首页 > 文献资料
-
PML/RARα的异常转录调控机制
t(15;17)(q22;q12)是急性髓系白血病中常见的染色体易位之一,这种易位产生PML/RARα融合蛋白,PML/RARα可作用多种转录因子,从而影响细胞的增殖,分化,凋亡;另外,PML/RARα也能直接作用与某些基因,影响它们的转录调控,综上,通过这些作用我们对PML/RARα这一异常融合蛋白已知的作用机制作一综述.
-
中药对内皮型一氧化氮合酶转录的调控作用
对内皮型一氧化氮合酶( endothelial nitric oxide synthase,eNOS)转录调控相关文献整理和分析,着重介绍中药的心脑血管防治作用的药理机制.从PubMed数据库和中国知网数据库检索出相关文献,结合《中医药学高级丛书-中药药理学》、《中药现代研究与应用》和《新中药药理与临床应用》中对相关中药的介绍分析文献.简述了eNOS基因转录调控的机制包括表观遗传调控、相关转录因子、27 nt小RNA负反馈调控、mRNA稳定性等；总结了能调控eNOS基因转录的中药成分和复方制剂及其药理作用机制.结合中药治疗慢性疾病的优势,提出从分子水平(如表观遗传特征的缓慢变化)研究中药防治心脑血管疾病的药理机制的方法.
-
吴茱萸汤及其各组分对TPH2启动子活性的影响
目的:利用分子生物技术构建色氨酸羟化酶(TPH2)启动子调控红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)转基因细胞,以筛选吴茱萸汤及其各组成药物对TPH2启动子的调控活性,探讨其治疗偏头痛可能的分子靶点.方法:构建TPH2启动子调控红色荧光蛋白表达的转基因细胞系,观察统计不同给药组中细胞荧光强度的变化及发光细胞数量的变化.结果:通过荧光细胞计数发现吴茱萸汤、吴茱萸、生姜、大枣水提物不同透析部分在不同浓度上对TPH2启动子转录活性具有不同的调控作用.结论:吴茱萸汤治疗偏头痛的可能分子靶点与激活TPH2表达有关.TPH2启动子调控红色荧光蛋白表达细胞模型可用于对以此为靶点的药物筛选和活性评价.
-
IgG启动子探针对中药注射剂进行临床前安全性评价的研究
目的:利用分子生物技术构建免疫球蛋白G(IgG)启动子调控绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因细胞,尝试以IgG基因表达起始为标准在临床前对中药注射剂进行其诱导Ⅱ型变态反应的可能性预测.方法:构建IgG启动子调控绿色荧光蛋白表达的转基因细胞系,用葛根素,KCl,聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)对该系统进行测试,并尝试用该系统对不同批次鱼腥草注射液进行筛选评价,观察统计各给药组中发光细胞数量的变化.结果:非离子表面活性剂吐温80对IgG表达启动过程有抑制作用,葛根素能显著激活IgG基因的表达,KCl对IgG表达无作用.所测批次鱼腥草注射液对IgG表达没有激活作用.结论:IgG启动子调控绿色荧光蛋白表达细胞模型能在IgG表达层次评价药物致敏性,吐温80能在转录水平上抑制IgG的表达,所测批次鱼腥草注射液在IgG转录层次上无诱导Ⅱ型变态反应活性.
-
马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本驴强毒株长末端重复序列(LTR)的启动子活性比较
将马传染性贫血病毒驴强毒(donkey-adapted equine infectious anemia virus,D-A EIAV)、马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒(donkey leukocyte attenuated EIAV,DLA EIAV)及EIAV Wyoming株的全长长末端重复序列(LTR)分别克隆到报告基因载体pCAT-Basic vector中,获得重组质粒p-D-A-LTR-CAT、p-DLA-LTR-CAT及p-Wyo-LTR-CAT.将这3个重组质粒分别体外转染EIAV阴性健康驴的白细胞,比较这三者LTR启动报告基因CAT表达的基础活性和在tat-pcDNA3共转染条件下激活活性的差异.结果表明:在驴白细胞中,DLA EIAV LTR启动CAT表达的活性略高于D-A EIAV LTR;而与EIAV Wyoming株LTR比较,DLA EIAV与D-A EIAV二者LTR启动CAT表达的活性都较低.在有共转染重组表达质粒tat-pcDNA3条件下,D-A EIAV、DLA EIAV及EIAV Wyoming株LTR起始CAT表达的活性都得到提高,分别提高了4.8倍、6.0倍和3.2倍.上述结果提示,LTR可能是体现DLA EIAV驴白细胞适应性的因素,不一定是影响其毒力减弱的根本原因.
-
PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨
目的 检测PGC-1β在人肝癌细胞(Hep G2)和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达.方法 在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统检测过表达PGC-1β时大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化.同时构建了5'端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件.分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响.构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用.结果 在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达.分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显.在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录.当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用.结论 在Hep G2和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的.
-
PGC1α协同PPARγ调节CIDEC基因在小鼠脂肪细胞系中表达
目的 鉴定CIDEC的表达能够被PPARγ和PGC1α共激活,检测其在脂肪代谢中的重要调控作用.方法 构建5删切和顺式原件突变的启动子,运用HepG2细胞中双荧光报告基因实验检测PPARγ和PGC1α对CIDEC的共激活作用并确定顺式作用元件.运用PPARγ特异激动剂piogiltazone刺激3T3-L1细胞检测CIDEC的mRNA水平.在3T3-L1细胞系中过表达CIDEC,检测脂肪合成及能量代谢相关基因的mRNA水平.通过腺病毒感染在小鼠肝原代细胞中过表达CIDEC,检测肝脏细胞中脂肪变化.结果 PPARγ和PGC1α能够显著激活CIDEC的启动子.过表达CIDEC后,脂肪细胞中脂类合成相关基因FAS上调(3.47±0.17)倍(P<0.05),ACC上调(3.95±0.57)倍(P<0.05),在肝原代细胞中CIDEC促进脂滴的生成.结论 CIDEC过表达能够被PPARγ促进并且被PGC1α共激活,在体内起到促进脂肪积累的作用.
-
X-盒结合蛋白1的生理及病理生理学作用
X-盒结合蛋白1(XBP-1)是未折叠蛋白反应的重要组分,有剪接型XBP-1(XBP-1S)和非剪接型XBP-1(XBP-1U)两种形式.当细胞处于内质网应激状态时,XBP-1由活化转录因子6(ATF6)诱导,经IRE1α非传统剪接,转录有功能的XBP-1S,活化未折叠蛋白反应.XBP-1是一种重要的转录因子,对细胞生长和分化具有重要调控 作用,并与人类多种疾病的发生和发展相关.
-
ATF-2在肿瘤发生中的作用
激活转录因子-2(activating transcription factor-2,ATF-2)属于碱性亮氨酸拉链bZIP转录因子家族成员,应激刺激下激酶p38/JNK直接磷酸化ATF-2 Thr69和Thr71位点而使ATF-2转录活性被激活,磷酸化的ATF-2形成同二聚体或异二聚体,结合特定DNA序列,调控靶基因表达.ATF-2调控的参与肿瘤发生的靶基因有细胞周期因子D1和A、c-Jun等.在不同类型肿瘤发生中,ATF-2兼具致癌和抑癌的双重功能,除了与不同研究采用的组织/细胞类型相关外,ATF-2的细胞内定位可能是决定其发挥何种作用的关键,ATF-2的细胞内定位能力受蛋白激酶PKCε的调控.
-
转录因子KLF2在血管内皮中的功能与调控研究进展
KLF样转录因子(krüppel-like transcription factors)参与多种基因表达的转录调控过程.KLF家族到目前共发现17个成员,分别命名为KLF1~KLF17.KLF2作为该家族中重要的成员,参与T细胞分化和脂肪分化等重要过程.近年来研究证实KLF2在保护内皮细胞功能方面发挥重要的作用,已经成为心血管领域中研究的热点之一.本文拟KLF2的特性、调控机制及在血管内皮中的功能研究进展作一综述.
关键词： Krüppel样转录因子 转录调控 血管内皮 -
多功能核蛋白NONO研究进展
NONO(non-POU-domain-containing octamer binding protein)是一种多功能的核蛋白质,作为人类剪切蛋白家族的一员,NONO参与多种生物学事件,如基因转录调控、前体RNA剪接、DNA解螺旋和配对、缺陷RNA核滞留、DNA损伤的修复以及肿瘤发生等过程.尽管NONO参与胞内多种生物过程,但目前,针对NONO生物功能的研究仍处于初级阶段,其相关的临床研究更少.本文就NONO基因的结构及功能研究进展予以综述.
关键词： NONO/p54nrb 转录调控 剪切 -
真核转录抑制因子调控机制的研究进展
转录调控是分子生物学领域的研究热点,其中转录抑制因子通过与特异蛋白因子或染色体部位结合来阻碍基因的活化,对转录进行负调控.按照作用距离或抑制作用的直接与间接性来划分其调控机制,是过去比较主流的分类标准.但人们逐渐发现,许多转录抑制因子很难用这种标准进行确切的分类,于是又提出了一种新的、更加科学的分类方法:按照抑制作用是通过与基本转录复合物直接结合来发挥作用,通过转录激活因子间的相互作用来实现,还是通过改变染色体结构来完成,将转录抑制因子分为三类.
-
组蛋白修饰酶对基因转录的调控
基因在转录过程中,需招募多种组蛋白修饰酶来对组蛋白进行化学修饰,这些化学修饰包括:组蛋白的甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化和SUMO化等.大多数组蛋白修饰酶能与不同的转录因子形成复合物,并引起组蛋白和DNA之间相互作用的改变,从而调控基因的转录.本文总结了各种组蛋白修饰酶复合物的组成、结构及功能方面的研究进展.
-
环RNA研究概况
在1976年就已经发现 RNA 可以具有环形形式。但是长期以来对环形 RNA（circRNAs）主要是作为一些特例加以研究。随着高通量 RNA 测序技术以及生物信息学的发展，近几年的研究发现circRNAs 在真核生物中普遍存在，并且具有一定的保守性和细胞特异性。越来越多的证据指明circRNAs不是剪切噪音，而是具有一定生物学功能，可能与一系列调控甚至疾病的发生和发展相关。
-
病毒预防靠病毒
异源基因转导细胞的重组病毒运载技术在各种基础与应用研究中已有几十年的历程.Darnell和同事利用重组腺病毒研究白蛋白启动子转录调控,属于早期应用实例之一[1].随着小鼠复制缺陷性反转录病毒问世,基因治疗的实验室研究进入了飞跃时期[2].该领域的研究热点为寻找各种DNA/RNA病毒载体或非病毒性载体[3-5].不久前,载体技术的思路已被引入基因疫苗的开发工作[6-10],这正是本系列综述所要涉及的主题.
-
乙型肝炎病毒转录调控的研究进展
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)基因组由一个约3.2 kb的环形DNA组成,包含了C、P、S和X 4个基因开放读码框、4个启动子和2个增强子,基因组开放读码框相互重叠,所有转录调控元件均隐含在基因编码序列中,病毒DNA序列达到高效重复利用.而HBV新的调控元件和正链转录体,以及转录后调节元件的发现,则为以后的研究提供了新的思路.
-
SIRT1启动子表达调控载体的构建和活性分析及AML1-ETO对其转录活性的影响
目的:本研究旨在分析AML1-ETO阳性白血病中SIRT1基因的表达及调控机理,寻找SIRT1核心启动子区域.方法:利用实时定量PCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株和白血病临床样本中研究SIRT1基因的表达情况;构建SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,分析其在293T细胞中的活性.采用PCR方法从含有SIRT1基因转录起始位点5'区的基因片段中扩增SIRT1基因核心启动子序列,插入经Xho Ⅰ和HindⅢ双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-Basic,采用阳离子脂质体SuperFect包裹荧光素酶报告重组子转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1-ETO对SIRT1启动子转录活性的调节作用.结果:AML1-ETO的表达与SIRT1的表达呈正相关;成功构建了6种SIRT1基因序列的荧光素酶报告重组子,并通过了酶切以及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告重组子在293T细胞中的荧光素酶活性明显高于阴性对照,明确了SIRT1基因核心启动子位置;研究结果证明融合蛋白AML1-ETO可以正向调控SIRT1启动子活性,SIRT1对AML1-ETO阳性白血病发生发展的影响.研究表明:SIRT1可能是AML1-ETO的靶基因之一.结论:成功构建了SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,找到了SIRT1基因核心启动子区,且核心启动子在293T细胞中有较高的活性.AML1-ETO通过促进SIRT1启动子的活性对其进行转录调控.
-
转录因子GATA-2对iASPP基因的转录调控研究
癌基因iASPP促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其转录起始位点上游序列有转录因子GATA-2的假定结合位点,GATA-2在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要作用.本研究旨在探讨GATA-2对iASPP的转录调控作用.首先检测了部分白血病细胞系中iASPP和GATA-2蛋白的表达,然后构建带有GATA-2开放读码框的真核表达载体与带有iASPP转录起始位点上游3000 bp至下游500 bp序列中GATA-2假定结合位点的荧光素酶报告载体,共转染HEK293和CV-1细胞,检测荧光素酶活性,并对荧光素酶活性上调的结合位点区进行染色质免疫共沉淀实验.结果显示,白血病细胞系中iASPP高表达的细胞大多存在GATA-2的高表达；GATA-2对iASPP报告基因荧光素酶活性有显著影响,并呈现明显的“剂量-效应”关系.当pCMV5-GATA2转染剂量上升至100 ng时,iASPP荧光素酶活性在HEK293细胞中上调到2倍；此转录激活作用在CV-1细胞中尤为显著,荧光素酶活性上调可达6.7.染色质免疫共沉淀结果证实GATA-2与iASPP转录起始区nt-361 ～-334有特异性结合.结论:转录因子GATA-2可以与iASPP的转录调控区结合,并促进iASPP基因转录.
-
多发性骨髓瘤细胞中P53介导的Ran转录调控的研究
目的:探讨P53是否在骨髓瘤细胞中对ran进行转录调控.方法:应用实时荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞系OPM-2、RPMI-8226、U-266、KAS6/1、ANML-6、H-929、MM1.S、MOLP-8中ran转录水平,使用Nutlin-3a培养骨髓瘤细胞株MM1.S 24、48和72 h后检测ran转录水平;蛋白免疫印迹方法检测ran和P53蛋白表达水平;使用不同剂量的表达P53荧光素酶报告基因质粒转染MM1.S细胞后检测ran表达水平.结果:在8株人骨髓瘤细胞株中H-929和MM1.S细胞中ran的转录活性高,其差异具有统计学意义(P＜0.05).Nutlin-3a处理MM1.S细胞后ran转录水平较空白对照组明显下降(P＜0.05),同时在蛋白表达水平这种变化呈现时间依赖性;P53蛋白表达增多(r=1.00,P=0.06),相应的ran蛋白表达减少(r=-1.00,P=0.04).表达P53荧光素酶报告基因的质粒转染MM1.S细胞后发现,在质粒增加至25 ng后ran转录水平开始下降(P＜0.05).结论:通过多发性骨髓瘤细胞中P53转录调控ran转录水平的实验证明了ran是受p53调控的一个靶基因.
-
AML1、AML1-ETO对nucb2基因转录调控活性的影响
本研究旨在探讨造血特异转录因子AML1及M2b型急性髓系白血病(AML-M2b)累及的异常融合蛋白AML1-ETO对凋亡相关基因nucb2(nucleobindin-2)启动子转录活性的影响,探索AML1-ETO对AML-M2b型白血病的分子致病机制.利用实时RT-PCR方法在AML1-ETO诱导型白血病细胞株中研究AML1-ETO在转录水平对于nueb2的调控情况;利用ChIP-qPCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株中研究AML1、AML1-ETO与nucb2基因启动子之间直接的体内相互作用情况;采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1、AML1-ETO对nucb2启动子转录活性的调节作用.结果表明:AML1-ETO的表达与nucb2的表达呈负相关;nucb2可能是AML1、AML1-ETO的靶基因;AML1、AML1-ETO皆对nucb2启动子具有转录抑制作用,且AML1-ETO对nucb2抑制更强.结论:nucb2是AML1、AML1-ETO的直接靶基因,AML1、AML1-ETO通过抑制nucb2启动子的活性对其进行转录调控.
