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2.3前列腺素E2合酶和环氧合酶-2与反流性食管炎的关系研究
目的检测反流性食管炎组织中mPGES和COX-2的表达,探讨二者在食管炎组织中的作用.方法39例经临床和内镜确诊的反流性食管炎患者病变处活检组织及20例正常对照组的食管活检组织,应用鼠抗人COX-2单克隆抗体及兔抗人mPGES多克隆抗体进行免疫组化染色,采用北航计算机图像分析系统作半定量分析.
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促泌素研究进展
1998年Wagner等[1]利用一位32岁男性胰岛素瘤患者的瘤细胞,接种免疫BALB/c小鼠后,通过细胞杂交技术克隆出一种名为D24的鼠抗人胰岛素瘤单克隆抗体.在此基础上,该团队通过D24鉴定出一种神经内分泌和胰岛β细胞特异的钙结合蛋白--促泌素(secretagogin)[2].对促泌素的研究尚不多见,我们主要对其在正常组织、各类病变中的表达特点和临床意义方面的研究进展进行综述.
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脑星形细胞肿瘤中PTEN、血管内皮细胞生长因子表达与微血管密度
一、材料和方法1.材料:人星形细胞肿瘤标本43例(患者中男28,女15)取自南通医学院附属医院病理科1987~2000年存档的手术标本.患者年龄14~69岁,平均年龄40.4岁,按WHO胶质瘤分级标准,Ⅰ级3例(均为毛细胞型),Ⅱ级18例(原浆型14例,纤维型4例),Ⅲ级12例(肥胖型3例,间变型9例),Ⅳ级10例(为胶质母细胞瘤),均经病理诊断证实为星形细胞肿瘤.即用型兔抗人PTEN、第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)多抗和鼠抗人血管内皮细胞生长因子(VEGF)单抗,EDTA抗原修复液及SABC试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司.
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精浆内前列腺素D合成酶双抗体夹心酶联免疫吸附法的建立及其应用
前列腺素D合成酶(L-PGDS)是一种双功能蛋白,它能转运、催化前列腺素D的合成[1-3].我们已用真核表达了人L-PGDS[4]、制备了小鼠抗人L-PGDS单克隆抗体.本研究在此基础上,建立L-PGDS双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),分析精浆中L-PGDS与精子密度和精子活力间的相关性,以探讨L-PGDS在不同类型男性不育患者精浆内的表达差异[5].
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P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义
P27蛋白具有限制性调节细胞周期进程的作用,这一作用主要通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKS)复合物的功能来实现。P27蛋白表达与预后的关系在乳癌、淋巴瘤、前列腺癌以及消化道肿瘤已有报道[1],而在肺癌中的研究甚少。我们运用免疫组化法检测P27在非小细胞性肺癌组织中的表达水平,从而探讨其在非小细胞性肺癌中的意义。 对象和方法 1.对象:56例非小细胞肺癌(NSCLC)病例均在本院接受治疗及随访。其中男42例,女14例,年龄39~77岁,平均60岁。中位随访时间2年(1~5年),56例NSCLC中,腺癌36例,鳞癌18例,腺鳞癌2例。高分化12例,中分化20例,低分化24例。第1、2年每3个月随访一次,以后每半年一次。2.方法:(1)试剂:鼠抗人P27单克隆抗体(G173-524)购自美国Pharmingen公司。羊抗鼠IgG、链菌素亲生物蛋白和过氧化物酶、3,3-二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)均购自丹麦DAKO公司。(2)染色流程:5 μm石蜡切片脱蜡水化→过氧化氢室温处理20 min→甩干后微波抗原修复2次,每次10 min→鼠抗人P27单抗(1∶10)湿盒孵育过夜→生物素标记羊抗鼠IgG(1∶200),37 ℃湿盒温育40 min→DBA显色、复染、封片。用已知P27表达阳性的胰腺癌作阳性对照。用缓冲液(PBS)取代一抗作阴性对照。(3)染色结果判断:观察染色切片中10个具有代表性的高倍视野,其肿瘤细胞阳性数在50%以上为(+),低于50%为(-)。3.统计学方法:采用第二军医大学统计教研室统计软件SPSS软件包,运用Logistic逐步回归对P27表达与临床及病理指标的相关性进行分析;应用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,时序检验(log rank test),根据寿命表各随访年份生存率作生存曲线。
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抗人前列腺特异膜抗原单克隆抗体的131Ⅰ标记及在荷瘤裸鼠体内的分布
我们利用鼠抗人前列腺特异膜抗原(PSMA)单克隆抗体Ed-5,经131Ⅰ标记后,研究其在荷人前列腺癌裸鼠体内分布情况.
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基质金属蛋白酶-2、9和Ⅳ型胶原在膀胱癌中的表达及意义
我们采用免疫组化方法观察膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中基质金属蛋白酶2和9(MMP-2,MMP-9)及Ⅳ型胶原的表达,探讨其在BTCC进展中的作用及判断预后的价值.报告如下.材料和方法收集我院1988~1995年间手术切除的膀胱癌石蜡包埋组织标本49例.男40例,女9例.年龄35~84岁,平均59岁.有随访结果者42例,随访时间3~120个月.除1例膀胱全切、1例手术无法切除者外,术后复发24例.初发肿瘤41例,复发8例.WHO分级:G1 14例,G2 23例,G3 12例.UICC-TNM分期:T0 1例,T1 24例,T2 10例,T3 7例,T4 7例.另取10例正常膀胱组织为对照.鼠抗人MMP-2,MMP-9,Ⅳ型胶原单克隆抗体(工作浓度1∶100)及SP免疫组化染色试剂盒均为美国Zymed公司产品,按说明进行操作.
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脑膜瘤的增殖活性与生长激素受体的表达
一、资料与方法40例脑膜瘤患者,均Simpson Ⅰ~Ⅱ级手术切除,经病理确诊.Ⅰ级脑膜瘤31例,Ⅱ级5例,Ⅲ级4例.40例随访3-16年,其中20例复发.增殖细胞核抗原(PCNA)及生长激素受体(GHR)的免疫组化检测:鼠抗人PCNA单克隆抗体(PC10)、通用型SP试剂盒、DAB试剂盒购自北京中山生物技术有限公司,鼠抗GHR单克隆抗体(Mab263)购自英国Serotec公司.
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间接免疫荧光技术检测尿沉渣血小板的临床研究
尿沉渣存在血小板(Plt)的临床意义在国内未曾见过报道,采用中国军事医学科学院、鼠抗人血小板糖蛋白Ⅱb/ⅢaCD41单克隆抗体,以间接免疫荧光技术、在尿沉渣中找到了血小板,并对其临床价值加以探讨,结论是尿沉渣血小板的存在与肾小球损伤程度有关.
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梅毒螺旋体抗体 IgG酶联免疫吸附试验的建立
梅毒螺旋体抗原试验,如荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验( FTA- ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验( TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验( TPPA)等的敏感性和特异性高,但试剂昂贵,操作较复杂,所需时间较长,现不用于筛查而用于确证。为探讨既可用于筛查又可用于确证的梅毒螺旋体抗体检测方法,我们用基因重组技术表达的梅毒螺旋体蛋白( Treponema pallidum protein,Tp) 17和 Tp44.5为抗原,以辣根过氧化物酶标记的鼠抗人 IgG单克隆抗体为酶结合物,建立了梅毒螺旋体抗体 IgG的间接 ELISA法( ELISA- Tp- IgG),经临床观察和献血员筛查,效果较好,现报道如下。
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P21WAF1在胃癌中表达及其意义
P21WAF1是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂,它通过抑制多组cy clin/cdk复合物的活性而调节细胞周期。业已证实P21WAF1与肿瘤细胞生长、分化密切相关。为此,我们采用免疫组化方法研究P21WAF1在胃癌中表达,探讨其临床病理学意义。材料和方法 一、材料:所有标本均为两院手术切除标本,正常胃粘膜10例,胃粘膜肠化10例,胃癌 68例。Borrmann Ⅰ型18例,Ⅱ型20例,Ⅲ型19例,Ⅳ型11例。Lau ran’s分型:肠型胃癌38例,弥漫型胃癌30例,其中淋巴结转移组31例。鼠抗人 P21WAF1单抗为美国Santa Cruz公司产品,S-P免疫组化染色试剂盒购自北京中山生物技术公司。
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CD44v6在人胃癌中表达的研究
我们采用免疫组化S-P法对胃癌组织中CD44v6的表达进行检测,以探讨CD44v6在胃癌生长分化、转移方面的临床意义。材料与方法 一、材料所有标本均取自我院1997年10月~1998年3月手术切除标本,术前及术后均经病理证实的20个病例60份标本。其中胃癌20份,癌旁组织20份,正常粘膜20份标本。按Lauren分型,肠型5例,弥漫型15例,有淋巴结转移16例。鼠抗人CD44 v6单抗、S-P试剂盒为Boster产品。
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肾移植术后并发恶性肿瘤10例
我院于1991年至2006年12月共行424例肾移植,其中汉族309例,维吾尔族(维族)57例,哈萨克族(哈族)44例,俄罗斯族5例,回族4例,蒙古族2例,锡伯族2例,朝鲜族1例.424例肾移植术后并发恶性肿瘤10例,其中汉族4例,回族2例,维族2例,哈族2例.患者中女性5例,男性5例,年龄17~61岁,平均47.5岁,均为第1次接受肾移植,供者均为汉族,供、受者血型相符.术后免疫抑制方案为:3例服用环孢素A(CsA)+硫唑嘌呤(Aza)+泼尼松(Pred),4例服用CsA+咪唑立宾(Mzb)+Pred,3例服用CsA+霉酚酸酯(MMF)+Pred,2例加用抗淋巴细胞球蛋白(ALG),1例加用鼠抗人CD3单克隆抗体(OKT3).
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体外诱导单核细胞分化为肝样细胞的研究
我们通过建立人为细胞诱导分化体系在体外诱导人外周血单核细胞分化为肝样细胞,旨在为肝组织工程研究及临床应用提供新的细胞来源.一、材料与方法1.材料:外周血由山东省立医院肝胆外科患者知情同意并志愿提供,由山东省立医院伦理委员会批准;RPMI 1640培养基、胎牛血清(Gibco公司);粒细胞刺激因子(齐鲁制药公司),肝细胞生长因子( HGF)、成纤维细胞生长因子4(FGF-4,Peprotech公司);鼠抗人CK19单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(Abcom公司);FITC标记山羊抗鼠IgG、TRITC标记山羊抗鼠IgG(北京中杉公司);4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、抗荧光淬灭封片剂(碧云天公司);淋巴细胞分离液、β-巯基乙醇( Sig-ma公司).
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脑胶质瘤干细胞的培养和鉴定
肿瘤干细胞和肿瘤的发生、进展和预后密切相关[1].我们应用脑胶质瘤细胞株U251,证实人脑胶质瘤干细胞的存在.一、材料与方法1.材料:人脑胶质瘤细胞株U251(购自中国科学院细胞库).DMEM/F12培养基(Hyclone),EGF(Peprotech),FGF(Peprotech),LIF(Millipore),1327(Invitro-gen),鼠抗人Nestin单抗(中杉金桥),鼠抗人MAP2单抗(Sigma),鼠抗人PE-CD133单抗(eBioscience),兔抗人GFAP单抗(BIOSS),逆转录试剂盒(Toyobo),SYBR Green mix(Toyobo),等.
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CD4+NKT细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的意义
我们采用流式细胞术(flow cyto-metry)对慢性HBV感染者外周血CD4+NK-T、CD8+NK-T细胞的分布情况进行分析,并对细胞样品进行51Cr细胞毒性试验,以鉴定其细胞毒性。一、资料与方法1. 对象:病例为第一军医大学南方医院感染内科1999年5月至9月门诊及住院病人。选择慢性HBV携带者(AsC)18例、经肝组织活检证实的慢性乙型病毒性肝炎(中度)(CHB)18例,正常对照组12例取自门诊健康体检者。48例受检者中女14例,男34例,年龄17~42岁(平均32.4岁);36例慢性HBV感染者均为HBsAg阳性(ELISA),27例HBeAg阳性,9例抗-HBe阳性;正常对照组除5例抗-HBs阳性外,其余对照者HBV血清标志物全部阴性。2. 方法:流式细胞检测(FACS)分析CD4+ NK-T、CD8+NK-T细胞的分布情况新鲜抗凝全血4ml,常规分离PBMC,在RPMI 1640培养液中、37℃培养2h,移去贴壁的单核细胞。2×106/ml非贴壁细胞继续以20U/ml rhuIL-12及100U/ml rhuIL-2刺激培养14d,加入FITC标记鼠抗人CD4单克隆抗体(mAb)或CD8 mAb、PE标记CD56-mAb 45min,作FACS,获得CD4+ NK-T和CD8+ NK-T细胞的百分率。所有病例均同步设一鼠抗人IgG(PE、FITC)细胞样品作为对照。
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三种方法制作人脱细胞真皮基质的生物学特性比较
1 材料与方法1.1 主要试剂鼠抗人Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白抗体,鼠抗人波形蛋白抗体,鼠抗人结蛋白抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司;dispaseⅡ、Ⅰ型胶原酶、噻唑蓝(MTT)购自美国sigma公司.
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利用免疫学方法检测脱细胞真皮基质的细胞碎片残留
1 材料与方法1.1 试剂及材料1.1.1 试剂 鼠抗人角蛋白单克隆抗体(简称CK)、鼠抗波形蛋白单克隆抗体(简称VIM)和其他免疫组织化学常规试剂,均由北京中山生物技术有限公司提供.
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改良人脱细胞真皮基质对成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响
主要试剂和仪器:hoechst 33258购自美国Sigma公司,鼠抗人波形蛋白抗体、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购自大连宝生物工程有限公司,β肌动蛋白、Ⅰ型前胶原引物购自上海博亚生物技术有限公司.IX71型荧光显微镜购自日本Olympus公司,PCR扩增仪购自德国Eppendorf公司.