四周能不同程度增加心肌梗死大鼠缺血区域和非缺血区域心肌eNOS蛋白表达以及AKT磷酸化水平,而对iNOS蛋白表达没有明显的影响.结论:葛根素诱导血管生成作用的分子机制与其促进AKT磷酸化水平,从而激活eNOS,使NO生成增加有关.
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补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK蛋白的影响
目的:探讨补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠体内血小板活化信号通路中酪氨酸激酶(Src),蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及其磷酸化表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、硫酸氢氯吡格雷组(7.81 mg·kg-1)和补阳还五汤高、中、低剂量组(29.69,14.84,7.42 g·kg-1).连续灌胃ig给药14 d后,大脑中动脉线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,并神经功能缺损评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测算脑梗死体积;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测血小板活化信号通路中Src,Akt和p38 MAPK蛋白及其磷酸化表达情况.结果:与模型组比较,补阳还五汤各组及硫酸氢氯吡格雷组能明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积比(P＜0.05);补阳还五汤不同剂量明显降低Src,Akt和p38 MAPK磷酸化水平(P＜0.05);硫酸氢氯吡格雷明显降低Src和Akt磷酸化水平(P＜0.05);各组大鼠血小板Src,Akt和p38 MAPK总蛋白表达水平无统计学差异.结论:补阳还五汤预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑组织保护作用,一定程度上是发挥抗血小板活化的作用,且可能与抑制Src家族激酶,PI3K-Akt和p38 MAPK信号通路有关.
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大黄(廑)虫丸对糖尿病大鼠视网膜毛细血管PI3K-AKT信号通路相关因子的影响
目的:观察大黄(廑)虫丸对糖尿病大鼠视网膜毛细血管中PI3K-AKT信号通路相关因子表达的影响,探讨大黄(廑)虫丸对糖尿病视网膜病变(DR)微血管损伤的保护作用及机制.方法:100只雄性SPF级Wistar大鼠随机分成空白组,模型组,大黄(座)虫丸低、中、高剂量组.除空白组外各组均采用链佐脲菌素腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型.造模成功后分别于给药6、12周后取大鼠眼球进行检测.RT-PCR定量检测PI3K、AKT mRNA在视网膜组织中的表达水平.Western blot法检测各组PI3K、AKT、Caspase-9在视网膜组织中的蛋白表达量.结果:与空白组比较,模型组视网膜中PI3K、AKT mRNA表达水平下降,PI3K、AKT白相对表达量下降(P＜0.05),而Caspase-9蛋白相对表达量上升(P＜0.05);灌胃6、12周后,大黄(廑)虫丸各剂量组与模型组比较,视网膜中PI3K、AKT mRNA含量均升高,PI3K、AKT蛋白相对表达量升高(P＜0.05),Caspase-9蛋白相对表达量下降(P＜0.05),其中,大黄(廑)虫丸中剂量组PI3K、AKT mRNA表达接近空白组.结论:大黄(廑)虫丸能够上调PI3K、AKT,降低Caspase-9表达,抑制糖尿病大鼠视网膜微血管周细胞的凋亡,从而发挥其对DR微血管损伤的保护作用.
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人参皂苷Rh2抗小鼠哮喘模型气道炎性反应的作用研究
目的:探讨人参皂苷Rh2对小鼠哮喘模型气道炎性反应影响的作用机制.方法:雌性BALB/c小鼠50只随机分成5组,即正常对照组,哮喘模型组,人参皂苷Rh2低、高剂量组、地塞米松组.在末次激发24h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13含量以及肺组织中磷酸化AKT、p38MAPK及核转录因子-κB(NF-κB) p65蛋白的变化.结果:与正常对照组比较,小鼠哮喘模型组BALF中炎性细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平升高(P＜0.01);肺组织中磷酸化AKT、p38 MAPK及NF-κB p65蛋白表达水平升高(P＜0.05).与哮喘模型组比较,人参皂苷Rh2高剂量组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平和肺组织中磷酸化AKT、p38MAPK及NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).人参皂苷Rh2处理能明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,人参皂苷Rh2低、高剂量干预组之间比较,无显著差异.结论:人参皂苷Rh2对小鼠哮喘具有保护作用,其机制可能部分与抑制磷酸化的AKT、p38MAPK以及NF-κB信号通路有关.
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丹芍颗粒Ⅲ号诱导Akt磷酸化在治疗大鼠紫癜性肾炎中的作用
目的:探讨丹芍颗粒Ⅲ号对紫癜性肾炎(HSPN)大鼠的作用机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为5组:空白组,模型组,丹芍低、中、高剂量组,各5只,造模后丹芍各剂量组给予丹芍颗粒Ⅲ号治疗,取肾组织后送病理观察;BCA法进行大鼠24h尿蛋白定量;Western blot法检测大鼠肾组织中p-Akt蛋白量;RT-PCR法检测大鼠肾组织Akt mRNA的表达量;透射电子显微镜下观察肾小球基底膜及足细胞.结果:光镜下,模型组肾组织存在明显异常改变;丹芍各剂量组肾组织病变较模型组减轻.24h尿蛋白定量模型组显著高于空白组(P＜0.05);丹芍高、中、低剂量组均低于模型组(P＜0.05).与空白组比,模型组p-Akt蛋白灰度值比率显著下降(P＜0.01),与模型组比,丹芍高、中剂量组p-Akt蛋白比率均升高(P＜0.05).5组Akt mRNA表达不等,但两两之间差异无统计学意义.空白组肾小球基底膜清晰完整,足突未见融合,而模型组肾小球基底膜偶见增厚,但足突大部分融合,消失.丹芍各剂量组大鼠肾小球基底膜基本光滑均匀,足突融合较模型组明显减轻.结论:丹芍颗粒Ⅲ号诱导Akt蛋白的磷酸化,促进PI3K/Akt信号通路抑制肾小球足细胞融合、凋亡的作用,可能是发挥对大鼠HSPN治疗作用的机制.
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糖痹康对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经PI3K/AKT信号通路的影响
目的:观察中药复方糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经AKT、P-AKT、P13K-P85、P-P13KP85表达的影响.方法:SD雄性大鼠60只,随机选取10只为正常组,其余大鼠采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素(STZ)诱发2型糖尿病大鼠动物模型.造模成功后随机分为模型组,甲钴胺组,糖痹康低、中、高剂量组,每组10只.各组采取相应干预.16周后取大鼠一侧坐骨神经,采用Western blot法检测大鼠坐骨神经AKT、P-AKT、P13K-Pg5、P-P13KP85的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经组织AKT、P-AKT、P13K-P85、P-P13KP85蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,甲钴胺组及糖痹康低、中、高剂量组AKT、P-AKT、P13K-P85、P-P13KP85蛋白表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:抑制PI3K/AKT信号通路,可能是中药复方糖痹康防治DPN的作用机制之一.
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栝楼薤白半夏汤预处理保护缺血再灌注大鼠心肌PI3K/Akt通路机制
目的:研究栝楼薤白半夏汤预处理对缺血再灌注大鼠心肌组织的保护作用及其机制是否与PI3K/Akt信号通路相关.方法:40只SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、预处理组、栝楼组.模型组及栝楼组大鼠行结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注2h的方法造模,并设预处理组为对照.预处理组造模方法为短暂缺血5 min、再灌注5 min,反复3次后行缺血30min、再灌注120 min.栝楼组给予中药汤剂栝楼薤白半夏汤灌胃,其余各组灌胃同体积的生理盐水.生化自动仪检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、cTnT(肌钙蛋白T)含量;采用免疫组化法检测心肌凋亡相关蛋白bax、bcl-2表达情况,采用免疫印迹法检测心肌组织的Akt、p-Akt表达.结果:栝楼组和预处理组血清CK-MB、LDH、cTnT含量及心肌组织的bax蛋白表达低于模型组,而bcl-2、p-Akt蛋白表达高于模型组.结论:栝楼薤白半夏汤预处理对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,通过激活PI3K/Akt信号通路,与调节凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白的表达有关.
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葛根素对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用
目的:探讨葛根素(puerarin,Pue)在心肌细胞氧化应激损伤中的保护作用.方法:利用H2O2处理心肌H9c2细胞,建立氧化应激损伤模型.采用激光扫描共聚焦显微镜成像法测定线粒体膜电位,用MTT法观察Pue对细胞增殖的影响,利用Western blotting法检测Pue对GSK-3β、Akt活性的影响.结果:Pue明显减轻H2O2诱发的心肌细胞线粒体损伤,但PI3K抑制剂渥曼青霉素(wortmannin,Wort)对此作用没有影响;Pue能够增加GSK-3β(Ser9)蛋白的表达,而未增加Akt(Ser473)蛋白的表达.结论:Pue通过使GSK-3β失活,抑制mPTP的开放,从而减轻氧化应激诱发的心肌细胞损伤,而PI3 K/A kt信号传导通路并未参与此过程.
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电针对颈椎病大鼠椎间盘软骨细胞及PI3K/Akt信号通路的影响
目的:探讨电针在颈椎病大鼠模型椎间盘软骨细胞的凋亡,以及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3 K/Akt)信号传导通路中的两个蛋白PI3K、Akt的影响.方法:将40只SD大鼠按随机数字表法分成电针组、莫比可组、假手术组、模型组4组各8只,雌雄各半.电针组给予“颈夹脊”、“手三里”穴治疗25 min/d/次,14 d为1个疗程共2个疗程,中间休息2d;莫比可组用莫比可进行灌胃处理;模型组、假手术组无任何治疗只做固定,其治疗疗程同电针组.疗程结束,取大鼠颈部椎间盘组织测生化相关指标.结果:电针治疗后可见颈椎病大鼠模型软骨细胞中PI3K、P-Akt、Bcl-2的蛋白含量表达上升且幅度大,Bax的表达则出现抑制.结论:电针能延缓颈椎病大鼠椎间盘软骨细胞的凋亡过程,其机制与PI3 K/Akt信号传导通路与Bcl-2、Bax的含量可能有关.
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温阳通脉方对大鼠心肌缺血再灌注RISK通路机制研究
目的：观察温阳通脉方对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用及其可能机制。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组（IR组）、心肌缺血预适应组（IP组）、温阳通脉方组（WY组）。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤（IR）模型及心肌缺血预适应（IP）模型。检测各组大鼠血清心肌坏死标记物肌钙蛋白T （cTnT）含量，免疫组化法检测心肌bax、bcl-2蛋白表达， western-blot检测akt、 p-akt表达。结果 WY组、 IP组血清cTnT含量低于IR组（P <0.05），高于假手术组（P<0.05）。 WY组、 IP组bax表达低于IR组（P<0.05）。 WY组和IP组bcl-2、 akt蛋白表达高于IR组（P<0.05）。 WY和IP组血清cT-nT含量及心肌bcl-2、 bax、 akt表达比较无统计学差异（P>0.05）。结论温阳通脉方预处理具有心肌保护作用，其保护机制可能与激活akt通路，上调bcl-2，抑制bax蛋白表达有关。
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桦木酮酸对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞周期及相关蛋白表达的影响
目的:研究桦木酮酸对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞周期及相关蛋白表达的影响.方法:采用流式细胞仪检测H22肿瘤细胞细胞周期的变化以及P53蛋白的表达变化;免疫组化法检测H22细胞中的PI3K和AKT蛋白.结果:随桦木酮酸剂量的增加,H22细胞S期和G2期的含量逐渐增多且P53蛋白的表达随之升高,而PI3K和AKT蛋白的表达降低.结论:桦木酮酸可能上调P53的活性,抑制PI3K和AKT蛋白,从而抑制细胞的存活通路促凋亡.
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长梗秦艽酮通过调节Akt和ERK1/2通路抑制人肝癌BEL-7402细胞生长
目的:研究长梗秦艽酮抑制人肝癌BEL-7402细胞生长与Akt和ERK1/2通路的关系.方法:采用MTT法观察BEL-7402细胞活性,Western blot蛋白质印记法检测Akt和ERK1/2磷酸化水平,流式细胞术分析细胞周期.结果:长梗秦艽酮能够抑制人肝癌BEL-7402细胞生长,诱导S期细胞周期阻滞,激活Akt和ERK1/2磷酸化,并凡Akt和ERK1/2抑制剂能够拮抗长梗秦艽酮对BEL-7402细胞的生长抑制和S期阻滞诱导作用.结论:长梗秦艽酮可以通过调节Akt和ERK1/2通路诱导肿瘤细胞周期阻滞,从而抑制肿瘤细胞生长.
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补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株移植瘤裸鼠脾、胃和肺中PI3K和AKT表达的影响
目的:探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株移植瘤裸鼠脾、胃、肺中PI3K/AKT信号通路的影响.方法:60只裸鼠随机分为:空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组、补中益气汤低、中、高剂量组.分别给予相应干预后,测量移植瘤体积,计算抑瘤率.应用免疫组化,Real-time PCR方法检测裸鼠脾、胃、肺组织中PI3K,AKT蛋白和基因的表达水平.结果:不同浓度的补中益气汤联合顺铂能抑制移植瘤的生长,其中以中、高剂量组的抑制作用强;荷瘤裸鼠的脾、胃、肺中PI3K,AKT蛋白和基因的表达均升高,以荷瘤对照组升高显著,随着应用顺铂和补中益气汤浓度的增加,PI3K,AKT的表达逐渐降低,在脾、胃组织中与荷瘤对照组比较有统计学差异(P＜0.05),补中益气汤中、高剂量组与顺铂组比较有统计学差异(P＜0.05),与空白对照组比较无统计学差异.结论:在肺腺癌移植瘤裸鼠中,脾、胃、肺组织中PI3K,AKT的蛋白和基因的表达增加,顺铂和补中益气汤可以降低PI3K,AKT表达,其降低程度与补中益气汤浓度可能存在一定关系;顺铂联合补中益气汤可降低脾、胃、肺中PI3K和AKT蛋白和基因的表达而使该通路接近正常,从而保护脾、胃、肺的功能,PI3K/AKT信号通路上可能有补中益气汤作用的靶点.
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七叶皂苷钠通过抑制AKT, ERK上游信号SRC活性诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡
探讨七叶皂苷钠对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制.运用MTT法检测七叶皂苷钠对MCF7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态学变化;DAPI染色后在荧光显微镜下检测细胞核变化;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白(PARP,cleaved caspase-8,pro-caspase-3)和细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)及其共同上游激酶SRC的磷酸化变化情况.结果显示,不同浓度七叶皂苷钠作用于乳腺癌MCF-7细胞后,以剂量依赖方式抑制MCF-7细胞增殖;诱导细胞凋亡(典型的凋亡形态学变化、细胞核改变和细胞凋亡率显著增加);细胞凋亡相关蛋白PARP切割增加,cleaved caspase-8表达增加,pro-caspase-3表达减少进一步验证了七叶皂苷钠的凋亡诱导作用;七叶皂苷钠显著抑制细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)的磷酸化,其共同上游激酶SRC的活化亦显著下降.结果表明,七叶皂苷钠通过抑制SRC的活化,阻断信号向下游信号分子AKT,ERK的传递,抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,诱导细胞凋亡.
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三七皂苷R1通过雌激素受体调节ATF6/Akt信号通路减轻OGD/R所导致的神经元损伤
三七皂苷R1(notoginsenoside R1,NGR1)是传统中药三七的重要活性成分,也是雌激素受体激动剂.因其蕴含抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种 功能,故在疾病治疗中被普遍运用.为阐明NGR1在缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的潜在神经保护作用机制,该研究采用原代皮层神经元建立氧糖剥夺再灌 注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型,并且给予NGR1及雌激 素受体阻断剂ICI-182780处理,然后分别采用MTT,LDH和Hochest 33342染色检测神经元存活率、细胞膜完整性和凋亡,Western blot检测抗凋亡通路ATF6α,p-Akt,Akt蛋白及凋亡相关蛋 白Bax,Cleaved Caspase-3的表达.结果显示:神经元在OGD/R损伤后,其细胞存活率明显下降(P<0.05)、细胞膜相对完整性显著降低(P<0.05)、细胞凋亡加重(P<0.05),ATF6α,p-Akt表达下调且促凋亡蛋白Bax,Cleaved Caspase-3表达增加(P<0.05).NGR1处理后能够减轻OGD/R造成的神经元细胞损伤,上调ATF6α表达、促进Akt磷酸化并 且减少Bax,Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),但是,NGR1的这些神经保护 性作用能够被雌激素受体阻断剂ICI-182780阻断.研究结果证实:NGR1在缺血缺氧情况下 对神经元具有保护性作用,该保护作用可能是NGR1通过雌激素受体调控ATF6/Akt信号通路实 现的.
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红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究Ⅴ——调节糖代谢紊乱作用机制研究
目的:探讨红景天、蛹虫草、大黄配伍(中药复方FF16)改善IRF小鼠葡萄糖代谢紊乱的作用机制.高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠形成胰岛素抵抗合并糖耐量低减的IRF小鼠,分为模型对照组IRF、罗格列酮(Rosi)组和FF16组.以禁食血糖水平测定、腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)评价动物的糖代谢状态；采用胰岛素耐量试验(ITT)、血胰岛素测定和稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价机体的胰岛素敏感性.应用Western blot方法,检测小鼠肝脏胰岛素信号通路相关蛋白Akt,p-Akt,糖代谢相关蛋白GSK3β,p-GSK3β的表达.结果显示,中药复方FF16能够改善IRF小鼠的糖代谢紊乱,使葡萄糖耐量试验AUCIIPGTT较IRF组降低22.3％；能显著增加IRF小鼠的胰岛素敏感性,使胰岛素耐量试验AUCITT降低22.1％,HOMA-IR指数降低49.5％.FF16使IRF小鼠肝脏Akt磷酸化水平升高116.4％,GSK3β磷酸化水平升高24.9％.推测中药复方FF16可通过增强IRF小鼠肝脏糖原合成,改善机体糖代谢紊乱状态.
