反转录聚合酶链反应检测前列腺癌病人外周血中前列腺特异膜抗原

前列腺特异膜抗原(PSM)存在前列腺细胞上,患前列腺癌时,有很少量PSM进入血清,检测病人血清中PSM的水平,对前列腺癌的诊断有一定的临床意义,但该方法的敏感性和特异性均不理想.我们运用敏感的反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测了33例前列腺癌病人外周血中PSM mRNA的表达,结合临床有关资料,探讨其临床意义.

应用针对前列腺特异膜抗原胞外区的单克隆抗体J591靶向定位前列腺转移癌

抗人前列腺特异膜抗原单克隆抗体的131Ⅰ标记及在荷瘤裸鼠体内的分布

我们利用鼠抗人前列腺特异膜抗原(PSMA)单克隆抗体Ed-5,经131Ⅰ标记后,研究其在荷人前列腺癌裸鼠体内分布情况.

前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达

目的克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达.方法用RT-PCR方法扩增前列腺癌组织标本中的PSMA cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0.用脂质体转染法,把pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白的表达.结果序列测定结果表明,两条引物之间的片断长度为2279 bp,与预期长度一致.将克隆的编码区序列与Genebank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的分子量为100 000.结论利用RT-PCR技术成功扩增了PSMA编码区序列,经序列分析显示扩增片断的序列正确.构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株.经免疫分析,证实了真核细胞内表达的PSMA为分子量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性.所获得的PSMA真核表达系统为进一步研究PSMA基因修饰的DCs疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础.

前列腺特异膜抗原的研究进展

前列腺特异膜抗原(prostate-specific membrane antigen ,PSMA) 是存在于前列腺细胞膜上的组织特异性抗原,因其在前列腺癌,尤其是激素难治性前列腺癌及转移灶中的高表达而具有重要的临床意义.本文综述了PSMA的生物学特性及其在前列腺癌诊断和治疗中的研究进展.

抗前列腺特异膜抗原单克隆抗体的标记及在荷瘤裸鼠体内的分布研究

目的:研究125I标记的抗前列腺特异膜抗原(PSMA)单克隆抗体(125Ⅰ-Ed-5)及正常小鼠IgG(125Ⅰ-NMIgG)在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的分布,探讨应用125Ⅰ-Ed-5进行放射免疫显像诊断和放射免疫治疗实验性人前列腺癌的可行性.方法:建立荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,用125Ⅰ标记抗PSMA单克隆抗体Ed-5和NMIgG,125Ⅰ-Ed-5和125Ⅰ-NMIgG经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,于注射后24、48、72、120小时分批处死,测定肿瘤和血液、肝、肺等重要脏器的单位重量放射性比值(T/NT)、各组织摄取百分比(%ID/g),研究其在荷瘤裸鼠体内的放射性分布情况.结果:125Ⅰ-Ed-5的标记率为72.3%,放射性比活度为55.2MBq/mg,放射性化学纯度是90.2%,免疫活性分数为63%.在注射125Ⅰ-Ed-5后24～120小时内,裸鼠体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚:各组织的T/NT比值在72h达到高,其中肿瘤/肌肉高达6.36.而在注射125Ⅰ-NMlgG的对照组中,裸鼠体内未见放射性浓聚,呈全身均匀性分布.结论:标记后的125Ⅰ-Ed-5免疫活性没有改变,在裸鼠体内对前列腺癌移植瘤有靶向定位作用,为进一步应用125Ⅰ-Ed-5进行前列腺癌放射免疫显像和放射免疫治疗的实验研究奠定基础.

前列腺特异膜抗原的结构模型研究

目的对前列腺特异膜抗原(PSMA)进行结构模建并尝试其小分子抑制物的设计.方法通过网络资源和分子设计软件SYBYL(R)进行PSMA的三维模建和小分子抑制物的设计.结果以气单胞菌氨肽酶(AMP)的晶体结构为模板使用Composer模块,获得PSMA胞外区三维结构模型.采用分子对接方法,以AMP和ρ-碘基-D-苯丙酸-氧肟酸(AIDPH)的复合物晶体结构1IGB为参照,将AIDPH对接到PSMA的结构上,相对应形成疏水作用一端的残基为Y279、Y294、Y298及Y301,与1IGB的晶体结构中的蛋白-抑制剂间的疏水作用非常相似,相对应于另一端形成氢键的4个残基中有3个相同,说明两个复合物氢键形成的方式大体一致.结论成功获得PSMA三维结构的理论模型.AIDPH有望作为设计PSMA靶向性药物的前导基团.

前列腺特异膜抗原的研究现况

前列腺特异膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)是存在于前列腺细胞膜上的组织特异性抗原,由于其在前列腺癌分期、诊断和治疗中具有重要的临床意义,故将其研究现况综述如下.

放射性核素标记前列腺特异膜抗原配体对转移性去势抵抗性前列腺癌诊治的研究进展

前列腺癌是男性患者常见的癌症.晚期前列腺癌会进展为转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC),其诊疗一直是医学界的难题.应用放射性核素标记前列腺特异膜抗原(PSMA)配体对mCRPC癌灶进行诊断和靶向定位治疗,可以明显改善患者预后,提高生存质量,有较大的潜在临床应用价值.该文对近年来放射性核素标记PSMA配体在mCRPC单光子显像、正电子显像、治疗及诊治一体化中的研究进展进行综述.

68Ga-PSMA-11PET/CT半定量指标对前列腺良恶性病变鉴别诊断的价值

目的 探讨68 Ga-前列腺特异膜抗原(PSMA)-11 PET/CT半定量指标对前列腺良恶性病变鉴别诊断的价值.方法 回顾性分析2017年11月至2018年6月于本院行68Ga-PSMA-11 PET/CT检查的初诊患者30例(年龄52～86岁),检查前1周内检测血清总前列腺特异抗原(tPSA)和游离前列腺特异抗原(fPSA).通过阈值自动分割法测量前列腺病灶68Ga-PSMA-11 PET半定量指标,包括病灶PSMA体积(VPSMA)、大标准摄取值(SUVmax)、平均标准摄取值(SUVmean)、标准摄取值峰值(SUVpeak)及病灶PSMA总量(TLUPSMA).采用Mann-Whitney u检验比较前列腺良恶性病变各指标的差异,用受试者工作特征(ROC)曲线获得鉴别前列腺良恶性病变的佳阈值.结果 经病理证实,19例为前列腺癌,11例为前列腺良性病变.前列腺良恶性病变患者之间的tPSA、SUVmaxSUVmean、SUVpeak及TLUPSMA差异均有统计学意义(u值:17.00～48.00,均P＜0.05);而两者之间的fPSA、fPSA/tPSA及VPSMA差异均无统计学意义(u值:64.00～99.00,均P＞0.05).tPSA鉴别前列腺良恶性病变佳阈值为18.30μg/L,对应的灵敏度为13/17(2例患者PSA信息缺失),特异性为9/11,ROC曲线下面积(AUC)为0.743.SUVmax、SUVmean及SUVpeak鉴别前列腺良恶性病变佳阈值为分别为5.50、3.09及3.56,对应灵敏度均为18/19,特异性均为9/11,AUC分别为0.902、0.907及0.919.TLUPSMA鉴别前列腺良恶性病变佳阈值为54.81 cm3,对应灵敏度为14/19,特异性为9/11,AUC为0.804.结论 68 Ga-PSMA-11 PET/CT半定量指标SUVmax、SUVmean、SUVpeak及TLUPSMA对前列腺良恶性病变鉴别有价值,其中SUVpeak诊断效能可能更佳.

68Ga-PSMA-617PET/CT与多参数MRI诊断前列腺癌的对比研究

目的 比较68Ga-前列腺特异膜抗原(PSMA)-617 PET/CT与多参数MRI对原发性前列腺癌的诊断效能.方法 前瞻性纳入2017年6月至2017年11月间24例怀疑前列腺癌的患者,年龄(67.6±7.0)岁,均行68Ga-PSMA-617 PET/CT与多参数MRI.以病理诊断为“金标准”,分析大标准摄取值(SUVmax)和多参数MRI的诊断效能,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析比较两者诊断效能的差异.结果 经穿刺和(或)切除病理活组织检查(简称活检)确诊,前列腺癌18例,良性前列腺病变6例.按5分区分析(24例患者120个分区),PET/CT和多参数MRI于前列腺癌患者中分别准确检出分区48和56个,于非前列腺癌患者中各准确检出分区54和41个.68Ga-PSMA-617PET/CT诊断前列腺癌SUVmax临界值为4.85,曲线下面积(AUC)为0.890,灵敏度为75.00％(48/64),特异性为96.43％(54/56),阳性预测值为96.00％(48/50),阴性预测值为77.14％ (54/70),准确性为85.00％ (102/120),约登指数为71.43％;多参数MRI按照前列腺影像报告和数据系统(PI-RADS)评分≥4分,诊断前列腺癌的AUC为0.837,灵敏度为87.50％(56/64),特异性为73.21％ (41/56),阳性预测值为78.87％(56/71),阴性预测值为83.67％ (41/49),准确性为80.83％(97/120),约登指数为60.71％.两者AUC差异有统计学意义(Z=2.82,P＜0.01).结论 68Ga-PSMA-617 PET/CT显像对前列腺癌的诊断准确性高于多参数MRI;但两者均有较高的诊断效能,可相互补充.

177Lu-PSMA-617治疗转移性前列腺癌的安全性和疗效

目的 探讨177Lu-前列腺特异膜抗原(PSMA)-617治疗转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)的安全性和有效性.方法 前瞻性研究2017年8月至2018年9月在本院接受177Lu-PSMA-617治疗的11例mCRPC患者(平均年龄70.6岁),所有患者治疗前行68Ga-PSMA-11 PET/CT检查,以评估肿瘤放射性摄取.分别记录患者治疗前后血常规、肾功能和血清前列腺特异抗原(PSA)等指标.通过血常规及肾功能的变化评估治疗的安全性,通过治疗前后PSA水平的变化和68Ga-PSMA-11PET/CT显像病灶大标准摄取值(SUVmax)的改变评估治疗的有效性.采用配对t检验和符号秩和检验分析数据.结果 177Lu-PSMA-617治疗后,未见明显不良反应.所有患者的WBC计数、RBC计数、PLT及Hb在治疗前后差异均无统计学意义(t值:-0.28～1.11,均P＞0.05);未发现相关肾脏毒性.177Lu-PSMA-617治疗后患者PSA水平显著低于治疗前[80.70(14.29,1 538.00) μg/L与604.60(88.41,3 980.00) μg/L;u=59,P=0.023].仅2例发生PSA增高,疾病进展;余9例PSA下降,其中2例下降＞30％,7例下降＞50％.治疗后显像示9例转移病灶SUVmax明显降低,2例转移淋巴结SUVmax明显降低.结论 177Lu-PSMA-617对mCRPC有较好的治疗价值,且安全性较好.

68Ga-PSMA-617PET/CT对高危前列腺癌的预测价值

目的 探讨68 Ga-前列腺特异膜抗原(PSMA)-617 PET/CT对高危前列腺癌的预测价值.方法 回顾性分析2016年5月至2017年1月间30例(中位年龄67岁)经穿刺活组织检查证实的前列腺癌患者的68 Ga-PSMA-617 PET/CT及临床资料,依据美国国立综合癌症网络(NCCN)指南的前列腺癌危险度分级标准[Gleason评分、前列腺特异抗原(PSA)水平]将患者分为低～中危组和高危组.半定量分析患者PET图像获得前列腺癌大标准摄取值(SUVmax),基于SUVmax建立高危前列腺癌的logistic回归预测模型,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析评价其诊断效能.结果 30例患者中位Gleason评分为7.5(7,9)分;中位PSA水平为34.0(19.4,119.1) μg/L,其中PSA≤20 μg/L者9例,PSA＞20 μg/L者21例.根据NCCN指南,24例为高危前列腺癌,6例为低～中危前列腺癌.高危组的SUMmax明显高于低～中危组[14.2(11.4,23.1)与7.9(3.8,13.1);u=118,P＜0.05].以SUVmax建立的二分类logistic回归模型预测高危前列腺癌的ROC曲线下面积为0.819.以预测概率0.73为截断值,预测模型的诊断灵敏度及特异性分别为87.5％(21/24)和4/6.结论 68Ga-PSMA-617 PET/CT显像的SUVmax可作为独立预测高危前列腺癌的影像学参考指标.

荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型的建立及其应用研究

目的 应用人前列腺癌细胞株LNCaP接种裸鼠,鼠间移植传代,建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型.方法 观察移植瘤大体形态和组织病理学检查,并应用免疫组织化学方法观察肿瘤组织细胞中前列腺特异膜抗原(PSMA)的表达以及125I标记抗PSMA单抗的荷瘤裸鼠体内放射免疫显像.结果 移植瘤的形态和功能特性与原发肿瘤基本相似,移植瘤的移植成功率为100%;放免显像显示标记抗体能浓聚于肿瘤部位,经尾静脉注射标记抗体后96 h,肿瘤显像清晰,肿瘤组织/非肿瘤组织放射性比值(T/NT)均大于2.8.结论 本动物模型的建立为今后前列腺癌放射免疫治疗的实验研究提供1个理想的模型.

前列腺特异膜抗原及其临床应用研究新进展

前列腺特异膜抗原是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白,特异性表达于各种前列腺组织分泌性腺上皮及多种非前列腺恶性实体肿瘤的新生毛细血管内皮细胞,近年以其为靶向的诊断、治疗等临床应用研究进展迅速.

抗PSMA单克隆抗体在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的放射免疫显像实验研究

目的研究131I标记的抗前列腺特异膜抗原(PSMA)单克隆抗体(131I-Ed-5))在荷人前列腺癌瘤裸鼠体内的分布及对肿瘤的靶向定位性能.方法建立荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,用131I标记抗PSMA单克隆抗体Ed-5,131I-Ed-5经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,于注射后24、48、96、144hγ照相后断颈处死,取脏器称湿重并计数,测定肿瘤和血液、肝、肺等重要脏器的单位重量放射性比值(T/NT)、各组织摄取百分比(%ID/g).结果在注射131I-Ed-5后96h,肿瘤显影清晰,随时间延长其边缘更清晰.在注射131I-Ed-5后24～144h内,裸鼠体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚;96h肿瘤对131I-Ed-5的摄取率为32.30%ID/g,各组织的T/NT比值也达到高,其中肿瘤/肌肉高达7.08.给予注射131I-NMIgG的对照组中,未出现放射性浓聚,而呈全身分布.Ed-5具有良好的免疫活性和对前列腺癌的靶向定位作用,可望用于前列腺癌导向诊断与放射免疫治疗.

前列腺癌细胞转移相关基因的筛选

目的 通过对siRNA-PSMA-LNCaP、PC-3和LNCaP前列腺癌细胞株进行肿瘤转移基因芯片分析,筛选出与前列腺癌细胞转移相关的基因,并对芯片结果进行验证.方法 利用肿瘤转移基因芯片技术,对siRNA-PSMA-LNCaP细胞株、PC-3细胞株和LNCaP前列腺癌细胞株进行肿瘤转移相关基因表达差异分析,从中筛选出可能调控前列腺癌细胞转移的基因,并利用real-time PCR的方法在前列腺特异膜抗原(PSMA)阳性/阴性的前列腺癌细胞株和临床样品中对筛选得到的基因进行进一步验证.结果 从肿瘤转移基因芯片结果筛选得到了3种在PSMA表达抑制或不表达情况下显著上调的基因:MMP3、CDH6和MTSS1;3种基因的表达在PSMA阳性细胞株和PSMA阴性细胞株中与芯片结果一致;利用临床组织对肿瘤转移基因芯片结果验证,结果显示3种前列腺癌细胞转移相关基因的表达水平与前列腺癌临床分级和PSMA的表达呈负相关.结论 发现了3种可能参与调控前列腺癌细胞转移的基因:MMP3、CDH6和MTSS1.它们的表达水平与前列腺癌临床分级、PSMA的表达呈负相关,可能参与了由PSMA介导的前列腺癌细胞的转移.

铼-188和平阳霉素联合导向治疗前列腺癌的体外作用

[目的]探讨前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3介导铼-188和平阳霉素(PYM)导向治疗前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用.[方法]以葡聚糖为中介体制备7E11C5.3-PYM偶联物,间接ELISA法测定免疫活性,2,3,5.氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定抑菌活性.采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物.纸层析法测定标记率和放化纯度,直线回归外推法测定免疫活性分数.四唑盐(MTT)法测定体外细胞毒作用.[结果]7E11C5.3-PYM偶联物中7E11C5.3和PYM的克分子比为1:54,偶联后单抗的免疫活性降低了10%-20%.偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的25%.188Re-7E11C5.3的标记率为93.16%±2.18%,放化纯度为95.62%4±0.48%,免疫活性分数为74.86%±1.86%.7E11C5.3-PYM和188Re-7E11C5.3对LNCaP细胞的抑制作用分别强于游离PYM和188ReO4-;两者单独用药时,其半数抑制浓度(IC50)分别为(10.17±2.06)μg/mL和(23.38±3.73)×104 Bq/mL;两者联合用药时,其IC50值分别为(1.83±0.20)μg/mL和(6.82±0.73)×104Bq/mL.[结论]7E11C5.3-PYM和188Re-7E11C5.3联合用药对前列腺癌细胞的抑制作用显著强于单独用药.

前列腺特异膜抗原基因的克隆和真核表达

[目的]克隆前列腺特异膜抗原(PSMA)基因的编码区序列,并进行真核表达.[方法]用RT-PCR方法扩增前列腺癌组织标本中的PSMA cDNA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0.用脂质体转染法,把pcDNA3.0-PSMA转染哺乳动物细胞,鉴定PSMA蛋白的表达.[结果]序列测定结果表明,两条引物之间的片段长度为2 279 bp,与预期长度一致.将克隆的编码区序列与GenBank的PSMA序列进行Blast对比分析,同源性为99.7%;间接免疫荧光法显示表达的蛋白质为膜蛋白,免疫印迹表明表达蛋白质的相对分子质量为100 ku.[结论]成功扩增了PSMA编码区序列,构建了PSMA真核表达载体,建立了PSMA稳定表达的细胞株.经免疫分析,证实了真核细胞内表达的PSMA为分子质量正确的膜蛋白,且具有良好的抗原性.所获得的PSMA真核表达系统为进一步研究PSMA基因修饰的DCs疫苗对前列腺癌的治疗提供了物质基础.

前列腺特异膜抗原(PSMA)的检测及临床应用进展

前列腺特异膜抗原(PSMA)是一种新近发现的前列腺癌相关抗原,由于其较高的前列腺特异性和膜结合特性,使其在前列腺癌的临床诊断中,特别是在判断肿瘤的转移和进展方面,是一种较PSA更加敏感、特异的CaP肿瘤标记物.