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子宫内膜细胞色素P450芳香化酶的表达研究进展
细胞色素P450芳香化酶(aromatase cytochrome P450, P450 arom)能催化C19雄激素转化为雌激素,是雌激素合成的关键酶之一。P450 arom位于细胞内质网,在体内多种雌激素合成部位表达,如卵巢颗粒细胞、脂肪组织、胎盘合体滋养层细胞、脑细胞等。近年的研究发现P450 arom在子宫内膜上也有表达,能促进子宫内膜局部雌激素的转化,现对其在子宫内膜的研究进展综述如下。细胞色素P450芳香化酶的结构特征 P450 arom与其它细胞色素P450异构体的结构类似。C端为血红素结合区,该区含有保守的半胱氨酸残基,可作为含铁血红素的第5个配位配基。该区上游有2个保守区,一个由20个以上氨基酸构成,一个为高度保守的部分I螺旋。N端由疏水氨基酸组成,但在有些情况下,连接N端的是糖基序列[1]。 P450 arom是CYP 19基因的产物,是细胞色素P450产物中唯一由单基因编码的酶。CYP 19是细胞色素P450基因超家族成员之一。随着分子生物学技术的发展,对CYP 19基因的结构及调节有了较深入的了解。人CYP 19基因位于染色体15 q 21.1,该基因的开放阅读框包含9个外显子,II~X,其中翻译起始位点位于外显子II。基因至少长75 kb,在第一个编码外显子II上游有4个未翻译外显子,I.1~4,在后一个编码外显子X上有血红素结合区(heme-binding region,HBR),同时,该外显子还有两个选择性多聚腺苷酸位点,可产生两种长度不等的转录产物,分别为3.4和2.9 kb(图1)。 CYP 19基因的主要特点是其具有组织特异性表达。用聚合酶链反应(PCR)和快速扩增互补DNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)检测发现,CYP 19基因在不同组织的转录产物5’末端不相同[3-4]。在胎盘组织,转录产物5’末端主要为未翻译外显子I.1,I.2<1%;在卵巢,5’末端为外显子II;而在脂肪细胞,不同条件下,有3种不同的5’末端,I.4、I.3和II。这种组织特异性在于该基因的组织特异性启动子调节。在胎盘,转录运用远端启动子I.1;在卵巢为近端启动子II;脂肪组织为启动子I.4、I.3及II。CYP 19基因这种运用选择性启动子调节组织特异性表达的特点,对人体不同部位雌激素的合成调节具有重要意义。
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人谷胱甘肽S-转移酶P1基因及其人群多态性
人类细胞质谷胱甘肽S-转移酶(hGSTs)超基因家族主要包括4个家族:A、M、T、P(按旧命名系统分别为α、μ、θ、π)[1],其中GSTM1以及GSTT1的人群多态性以及与疾病易感性关系的研究开展较早,也有了一定的积累[2~4].GSTP1的人群多态性问题则是近年来才引起医学界的注意.hGSTP1是hGSTs家族中酸性同工酶P1(有些文献中命名为GSTπ)的编码基因.1989年Board等人分离了人类GSTP1基因的cDNA克隆,将其定位于染色体的11q13,并首次报道了GSTP1基因的外显子5(ICe105→Val)和外显子6(Ala114→Val)存在多态性[5],并在12q13-14区段发现一个可能是由于部分反转录再插入形成的相关假基因.由于hGSTP1与一些人类环境致癌剂的体内代谢反应有关,其过表达与肿瘤药物耐受性密切相关,基因多态性不同形式与各种癌症易感性之间的关系也越来越多地受到关注.现将有关hGSTP1基因及其人群多态性研究现状介绍如下.
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1-07 镍化合物诱发细胞恶变过程中P53基因突变
目的探讨3种镍化合物在诱发细胞恶变过程中不同阶段P53基因突变情况,并比较它们之间的差异.方法 3种镍化合物转化细胞接种BALB/c裸鼠,应用PCR-SSCP法进行肿瘤细胞和转化细胞P53基因第5~8外显子检测.结果硫化镍、氯化镍、硫酸镍分别诱发的转化细胞都在BALB/c裸鼠皮下形成肿瘤,病理组织学检查确定为纤维肉瘤.硫化镍组1个经软琼脂筛选的转化细胞系和相应的肿瘤细胞系P53基因第8外显子检出突变.氯化镍组的肿瘤细胞系第6外显子检出突变.结论 3种镍化合物所诱发的细胞转化为恶性转化,且都具有体内致瘤性.镍化合物诱发细胞恶变的晚期发生P53基因突变.
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1-08 反式BPDE诱发人支气管上皮细胞系P53基因突变
目的检测苯并(a)芘的代谢产物反式-BPDE诱发的人支气管上皮细胞系P53基因突变,探讨苯并(a)芘在人肺癌发生中的作用.方法用反式-BPDE处理人支气管上皮细胞系(16HBE),银染PCR-SSCP方法检测P53抑癌基因第5、6、7、8外显子的点突变情况.结果 20d后,经反式-BPDE处理的人支气管上皮细胞系与对照组相比,P53基因第8外显子出现异常泳动带.结论反式-BPDE可诱发人支气管上皮细胞系P53基因突变,可能是苯并(a)芘诱发肺癌的早期分子事件.
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eNOS基因多态性与原发性高血压的相关性研究
目的探讨了内皮型-氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因多态性与原发性高血压的相关性.方法依据eNOS基因外显子7G894T位点设计引物,通过巢式聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,限制性内切酶消化目的片段,琼脂糖凝胶电泳,紫外透射分析仪检测,计数基因型及突变基因频率,然后通过X2检验有无统计学意义.结果 eNOS基因外显子7的894位点有3种基因型:GG、GT、TT.高血压组103例中有21例发生G894T突变,其中纯合子TT 4例(4/103,3.9%),杂合子GT 17例(17/103,16.5%).对照组114例中有12例发生G894T突变,均为杂合子GT(12/114,10.5%).两组eNOS等位基因的突变频率(杂合子+纯合子)X2检验结果:X2=4.081,P<0.05,OR=2.176,95%CI为1.024~4.626.两组纯合子X2检验结果:X2=2.619,P>0.05,等位基因频数X2=6.555,P<0.05.结论 eNOS基因G894T突变与高血压发病相关,携带eNOS基因G894T的人具有罹患EH的危险性.
关键词: 原发性高血压 内皮型-氧化氮合酶基因 外显子 突变 -
肿瘤中微卫星不稳定的发生机制及研究意义
微卫星(microsatellite,MS)是由1~6个核苷酸组成单元串联重复排列而成的DNA序列,故又称短串联重复序列(short tandem repeats,STRs)、简单重复顺序(simple sequences repeats,SSRs).MS广泛分布于原核和真核生物基因组中,在人类基因组DNA序列中,平均约隔6kb便含有一个MS,约占人基因组的10%,多位于基因之间的间隔区域及内含子、启动子中,也有一些基因的外显子中含有MS.由于MS呈高度多态且按孟德尔共显性方式稳定遗传,自发性突变率很低(10-5~10-4),序列一般较短,易于扩增,所以在连锁分析、人类进化研究、个体识别、亲子鉴定、基因定位作图等方面得到了广泛的应用.
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肾细胞癌中VEGF的表达与MVD关系的研究进展
现就VEGF、MVD的生物学行为与肾细胞癌(RCC)的关系作简要的综述.血管内皮生长因子(VEGF)与肾细胞癌的生物学行为关系VEGF也称血管渗透因子,人类VEGF基因定位于染色体6P2l-3,全长14kb,包括8个外显子和7个内含子.VEGF基因编码分子量为45kD左右的同源二聚体糖蛋白,纯化后的VEGF表现为一种具有肝素活性的同源二聚体多肽,相对分子量为34 000~37 000.在正常胚胎发育时,有广泛表达,在正常成年人的组织呈低水平表达,但在肿瘤形成的病理过程中,有广泛表达.
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脑卒中与一氧化氮合成酶基因相关性及预防措施的研究
关于脑卒中基因水平的研究近年已经受到广泛的关注,人eNOs第7外显子G894T突变使编码的第298位谷氨酸(Glu)被天冬氨酸(Asp)所取代,使eNOs发生构象改变,从而引起eNOs活性降低,NO生成减少,从而减少了对脑血流的调节和神经细胞的保护作用,促进了脑卒中的发生[1].
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ARHI抑癌基因与肿瘤关系的进展
一、ARHI基因结构和功能肿瘤抑制基因ARHI(aplysia ras homo log 1),又名NO-EY2或ras同源基因家族成员Ⅰ(ras homolog gene,member Ⅰ)或DIRAS3.ARHI是一个印迹基因,人ARHI基因定位于1p 31,总长约为8kb,由2个外显子和1个内含子组成.外显子Ⅰ为81个未编码的核苷酸,外显子Ⅱ则包括整个蛋白质的编码区[1].
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内皮型一氧化氮合酶基因G894T变异与超重和高血压的关系
目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因第7外显子G894T变异与超重在高血压患病中的意义.方法在人群中筛检出未经药物系统治疗的116例高血压患者及136名血压正常者为研究对象;运用PCR-限制性片段长度多态性检测G894T变异;用相加模型分析G894T变异与超重之间的交互作用;用人群归因危险度百分比(PAR%)反映人群中的病因分值.结果 G894T变异与超重对高血压患病具有正交互作用;归因交互效应为1.99;归因交互效应百分比为30.76%;纯因子间归因交互效应百分比为36.38%.用多元logistic回归分析调整年龄、性别、吸烟指数及饮酒指数后,G894T 变异与超重对高血压患病仍具有正交互作用.调整上述混杂因素后,归因交互效应为2.85;归因交互效应百分比为39.97%;纯因子间归因交互效应百分比为46.49%.在给定条件下计算的PAR%约为15%.结论 eNOS基因第7外显子G894T变异与超重之间的交互作用在该研究人群高血压患病中具有重要意义;在仅仅对具有G894T变异与超重同时存在的部分人群中控制超重可明显降低一般人群高血压的患病率.
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中国人胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因的变异
CETP是反向胆固醇转运的重要载体.反向胆固醇转运是将胆固醇从周围组织向肝脏转运的过程.近来发现,CETP基因的变异影响这一过程,引起血脂水平的变化.CETP基因位于第16号染色体长臂上(16q13),全长25kb.AKITA等1994年首次报道了日本人中CETP基因变异的情况,突变的基因之一是第15外显子G→A的替换,导致442位氨基酸Asp→Gly的错义突变(D442G).但有关中国人CETP基因变异的情况,尚未见报道.
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胃肠道间质瘤
胃肠道间质瘤是胃肠道常见的间叶性肿瘤.该肿瘤由梭形或上皮样细胞组成,80%~100%表达CD117(KIT).GIST主要发生于老年人,常见部位有胃(60%~70%)、小肠(20%~30%)、结肠和直肠(5%)及食管(<5%).该肿瘤可不同程度的表达CD34、SMA、S-100;并可见KIT基因11号外显子的活跃突变.该肿瘤有良恶性.诊断GIST需除外真正的平滑肌肿瘤、神经纤维瘤及自主神经瘤.
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MDA-7/IL-24蛋白的功能研究进展
mda-7/IL-24基因初被命名为黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7),是1995年Jiang等[1]利用减数杂交技术从β干扰素和蛋白激酶C活化剂mezerin诱导的人黑色素瘤细胞HO-1中鉴定并克隆出来的.基于结构、序列同源性、基因定位等方面的考虑,MDA-7蛋白被归为IL-10家族,并被命名为MDA-7/IL-24蛋白.mda-7/IL-24基因在进化过程中比较保守,在酵母、猴子、牛、狗和猫的基因组DNA中都发现了mda-7/IL-24基因的同源基因[2].人mda-7/IL-24基因是单拷贝基因,定位于1号染色体(1q32.2-q41),由7个外显子和6个内含子组成,其mRNA长约2 kb,编码由206个氨基酸组成、相对分子质量约为23 800的蛋白质.
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有PDGFRA基因第18号外显子D842Y突变的印戒细胞样上皮样胃肠道间质瘤一例
患者女,64岁.3个月前体检行胃镜检查,于胃窦大弯近胃体处见一半球形隆起,大小约3.6 cm×2.5 cm,表面糜烂、凹陷,并附有陈旧性血迹.病理活检及免疫组织化学证实为胃肠道间质瘤(GIST),于2010年8月2日入院,行远端胃大部切除并胃十二指肠(毕Ⅰ)吻合术.
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淋巴瘤样丘疹病的临床病理分析及全基因组外显子测序分析
目的 探讨淋巴瘤样丘疹病(lymphomatoid papulosis, LyP)的临床病理和免疫表型特点,了解该病肿瘤细胞全基因组外显子突变及凋亡热点通路上的基因突变富集情况.方法 对20例LyP患者临床病理资料进行分析,行免疫组织化学SP和EliVision法染色,对2例LyP C型行全基因组外显子测序.结果 20例LyP患者中,男9例,女11例,平均年龄28.6岁.19例表现为多发丘疹、结节,1例为单发结节.获得随访的15例患者均存活,生存时间20~155个月.组织病理:LyP A型6例,B型3例,C型10例,D型1例,主要病变位于真皮及皮下脂肪组织内,四型主要的浸润方式分别为楔形、带状、片状、结节状.免疫组织化学:20例LyP中17例表达CD30,均为大瘤细胞.不表达CD30的3例均为B型.16例表达CD3,17例表达CD4,8例表达CD8,16例表达T细胞胞质内抗原(TIA)1,10例表达颗粒酶B,1例表达CD15,1例表达CD20(呈局灶阳性),均不表达间变性淋巴瘤激酶(ALK)1.2例LyP C型全基因组外显子测序检测到共有的非同义突变为101个,其中错义突变87个,错义突变/移码缺失6个,错义突变/非移码缺失2个,移码缺失5个,错义突变/同义突变1个.突变基因Syndecan-1(SDC1)、COL4A1、Laminin-5富集到细胞外基质受体的通路上.结论LyP临床病理表现是诊断的重要依据,预后较好.SDC1、COL4A1、Laminin-5基因突变或与LyP 皮损的复发或者进展、转变为恶性程度更高的淋巴瘤相关.
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p53基因治疗研究的新进展
人类p53基因位于17p13.1,全长约16~20 kb,由11个外显子和10个内含子组成,编码393个氨基酸,是相对分子质量为53 000的核磷酸化蛋白[1].它与肿瘤的发生、发展以及肿瘤患者的预后有着十分密切的关系.大约50%的人类肿瘤中存在p53基因的变化, 因此,针对p53进行肿瘤基因治疗逐渐成为研究的热点.
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乳腺癌和卵巢癌中BRCA基因的突变
一、BRCA1和BRCA2基因1990年Hall等[1]发现家族性乳腺癌与17号染色体长臂上的一个位点有关. 随后Narod等[2]也报道了家族性乳腺癌及卵巢癌与17号染色体有关.1994年这一基因位点被克隆鉴定,命名为BRCA1[3].该基因位于染色体17q21,全长100 kb,含24个外显子.蛋白产物的相对分子质量为200 000,含1 863个氨基酸.
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FHIT基因研究进展
早在1979年,Cohen等就发现一家族性早发、双侧、多灶的肾透明细胞癌与t(3:8)染色体易位有关.此后,人们在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中观察到3号染色体短臂的高频率缺失,提示在3p上可能存在抑癌基因.1996年,Ohta等[1]用差异显示分析探针和外显子捕获法在3p14.2上确定了一个新的基因,由该基因cDNA推算的蛋白质与具有3价组氨酸结构域的HIT蛋白质家族高度同源,又因为此基因跨越脆性位点(fragile site),故将之命名为FHIT(fragile histidine triad)基因.FHIT基因全长超过1 Mb,为一高度保守的基因序列,其mRNA全长约1.1 kb,包含10个外显子,由第5~9外显子编码一个相对分子质量约为16 800的蛋白.Barnes等[2]通过蛋白质活性分析证实,人类FHIT蛋白是一典型的二腺苷酸三磷酸水解酶(Ap3A),催化Ap3A水解为ADP和AMP,FHIT蛋白质水解酶活性丧失将导致Ap3A水平升高.
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影响细胞分化相关基因NDRG1作用的相关因素研究进展
N-myc下游调节基因( N-myc downstream regulated gene , NDRG)1属于NDRG家族,α/β水解酶超家族,但没有水解酶催化位点[1]。初是在N-myc敲除的小鼠胚胎组织中发现的,受 N-myc 的抑制而得名。 NDRG1位于人类染色体8q24,全长约60 kb,包括16个外显子和15个内含子,含有一个与第1外显子和第1内含子5′端重叠的CpG岛,C末端包含有3段特有的10个亲水性氨基酸残基( GTRSRSHTSE )串联重复序列。 NDRG1含有磷酸泛酰巯基乙胺序列,在一些多酶复合物中,该序列提供辅基酰基载体蛋白,作为“摆动臂”活化氨基酸和脂肪酸[2]。
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非小细胞肺癌EGFR基因第19外显子突变的特征分析
吉非替尼(gefitinib)是针对肺癌表皮生长因子受体(epiddermal growth factor receptor,EGFR)设计的肿瘤靶向药物,已使众多的非小细胞肺癌(NSCLC)患者获益,但其疗效与EGFR基因突变相关[1-3].通过EGFR基因第19外显子可筛选gefitinib药物的适合患者进行个体化治疗,提高疗效,减少盲目用药.我们检测了62例NSCLC患者的EGFR基因第19外显子突变,并分析突变DNA特征及氨基酸变化规律.