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脑卒中与一氧化氮合成酶基因相关性及预防措施的研究
关于脑卒中基因水平的研究近年已经受到广泛的关注,人eNOs第7外显子G894T突变使编码的第298位谷氨酸(Glu)被天冬氨酸(Asp)所取代,使eNOs发生构象改变,从而引起eNOs活性降低,NO生成减少,从而减少了对脑血流的调节和神经细胞的保护作用,促进了脑卒中的发生[1].
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痰瘀通胶囊含药血清对HUVEC增殖及eNOS蛋白表达的影响
目的 观察痰瘀通胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化及调脂的可能机制.方法 用SRB法检测痰瘀通胶囊含药血清对内皮细胞增殖的变化;用Western Blot法检测其对内皮细胞eNOS蛋白表达的变化.结果 痰瘀通胶囊含药血清能促进人脐静脉内皮细胞增殖,上调eNOS的蛋白表达水平.结论 痰瘀通胶囊含药血清通过上调eNOS的蛋白表达水平,促进内皮细胞增殖,具有保护血管内皮细胞的功能,从而达到抗动脉粥样硬化和防治高脂血症的作用.
关键词： 痰瘀通胶囊 内皮细胞 高脂血症 eNOs Western blot -
葛根素对心肌梗死大鼠心肌iNOS,eNOS蛋白表达及AKT磷酸化水平的影响
目的:探讨葛根素诱导血管生成的分子机制.方法:通过大鼠心肌梗死动物模型,运用Western-blot的方法检测心肌iNOS、eNOS,AKT,p-AKT的蛋白表达.结果:葛根素120mg/kg腹腔注射四周能不同程度增加心肌梗死大鼠缺血区域和非缺血区域心肌eNOS蛋白表达以及AKT磷酸化水平,而对iNOS蛋白表达没有明显的影响.结论:葛根素诱导血管生成作用的分子机制与其促进AKT磷酸化水平,从而激活eNOS,使NO生成增加有关.
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中药对内皮型一氧化氮合酶转录的调控作用
对内皮型一氧化氮合酶( endothelial nitric oxide synthase,eNOS)转录调控相关文献整理和分析,着重介绍中药的心脑血管防治作用的药理机制.从PubMed数据库和中国知网数据库检索出相关文献,结合《中医药学高级丛书-中药药理学》、《中药现代研究与应用》和《新中药药理与临床应用》中对相关中药的介绍分析文献.简述了eNOS基因转录调控的机制包括表观遗传调控、相关转录因子、27 nt小RNA负反馈调控、mRNA稳定性等；总结了能调控eNOS基因转录的中药成分和复方制剂及其药理作用机制.结合中药治疗慢性疾病的优势,提出从分子水平(如表观遗传特征的缓慢变化)研究中药防治心脑血管疾病的药理机制的方法.
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松龄血脉康胶囊对自发性高血压大鼠内皮一氧化氮合酶和内皮素表达的影响
目的:探讨松龄血脉康胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响及对组织中eNOS和ET在mRNA水平的调控.方法:SHR大鼠24只,平衡血压2周后随机分为3组(空白组、中药组、西药组),每组8只.中药组以松龄血肺康胶囊20mg/(kg·d)灌服;西药组以雷米普利1mg/(kg·d)灌服,空白组给予同体积的生理盐水,连续4周.采用尾动脉无创测压法检测血压,一周一次.用药四周后,腹主动脉取血处死,冰上取肝脏,荧光实时定量PCR技术检测肝脏eNOS和ET mRNA的表达水平.结果:松龄血脉康胶囊给药4周后,可有效抑制血压上升,调控血压使血压有逐渐下降的趋势;显著上调组织中eNOSmRNA的表达,下调组织中ET mRNA的表达.结论:松龄血脉康胶囊能调控组织中eNOS和ET在mRNA水平的表达,参与对血压的调节.
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冰片对梓醇及葛根素透过局灶性脑缺血模型大鼠血脑屏障作用的研究
该研究通过观察冰片是否具有促进梓醇、葛根素透过局灶性脑缺血模型大鼠血脑屏障的作用,及其是否与激活β2肾上腺素受体-eNOS-NO途径有关,从医学生物学作用角度阐释冰片“通窍引经”的传统功效及其机制.该研究采用大鼠大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血模型,5d后神经功能障碍评分达5分者为造模成功.将模型成功大鼠随机分为7组,用药前经统计学检验各组间无显著性差异后,灌服给予相应药物[梓醇45 mg · kg-1、葛根素200 mg·kg-1、冰片200 mg·kg-1、布他沙明(Butoxamine,BTX)1.5 mg· kg-1]:模型组(M组,溶剂)、梓葛组(ZG组)、梓葛冰组(ZGB组)、梓冰组(ZB组)、葛冰组(GB组)、β2受体阻断剂+梓葛组(BTX+ ZG组)、β2受体阻断剂+梓葛冰组(BTX+ ZGB组),另设假手术组(S组,溶剂),每组10只.各组给药10 min后取材,采用UPLC-MS测定脑脊液中梓醇和葛根素含量,Western blot法测定脑组织中eNOS含量、β2受体表达,Griess法检测脑组织中NO含量.结果显示,与假手术组相比,造模大鼠神经功能得分均值均在5分以上,具有显著差异(P＜0.05),显示造模成功.除假手术组外,经单因素方差分析,给药前各组之间的神经功能评分均无显著性差异.给药后与模型组相比,ZG组梓醇质量分数为26.673 μg·L-1,葛根素含量在检测限以下,脑组织中eNOS表达和NO含量、β2受体表达没有显著差异;与ZG组相比,ZGB组、ZB组、GB组脑脊液中梓醇质量分数增加至40～43 μg·L-1、葛根素质量分数增加至72～ 75 μg·L-1,脑组织中eNOS表达和NO含量、β2受体表达均有显著升高(P＜0.05),显示冰片有促进作用;与ZG组相比,BTX+ ZG组大鼠脑脊液中梓醇质量分数为21.401 μg·L-1,葛根素检测不出,2组无显著差异,显示BTX无抑制作用;与ZGB组相比,BTX+ ZGB组脑脊液中梓醇质量分数32.826 μg·L-1、葛根素质量分数47.820 μg·L-1,脑组织中eNOS表达和NO含量均有显著下降(P＜0.05),显示BTX有抑制作用.该研究说明冰片能够显著促进梓醇、葛根素透过局灶性脑缺血大鼠血脑屏障,其作用可被β2肾上腺素受体阻断剂布他沙明所阻断,其机制可能与上调β2肾上腺素受体从而促进eNOS表达,进而使NO含量升高有关.
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同型半胱氨酸、hs-CRP、D-二聚体和eNOS在冠心病患者血液中的检测意义
目的 探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、超敏C-反应蛋白(highly sensitive C-reactive protein,hs-CRP)、D-二聚体(D-Dimer,D-D)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)在冠心病患者血液中的表达及检测意义.方法 选取2015年10月至2017年2月本院收治的经冠状动脉造影确诊为冠心病的患者100例为观察组,同时选取同期本院健康体检者50例为对照组.收集受试者血液并检测血液中Hcy、hs-CRP、D-D和eNOS的水平.结果 与对照组相比,观察组患者血液中Hcy、hs-CRP和D-D显著上升,eNOS水平显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05).观察组患者随着疾病程度的加重,Hcy、hs-CRP和D-D逐渐上升,eNOS水平逐步下降,差异具有统计学意义(P<0.05).患者血液同型半胱氨酸、hs-CRP、D-Dimer和eNOS联合检出率显著高于各指标单独检出率.结论 Hcy、hs-CRP、D-D和eNOS在冠心病患者的血清中呈异常表达状态;且Hcy、hs-CRP、D-D和eNOS联合检测及实时监测对于诊断冠心病具有重要的临床意义.
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同型半胱氨酸抑制人脐静脉内皮细胞eNOS活性
目的 研究不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)作用不同的时间对人脐静脉内皮细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响机制.方法 取2～3代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与不同浓度Hcy孵育以及孵育不同时间.用Western blot和实时荧光定量RT-PCR法检测热休克蛋白90(HSP90)、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达,小凹蛋白(Caveolin-1)、eNOS、P-eNOS蛋白及mRNA的表达,二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)mRNA表达.结果 与静息和激活状态下的对照组相比,在Hcy作用下,Caveolin-1蛋白的表达上调(P＜0.05),而Akt蛋白的表达下调(P＜0.05),且均呈浓度、时间依赖性.eNOS蛋白的表达无明显改变.Hcy对其他检测指标无影响.结论 Hcy引起的eNOS活性降低与增强Caveolin-1蛋白表达使其与eNOS藕联增加,减少HSP90、Akt和eNOS复合物的形成,进而抑制了eNOS的活性有关.
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胸腺素β4通过提高Akt磷酸化促进局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质eNOS和CD31表达
目的 探讨胸腺素β4(Tβ4)对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质血管再生影响及其机制.方法 用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型.将大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(IR组)、Tβ4组(IRT组)、Tβ4+LY294002组(IRTL组)、0.9％氯化钠注射液组(IRN组),缺血2h后把IR、IRN和IRT组分为3和7d两亚组.Western blot检测Akt磷酸化水平和eNOS蛋白表达;免疫组化检测Tβ4和CD31蛋白表达;荧光定量PCR检测eNOS、SDF-1及CXCR4mRNA表达;Longa法检测神经功能.结果 与IRN组相比,IRT 3 d Tβ4蛋白表达显著增多(P＜0.o1);与IRN组比较,IRT 3和7 d Akt磷酸化水平和eNOS蛋白显著增高(P＜0.05),但IRTL组与其比较p-Akt和eNOS蛋白表达显著减少(P＜0.01);与IRN组比较,IRT 3和7 d eNOS、SDF-1和CXCR4mRNA表达显著升高(P＜0.05);与IRN组比较,IRT 3和7d组微血管密度显著增高(P＜0.05),大鼠神经功能缺损在第7天改善明显(P＜0.05).结论 Tβ4可能通过提高局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质Akt磷酸化水平、eNOS基因和蛋白的表达,促进大鼠大脑皮质缺血半暗带血管再生和神经功能恢复.
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岩藻多糖抑制小鼠心肌梗死后的心脏重构
目的 观察裙带菜提取物岩藻多糖对小鼠心肌梗死后心脏重构的影响.方法 将小鼠随机分为假手术组、心肌梗死模型组(采用冠状动脉左前降支结扎建立该模型)、低浓度或高浓度岩藻多糖处理组(心肌梗死术后每日灌胃给予200或500 mg/kg岩藻多糖处理).每日观察小鼠死亡情况,3周后采用超声心动图检测心功能,病理染色检测心肌梗死面积和,用RT-PCR检测心肌SOD、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及炎性因子TNFα、IL-1β和TGFβmRNA表达,Western blot检测eNOS信号通路相关蛋白.结果 岩藻多糖能明显改善心肌梗死小鼠的心功能(P＜0.05)、减少梗死面积(P＜0.05),提高生存率(P＜0.05).与对照组相比,心肌iNOS和炎性因子TNFα、IL-1β及TGFβ mRNA表达明显下降(P＜0.05),SOD mRNA的表达明显增高(P＜0.05);岩藻多糖能激活eNOS信号通路.结论 岩藻多糖能减轻小鼠心肌梗死,其作用机制可能与其抗炎、抗氧化及激活eNOS信号通路有关.
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电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响
目的 探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型.将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组.缺血2h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7d3个时间点.取双侧“合谷”穴(LI4)为电针刺激穴位.免疫组化法检测eNOS蛋白的表达；反转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达；Western blot法检测eNOS、MMP-9蛋白的表达.结果与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达显著增加(P＜0.01)；与模型组比较,电针组各时间点eNOS蛋白及mRNA明显增加(P＜0.01).eNOS蛋白表达于再灌注3d达高峰,假手术组表达为0.4291±0.0173,模型组再灌注3 d表达为0.7374 *0.0252,电针组表达为0.8536±0.0212,各组比较有显著差异(P＜0.01).与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达显著增加(P＜0.01)；与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1d显著低于模型组(P＜0.01),再灌注3、7d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组(P＜0.01).结论 电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达.
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氧化低密度脂蛋白下调血管内皮细胞表达Rictor
目的 探讨氧化低密度脂蛋白对培养血管内皮细胞表达基因Rictor的影响.方法 分离并培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度(10、20、40和80 mg/L)氧化低密度脂蛋白作用24 h后,用RT-PCR及Western blot检测Rictor的表达情况,并检测转染Rictor后,蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化的变化,用硝酸还原酶还原法测定NO释放量.结果 氧化低密度脂蛋白显著降低Rictor的mRNA及蛋白的表达量(P＜0.01),使Rictor-mTOR复合物形成减少.转染Rictor后,不仅Rictor表达增加而且使蛋白激酶Akt及eNOS磷酸化增加；内皮细胞NO释放量增多(P＜0.05).结论 影响内皮细胞表达Rictor,是氧化低密度脂蛋白诱发血管内皮细胞功能不良的重要机制之一.
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胚胎小鼠肾脏发育过程中eNOS表达与细胞凋亡的关系
目的 观察胚胎小鼠不同发育阶段肾组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达和细胞凋亡的特征,探讨eNOS与细胞凋亡的关系.方法 应用原位末端标记(TUNEL)法检测胚胎小鼠肾组织中的细胞凋亡.免疫组织化学方法和体视学方法检测eNOS的表达.结果 不同发育阶段的肾组织中均可见到TUNEL染色阳性的细胞,凋亡指数从E14d开始增高,E18d达到高峰.eNOS表达于皮质生肾区、近端小管和远端小管,表达量随着发育逐渐增加.结论 细胞凋亡扣eNOS的表达在小鼠肾脏胚胎发育过程中具有重要的作用,细胞凋亡与eNOS的表达有一定的相关性.
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葡萄糖降解产物对内皮细胞AQP1及eNOS表达影响研究
目的 研究腹膜透析液毒性成份之一-葡萄糖降解产物(GDPs)对内皮细胞水孔蛋白1(AQP1)及eNOS表达影响.方法 选用两种相关的GDPs-2-糠醛(Fur)及甲基乙二醛(MGly),采用与传统腹膜透析液浓度相当的GDPs刺激内皮细胞系t End.1 24h(Fur 0.8 uM; MGIy 35 uM),以培养液DMEM作为对照组,研究GDPs对内皮细胞AQP1及eNOS表达影响.并进一步通过时间依赖性及浓度依赖性分析研究GDPs对AQP1mRNA表达影响.使用RT-PCR检测AQP1及eNOS基因表达.使用Western blot检测AQP1蛋白表达. 结果 内皮细胞系t End.1经GDPs(Fur 0.8 uM;MGIy 35 uM)刺激24h后,Fur及MGly显著上调内皮细胞eNOSmRNA表达(P<0.05).GDPs对AQP1 mRNA表达有降低的趋势但无统计学意义.时间依赖性及浓度依赖性研究同样提示GDPs对AQP1 mRNA表达有下降的趋势.蛋白质印迹分析(Western blot)检测有相似的结果 .结论 GDPs促进内皮细胞eNOS的表达但并不促进AQP1的表达,GDPs的这种作用可能参与长期腹膜透析过程中腹膜血管新生及超滤衰竭的发生.
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槲皮素对软脂酸诱导的EA.hy926细胞eNOS合成的影响
目的 研究槲皮素对软脂酸诱导EA.hy926细胞eNOS合成的影响.方法 体外培养EA.hy926细胞,分正常对照组、模型组、槲皮素组、二甲双胍组,采用RT-PCR法及免疫组化法,测定各组细胞eNOS mRNA和蛋白表达.结果 模型组细胞eNOS mRNA和蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.05),药物组与模型组相比eNOS mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05),药物组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 槲皮素对软脂酸诱导EA.hy926细胞eNOS合成具有显著促进作用.
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胶原诱导性关节炎小鼠存在血管内皮功能失调——类风湿关节炎加速动脉粥样硬化的新证据
目的 类风湿关节炎(RA)患者易患动脉粥样硬化(AS),而RA是否会造成内皮功能障碍,并通过该途径触发或者加速AS是我们的研究重点.方法 观察胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠及同期对照小鼠的主动脉对于乙酰胆碱及硝普纳诱导的血管舒张率并进行对比,及CIA与对照小鼠血管组织iNOS及eNOS表达水平的检测.结果 对照小鼠的主动脉组织中,对于乙酰胆碱的诱导,血管舒张率为88.70±22.90％,CIA显著下降为53.90±18.40％ (p＜0.01).对于硝普纳的诱导则未见差异.CIA小鼠血管组织中eNOS表达下调,iNOS表达升高.结论 CIA小鼠存在内皮细胞功能障碍且与关节炎严重程度呈正相关.
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辛伐他汀通过磷酸化作用增强内皮一氧化氮合酶活性
目的 建立含人内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因的人胎肾细胞株,研究他汀类药物对eNOS活性的影响.方法 用脂质体转染的方法将含有eNOS基因的质粒pcDNA3.l-eNOS导入人胎肾细胞(293细胞),利用G418筛选二次,以免疫印迹法鉴定并筛选出稳定表达eNOS的阳性克隆.将辛伐他汀(10 μmol/L)加入eNOS阳性细胞系培养2h后,收获细胞并用同位素二步色谱法检测eNOS的活性,同时用Western Blot蛋白检测eNOS、磷酸化的eNOS表达水平和细胞内信号分子Akt、AMPK水平以探讨辛伐他汀调节eNOS活性的机制.结果 Western Blot显示经转染pcDNA3.l-eNOS并筛选后的后的293细胞20%的克隆能稳定有效表达eNOS蛋白;辛伐他汀处理2 h后eNOS活性明显升高(P＜0.05).结论 成功建立了具有G418抗性的含pcDNA3.l-eNOS基因的人胎肾细胞株,并且证明辛伐他汀可通过调节eNOS的活性来调节NO的生成,这可能为心血管疾病的治疗提高一种新的思路.
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胰岛素对高糖状态下血管内皮细胞凋亡、eNOS、bcl-xL、bax表达的影响
高浓度葡萄糖使人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡增加,bcl-xL和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达减少;加入生理浓度或高浓度Ins后,HUVEC凋亡显著减少,bcl-xL、bax和eNOS表达增加;HUVEC凋亡与eNOS、bcl-xL、bax表达均呈负相关(r=-0.85,r=-0.81).表明胰岛素可以抑制高糖引起的HUVEC凋亡,该作用可能与bcl-xL、bax和eNOS表达增加有关.
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他汀类药物治疗肝硬化研究进展
他汀类药物是临床上应用为广泛的可降低胆固醇水平、控制其发展的一类药物,目前广泛应用于高血脂的治疗.随着他汀类药物临床多效性研究的不断进展,近年来研究发现他汀类药物对于缓解及治疗肝硬化并发症,具有一定的效果.本文综述了近年来他汀类药物在肝硬化治疗研究的文献,讨论此类药物在肝硬化及其并发症治疗中的安全性及应用前景,具有较好的临床指导意义.
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子癎前期患者胎盘内源性一氧化氮合酶抑制物水解酶的表达
子癎前期(pre-eclampsia)是妊娠期特有的疾病,严重威胁母婴安全和健康.但其病因及发病机理还有许多值得探讨之处,近年关注到内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的抑制物及抑制物水解酶在子癎前期发病中的作用.
