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即刻早期和晚期基因的转录产物在巨细胞病毒感染中的诊断作用
近年来对于巨细胞病毒(CMV)的即刻早期(IE)基因和晚期(L)基因的结构和功能有了较为深入的研究.应用核酸杂交技术和聚合酶链反应等先进技术检测IE-mRNA和L-mRNA能在早期特异性地诊断CMV活动性感染,对于临床治疗和预后监测有重要的指导意义.
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杂交技术与开腹手术治疗腹壁巨大切口疝疗效比较
目的:比较杂交技术与开腹手术治疗腹壁巨大切口疝的临床效果.方法:选取2013年3月至2017年3月于潍坊市人民医院治疗的87例巨大腹壁切口疝患者.根据手术方式分为杂交手术组(42例)与开腹手术组(45例),比较2组患者术中出血量、手术时间、下床活动时间、肛门排气时间、切口长度、住院时间及术后并发症发生率.结果:与开腹手术相比,杂交手术出血量少,并发症少.杂交手术组患者下床活动时间、肛门排气时间、切口长度、住院时间及术后并发症均显著短于开腹手术组(P<0.05).结论:杂交技术治疗腹部巨大切口疝具有创伤小、术中出血量少、术后患者恢复快、住院时间短、并发症少等优点.
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如何做好玉米深加工及综合利用
玉米具有丰富的营养,在生活和生产过程中得到了广泛的应用。因此,本文首先分析玉米加工深加工利用情况,接着就如何综合利用展开论述。
在人类发展过程中,玉米是一种非常重要的粮食农作物。随着玉米生产发展过程中,通过各种杂交技术,玉米品种不断增加,栽培技术不断提高。玉米食用价值和营养很高,含有丰富的蛋白质、淀粉、脂肪以及维生素等。在我国玉米深加工技术发展迅速,在消费过程中,主要包括食用、饲料、工业和种子消费。作为重要的工业原料,玉米可以加工成500中以上的产品。玉米作为初加工产品和副产品都能进一步进行加工利用,被广泛的应用在食品、发酵、医药、纺织等工业生产过程中,渗透社会生产的各个方面,从根本上提高玉米开发和综合利用水平,玉米深加工技术发展,获得了巨大的经济效益和社会效益。本文就如何做好玉米深加工和综合利用展开论述。 -
β珠蛋白生成障碍性贫血聚合酶链反应-反向点杂交法基因诊断
β珠蛋白生成障碍性贫血亦称β地中海贫血是由于β珠蛋白基因座位突变导致β珠蛋白肽链合成减少或缺乏所引起的一类遗传性溶血性疾病.该病呈常染色体隐性遗传,在中国华南及西南地区是一种常见病,广东地区人群发生率达1.36 %~4.90 %.本病的轻型患者可以没有临床症状,重症患者一般在出生后一年内开始表现出严重的贫血,终身需要输血治疗.由于缺乏有效的根治性手段,目前对β地中海贫血以预防为主.通过对人群中地中海贫血突变基因携带者的筛查,有针对性地指导婚育,开展产前诊断工作,从而杜绝重症患儿的出生.本文利用聚合酶链反应-反向点杂交技术(PCR-RDB)对广东中山地区的288例可疑患者进行了基因水平的分析,结果报道如下.
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聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病毒检测中的应用
利用半抗原地高辛配基(digixigenin)制备非同位素标记探针技术,分别标记乙型肝炎病毒全基因探针(DIG-HBVDNA)及乙型肝炎病毒PCR产物C区探针[DIG-HBV(C/preC)],经斑点杂交检测血清HBVDNA及血清聚合酶链反应(PCR)产物,与PCR平行检测122份血清标本.
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石蜡切片FISH技术应用于肿瘤组织的探讨
荧光原位杂交(FISH)是80年代初期发展起来的非同位素杂交技术之一.FISH是DNA片断物理定位的主要方法,是绘制人类基因组物理图谱的主要手段.此外,FISH也可作为传统细胞遗传学的补充,在中期染色体片上检测出难以确定的染色体易位、微小缺失等,即使在分裂象少、分散质量差的玻片上,也能得到良好结果.因此,FISH是一种重要的分子细胞遗传学方法.1986年细胞遗传学概念提出后,FISH技术的应用领域大为扩展,可以在细胞系、分离细胞核、印片以及石蜡切片等标本中检查染色体数目和结构畸变,使细胞遗传学成为真正的全周期细胞遗传学,从而也引起了肿瘤学家的关注.利用此项技术的有关报道国内时常可见,但是用于石蜡切片者几乎没有,主要是方法上还存在一定难度,结果也不太好分析等.将FISH技术用于肿瘤石蜡切片,可以在病理形态尚正常时对肿瘤进行早期的分子水平的诊断,具有非常诱人的应用前景.我们采用一个染色体着丝粒探针和一个单拷贝基因探针,利用鼻咽癌和口腔癌石蜡切片,经过反复摸索,建立了石蜡切片FISH技术.
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比较基因组杂交技术在软组织肉瘤诊断中的应用
比较基因组杂交(CGH)技术是在荧光原位杂交(FISH)基础上,结合消减技术发展起来的一种能快速、全面分析染色体基因组获得和缺失的分子遗传学方法.它不需要特殊探针,能进行全基因组检测,并可在正常中期染色体上定位.目前CGH技术是对整个染色体扫描分析常用的技术,在软组织肉瘤的诊断和研究中有重要意义.
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MDA-7/IL-24蛋白的功能研究进展
mda-7/IL-24基因初被命名为黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7),是1995年Jiang等[1]利用减数杂交技术从β干扰素和蛋白激酶C活化剂mezerin诱导的人黑色素瘤细胞HO-1中鉴定并克隆出来的.基于结构、序列同源性、基因定位等方面的考虑,MDA-7蛋白被归为IL-10家族,并被命名为MDA-7/IL-24蛋白.mda-7/IL-24基因在进化过程中比较保守,在酵母、猴子、牛、狗和猫的基因组DNA中都发现了mda-7/IL-24基因的同源基因[2].人mda-7/IL-24基因是单拷贝基因,定位于1号染色体(1q32.2-q41),由7个外显子和6个内含子组成,其mRNA长约2 kb,编码由206个氨基酸组成、相对分子质量约为23 800的蛋白质.
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T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病的临床病理研究
目的 分析和总结T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(T-LBL/ALL)的临床、组织学、免疫表型特征,以提高对T-LBL/ALL的认识和诊断水平.方法 采用HE、免疫组织化学(EliVision法)、原位杂交及聚合酶链反应等方法结合临床资料对128例T-LBL/ALL进行了分析.结果 男94例,女34例.男女比2.8:1.年龄4-88岁,平均27岁,中位年龄22岁.58例病变累及淋巴结,27例累及淋巴结外,43例淋巴结内外均有累及.其中73.3%(74/101)累及颈部淋巴结,42.6%(43/101)累及纵隔.病变以弥漫为主,少数呈结节状.多数病例的瘤细胞为中小细胞,少数瘤细胞较大.瘤细胞表达末端脱氧核苷酸转移酶(TdT,94.5%,121/128)、CD34(49.0%,48/98)、CD3(72.2%,78/108)、CD7(96.3%,104/108)、CD43(88.9%,56/63)、CD79a(7.1%,5/70)、CD10(32.9%,25/76)、CD99(96.7%,58/60)、Pax-5(4.4%,4/91);128例髓过氧化物酶(MPO)均为阴性.共随访51例(39.8%),随访时间1~53个月.总体存活率68.6%;总体中位生存时间12个月.不同年龄组中CD3阳性率差异有统计学意义,30岁以上的病例CD3阳性率显著降低.CD10阳性患者的生存时间较阴性患者的生存时间短.5例T细胞受体(TCR)基因重排检测结果显示,4例有TCR基因克隆性重排.结论 T-LBL/ALL主要发生于青少年,以颈部淋巴结肿大和(或)纵隔肿物为主要临床表现.多数病例的肿瘤细胞以中小细胞为主,弥漫分布,但是也应注意到少数病例细胞较大,或结节状生长.免疫组织化学CD7、Pax-5、TdT、CD34、Ki-67五项抗体的联合应用有助于大多数病例确诊.对极少数病例可辅以TCR基因重排检测.
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促泌素研究进展
1998年Wagner等[1]利用一位32岁男性胰岛素瘤患者的瘤细胞,接种免疫BALB/c小鼠后,通过细胞杂交技术克隆出一种名为D24的鼠抗人胰岛素瘤单克隆抗体.在此基础上,该团队通过D24鉴定出一种神经内分泌和胰岛β细胞特异的钙结合蛋白--促泌素(secretagogin)[2].对促泌素的研究尚不多见,我们主要对其在正常组织、各类病变中的表达特点和临床意义方面的研究进展进行综述.
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沙眼衣原体检测及分型的方法学比较研究
对COBAS AMPLICOR系统、多重PCR和巢式PCR扩增沙眼衣原体(CT)质粒和/或外膜蛋白(omp1)VD2基因,并以反向线点杂交技术(Reverse line blot hybridization assay,RLB)进行CT血清学分型对CT检测方法进行了比较.
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反相斑点杂交技术在解脲脲原体分型中的应用
解脲脲原体(UU)被认为是盆腔及生殖器炎症的主要病原体之一.然而,女性下生殖道内查到UU者,是否皆须按非淋菌性阴道炎进行治疗,近年来一直困扰广大妇产科医生.有学者研究认为UU的感染与其群别和亚型的型别相关,但目前临床中尚缺乏一种简单易行的进行UU分型的方法,为此我们对UU基因型的分型方法进行了一些研究,报道如下.
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人乳头瘤病毒基因检测方法的初步比较及基因亚型分析
宫颈癌的筛查方法从分子水平检测通常采用多重核酸扩增荧光检测技术(FQ-PCR)和第二代杂交捕获技术(HC-Ⅱ)以及PCR结合反向寡核苷酸探针点杂交技术(PCR/RDB).FQ-PCR实验方法简单,其优点是易于操作,且全部实验均在一个密闭反应体系中完成,能有效避免交叉污染造成的假阳性;而HC-Ⅱ实验方法相对繁琐,其缺点是开放式的操作过程容易交叉污染造成假阳性,且试剂成本较高.但HC-Ⅱ的实验方法比FQ-PCR要早若干年应用于临床,现今仍在广泛应用,并在指导临床宫颈痛早防早治领域有不俗的表现.而FQ-PCR是近一两年来才应用于临床的实验方法,其对人乳头瘤病毒(HPV)检测的灵敏度和特异性如何,目前尚未见报道.
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TraSH技术可确定微生物基因组间功能差异
转座子定点杂交技术(transposon site hybridization,TraSH)是科技进步需要的产物,是近几年来通过对转座子研究的不断深入建立起来的一整套成熟技术.
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微阵列比较基因组杂交技术在产前诊断中的应用
在遗传和环境因素共同影响下,大约3%的婴儿有严重的出生缺陷,其中5%~10%将会发展成智力障碍,所以产前诊断是优生优育的必要保障。从20世纪60年代染色体显带技术发展以来,染色体核型分析就成为产前诊断的金标准[1],该技术能够检测到染色体数量变化、平衡/不平衡易位、倒位和显微镜下可见的大片段缺失和重复等问题。但目前该技术还存在一定的局限,如由于分辨率较低不能够检测出少于5 Mb片段的染色体异常;同时,产前染色体(羊水、绒毛染色体)条带较少增加了异常检出的难度;诊断前需要细胞培养的过程延长了出终报告的时间;对于结果的分析也依赖于检验人员的水平(图1A)[2]。以上这些因素都限制了染色体核型分析技术在高通量自动化分析中对亚显微镜染色体结构异常的发现。
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序列特异性寡核苷酸探针基因分型在造血干细胞与肾脏移植中的应用
异基因造血干细胞或实体器官移植成功率与人类白细胞抗原(HLA)配型密切相关,因此探讨准确的分型方法对指导临床移植十分重要.本研究应用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)杂交技术对造血干细胞移植、肾移植的供、受者进行HLA分型,并与聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)分型、血清学分型进行比较.
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尖锐湿疣患者皮损中人乳头瘤病毒基因分型与定量检测
为了对尖锐湿疣(CA)患者皮损中人乳头瘤病毒(HPV)基因进行分型与定量检测,我们对斑点杂交技术略加改进,获得成功.
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杂交法快速检测单核细胞增生李斯特菌
单核细胞增生李斯特菌(李氏菌)广泛存在于土壤、人和动物的粪便中,很容易污染食品,引起食物中毒,以致李氏菌病暴发.该菌用经典法检验周期长,需5~14 d才能出结果.我们建立了用PCR-Southern杂交技术快速检测食品中李氏菌的方法.该法简便快速、特异性好、灵敏度高,具有较高的实用和推广价值.一、材料与方法
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偏振荧光法定量测定细菌染色体的同源性
定量DNA-DNA杂交技术在细菌基因鉴定和分类方面发挥着重要作用,固相微孔板法,因其简便而被国内外微生物学工作者广泛应用[1-3].但因残留的多糖对DNA包板的影响,导致两种DNA杂交后同源性计算的误差,有碍细菌的鉴定和分类.液相杂交可避免这一不足.本研究应用一种新的荧光染料SYBR Green1特异性结合双股DNA的特性,并借助偏振荧光技术的敏感性,对10株临床分离菌进行了种间同源性测定,报告如下.
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反向点杂交技术快速检测中国人常见的G6PD基因突变
G6PD缺乏症是一种x染色体连锁不完全显性遗传的红细胞酶缺陷病,高发于热带和亚热区地区,中国南方也是该病的高发区[1].G6PD基因突变谱具有明显的种族和地域特征,迄今已在中国人中至少鉴定出31种点突变,其中1388G→A、1376G→T、1024C→T、1004C→T、871G→A和95A→G为中国人6种常见的G6PD基因突变类型,其累计基因频率超过了86%[2].