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抗巨细胞病毒早晚期抗原单克隆抗体制备及在病毒培养物鉴定中的初步应用
目的 制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用.方法 CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合.酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆.免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定,终获得的杂交瘤制备腹水并使用Protein G进行纯化.纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定.结果 3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆.剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆终获得抗CMV单抗杂交瘤1株,即23B5-1.免疫荧光显示23B5-1株单抗与CMV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应,即覆盖即刻、早期和晚期抗原.免疫印迹试验显示23B5-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合.23B5-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgG1.Protein G纯化腹水后的单抗效价≥1∶12800.纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合.结论 初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好.
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假病毒在狂犬病中和性单克隆抗体研究中的应用
狂犬病(rabies)是由Lyssavirus病毒属病毒引起的一种急性人畜共患传染病,患者以中枢神经系统病变为主,病死率几乎100％.全世界每年约有5.5万人死于狂犬病,主要集中在亚洲和非洲发展中国家和不发达国家,印度和中国年均狂犬病死亡人数居全球第一和第二位[1-2].应用狂犬病疫苗和免疫球蛋白(rabies immune globulin,RIG)进行狂犬病暴露后处置是预防狂犬病发生的有效措施,采用世界卫生组织(world health organization,WHO)推荐的狂犬病中和抗体检测快速荧光灶抑制试验(rapidfluorescent focus inhibition test,RFFIT)进行狂犬病暴露后处置效果监测可及时发现问题采取补救措施.
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HIV-Ⅰ包膜蛋白gp41单克隆抗体的研究进展
HIV-1gp41在病毒侵入早期,发挥重要作用.针对gp41的单克隆抗体作为一种良好的工具广泛地应用于以gp41为靶点的抗HIV-1药物和疫苗研究工作中.
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SARS冠状病毒抗体工程的研究、应用及进展
SARS冠状病毒(SARS-CoV)抗体工程的研究建立了SARS的快速检测方法,深入探索了病毒的传播途径及致病机理.人源化抗体的研制及动物试验的成功使单克隆抗体用于SARS-CoV的预防及治疗成为可能.
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小肠结肠炎耶尔森菌O:3血清型特异性单克隆抗体制备
目的制备出小肠结肠炎耶尔森菌血清O:3型特异的单克隆抗体.方法用常规的骨髓杂交瘤融合技术.结果筛选到了一株针对于小肠结肠炎耶尔森菌O:3血清型特异性的克隆株(编号:Y6H8),且证实分泌的抗体属于针对于脂多糖免疫球蛋白IgG,可用于玻片凝集法鉴定0:3血清型小肠结肠炎耶尔森菌.结论通过本实验证实小肠结肠炎耶尔森菌血清O:3型菌株脂多糖存在其特异性成分,可用于该菌株的分型鉴定.
关键词： 小肠结肠炎耶尔森菌O:3血清型 单克隆抗体 脂多糖免疫球蛋白 -
小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备
目的 利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定.方法 用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果 筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应.结论 本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象.
关键词： 小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型 单克隆抗体 交叉凝集 -
流研所疾病监测组应用单克隆抗体和免疫斑点试验对B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖分型
本研究使用4种抗B群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)脂寡糖的单克隆抗体(McAb)和免疫斑点试验(dot-blotting)首次对我国不同年代和地区收集的91株B群Nm进行了脂寡糖(Lipooligo-saccharide,LOS)分型,总分型率为90.11%,其中L3.7.9复合型多,占63.74%,其次为L1.3.7.9复合型,占12.09%.该结果为确定我国引起流脑发病的B群Nm主要LOS型提供了依据,为筛选本国的B群Nm菌苗菌株及其作为菌苗成分的LOS抗原奠定了基础.
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我国B群脑膜炎奈瑟氏菌单克隆抗体分型及其流行病学意义
为了阐明自七十年代以来在我国11个省和2个直辖市流脑病人和带菌者中所分离的B群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)之间的流行病学关系,应用抗脑膜炎奈瑟氏菌1类和2/3类外膜蛋白的单克隆抗体(McAb)和全菌酶联免疫吸附试验(Wthole Cell-ELISA)对109株B群Nm进行分型及分亚型检定.初步结果表明.上述菌株可分成6个型,分型率为34.9%(38/109),其中15型较多,占15.6%.67株可分为12个亚型及复合亚型,分亚型率为61.5%,其中以P1.2亚型为多见,占可分亚型菌株的47.8%(32/67),其次为P1.12亚型,占13.4%(9/67).在比较病人菌株与带菌者菌株的型别时发现,前者存在明显的优势亚型,即P1.2亚型,占可分亚型病人菌株的64.4%(29/45).而后者中仅1株为P1.2亚型.该亚型主要发现于1984年以后,地区分布较为广泛,是目前引起我国B群流脑发病的主要亚型.分析结果还初步解释了我国B群流脑带菌率高发病率较低的原因.
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GⅡ型诺如病毒衣壳蛋白抗原表位预测及单克隆抗体的制备
目的 原核表达诺如病毒衣壳蛋白VP1,制备抗诺如病毒衣壳蛋白VP1的单克隆抗体,并研究其抗原表位特性.方法 PCR扩增GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白基因,将目的基因克隆至载体pET28a(+),转化至大肠埃希菌原核表达.纯化表达产物免疫BALB/c小鼠,将成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合.用Modeller9.9为诺如病毒GⅡ型湖州株VP1蛋白构建三维模型,构建好的三维模型提交到SEPPA在线B-cell空间表位预测软件,对GⅡ型湖州株VP1蛋白进行空间表位预测.用预测的表位序列来筛选阳性克隆,得到对应这些表位的单克隆抗体.结果 成功构建重组表达载体pET28a(+)-Noro-VP1并在大肠埃希菌中获得表达,重组蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,用预测的抗原表位多肽筛选,获得10株杂交瘤细胞株.与重组蛋白的ELISA结果显示1E8、1P10、2C15和2L16四株反应性强,其他几株反应性较弱.Western blotting结果显示只有2K10、1K16、1E8三株能与重组蛋白很好的结合.结论 成功制备了抗GⅡ型湖州株诺如病毒VP1蛋白的单克隆抗体,抗原表位位于衣壳蛋白的P2区,为制备诺如病毒快速免疫诊断试剂盒及抗原表位的研究提供基础.
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α1b-干扰素雾化吸入预防上呼吸道感染诱发毛细支气管炎疗效观察
急性毛细支气管炎是2岁以下小儿较常见的下呼吸道感染，该病起病急、发病重、病死率高。若治疗不及时，常易并发呼吸衰竭。目前国内无特异性治疗方法，仍以氧疗、控制喘憋及对症治疗为主，故预防毛细支气管炎的发生成为临床医生为关注的问题。抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体对高危儿的预防效果确切，但容易导致呼吸道合胞病毒发生变异［1］，其昂贵的价格也限制了它的使用，故探寻一种有效而相对经济简便的的方法显得尤为重要。本文旨在观察氧驱动雾化吸入干扰素在预防毛细支气管炎的发生方面所起作用，现报告如下。
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西妥昔单抗联合标准化疗一线治疗晚期非小细胞肺癌患者疗效的临床观察
肺癌是目前常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着人民健康和生命,小细胞肺癌(SCLC)罕见.非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)过表达,出现淋巴结转移可能性越大,进展预后不良.西妥昔单抗(爱必妥)是一种特异性结合EGFR的单克隆抗体,该药与EGFR细胞外部分结合后,可阻断该受体介导的信号传导通路,同时还会引起EGFR内吞与降解,并诱导抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),杀伤表达EGFR的肿瘤细胞抑制过度表达EGFR的肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞的凋亡.
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孟鲁司特钠对哮喘急性发作期患者免疫调节功能及炎症因子的影响探究
支气管哮喘由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与气道慢性炎症性疾患.传统的哮喘治疗药物主要从抗炎和扩张支气管等方面着手,通过基于β2受体激动剂、茶碱类、糖皮质激素、色甘酸钠和尼多酸钠、抗IgE单克隆抗体和抗组胺等药物来达到控制症状,维持肺功能和改善患者临床体验的目的[1].孟鲁司特钠作为哮喘炎性介质白三烯的调节剂,在阻断其诱使患者发病,控制炎症因子和调节免疫功能等方面具有良好的效果.本文研究了孟鲁司特钠对哮喘急性发作期患者免疫调节功能及炎症因子的影响.现报告如下.
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α1b-干扰素雾化吸入预防上呼吸道感染诱发毛细支气管炎疗效观察
急性毛细支气管炎是2岁以下小儿较常见的下呼吸道感染，该病起病急、发病重、病死率高。若治疗不及时，常易并发呼吸衰竭。目前国内无特异性治疗方法，仍以氧疗、控制喘憋及对症治疗为主，故预防毛细支气管炎的发生成为临床医生为关注的问题。抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体对高危儿的预防效果确切，但容易导致呼吸道合胞病毒发生变异［1］，其昂贵的价格也限制了它的使用，故探寻一种有效而相对经济简便的的方法显得尤为重要。本文旨在观察氧驱动雾化吸入干扰素在预防毛细支气管炎的发生方面所起作用，现报告如下。
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HSP70单克隆抗体诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究
目的:体外培养宫颈癌细胞株,免疫化学方法检测阻断HSP70前后的表达;方法:TUNEL技术观察不同浓度热休克蛋白70单抗对细胞生长的影响.探讨热休克蛋白70(HSP70)单抗对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用;结果:经不同浓度热休克蛋白70单抗后,免疫化学方法检测HSP70的表达显著受到抑制.TUNEL技术检测出细胞凋亡;结论:表明热休克蛋白70单克隆抗体明显诱导宫颈癌细胞调亡.
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单株抗人肝脏微粒体蛋白及细胞色素P450单克隆抗体的制备及初步鉴定
目的:制备抗正常人肝脏微粒体(HLM)及细胞色素P450蛋白的单克隆抗体.方法:采用人肝脏微粒体蛋白作为免疫原免疫Balb/C小鼠,按常规方法融合、克隆,经间接ELISA法筛选抗体阳性杂交瘤细胞株,通过单抗亚类、Western blot对抗体进行初步鉴定.结果:成功地制备了一株抗肝微粒体蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为MAb 10C7.用鼠单抗亚类快速鉴定纸条鉴定10C7为IgG2b.Western blot分析显示,MAb 10C7可特异识别相对分子量为46kD的人肝脏微粒体蛋白.结论:MAb 10C7抗正常人肝脏微粒或细胞色素P450蛋白的特异性强,对相关蛋白质的功能研究有较好的应用前景.
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ELISA夹心法测定TRPC6蛋白的初步应用研究
目的 初步利用所建立的双抗体ELISA夹心法检测TRPC6蛋白.方法 采用本室制备的单克隆抗体A2和F11,分析为识别不同位点,以佳配对组合建立双抗体ELISA夹心法,并以此方法检测小鼠脑组织中的TRPC6蛋白.结果 确定检测的标准TRPC6多肽浓度区间为1.25-40μg/ml,相关系数R2为0.992,测定小鼠脑组织总蛋白中含有的TRPC6蛋白表达量在1.16μg/ml-1.45μg/ml.结论 所建立的ELISA夹心法可初步用于TRPC6蛋白的检测,为进一步的临床应用提供基础.
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单克隆抗体OC859治疗对卵巢癌患者生存率及免疫系统的影响
目的探讨单克隆抗体(单抗)OC859治疗对卵巢癌患者生存率及免疫系统的影响. 方法对用单抗OC859治疗105例(单抗组)及未用单抗的126例(对照组)卵巢癌患者进行回顾性分析,比较两组患者的生存率.并测定单抗组部分患者血清人抗鼠抗体(HAMA)(25例)和T细胞亚群(15例)的改变.结果两组年龄、满意的肿瘤细胞减灭术比例、病理类型、分期、分化均无显著性差异.单抗组平均化疗10.9疗程,对照组平均化疗8.2疗程,两组有显著性差异(P＜0.01).单抗组平均生存时间、3及5年生存率分别为(91±6)个月、65.7%和62.2%,而对照组分别为(62±7)个月、41.1%和36.2%,均有极显著性差异(P均＜0.001).单抗组治疗后HAMA滴度明显升高.在单抗治疗前患者外周血CD4/CD8比值低于正常水平,单抗治疗一次后CD4/CD8比值大部分达正常水平,治疗两次后全部达正常水平. 结论单抗OC859治疗使卵巢癌患者的3及5年生存率均明显提高,患者的免疫系统均有明显改变.在手术和化疗的基础上单抗OC859有助于卵巢癌的治疗.
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140对不育夫妇溶脲脲原体、沙眼衣原体感染分析
近年来，性传播疾病的病原体，溶脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)不仅造成广泛的生殖道感染，并导致不育，发病有逐年上升的趋势。为此，对140对不育夫妇作UU、CT检测，并与对照组进行比较。 一、对象和方法 1.对象：来自我所不育门诊140对夫妇280例不育患者。女方排除先天性不育因素及排卵障碍、内分泌失调；男方排除无精、少精症。其中原发不育74对夫妇148例，婚后夫妇同居，有正常性生活，未采取避孕措施2年不育，年龄21～36岁；继发不育66对132例，末次足月产或流产后未采取避孕措施2年未育，年龄23～38岁。同时选择近2年内有生育史的健康妇女69例及男性51例(其中51对夫妇)，年龄21～34岁作为对照组。 2.方法：UU采用间接血凝试验(IHA)检测，试剂由首都儿科研究所提供，取空腹静脉血2 ml，分离血清，存于-20℃待测，每块测定板均有阴、阳血清对照，1∶8稀释度出现红细胞凝集为阳性。CT检测采用英国Unipath公司单克隆抗体快速免疫法(简称C-C法)检测CT抗原，用棉拭子分别取男、女受检对象的尿道分泌物、宫颈粘液，15 min后观察结果，蓝色线条为阳性。 3.统计学处理：数据采用χ2检验。 二、结果 1.男、女不育组UU、CT阳性率：男、女不育组的UU、CT及UU、CT混合感染率平均显著高于对照组(P＜0.01，P＜0.005)，原发不育与继发不育组之间差异无显著性(P＞0.05)(表1，2)。三、讨论 男女生殖道的急、慢性感染及炎症粘连、阻塞是引起不育的主要原因。它可以由多种微生物所引起，常见的有衣原体、支原体、淋球菌等［1］。男女性感染CT、UU后常表现为隐匿性，均可引起生殖道的炎症。女性感染UU、CT始发于下生殖道，后沿粘膜上行累及子宫、输卵管及盆腔等脏器，引起宫颈炎、宫内膜炎、输卵管炎，导致梗阻性输卵管炎或盆腔炎引起女性不育［2］。女性宫腔内的UU可吸附于精子头部和体部，影响精子的运动功能，影响精子与卵子的接触和受精［3］。男性感染CT、UU可引起前列腺炎，导致前列腺分泌功能障碍，可使精液液化不良。UU、CT对精子吸附作用既干扰精子的发育又使精子流体阻力增大，运动速度降低从而影响了精子的密度和活动率，可致男性不育［4］。本结果显示，不育组UU、CT男女阳性率分别为23.2%、31.8%及24.3%、33.6%，明显高于对照组7.5%、6.7%及8.3%、10%。未行聚合酶链反应(PCR)等方法对UU、CT的检测，是本资料的不足之处。项裕财等［5］对1 198例不育患者UU、CT分别作分离培养法和单克隆抗体免疫荧光法检测，CT、UU阳性率为25.5%、35.3%，谷翊群等［6］用PCR对不育人群检测UU感染率为21%，Soomg等［7］用DNA探针对不育妇女CT感染率为28.3%。本结果不育组CT、UU阳性率以及混合感染率明显高于对照组(P＜0.01，P＜0.005)，而CT、UU原发不育和继发不育组感染无显著性差异(P＞0.05)，表明CT、UU感染是影响男女不育的因素之一。有报道，CT、UU检出率与性伴侣有关，男性CT感染传给女性，女性CT感染传给男性比例分别为40%、32%，女性感染UU而男性伴侣感染为56.3%［1，8］。本组结果CT、UU经夫妇配对检验，UU、CT感染在夫妇间有相关性(P＜0.01)，这可能与夫妇性生活易同时感染有关。跟踪治疗(夫妇双方治疗)后复查80对不育夫妇，其中转阴者49对，妊娠28例(占57%)，未转阴31例中仅2例妊娠(占6%)，转阴者妊娠明显高于未转阴者(P＜0.01)。提示CT、UU感染致男女不育的因素不容忽视。对不育夫妇进行CT、UU检测有利于不育原因的分析，防治CT、UU的感染有助于提高育龄夫妇的生殖健康水平，降低不育的发生率。
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一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的方法
目的 建立一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体(AFP-McAb)杂交瘤细胞系的方法. 方法 以常规和改良两种方式同时免疫8～12周Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合并行次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养.用间接酶链免疫吸附试验法(ELISA)筛选阳性克隆株,并建立细胞系. 结果 在较短时间内,改良法能获得高效价的免疫抗体,与常规免疫法相比有极显著差异(P＜0.001),同时改良法的细胞融合率和抗体阳性率也显著高于常规免疫法(P＜0.001).筛选获得的高效分泌抗人AFP-McAb的阳性杂交瘤细胞珠进行了初步鉴定. 结论 新的改良方法优化了常规的McAb制备中动物免疫程序,并能成功筛选出AFP-McAb杂交瘤细胞系.
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妊娠相关血浆蛋白A单克隆抗体的制备与鉴定
建立妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)单克隆抗体细胞株,制备其单克隆抗体(McAb),以用于检测孕妇血清中PAPP-A的含量,提高先天性染色体异常疾病筛查的检出率.本室采用甲基纤维素半固体选择性培养基细胞融合技术获得了理想的PAPP-A McAb,为提高有关PAPP-A免疫分析技术的准确性、精确度打下了基础.
