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细胞角蛋白19基因检测与肺癌血源性微转移的初步研究
细胞角蛋白19(CK19) mRNA几乎可在所有的上皮细胞、上皮类肿瘤细胞及部分非上皮类肿瘤细胞中检出,而正常人外周血细胞中无CK19 mRNA的表达,故检测外周血中CK19 mRNA的表达,可推断有表达CK19的上皮细胞及肿瘤细胞的异位存在[1,2].CK19 mRNA的蛋白表达产物片段CYFRA21-1,亦已作为临床上肺癌诊断的辅助指标[3].为探讨CK19 mRNA是否能作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,我们对肺癌及健康人外周血中CK19 mRNA的表达进行检测,并与血CYFRA21-1含量进行了相关分析.
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3种富集胃癌患者外周血中胃癌细胞方法的比较
目的:建立一种富集胃癌患者外周血中癌细胞的有效方法.方法:先将不同浓度胃癌MGC-803细胞加入到健康人外周血中,再用淋巴细胞分离液收集单核细胞,然后等分成3份,并用3种方法处理-A方法,用CD45磁珠去除白细胞;B方法,用Ber-EP4磁珠富集癌细胞;C方法,先后使用上述2磁珠.后用定量RT-PCR检测看家基因β2微球蛋白(β2MG)mRNA的量.同法检测30例胃癌患者外周血.结果:β2MG mRNA扩增曲线的交叉点(crossing point,Cp)数值与癌细胞数间有良好的负相关(方法A,P<0.05,方法B或C,P<0.01).方法C检测到的Cp值为3种方法中大的;其灵敏度为1 mL血中含有1个癌细胞.用A、B和C方法检测30例胃癌患者外周血癌细胞的阳性率分别为70.00%,60.00%和36.57%(C与A比较,X2=5.79,P<0.05;C与B比较,x2=4.92,P<0.05).结论:在检测胃癌患者外周血癌细胞的实验中,联用阴性和阳性免疫磁珠可减少来自外周血白细胞的污染.
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IL-2联合IL-12激活A-NK细胞治疗人肝癌HepG-2
目的:研究A-NK细胞体外抗肿瘤作用及小鼠体内抗肿瘤作用.方法:用淋巴细胞分离液分离健康人外周血中的血单个核细胞,PME(5 mmoL/L)室温处理40 min,PME处理后的人外周血单个核细胞重悬于AIMV中.分为四组分别为:IL-2(6 MU/L)组,IL-2(1MU/L)组,IL-12(5 ug/L)组,IL-2(1 MU/L)+IL-12(5 ug/L)组;每瓶细胞浓度为5×109/L,于37℃,50 mL/L CO2饱和湿化空气的培养箱中水平培养4-5 h,移去含未黏附于塑料表面的细胞悬液,收集黏附于塑料表面的细胞(即A-NK细胞),MTT比色法检测A-NK细胞体外细胞毒作用;然后建立肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,以肿瘤体积、抑瘤率、生存期等指标观察A-NK对移植瘤的抑制作用.结果:A-NK+IL-2+IL-12组细胞毒活性明显高于其他三组(aP<0.05),体内实验表明A-NK+IL-2+EL-4/IL-12治疗组的移植瘤生长速度缓慢,体积明显小于生理盐水对照组(bP<0.05),生存期显著延长(cP<0.05).结论:IL-12辅助IL-2激活的A-NK细胞的体外杀伤活性较单独用IL-2或IL-12强,体内实验显示具有明显的抗肿瘤作用.
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树突状细胞体内外对肝癌细胞的抑制作用
目的:研究树突状细胞对肝癌等肿瘤细胞的直接作用.方法:用rhGM-CSF和rhIL-4从健康人外周血诱导树突状细胞,用ELISA和MTT法分别检测DC培养上清液中IL-12和TNF水平,用MTT法检测DC对肝癌细胞SMMC-7 721、QGY-7703、HEPG-2、Alexander,胃癌细胞SGC-7901,慢性髓原性白血病细胞K562、Burkitt's淋巴瘤细胞Raji和正常人二倍体细胞的抑制作用,同时用流式细胞术检测DC表面FasL的表达,后用DC进行人肝癌裸鼠皮下抑制瘤的抑制试验.结果:诱导7 d的DC对4种肝癌细胞和胃癌细胞均有不同程度抑制作用,随着效靶比的增加,DC对肝癌细胞和胃癌细胞的抑制作用逐渐增加;DC预防人肝癌裸鼠皮下移植瘤,其抑制率为97%.结论:DC进入机体后也可以非特异性抑制方式发挥抑癌作用,本研究丰富和拓展了肝癌DC疫苗的内容,为今后肝癌DC疫苗的研究奠定了基础.
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Aiolos基因mRNA表达与支气管哮喘发病的相关性
Aiolos是表达在淋巴细胞内的转录因子,对淋巴谱系细胞的发育有着重要的作用.近年Aiolos在淋巴瘤以及淋巴细胞白血病等系统疾病中已有突破性发现,支气管哮喘(简称哮喘)的发生与发展与淋巴细胞及其分泌的细胞因子密切相关,我们采用SYBR Green荧光实时定量聚合酶链式反应(PCR)法检测33例哮喘患者及38名健康人外周血中Aiolos mRNA的表达,探讨Aiolos mRNA的表达差异与哮喘发病间的关系.
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膜型和可溶性CD28分子在衰老过程中的调节性表达
为研究CD28分子在衰老过程中的表达情况,我们于2004年9~12月选择了513名健康人外周血标本进行膜型CD28分子(membrane CD28,mCD28)的表达以及其中300名健康人外周血血清进行可溶性CD28分子(sCD28)含量的测定,报道如下.
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鼻咽癌患者外周血γδT细胞对鼻咽癌细胞的细胞毒活性测定
T细胞受体(T cell receptor,TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同,识别抗原的方式类似于免疫球蛋白,以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子[1,2],无需抗原呈递分子配合,直接识别广谱肿瘤抗原.我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者及6例健康人外周血的γδT细胞,经原代NPC细胞同步培养,得到高纯度的NPC细胞.流式细胞仪检测γδT细胞纯度,研究两种来源的γδT细胞对Daudi、CNE1、CNE2和新建的传代培养NPC细胞的细胞毒作用,探讨NPC患者外周血中γδT细胞的抗肿瘤作用.
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健康人外周血树突状细胞的体外培养扩增及其CDla等表面分子的表达分析
树突状细胞(DC)是一种功能强的抗原提呈细胞,其显著的特征是能够刺激初始型T细胞增殖,而B细胞和巨噬细胞只能刺激记忆型或被活化的T细胞,因此DC在免疫应答诱导中起重要作用.
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IL-1β(白细胞介素1β)在大鼠外周血中的节律变化研究
研究证实白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)在细胞免疫激活、抗肿瘤、减轻机体炎症反应中发挥重要作用.此外,还有导致厌食、体温升高、活动能力降低、激活下丘脑-垂体-肾上腺轴以及引起一氧化氮合酶含量增加等作用.而有关IL-1β在外周血中的节律报道甚少,仅Zabel P等报道过健康人外周血中I L-1β具有节律性,但对常用作实验动物的大鼠其IL-1β在外周血中的节律却未见报道.鉴此,本研究就IL-1β在大鼠外周血中的节律作初步探讨,为进一步了解IL-1 β的生理及病理学作用提供时间生物学资料.成年健康雄性SD大鼠24只,体重250-2 70g,自然光照下喂养(光暗比12:12).随机分成4组,分别于16:00、22: 00、4:00、10:00四个时间腹腔给予细菌脂多糖(600ug/Kg).2小时后,又分别于18:00、24:00、6:00、12:00四个时间麻醉,从左心室采血(1.3ml/只).血液在室温下静置0.5小时,以3000转/分离心15分钟, 取血清(0.5ml/只),保存于-20℃,备用.应用放射免疫分析法测定血清中的I L-1β.结果:腹腔注射细菌脂多糖后,大鼠外周血中的IL-1β在6:00达高峰, 但在12:00和18:00有明显的下降,24:00又有所升高,显示出明显的节律性 .分析比较各组IL-1β含量的均数与标准差,并对4组数据作方差分析:12:00与 6:00组以及18:00与6:00组之间差异具有显著性(P<0.05).
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脐血、健康人及慢粒患者外周血来源的DC介导的抗白血病免疫效应研究
目的:观察脐血、健康人及慢性粒细胞性白血病(CML)患者外周血3种不同来源的树突状细胞(DC)及其抗白血病效应.方法:分离3种来源的单个核细胞(MNC)并在细胞因子(GM-CSF+IL-4+TNF-a)作用下诱导培养DC.观察DC形态,流式细胞技术检测DC免疫表型(CD1a、CD80、CD83、HLA-DR);将所得DC经CML细胞可溶性抗原负载后和其同源T细胞混合诱导抗原特异性CTL,MTT法检测其杀伤活性.结果:3种来源MNC在细胞因子作用下均可获得形态典型的DC,且高表达CD1a、CD80、CD83、HLA-DR,经抗原负载后的DC诱导的CTL对CML靶细胞的杀伤活性也较强.结论:脐血、健康人及CML患者外周血均为理想的DC来源;有较好的诱导CTL杀伤白血病细胞效应;应用DC瘤苗免疫治疗白血病必将成为一种崭新的肿瘤免疫治疗方法,有十分诱人的发展前景.